---
title: "\"Временные методические указания по определению ровраля методом хроматографии в тонком слое в биосубстратах\""
number: "3076-84"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-3076-84"
---

## "Временные методические указания по определению ровраля методом хроматографии в тонком слое в биосубстратах"

# "Временные методические указания по определению ровраля методом хроматографии в тонком слое в биосубстратах"

(утв. Минздравом СССР 31.07.1984 N 3076-84)


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Заместитель Главного<br>
государственного<br>
санитарного врача СССР<br>
**А.И.ЗАИЧЕНКО**

</div>

<div align="center">

31 июля 1984 г. N 3076-84

</div>



## <a id="p100002"></a>ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОВРАЛЯ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ В БИОСУБСТРАТАХ



> <a id="p100003"></a>*(Дополнение к Методическим указаниям N 2422-81)*



### 1. <a id="p100004"></a>Краткая характеристика препарата


<a id="p100005"></a>Ровраль - 1-изопропилкарбамоил-3-/3,5-дихлорфенил/-3-гидантоин.

        N-CONHCH(CH )
        /\         3 2
       /  \=O

| . | ___Cl |
| --- | --- |

                \ ___ /
<a id="p100006"></a>                  ─── \                             C  H  O N Cl .
                      Cl                             13 13 3 3  2

<a id="p100007"></a>    Молекулярная масса: 330,17.
<a id="p100008"></a>    Синонимы и торговые названия: ипродион, афнор, ВСИ, 26019 РН, РОП 500ф,
НРС 910, ЛФА 2071, гликофен.
<a id="p100009"></a>    Химически  чистый  препарат  представляет  собой  белое кристаллическое
вещество  без  запаха  с  точкой  плавления 136 °C,  растворимое в этаноле,
ацетонитриле,   толуоле,   бензоле,  ацетоне,  дихлорметане  и  практически
                                                                         -7
нерастворимое в воде. Упругость паров незначительна: при 20 °C -  2  x 10
мм рт. ст.
<a id="p100010"></a>    ЛД   внутрижелудочно  для  белых  крыс  -  3500 мг/кг, для мышей - 4000
      50
мг/кг. Раздражающее действие отсутствует.
<a id="p100011"></a>Ровраль - фунгицид, применяемый в борьбе с серой гнилью на винограде и овощных культурах.


### 2. <a id="p100012"></a>Методика определения ровраля в биосубстратах хроматографическим методом



#### <a id="p100013"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100014"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100015"></a>Метод основан на извлечении действующего вещества препарата из анализируемых проб органическим растворителем - ацетонитрилом или метиленом хлористым, солянокислотной очистке упаренных экстрактов, экстракции из солянокислых растворов метиленом хлористым и последующем определении методом тонкослойной хроматографии.

##### <a id="p100016"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100017"></a>Метрологическая характеристика метода приведена в [таблице 1](#p100106) (см. Приложение).

##### <a id="p100018"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100019"></a>Определению ровраля не мешают препараты дерозал, бенлат, зупарен, применяемые, как и ровраль, при борьбе с серой гнилью.


#### <a id="p100020"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100021"></a>Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-74.
<a id="p100022"></a>н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.
<a id="p100023"></a>Толуол чда, [ГОСТ 5789-78](https://bukva.ai/docs/gost-5789-78).
<a id="p100024"></a>Натрий сернокислый безводный чда, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76).
<a id="p100025"></a>Метилен хлористый хч, ТУ 6-09-2662-77.
<a id="p100026"></a>Ацетон ОП-2 осч, 9 - 5, ТУ 6-09-3513-75.
<a id="p100027"></a>Гептан хч, ТУ 6-09-4520-77.
<a id="p100028"></a>Этиловый эфир (медицин.) фарм.
<a id="p100029"></a>Натрия гидроокись хч, ГОСТ 4328-77, 1 н водный раствор.
<a id="p100030"></a>Кали едкое осч, 18 - 3 ОСТ 6-01-301-74, 15-процентный водный раствор.
<a id="p100031"></a>Этиловый спирт хч, ТУ 6-09-1710-77.
<a id="p100032"></a>Хлороформ хч, ГОСТ 20015-74.
<a id="p100033"></a>Соляная кислота хч, ГОСТ 3118-77, 0,1, 1 и 5 н водные растворы.
<a id="p100034"></a>Натрий азотистокислый хч, ГОСТ 4197-74.
<a id="p100035"></a>Аммоний хлористый осч, 2 - 4 ТУ 6-09-587-75.
<a id="p100036"></a>Силикагель КСК, ТУ 6-09-2525-72 (0,10 - 0,14 мм).
<a id="p100037"></a>Кальций сернокислый безводный чда, ТУ 6-09-706-76.
<a id="p100038"></a>Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.
<a id="p100039"></a>N-(1-Нафтил)этилендиамин дигидрохлорид ч, ТУ 6-09-15-420-80.
<a id="p100040"></a>Аммоний сульфаминовокислый ч, ТУ 6-09-15-364-78, 5-процентный раствор в 0,1 н соляной кислоте.
<a id="p100041"></a>1-Нафтол чда, ГОСТ 5838-79, 1-процентный раствор в этиловом спирте.
<a id="p100042"></a>Дифениламин чда, ГОСТ 5825-70.
<a id="p100043"></a>Цинк хлористый чда, ГОСТ 4529-69.
<a id="p100044"></a>Пластинки хроматографические "Силуфол" UV-254 (ЧССР).
<a id="p100045"></a>Диазореактив: к 10 г азотистокислого натрия приливают 20 мл конц. соляной кислоты и доводят объем жидкости до 50 мл дистиллированной водой. Раствор используется свежеприготовленным.
<a id="p100046"></a>Проявляющий реактив N 1: <...> г едкого калия растворяют в 50 мл дистиллированной воды и добавляют 0,1 г 1-нафтола. Раствор устойчив в течение 7 дней при хранении в холодильнике.
<a id="p100047"></a>Проявляющий реактив N 2: 0,5 г дифениламина растворяют в 100 мл ацетона и добавляют 0,5 г цинка хлористого. Раствор используется свежеприготовленным.
<a id="p100048"></a>Стандартный раствор ровраля с содержанием 100 мкг действующего вещества в 1 мл хлороформа, ацетона или этилового спирта готовят из хч или технического препарата с учетом % содержания действующего вещества. Раствор устойчив в течение 10 - 15 дней.


#### <a id="p100049"></a>2.3. Приборы, аппаратура и посуда


<a id="p100050"></a>Испаритель ротационный, ТУ 25-11-917-74, тип ИР-1M.
<a id="p100051"></a>Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-74.
<a id="p100052"></a>Камера для опрыскивания хроматографических пластинок, ГОСТ 11413-74.
<a id="p100053"></a>Воронки делительные, ГОСТ 861-75, на 100 мл.
<a id="p100054"></a>Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
<a id="p100055"></a>Колбы конические, ГОСТ 10394-72, на 100 мл.
<a id="p100056"></a>Колбы мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), на 100 и 1000 мл.
<a id="p100057"></a>Пипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74), на 1, 2, 5 мл.
<a id="p100058"></a>Микропипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74).
<a id="p100059"></a>Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-65.
<a id="p100060"></a>Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1081-73.
<a id="p100061"></a>Вентилятор или фен.
<a id="p100062"></a>Колбы круглодонные со шлифом 29, ГОСТ 10394-72, на 100 мл.
<a id="p100063"></a>Чашки Петри, ГОСТ 10973-75.
<a id="p100064"></a>Чашки выпарительные N 3, 4, ГОСТ 9147-73.
<a id="p100065"></a>Баня водяная, ТУ 46-22-608-75.
<a id="p100066"></a>Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.
<a id="p100067"></a>Стекловата.


#### <a id="p100068"></a>2.4. Описание определения



##### <a id="p100069"></a>2.4.1 Экстракция и очистка

<a id="p100070"></a>Кровь, легкие, печень, почки, мозг. 5 г навески органов (5 мл крови) измельчают и помещают в коническую колбу на 100 мл, перемешивают с 3 г безводного сульфата натрия и заливают 30 мл ацетонитрила, помешивают 2 - 3 минуты и оставляют на 10 - 15 минут, затем фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента" в фарфоровую чашу. Экстракцию оставшегося в колбе биосубстрата повторяют еще дважды ацетонитрилом по 30 мл. Объединенный экстракт упаривают в фарфоровой чаше на бане досуха. К сухому остатку добавляют 2 - 3 мл 5 н соляной кислоты, тщательно ополаскивая остаток со стенок чаши, и сливают через слой стекловаты в делительную воронку на 100 мл. Чашу еще трижды ополаскивают по 2 мл 5 н соляной кислоты и сливают в ту же воронку. Из раствора соляной кислоты ровраль экстрагируют метиленом хлористым трижды по 15 мл. Органический слой отделяют, проводя его через воронку с безводным сульфатом натрия (слой 2 см) в круглодонную колбу на 100 мл для упаривания на испарителе. Растворитель выпаривают досуха, остаток растворяют в минимальном количестве ацетона и наносят количественно на хроматографическую пластинку.
<a id="p100071"></a>Моча. 5 мл мочи помещают в делительную воронку на 100 мл и экстрагируют встряхиванием в течение 2 - 3 минут 15 мл метилена хлористого, отделяют метилен хлористый, проводя через слой (2 см) безводного сульфата натрия в 100 мл круглодонную колбу для выпаривания. Экстракцию проводят еще 2 раза метиленом хлористым по 15 мл. Экстракт упаривают досуха на роторном испарителе, остаток растворяют в минимальном количестве ацетона и наносят количественно на хроматографическую пластинку.
<a id="p100072"></a>Кал. 5 г кала помещают в коническую колбу на 100 мл, заливают 50 мл ацетонитрила, помешивают содержимое колбы 2 - 3 минуты и оставляют на 10 - 15 минут. Фильтруют экстракт в фарфоровую чашу через бумажный фильтр. Экстракцию повторяют еще дважды по 30 мл ацетонитрила.
<a id="p100073"></a>Объединенные экстракты упаривают до 15 - 20 мл, помещают в делительную воронку, ополоснув ацетонитрилом (5 мл x 2) чашу. Ацетонитрильный слой промывают дважды 30 мл гексана, гексановые вытяжки собирают в отдельную делительную воронку и промывают 10 мл ацетонитрила. Объединяют ацетонитрильные слои в фарфоровой чаше и упаривают досуха на водяной бане. Далее поступают аналогично анализу крови, легких и т.д.

##### <a id="p100074"></a>2.4.2 Хроматографирование

<a id="p100075"></a>Хроматографирование проводят нисходящим способом. Хроматографические пластинки "Силуфол" сгибают от верхнего края на 2 см. Пробы и стандартные растворы наносят на пластинку на расстоянии 2 см от линии сгиба. Гнутый конец пластинки помещают в лодочку, в которую налит подвижный растворитель: смесь гептана и этилового эфира (1:4) или смесь толуола и этанола (93:7). Лодочка помещена в камеру для хроматографирования. После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей. Условия проявления хроматограммы следующие (в зависимости от проявляющего реагента):
<a id="p100076"></a>А. 1. Опрыскивание смесью 1 н раствора гидроокиси натрия и этилового спирта (50 x 50)(около 10 мл на пластинку).
2. <a id="p100077"></a>Выдерживание пластинок в сушильном шкафу при 120 °C в течение 10 минут.
3. <a id="p100078"></a>Опрыскивание 5 н соляной кислотой (8 мл на пластинку).
4. <a id="p100079"></a>Опрыскивание последовательно растворами:
<a id="p100080"></a>а) 2 г натрия азотистокислого в 100 мл 0,1 н раствора соляной кислоты (4 мл на пластинку);
<a id="p100081"></a>б) 5 г аммония хлористого или аммония сульфаминовокислого в 100 мл 0,1 н раствора соляной кислоты (8 мл на пластинку).
5. <a id="p100082"></a>Высушивание пластинок в токе воздуха.
6. <a id="p100083"></a>Опрыскивание раствором N-(1-нафтил)этилендиамин дигидрохлорида (5 г на 100 мл 1 н раствора соляной кислоты) или 1-процентным раствором 1-нафтола в этаноле (около 10 мл на пластинку).
<a id="p100084"></a>Следует обратить внимание на то, что расход всех реактивов для обработки хроматограмм должен быть минимальным, а струя раствора - рассеянной.
<a id="p100085"></a>Б. Опрыскивание пластинок 15-процентным спиртовым раствором едкого калия и термическая обработка при 150 °C в течение 20 минут. Затем пластинки последовательно обрабатывают диазореактивом и проявляющим реактивом N 1 или N 2.
<a id="p100086"></a>    При   наличии   ровраля   в   пробе   на   хроматограммах   проявляются
розово-фиолетовые  пятна в случае N-(1-нафтил)этилендиамин  дигидрохлорида,
оранжевые  пятна  в  случае  применения  1-нафтола  или  малиновые в случае
применения дифениламина. R  пятен 0,35  (гептан - диэтиловый  эфир (1:4)) и
                          f
0,50 - 0,55 (толуол - этанол (93:7)).


#### <a id="p100087"></a>2.5. Обработка результатов анализа


<a id="p100088"></a>Количественная оценка хроматограмм проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов.
<a id="p100089"></a>Содержание препарата в исследуемой пробе вычисляют по формулам:
<a id="p100090"></a>в крови и моче -

                                      A
<a id="p100091"></a>                                  X = -,
                                      V

<a id="p100092"></a>где:
<a id="p100093"></a>X - концентрация исследуемого препарата, мкг/мл;
<a id="p100094"></a>A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;
<a id="p100095"></a>V - объем взятой для анализа крови или мочи, мл;
<a id="p100096"></a>в печени, почках, мозге, легких, кале -

                                      A
<a id="p100097"></a>                                  X = -,
                                      P

<a id="p100098"></a>где:
<a id="p100099"></a>X - концентрация исследуемого препарата, мкг/мл;
<a id="p100100"></a>A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;
<a id="p100101"></a>P - навеска биосубстрата, г.


### 3. <a id="p100102"></a>Требования безопасности


<a id="p100103"></a>При проведении исследований по вышеприведенной Методике необходимо соблюдать правила предосторожности, требуемые при работе с ядовитыми, взрыво- и легковоспламеняющимися веществами.





<div align="right">

<a id="p100104"></a>Приложение

<a id="p100105"></a>Таблица 1

</div>


<div align="center">

<a id="p100106"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**

</div>



<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="14%"></colgroup>
<tr><td>Метрологические</td><td colspan="7">Анализируемый объект</td></tr>
<tr><td>параметры</td><td>печень</td><td>почки</td><td>легкие</td><td>мозг</td><td>кровь</td><td>кал</td><td>моча</td></tr>
<tr><td>Диапазон определяемых концентраций</td><td>0,1 - 10 мкг/г</td><td>0,1 - 10 мкг/г</td><td>0,1 - 10 мкг/г</td><td>0,1 - 10 мкг/г</td><td>0,1 - 10 мкг/г</td><td>0,2 - 10 мкг/г</td><td>0,04 - 10 мкг/г</td></tr>
<tr><td>Предел обнаружения, мкг</td><td>0,5</td><td>0,5</td><td>0,5</td><td>0,5</td><td>0,5</td><td>1,0</td><td>0,2</td></tr>
<tr><td>Предел обнаружения, мкг/ г, мкг/мл</td><td>0,1 мкг/г</td><td>0,1 мкг/г</td><td>0,1 мкг/г</td><td>0,1 мкг/г</td><td>0,1 мкг/мл</td><td>0,2 мкг/г</td><td>0,04 мкг/мл</td></tr>
<tr><td>Среднее значение определения стандартных количеств</td><td>86,0</td><td>88,0</td><td>89,0</td><td>85,4</td><td>94,0</td><td>85,4</td><td>98,2</td></tr>
<tr><td>C, %</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td>Стандартное отклонение</td><td>1,58</td><td>3,87</td><td>1,58</td><td>3,64</td><td>3,08</td><td>3,65</td><td>0,84</td></tr>
<tr><td>S</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td>Дов. интервал среднего значения при p = 0,95 и n = 5,</td><td>+/- 1,96</td><td>+/- 4,80</td><td>+/- 1,96</td><td>+/- 4,51</td><td>+/- 3,82</td><td>+/- 4,54</td><td>+/- 1,04</td></tr>
<tr><td>Относительное стандартное отклонение S , %</td><td>1,0</td><td>4,0</td><td>1,0</td><td>4,0</td><td>3,0</td><td>4,2</td><td>0,08</td></tr>
<tr><td>2</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td>Погрешность определения дельта, %</td><td>+/- 2,27</td><td>+/- 5,45</td><td>+/- 2,20</td><td>+/- 5,28</td><td>+/- 4,06</td><td>+/- 5,3</td><td>+/- 1,059</td></tr>
</table>




<a id="p100116"></a>

---