Временные методические указания по определению сикарола в воде, почве и зерне методом газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 27.04.1984 № 2992-84)
27 апреля 1984 г. № 2992-84
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СИКАРОЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ И ЗЕРНЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1. Краткая характеристика препарата
Действующее вещество — пиракарболид: 2-метил-5,6-дигидро-4-N-пиран-3-карбоксанилид.
<pre class="legal-pre"> O ───
││ // \\ C H NO .
/ \-C-NH-\ ___ / 13 15 2
│ ││ ───</pre>
\ /-CH Мол. масса 217,3. O 3
Порошок светло-серого цвета. Точка плавления 106 — 107 °C. Растворимость в воде 600 мг/л при 25 °C (pH нейтральная), растворим в большинстве органических растворителей, слабо растворим в бензоле и циклогексане. Препарат стабилен в течение 2-х лет при нормальных условиях хранения.
Сикарол малотоксичен для теплокровных животных, ЛД (технического 50 продукта) при оральном введении крысам — 15000 мг/кг, собакам — 5000 мг/кг.
Сикарол — системный фунгицид, предназначается для борьбы с базидиальными грибами. Рекомендуется для полевых испытаний против полегания сеянцев хвойных пород в питомниках с нормой расхода 5 — 10 г/кг и шютте сосны в концентрации 0,2 — 0,4%. МДУ и ПДК сикарола в воде и почве не установлены.
2. Методика определения сикарола
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на гидролитическом расщеплении сикарола раствором серной кислоты (1:4), ацилировании ангидридом полифторкарбоновой кислоты и определении образующегося производного методом ГЖХ с электронозахватным детектором.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода (n = 5) приведена в таблице.
| Анализируемая проба | Диапазон определяемых концентраций (мг/л, мг/кг) | Предел обнаружения (мг/л, мг/кг) | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, % | Доверительный интервал, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Вода Почва Зерно | 0,01 — 0,1 0,05 — 0,5 0,05 — 0,5 | 0,005 0,02 0,02 | 107 81 95 | 8,5 7,0 4,5 | 107 +/- 10,0 81 +/- 9,0 95 +/- 6,0 |
2.2. Реактивы и растворы
Хлороформ фарм., ТУ 6-09-4263-76.
Спирт этиловый хч, ТУ 6-09-1710-77.
Серная кислота концентрированная ч, ГОСТ 4203-77.
Натрия гидроокись хч, ГОСТ 4328-77, 15% раствор.
Натрий сернокислый безводный ч, ГОСТ 4166-76.
Кальций хлористый ч, ГОСТ 4460-77, 1% раствор.
3-Трифторметокси-2,2,3,3-тетрафторпропионовый ангидрид <...>
Т кип. = 112 — 114 °C или гептафтормасляный ангидрид <...>
Азот осч, ГОСТ 9293-74, или аргон ч, высший сорт, содержащий O < 0,002%. 2
Газ для отдувки (воздух, азот, гелий, аргон).
Хроматом № AW DMCS (0,16 — 0,20 мм) С 5% XE-60 (ЧССР) или
Хроматом № Супер (0,16 — 0,20 мм) с 3% OV-17 (ЧССР).
Стандартный раствор № 1 сикарола в этиловом спирте с концентрацией 100 мкг/мл.
Стандартные растворы сикарола с концентрациями 1,0; 2,0; 4,0 мкг/мл готовят разбавлением стандартного раствора № 1 дистиллированной водой.
2.3. Приборы и посуда
Хроматограф «Цвет-106» (или любой другой с детектором по захвату электронов).
Колонка стеклянная 1 м x 3 мм.
Ротационный испаритель вакуумный любого типа.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-75.
Баня водяная или масляная, ТУ 46-22-608-75.
Термометры электроконтактные до 100 °C и 150 °C, ГОСТ 9871-75.
Воронки делительные емкостью 100 мл, тип УШ, ГОСТ 8613-75.
Колбы круглодонные емкостью 100 мл, тип КККШ, ГОСТ 10394-72.
Колбы плоскодонные конические емкостью 100 мл и 25 мл, тип КН, ГОСТ 10394-72.
Холодильник с водяным охлаждением, тип ХПТ-КШ, ГОСТ 9499-70.
Воронки фильтрующие диаметром 20 мм, тип ВФ, ГОСТ 9775-69.
Воронки, тип 1а, ГОСТ 8613-75.
Пробирки градуированные со шлифом на 10 мл, тип ПГКШ, ГОСТ 10515-75.
Колбы мерные емкостью 50 мл, тип 1а, ГОСТ 1770-74.
Пипетки емкостью 1, 5, 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-71.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды», утвержденным Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, № 2051-79.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция
Вода. Пробу воды объемом 100 мл экстрагируют в делительной воронке хлороформом порциями по 20 мл и два раза по 10 мл при встряхивании в течение двух минут. Экстракты объединяют и отделяют растворитель на ротационном испарителе при температуре бани 50 °C.
Почва. Анализируемую навеску (10 г) помещают в плоскодонную коническую колбу емкостью 100 мл и приливают 30 мл экстрагента (смесь равных объемов ацетона и 1% водного раствора хлористого кальция). Встряхивают колбу на аппарате для встряхивания 30 мин., отфильтровывают экстракт через бумажный фильтр. Операцию повторяют и смывают колбу и фильтрат 10 мл экстрагента. Из объединенного экстракта отгоняют ацетон на ротационном испарителе при 50 °C. Водный остаток переносят в делительную воронку, в колбу для отгонки приливают 10 мл хлороформа, энергично встряхивают несколько раз и переносят хлороформ в делительную воронку. Сикарол экстрагируют в делительной воронке этим хлороформом и еще два раза порциями по 5 мл при встряхивании в течение двух минут. Экстракты объединяют и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре бани 50 °C до 1 — 2 капель. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха.
Зерно. Анализируемую навеску (10 г) помещают в плоскодонную коническую колбу емкостью 100 мл и приливают 15 мл этанола. Встряхивают колбу на аппарате для встряхивания 30 мин., отфильтровывают экстракт через бумажный фильтр. Промывают осадок на фильтре 5 мл эталона. Экстракт разбавляют дистиллированной водой до объема 100 мл. Водный раствор переносят в делительную воронку, приливают 20 мл хлороформа и энергично встряхивают. Хлороформ пропускают через 0,5 см слой безводного сульфата натрия. Операцию повторяют дважды, используя по 10 мл хлороформа. Экстракты объединяют и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре бани 50 °C до 1 — 2 капель. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха.
2.5.2 Гидролиз, получение производных для ГЖХ и количественное определение
Приливают в колбы 4,0 мл воды и 1,0 мл концентрированной серной кислоты и выдерживают 0,5 часа при 120 °C с обратным холодильником. Охлаждают, смывают стенки и шлиф холодильника 5 мл воды, приливают в колбу 5 мл бензола, а затем нейтрализуют при охлаждении 15% раствором гидроокиси натрия до pH 10, контролируя по универсальной индикаторной бумаге. Закрывают колбу притертой пробкой и энергично встряхивают в течение минуты, затем переливают содержимое колбы в делительную воронку. Отделяют бензольный слой и фильтруют его через 0,5 см слой безводного сульфата натрия, засыпанного в фильтрующую воронку. Из фильтрата пипеткой отбирают 0,5 мл раствора, переносят в градуированную пробирку и прикапывают микрошприцем 2 мкл реагента — ангидрида 3-трифторметокси-2,2,3,3-тетрафторпропионовой кислоты. Через 5 мин. помещают пробирку в стаканчик с водой комнатной температуры, растворитель и избыток реагента отдувают через стеклянный капилляр в токе воздуха или инертного газа, не допуская сильного вспенивания, до 1 — 2 капель раствора. К остатку приливают 0,5 мл гексана, встряхивают и вводят 5 мкл раствора в хроматограф.
2.6. Условия хроматографирования
Газ-носитель — аргон ч или азот осч.
При использовании азота осч чувствительность детектирования в 4 — 5 раз выше.
Скорость газа-носителя на продувку детектора — 150 мл/мин.
Скорость газа-носителя через колонку — 45 мл/мин.
Температура испарителя — 250 °C, термостата детектора — 250 °C, колонки (ЖЕ-60) — 140 °C.
-12 -10 Рабочая шкала электрометра 20 x 10 А при работе с аргоном и 10 А
при работе с азотом осч.
Время удерживания: абсолютное — 2 мин. 31 с, относительное (относительно гексахлорбензола) — 0,37.
Линейный динамический диапазон детектирования (по сикаролу) 0,02 — 2,0 нг.
2.7. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят по калибровочному графику. Для построения калибровочного графика вносят по 0,5 мл стандартного раствора сикарола, содержащего 1,0, 2,0, 4,0 мкг сикарола, приливают 3,5 мл воды и 1,0 мл серной кислоты и проводят гидролиз, ацилирование, ГЖХ-анализ так, как описано выше.
Строят график зависимости H = f(C),
C — содержание сикарола в стандартном растворе, мкг.
Содержание сикарола в анализируемой пробе рассчитывают по уравнению:
A
X — содержание препарата в анализируемой пробе, мг/кг (мг/л);
A — количество препарата, найденное по калибровочному графику, мкг;
3. Требования безопасности
Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, применяемые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами. Работа с фторированным ангидридом проводится в вытяжном шкафу.