Временные методические указания по определению действующего вещества препарата пликтран и его метаболитов (окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты) в биосубстратах хроматографическим методом
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "Временные методические указания по определению действующего вещества препарата пликтран и его метаболитов (окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты) в биосубстратах хроматографическим методом". 3003-84. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-3003-84
(утв. Минздравом СССР 27.04.1984 № 3003-84)
27 апреля 1984 г. № 3003-84
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА ПЛИКТРАН И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (ОКИСИ ДИЦИКЛОГЕКСИЛОЛОВА, ЦИКЛОГЕКСИЛОЛОВЯННОЙ КИСЛОТЫ) В БИОСУБСТРАТАХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
(Дополнение к Методическим указаниям № 2803-83)
1. Краткая характеристика препарата
Гидроокись трициклогексилолова, структурная формула:
/ \
\ /
| / | \ | |
\ /
Эмпирическая формула: C H SnO. 11 34
Синонимы и торговые названия: пликтран, цигексатин, тенкайд.
Химически чистое д.в. препарата пликтран — белое кристаллическое соединение с точкой плавления 245 °C. Точка плавления технического продукта (95 — 96% чистоты) — 196 — 198 °C.
Пликтран растворим в большинстве органических растворителей (хлороформ, гексан, метанол, этилацетат и др.). Растворимость в воде ограничена и составляет менее 1 мг/л.
Практически не летуч. Агрегативное состояние в рабочей зоне — гидрозоль.
Пликтран стабилен до 52 °C. Водная суспензия пликтрана стабильна в пределах pH от слабокислотной до щелочной.
Препаративная форма пликтрана стабильна в течение 2-х лет при хранении в нормальных условиях. При взаимодействии с сильными кислотами образуется соль.
Действующее вещество препарата пликтран — гидроокись трициклогексилолова в организме теплокровных образует два метаболита: окись дициклогексилолова и циклогексилоловянную кислоту.
Препарат пликтран обладает средней токсичностью, ЛД для белых крыс 50
540 мг/кг (орально). Острая оральная токсичность продуктов разложения для белых крыс: окиси дициклогексилолова - 355 мг/кг, циклогексилоловянной
кислоты — 3600 мг/кг.
Препарат пликтран предлагается как высокоэффективный акарицид для наземного опрыскивания плодово-ягодных, цитрусовых, овощных, бахчевых культур и хлопчатника против растительных клещей, включая популяции, устойчивые к органофосфорным или другим акарицидам.
2. Методика определения д.в. препарата пликтран и его метаболитов в биосубстратах хроматографическим методом
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении пликтрана и его двух метаболитов из анализируемого биосубстрата органическими растворителями, хроматографировании смеси веществ в тонком слое пластинок «Силуфол» и проявлении хроматограмм спиртовым раствором гематоксилина (альтернативно — кверцетином или пирокатехоловым фиолетовым).
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице.
| Анализируемый объект | Анализируемое соединение | Чувствительность методики, мкг/г, мкг/мл | Диапазон опр-мых концентр., мкг/г, мкг/мл | Ср. процент обнаружения _ C, % | Стандартное отклонение _ S | Величина точного измерения эпсилон альфа,K | Относит. станд. отклон. Sr, % | Погрешность определения дельта, % |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| Печень | I II III | 0,2 0,2 0,2 | 0,2 — 6 0,2 — 6 0,2 — 6 | 95,1 95,1 95,1 | 4,27 4,27 4,27 | +/- 5,31 +/- 5,31 +/- 5,31 | 4,49 4,49 4,49 | +/- 5,6 +/- 5,6 +/- 5,6 |
| Почки | I II III | 0,2 0,2 0,2 | 0,2 — 6 0,2 — 6 0,2 — 6 | 95,1 95,1 95,1 | 4,27 4,27 4,27 | +/- 5,31 +/- 5,31 +/- 5,31 | 4,49 4,49 4,49 | +/- 5,6 +/- 5,6 +/- 5,6 |
| Легкие | I II III | 0,2 0,2 0,2 | 0,2 — 6 0,2 — 6 0,2 — 6 | 95,0 95,0 94,0 | 5,10 5,30 5,90 | +/- 6,34 +/- 6,59 +/- 7,33 | 5,36 5,57 6,27 | +/- 6,67 +/- 6,94 +/- 7,79 |
| Мозг | I II III | 0,2 0,2 0,2 | 0,2 — 6 0,2 — 6 0,2 — 6 | 90,0 90,0 91,0 | 4,31 4,72 4,96 | +/- 5,36 +/- 5,87 +/- 6,17 | 4,78 5,24 5,45 | +/- 5,95 +/- 6,52 +/- 6,78 |
| Кровь | I II III | 0,2 0,2 0,1 | 0,2 — 6 0,2 — 6 0,1 — 6 | 95,1 95,1 94,0 | 4,30 4,27 4,78 | +/- 5,35 +/- 5,31 +/- 5,94 | 4,52 4,49 5,08 | +/- 5,62 +/- 5,58 +/- 6,32 |
| Кал | I II III | 0,2 0,2 0,1 | 0,2 — 6 0,2 — 6 0,1 — 6 | 87,0 86,0 90,1 | 4,72 4,70 5,9 | +/- 5,87 +/- 5,84 +/- 7,33 | 5,42 5,46 6,55 | +/- 6,75 +/- 6,79 +/- 8,13 |
| Моча | I II III | 0,1 0,1 0,1 | 0,1 — 6 0,1 — 6 0,1 — 6 | 97,4 97,4 97,4 | 2,69 3,05 3,12 | +/- 3,34 +/- 3,79 +/- 3,88 | 2,76 3,13 3,20 | +/- 3,43 +/- 3,89 +/- 3,98 |
Примечание. I — трициклогексилоловогидроксид, II — дициклогексилоловооксид, III — циклогексилоловянная кислота.
2.1.3 Избирательность метода
Определению не мешают препараты акрекс, кельтан, антио, рагор, применяемые, как и пликтран, против растительноядных клещей.
2.2. Реактивы и материалы
Уксусная кислота хч, ГОСТ 61-75.
Этиловый спирт хч, ТУ 6-09-1710-77.
Лимонная кислота хч, ГОСТ 908-79, 0,5-процентный водный раствор.
Гематоксилин хч, имп., 0,1-процентный этанольный раствор.
Кверцетин хч (ЧССР), 0,1-процентный этанольный раствор.
Пирокатехоловый фиолетовый индикатор чда, ТУ 6-09-07-1087-78, насыщенный раствор в этиловом спирте.
Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.
Активированный уголь марки «БАУ», ТУ 6-09-3247-73.
Соляная кислота чда, ГОСТ 3118-77, водный раствор (1:9).
Силикагель КСК, ТУ 6-09-2525-72 (0,28 — 0,45 мм и 0,10 — 0,14 мм).
Пластинки хроматографические «Силуфол» — UV254 (ЧССР).
Фильтры обеззоленные «синяя лента», ТУ 6-09-1678-77.
Пластинки стеклянные, 9 x 12 см.
Стандартные растворы гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты с содержанием 100 мкг в 1 мл смеси гексан — уксусная кислота (20:3), готовят из хч веществ.
2.3. Приборы, аппаратура и посуда
Весы аналитические с погрешностью не более 0,001 г типа ВЛДП-100 г.
Весы технические с погрешностью не более 0,5 г, ГОСТ 19491-74.
Колбы конические, ГОСТ 10394-72, на 100, 250 мл.
Колбы круглодонные со шлифом, ГОСТ 10394-72, на 100 мл.
Ротационный испаритель, ТУ 25-11-917-74, тип ИР-1М.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 25, 100, 250 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1, 5, 25 мл.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 25, 100 мл.
Стаканы химические, ГОСТ 10394-74.
Воронки лабораторные, ГОСТ 8613-75.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 1065-66.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-65.
Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 100, 250 мл.
Осветитель ультрафиолетовый, ТУ 25-05-2098-76.
Хроматографические колонки стеклянные (2 x 20 см).
Анализатор световой вибрационный 236-Б-Гр.
Водяные бани, ТУ 46-22-587-75.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Приготовление растворов
Стандартные растворы гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова и циклогексилоловянной кислоты (100 мкг/мл). I. 25 мг хч вещества помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в смеси гексан — уксусная кислота (20:3) и доводят до метки. II. Из I раствора 10 мл отбирают в мерную колбу емкостью 25 мл и доводят смесью гексан — уксусная кислота до метки. Стандартные растворы хранят до 30 дней.
0,1-процентный раствор гематоксилина в 96% этаноле. 0,1 г гематоксилина помещают в 100 мл колбу и добавляют 96% этанол до метки. На каждые 100 мл раствора добавляют 1 — 2 капли конц. соляной кислоты. Реактив хранят в темной склянке до 60 дней.
0,1-процентный раствор кверцетина в 96% этаноле. 0,5 г кверцетина растворяют в 300 мл этилового спирта при слабом нагревании, охлаждают и доводят объем до 500 мл этиловым спиртом. Реактив хранят в темной склянке не более 1 недели.
0,5-процентный раствор лимонной кислоты. 0,5 г лимонной кислоты растворяют в 99,5 мл дистиллированной воды. Реактив хранят не более 1 месяца.
2.4.2 Приготовление хроматографической колонки с силикагелем
В стеклянную колонку размером 2 x 20 см, снабженную краном и пористым стеклянным фильтром, заливают на 1/2 высоты смесь гексан — уксусная кислота (20:3) и помещают 7 г силикагеля КСК (0,28 — 0,45 мм). Колонку перед употреблением промывают смесью гексан — уксусная кислота (20:3).
2.4.3 Приготовление хроматографических пластинок с тонким слоем сорбента
Из 40 г силикагеля КСК (0,10 — 0,14 мм), 1,5 г крахмала в 110 мл воды готовят сорбционную массу. Заваривают крахмал 15 мл воды, доливают остальную воду, засыпают силикагель и хорошо перемешивают. 10 г сорбционной массы наливают на пластинку и, покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Сушат в течение ночи при комнатной температуре. Хранят в эксикаторе.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция и очистка
Кровь. 5 мл крови экстрагируют трижды по 5 мл смесью гексан — уксусная кислота (20:3). Объединенные экстракты проводят через воронку с сульфатом натрия, удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, растворяют сухой остаток в минимальном количестве смеси гексан — уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку.
Моча. 25 мл мочи экстрагируют дважды по 25 мл смесью гексан — уксусная кислота (20:3), затем к моче добавляют 5 мл этанола и опять экстрагируют 5 мл смеси гексан — уксусная кислота (20:3). Последнюю экстракцию повторяют еще раз, предварительно добавив 5 мл этанола. Объединенные экстракты проводят через воронку с сульфатом натрия и далее поступают, как и при анализе крови.
Кал. 5 г кала экстрагируют трижды по 5 мл смесью гексан — уксусная кислота (20:3). К объединенным экстрактам добавляют 0,5 г активированного угля, перемешивают раствор в течение 5 минут, отфильтровывают от частичек угля и проводят через колонку с силикагелем в колбу для выпаривания, туда же собирают и смывы (гексан — уксусная кислота 20:3) угля и колбы (2 x 10 мл), пропущенные через колонку. Удаляют растворитель на ротационном испарителе и далее поступают, как при анализе крови.
Печень, почки, мозг, легкие. 5 г пробы тщательно измельчают, помещают в коническую колбу на 100 мл, добавляют 15 мл смеси гексан — уксусная кислота (20:3) и экстрагируют в течение 10 минут. Экстракцию повторяют еще дважды по 10 мл смеси. Собирают все экстракты в отдельную колбу, а к биоматериалу добавляют 5 мл разбавленной соляной кислоты (1:9), помешивают смесь 2 — 3 минуты и декантируют в колбу с первоначальными экстрактами. Процедуру повторяют еще раз. Объединенные экстракты проводят через колонку с силикагелем в колбу для выпаривания. Туда же собирают смывы колбы (2 x 10 мл), пропущенные через колонку. Выпаривают на ротационном испарителе растворители и далее поступают, как при анализе крови.
2.5.2 Хроматографирование и проявление
Удалив растворитель, сухой остаток растворяют в минимальном количестве смеси гексан — уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку, через 5 минут развивают хроматограмму в системе подвижных растворителей гексан:уксусная кислота (49:10,5). После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей. Хроматограммы проявляют одним из нижеследующих способов.
1. Опрыскивание 0,1% раствором гематоксилина в 95% этиловом спирте, УФ-облучение в течение 5 минут и опрыскивание 0,5-процентным водным раствором лимонной кислоты.
2. УФ-облучение в течение 10 минут и опрыскивание насыщенным этанольным раствором пирокатехолового фиолетового.
3. Опрыскивание 0,2 н раствором серной кислоты, УФ-облучение в течение 10 минут и опрыскивание 0,1-процентным этанольным раствором кверцетина.
При наличии гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты в пробе на хроматограмме, обработанной
гематоксилином, появляются сиреневые пятна на розовом фоне; пирокатехоловым фиолетовым — синие пятна на светлом фоне, с R соответственно: 0,76 +/- f 0,01, 0,26 +/- 0,01, 0,14 +/- 0,01.
Содержание гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты в пробе находят путем сравнения размеров и интенсивности окраски пятен с пятнами стандартных растворов.
2.6. Обработка результатов анализа
Количество гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова и циклогексилоловянной кислоты рассчитывают по формулам:
A
X — концентрация веществ в мкг/мл;
A — количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;
V — объем взятой для анализа крови или мочи, мл;
в печени, почках, мозге, легких, кале:
A
X — концентрация вещества, мкг/г;
A — количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;
3. Требования безопасности
При работе с пликтраном и его метаболитами беречь глаза, руки, а также соблюдать все требования безопасности, необходимые при работе с кислотами, ядовитыми и взрывоопасными веществами.