Временные методические указания по определению действующего вещества препарата А-1 методом ГЖХ в воде, почве и растительном материале
(утв. Минздравом СССР 31.07.1984 № 3073)
31 июля 1984 г. № 3073
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА А-1 МЕТОДОМ ГЖХ В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ
1. Краткая характеристика препарата
Натриевая соль бензоилмуравьиной кислоты д.э. препарата А-1 (92%).
В препарате содержится и натриевая соль бензойной кислоты (8%).
O
// \ -CCOONa
| C H O Na. |
|---|
\\ / 8 5 3
А-1 — белое или слегка с желтоватым оттенком кристаллическое вещество, без запаха. Растворимость (г/100 мл при 20 °C): в воде — 41,0, в этаноле — 2,0, ксилоле — 0,05, ацетоне — 0,04, в хлороформе практически нерастворим.
Препарат А-1 применяется в качестве стимулятора роста хлопчатника путем предпосевной замочки семян хлопчатника.
2. Методика определения действующего вещества препарата А-1 в воде, почве, растительном материале газохроматографическим методом
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении бензоилмуравьиной кислоты из анализируемого объекта диэтиловым эфиром и последующем определении в виде метилового эфира на газовом хроматографе с использованием пламенно-ионизационного детектора.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Диапазон определяемых концентраций: для воды — 0,05 — 4,0 мг/л; для почвы — 0,4 — 4,0 мг/кг; для растительного материала — 0,5 — 4,0 мг/кг.
Предел обнаружения в хроматографируемом объеме: для воды — 2,5 нг; для почвы — 4 нг; для растительного материала — 10 нг. _
Среднее значение определения стандартных количеств (C) при n = 5 для _
воды 90%, стандартное отклонение (S) - 8,04, относительное стандартное отклонение (Sr) - 8,9%, доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5 (ЭПСИЛОН ) - +/- 9,9%, соответственно аналогичные характеристики
альфа,k
_ _
для почвы: C - 85%, S - 12,06, Sr - 14,1%, ЭПСИЛОН - +/- 14,9; для
_ _ альфа,k
растительного материала: C - 82%, S - 14,47, Sr - 17,6%, ЭПСИЛОН -
альфа,k
17,9%.
2.1.3 Избирательность метода
Иные стимуляторы роста, применяемые на хлопчатнике (пикс, тур), определению препарата А-1 не мешают.
2.2. Реактивы и материалы
Соляная кислота чда, ГОСТ 3118-77.
Диэтиловый эфир (медицин.) фарм.
Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.
Серная кислота чда, ГОСТ 4204-77.
Метиловый спирт чда, ГОСТ 6995-77.
Гидразин-гидрат чда, ГОСТ 5832-65.
Кали едкое осч, ОСТ 6-01-301-74.
Фильтры беззольные, ТУ 6-09-1678-77.
Стандартные растворы метилового эфира бензоилмуравьиной кислоты в хлороформе с содержанием 0,5, 5, 10, 25, 50, 100 мкг/мл.
Наполнитель для хроматографической колонки: хроматон N-AW силанизированный ГМДС с 10% К-301.
2.3. Приборы, аппаратура и посуда
Хроматограф с пламенно-ионизационным детектором.
Стеклянная хроматографическая колонка 3 x 3000 мм.
Водяная баня, ТУ 46-22-587-75.
Цилиндры мерные на 250, 100, 25 мл, ГОСТ 1770-74.
Делительные воронки на 100 мл, ГОСТ 8613-75.
Колбы конические на 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Аппарат Сокслета, ГОСТ 9777-74.
Колбы мерные на 100, 50, 25 мл, ГОСТ 1770-74.
Прибор для получения диазометана (рис. 1 — не приводится).
Колбы круглодонные для отгонки растворителей на 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Прибор для отгонки растворителей, ТУ 25-11-917-74, тип ИР-1.
2.4. Отбор проб производится в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб, утвержденными Минздравом СССР 21.08.1979, № 2051-79.
2.5. Получение диазометана
В реакционную колбу прибора для получения диазометана (рис. 1) помещают 6 г едкого кали, 3 мл метанола и 3 мл гидразин-гидрата. В приемную колбу наливают 50 мл диэтилового эфира. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 капля за секунды. Окончание реакции получения диазометана определяют по появлению красно-бурой окраски реакционной смеси или по выделению белых паров в реакционной колбе. Эфирный раствор диазометана интенсивно желтого цвета предпочтительно применять свежеполученным, но можно хранить 3 — 5 дней в темной склянке на холоде.
2.6. Проведение определения
2.6.1 Экстракция из воды
Пробу воды в 250 мл концентрируют на ротационном испарителе до 25 — 30 мл, к охлажденному раствору в делительной воронке добавляют 1 мл соляной кислоты и встряхивают 5 минут. Выделившуюся кислоту экстрагируют 100 мл (5 x 20 мл) диэтилового эфира. Объединенные эфирные вытяжки сушат над безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель на ротационном испарителе до объема 3 — 5 мл.
2.6.2 Экстракция из почвы
К навеске почвы в 50 г добавляют 50 мл диэтилового эфира, 1 мл разбавленной (1:1) серной кислоты и встряхивают 5 минут, экстракт фильтруют и повторяют извлечение еще 4 раза эфиром, порциями по 25 мл, и соответствующим количеством разбавленной серной кислоты. Собранные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют эфир до объема 3 — 5 мл.
2.6.3 Экстракция из семян хлопчатника
Навеску в 25 г измельчают и помещают в патрон из фильтровальной бумаги, который вкладывают в аппарат Сокслета и экстрагируют с 200 — 250 мл диэтилового эфира и 3 мл разбавленной (1:1) серной кислоты. Экстракцию продолжают 2 часа. Полученный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют эфир до объема 3 — 5 мл.
2.6.4 Метилирование
К концентратам экстрактов добавляют 0,5 — 1 мл метанола и 3 — 5 мл эфирного раствора диазометана. Метилирование обычно длится 10 — 15 минут в колбочке с пришлифованной пробкой. По окончании метилирования избыток диазометана удаляют током азота и отгоняют растворитель. Полученный метиловый эфир разбавляют хлороформом до 5 мл в мерной посуде и далее хроматографируют.
2.6.5 Условия хроматографирования
-9
Хроматограф с ДИП, рабочая шкала электрометра - 10 x 10 А, скорость протяжки ленты самописца - 720 мм/час, колонка стеклянная 3 x 3000 мм, наполнитель колонки - хроматон N-AW, силанизированный ГМДС с 10% E-301 (размеры частиц 0,20 - 0,25 мм), температура испарителя - 300 °C, температура термостата колонок - 140 °C, газ-носитель - азот, скорость азота - 45 мл/мин., водорода - 55 мл/мин., воздуха - 360 мл/мин., вводимые в испаритель объемы - 1 мкл, абсолютное время удерживания метилового эфира
бензойной кислоты — 3 мин., бензоилмуравьиной кислоты — 10 мин.
2.7. Обработка результатов анализа
Содержание д.в. препарата А-1 определяют методом соотношения со стандартом по площади пика.
Концентрацию д.в. препарата А-1 в анализируемой пробе (X, мг/л или мг/кг) вычисляют по формуле:
C x S x V
2 2
S x V x P
1 1
C — количество метилового эфира бензоилмуравьиной кислоты в стандартном растворе, введенном в хроматограф, мкг;
S — площадь пика стандартного раствора, введенного в хроматограф, кв. 1 мм;
S — площадь пика препарата в хроматографируемом объеме, кв. мм; 2
V — объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл; 1
V — общий объем экстракта в хлороформе перед хроматографированием, мл; 2
P — навеска или объем анализируемой пробы, г/мл;
K — коэффициент пересчета метилового эфира в натриевую соль
бензоилмуравьиной кислоты (1,05).
3. Требования безопасности
Соблюдать правила предосторожности, необходимые при работе с ядовитыми и взрывоопасными веществами. Обратить особое внимание на стадию получения диазометана, обладающего высокой токсичностью и взрывоопасностью.