--- title: "\"Временные методические указания по определению действующего вещества препарата пликтран и его метаболитов (окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты) в биосубстратах хроматографическим методом\"" number: "3003-84" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-3003-84" --- ## "Временные методические указания по определению действующего вещества препарата пликтран и его метаболитов (окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты) в биосубстратах хроматографическим методом" # "Временные методические указания по определению действующего вещества препарата пликтран и его метаболитов (окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты) в биосубстратах хроматографическим методом" (утв. Минздравом СССР 27.04.1984 N 3003-84)
Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
**А.И.ЗАИЧЕНКО**
27 апреля 1984 г. N 3003-84
**ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА ПЛИКТРАН** **И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (ОКИСИ ДИЦИКЛОГЕКСИЛОЛОВА,** **ЦИКЛОГЕКСИЛОЛОВЯННОЙ КИСЛОТЫ) В БИОСУБСТРАТАХ** **ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ** > *(Дополнение к Методическим [указаниям](https://bukva.ai/docs/2803-83) N 2803-83)* ## 1. Краткая характеристика препарата Гидроокись трициклогексилолова, структурная формула: / \ \ /
/\
\ / Эмпирическая формула: C H SnO. 11 34 Молекулярная масса: 385,156. Синонимы и торговые названия: пликтран, цигексатин, тенкайд. Химически чистое д.в. препарата пликтран - белое кристаллическое соединение с точкой плавления 245 °C. Точка плавления технического продукта (95 - 96% чистоты) - 196 - 198 °C. Пликтран растворим в большинстве органических растворителей (хлороформ, гексан, метанол, этилацетат и др.). Растворимость в воде ограничена и составляет менее 1 мг/л. Практически не летуч. Агрегативное состояние в рабочей зоне - гидрозоль. Пликтран стабилен до 52 °C. Водная суспензия пликтрана стабильна в пределах pH от слабокислотной до щелочной. Препаративная форма пликтрана стабильна в течение 2-х лет при хранении в нормальных условиях. При взаимодействии с сильными кислотами образуется соль. Действующее вещество препарата пликтран - гидроокись трициклогексилолова в организме теплокровных образует два метаболита: окись дициклогексилолова и циклогексилоловянную кислоту. Препарат пликтран обладает средней токсичностью, ЛД для белых крыс 50 540 мг/кг (орально). Острая оральная токсичность продуктов разложения для белых крыс: окиси дициклогексилолова - 355 мг/кг, циклогексилоловянной кислоты - 3600 мг/кг. Препарат пликтран предлагается как высокоэффективный акарицид для наземного опрыскивания плодово-ягодных, цитрусовых, овощных, бахчевых культур и хлопчатника против растительных клещей, включая популяции, устойчивые к органофосфорным или другим акарицидам. ## 2. Методика определения д.в. препарата пликтран и его метаболитов в биосубстратах хроматографическим методом ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на извлечении пликтрана и его двух метаболитов из анализируемого биосубстрата органическими растворителями, хроматографировании смеси веществ в тонком слое пластинок "Силуфол" и проявлении хроматограмм спиртовым раствором гематоксилина (альтернативно - кверцетином или пирокатехоловым фиолетовым). ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода приведена в таблице. | Анализируемый объект | Анализируемое соединение | Чувствительность методики, мкг/г, мкг/мл | Диапазон опр-мых концентр., мкг/г, мкг/мл | Ср. процент обнаружения _ C, % | Стандартное отклонение _ S | Величина точного измерения эпсилон альфа,K | Относит. станд. отклон. Sr, % | Погрешность определения дельта, % | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | | Печень | I II III | 0,2 0,2 0,2 | 0,2 - 6 0,2 - 6 0,2 - 6 | 95,1 95,1 95,1 | 4,27 4,27 4,27 | +/- 5,31 +/- 5,31 +/- 5,31 | 4,49 4,49 4,49 | +/- 5,6 +/- 5,6 +/- 5,6 | | Почки | I II III | 0,2 0,2 0,2 | 0,2 - 6 0,2 - 6 0,2 - 6 | 95,1 95,1 95,1 | 4,27 4,27 4,27 | +/- 5,31 +/- 5,31 +/- 5,31 | 4,49 4,49 4,49 | +/- 5,6 +/- 5,6 +/- 5,6 | | Легкие | I II III | 0,2 0,2 0,2 | 0,2 - 6 0,2 - 6 0,2 - 6 | 95,0 95,0 94,0 | 5,10 5,30 5,90 | +/- 6,34 +/- 6,59 +/- 7,33 | 5,36 5,57 6,27 | +/- 6,67 +/- 6,94 +/- 7,79 | | Мозг | I II III | 0,2 0,2 0,2 | 0,2 - 6 0,2 - 6 0,2 - 6 | 90,0 90,0 91,0 | 4,31 4,72 4,96 | +/- 5,36 +/- 5,87 +/- 6,17 | 4,78 5,24 5,45 | +/- 5,95 +/- 6,52 +/- 6,78 | | Кровь | I II III | 0,2 0,2 0,1 | 0,2 - 6 0,2 - 6 0,1 - 6 | 95,1 95,1 94,0 | 4,30 4,27 4,78 | +/- 5,35 +/- 5,31 +/- 5,94 | 4,52 4,49 5,08 | +/- 5,62 +/- 5,58 +/- 6,32 | | Кал | I II III | 0,2 0,2 0,1 | 0,2 - 6 0,2 - 6 0,1 - 6 | 87,0 86,0 90,1 | 4,72 4,70 5,9 | +/- 5,87 +/- 5,84 +/- 7,33 | 5,42 5,46 6,55 | +/- 6,75 +/- 6,79 +/- 8,13 | | Моча | I II III | 0,1 0,1 0,1 | 0,1 - 6 0,1 - 6 0,1 - 6 | 97,4 97,4 97,4 | 2,69 3,05 3,12 | +/- 3,34 +/- 3,79 +/- 3,88 | 2,76 3,13 3,20 | +/- 3,43 +/- 3,89 +/- 3,98 | *Примечание.* I - трициклогексилоловогидроксид, II - дициклогексилоловооксид, III - циклогексилоловянная кислота. ##### 2.1.3 Избирательность метода Определению не мешают препараты акрекс, кельтан, антио, рагор, применяемые, как и пликтран, против растительноядных клещей. ### 2.2. Реактивы и материалы н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78. Уксусная кислота хч, ГОСТ 61-75. Этиловый спирт хч, ТУ 6-09-1710-77. Лимонная кислота хч, ГОСТ 908-79, 0,5-процентный водный раствор. Гематоксилин хч, имп., 0,1-процентный этанольный раствор. Кверцетин хч (ЧССР), 0,1-процентный этанольный раствор. Пирокатехоловый фиолетовый индикатор чда, ТУ 6-09-07-1087-78, насыщенный раствор в этиловом спирте. Натрий сернокислый безводный чда, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76). Активированный уголь марки "БАУ", ТУ 6-09-3247-73. Соляная кислота чда, ГОСТ 3118-77, водный раствор (1:9). Силикагель КСК, ТУ 6-09-2525-72 (0,28 - 0,45 мм и 0,10 - 0,14 мм). Крахмал, ГОСТ 10163-62. Пластинки хроматографические "Силуфол" - UV254 (ЧССР). Фильтры обеззоленные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77. Пластинки стеклянные, 9 x 12 см. Стандартные растворы гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты с содержанием 100 мкг в 1 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3), готовят из хч веществ. ### 2.3. Приборы, аппаратура и посуда Весы аналитические с погрешностью не более 0,001 г типа ВЛДП-100 г. Весы технические с погрешностью не более 0,5 г, ГОСТ 19491-74. Колбы конические, ГОСТ 10394-72, на 100, 250 мл. Колбы круглодонные со шлифом, ГОСТ 10394-72, на 100 мл. Ротационный испаритель, ТУ 25-11-917-74, тип ИР-1М. Цилиндры мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), на 25, 100, 250 мл. Пипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74), на 0,1, 5, 25 мл. Колбы мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), на 25, 100 мл. Стаканы химические, ГОСТ 10394-74. Воронки лабораторные, ГОСТ 8613-75. Камера для хроматографирования, ГОСТ 1065-66. Камера для опрыскивания. Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-65. Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 100, 250 мл. Осветитель ультрафиолетовый, ТУ 25-05-2098-76. Хроматографические колонки стеклянные (2 x 20 см). Анализатор световой вибрационный 236-Б-Гр. Водяные бани, ТУ 46-22-587-75. ### 2.4. Подготовка к определению ##### 2.4.1 Приготовление растворов Стандартные растворы гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова и циклогексилоловянной кислоты (100 мкг/мл). I. 25 мг хч вещества помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и доводят до метки. II. Из I раствора 10 мл отбирают в мерную колбу емкостью 25 мл и доводят смесью гексан - уксусная кислота до метки. Стандартные растворы хранят до 30 дней. 0,1-процентный раствор гематоксилина в 96% этаноле. 0,1 г гематоксилина помещают в 100 мл колбу и добавляют 96% этанол до метки. На каждые 100 мл раствора добавляют 1 - 2 капли конц. соляной кислоты. Реактив хранят в темной склянке до 60 дней. 0,1-процентный раствор кверцетина в 96% этаноле. 0,5 г кверцетина растворяют в 300 мл этилового спирта при слабом нагревании, охлаждают и доводят объем до 500 мл этиловым спиртом. Реактив хранят в темной склянке не более 1 недели. 0,5-процентный раствор лимонной кислоты. 0,5 г лимонной кислоты растворяют в 99,5 мл дистиллированной воды. Реактив хранят не более 1 месяца. ##### 2.4.2 Приготовление хроматографической колонки с силикагелем В стеклянную колонку размером 2 x 20 см, снабженную краном и пористым стеклянным фильтром, заливают на 1/2 высоты смесь гексан - уксусная кислота (20:3) и помещают 7 г силикагеля КСК (0,28 - 0,45 мм). Колонку перед употреблением промывают смесью гексан - уксусная кислота (20:3). ##### 2.4.3 Приготовление хроматографических пластинок с тонким слоем сорбента Из 40 г силикагеля КСК (0,10 - 0,14 мм), 1,5 г крахмала в 110 мл воды готовят сорбционную массу. Заваривают крахмал 15 мл воды, доливают остальную воду, засыпают силикагель и хорошо перемешивают. 10 г сорбционной массы наливают на пластинку и, покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Сушат в течение ночи при комнатной температуре. Хранят в эксикаторе. ### 2.5. Проведение определения ##### 2.5.1 Экстракция и очистка Кровь. 5 мл крови экстрагируют трижды по 5 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3). Объединенные экстракты проводят через воронку с сульфатом натрия, удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, растворяют сухой остаток в минимальном количестве смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку. Моча. 25 мл мочи экстрагируют дважды по 25 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3), затем к моче добавляют 5 мл этанола и опять экстрагируют 5 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3). Последнюю экстракцию повторяют еще раз, предварительно добавив 5 мл этанола. Объединенные экстракты проводят через воронку с сульфатом натрия и далее поступают, как и при анализе крови. Кал. 5 г кала экстрагируют трижды по 5 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3). К объединенным экстрактам добавляют 0,5 г активированного угля, перемешивают раствор в течение 5 минут, отфильтровывают от частичек угля и проводят через колонку с силикагелем в колбу для выпаривания, туда же собирают и смывы (гексан - уксусная кислота 20:3) угля и колбы (2 x 10 мл), пропущенные через колонку. Удаляют растворитель на ротационном испарителе и далее поступают, как при анализе крови. Печень, почки, мозг, легкие. 5 г пробы тщательно измельчают, помещают в коническую колбу на 100 мл, добавляют 15 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и экстрагируют в течение 10 минут. Экстракцию повторяют еще дважды по 10 мл смеси. Собирают все экстракты в отдельную колбу, а к биоматериалу добавляют 5 мл разбавленной соляной кислоты (1:9), помешивают смесь 2 - 3 минуты и декантируют в колбу с первоначальными экстрактами. Процедуру повторяют еще раз. Объединенные экстракты проводят через колонку с силикагелем в колбу для выпаривания. Туда же собирают смывы колбы (2 x 10 мл), пропущенные через колонку. Выпаривают на ротационном испарителе растворители и далее поступают, как при анализе крови. ##### 2.5.2 Хроматографирование и проявление Удалив растворитель, сухой остаток растворяют в минимальном количестве смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку, через 5 минут развивают хроматограмму в системе подвижных растворителей гексан:уксусная кислота (49:10,5). После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей. Хроматограммы проявляют одним из нижеследующих способов. 1. Опрыскивание 0,1% раствором гематоксилина в 95% этиловом спирте, УФ-облучение в течение 5 минут и опрыскивание 0,5-процентным водным раствором лимонной кислоты. 2. УФ-облучение в течение 10 минут и опрыскивание насыщенным этанольным раствором пирокатехолового фиолетового. 3. Опрыскивание 0,2 н раствором серной кислоты, УФ-облучение в течение 10 минут и опрыскивание 0,1-процентным этанольным раствором кверцетина. При наличии гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты в пробе на хроматограмме, обработанной гематоксилином, появляются сиреневые пятна на розовом фоне; пирокатехоловым фиолетовым - синие пятна на светлом фоне, с R соответственно: 0,76 +/- f 0,01, 0,26 +/- 0,01, 0,14 +/- 0,01. Содержание гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты в пробе находят путем сравнения размеров и интенсивности окраски пятен с пятнами стандартных растворов. ### 2.6. Обработка результатов анализа Количество гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова и циклогексилоловянной кислоты рассчитывают по формулам: в крови и моче: A X = -, V где: X - концентрация веществ в мкг/мл; A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг; V - объем взятой для анализа крови или мочи, мл; в печени, почках, мозге, легких, кале: A X = -, P где: X - концентрация вещества, мкг/г; A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;
P - навеска биосубстрата, г.
## 3. Требования безопасности При работе с пликтраном и его метаболитами беречь глаза, руки, а также соблюдать все требования безопасности, необходимые при работе с кислотами, ядовитыми и взрывоопасными веществами. ---