--- title: "\"Методические указания по определению остаточных количеств пиклорама в воде, почве, зерне и растительном материале газохроматографическим методом\"" number: "2990-84" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-2990-84-2" --- ## "Методические указания по определению остаточных количеств пиклорама в воде, почве, зерне и растительном материале газохроматографическим методом" # "Методические указания по определению остаточных количеств пиклорама в воде, почве, зерне и растительном материале газохроматографическим методом" (утв. Минздравом СССР 27.04.1984 N 2990-84)
Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
**А.И.ЗАИЧЕНКО**
27 апреля 1984 г. N 2990-84
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПИКЛОРАМА В ВОДЕ,** **ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ** **ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ**
(Дополнение к Методическим указаниям
по определению торфена в почве,
воде методом газожидкостной хроматографии N 1978-79) ## 1. Краткая характеристика препарата #### 1.1 Пиклорам. 1.2. 4-амино-3,5,6-трихлорпиколиновая кислота. #### 1.3 NH 2 C H Cl N O Cl / \\Cl 6 3 3 2 2 Cl \ //COOH Мол. масса 241,46 N #### 1.4 Тордон, хлорамп. #### 1.5 В чистом виде белое кристаллическое вещество со слабым запахом хлора с Т пл. 209,5 - 210 °C и Т кип. 190 °C при 12 мм рт. ст. Константа -3 -7 диссоциации 1,3 x 10 . Упругость паров при 35 °C - 6 x 10 мм рт. ст. Стабильно при хранении. Растворимость (г/л при 25°) в воде - 0,43, бензоле - 0,20, ацетонитриле - 1,60, этаноле - 1,05 и ацетоне - 1,98. Малотоксичен для теплокровных: ПДК в почве 0,5 мг/кг, содержание в капусте, зерне хлебных злаков не допускается. Применяется для борьбы с двудольными и трудноискореняемыми сорняками в посевах зерновых культур в виде солей и в смеси с 2,4-Д и 2М-4Х, а также для уничтожения многолетних сорняков. ## 2. Методика определения пиклорама ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на извлечении пиклорама из растительных проб 0,05 М раствором гидроокиси натрия и из почвенных образцов подкисленным щавелевой кислотой 50% водным ацетоном; очистке экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и на колонке с окисью алюминия; последующем определении газожидкостной хроматографией с детектором постоянной скорости рекомбинации. С помощью предлагаемого метода можно определить пиклорам, находящийся в растительном материале как в свободном, так и в связанном состоянии в виде конъюгатов с эндогенными веществами пробы. ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода Минимально детектируемое количество - 0,02 мг. Нижний предел определения пиклорама в воде - 0,001 мг/л, в почве - 0,005 мг/кг, в траве - 0,01 мг/кг, в сене - 0,05 мг/кг и в зерне - 0,01 мг/кг. Размах варьирования, %: вода 89,1 - 99,2; почва 84,2 - 102,2; сено 65,1 - 80,1; зерно 73,2 - 89,0. Открываемость метода при добавлении стандартных количеств пиклорама составляет (при p = 0,95 и n = 5) для воды 94,2 +/- 2,8; для почвы 91,6 +/- 4,1; для травы 79,2 +/- 5,3; для сена 74,0 +/- 6,4 и для зерна 82,4 +/- 6,6%. ##### 2.1.3 Избирательность метода Гербицид типа 2,4-Д и дитиокарбаматные фунгициды (цинеб, поликарбацин) определению не мешают. ### 2.2. Реактивы и материалы Азот газообразный осч, ГОСТ 9293-74. 4-Амино-3,5,6-трихлорпиколиновая кислота хч. Метиловый эфир 4-амино-3,5,6-трихлорпиколиновой кислоты хч. Ацетон хч, ГОСТ 2603-79. Бензол хч, [ГОСТ 5955-75](https://bukva.ai/docs/gost-5955-75). н-Гексан ч, ТУ 6-09-3375-78, перегнанный. Диэтиловый эфир (для наркоза), фармакопея СССР. Калий марганцовокислый хч, ГОСТ 20490-75, насыщенный водный раствор. Натрий углекислый кислый чда, [ГОСТ 4201-79](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79). Натрий гидроокись хч, ГОСТ 4328-77. Натрий гидросернистокислый ч, ТУ МХП ГХП 126-56, 5 М водный раствор готовится непосредственно перед употреблением. Натрий сернокислый безводный хч, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76). Натрий хлористый хч, ГОСТ 4233-77. Алюминия окись для хроматографии ч, ТУ 6-09-3916-75, прокаливается 4 часа при 600 °C и хранится в эксикаторе над P O . 2 5 Серная кислота хч, ГОСТ 4204-77. Соляная кислота хч, ГОСТ 3118-77. Фосфорная кислота хч, ГОСТ 6552-80. Щавелевая кислота хч, ГОСТ 22180-76. Хлороформ чда, ГОСТ 3160-51, перегнанный. Хроматон N-AW-DMCS, пропитанный 3% или 5% SE-30 (0,20 - 0,25 мм). Хроматон N-AW-DMCS, пропитанный 3% OV-225 (0,20 - 0,25 мм). Нитрозометилмочевина. Диазометан, свежеприготовленный эфирный раствор из нитрозометилмочевины. Стандартный раствор метилового эфира пиклорама в гексане с содержанием 0,1 - 1 мкг/мл. ### 2.3. Приборы и посуда Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов или постоянной скорости рекомбинации ("Цвет-5", "Цвет-106", "Цвет-110" и др.). Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-112917-74. Вакуумный водоструйный стеклянный насос, ГОСТ 10696-75. Водяная баня, ТУ 46-22-603-75. Микрошприцы МШ-1, МШ-10, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Почвенное сито с диаметром отверстий 1 мм. Колбы конические плоскодонные на 100 мл с притертыми пробками КПШ-100-29/32, ГОСТ 10394-72. Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Колбы Эрленмейера на 100 мл без шлифов, КПШ-100, ГОСТ 10394-72. Воронки делительные на 100 и 500 мл, ГОСТ 8613-75. Фильтры стеклянные N 2 и N 4, ГОСТ 9775-69. Концентраторы (грушевидные колбы на 50 и 100 мл) на шлифах (N 14 или N 19) КТУ-100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72. Пробирки градуированные с притертыми пробками на 20 мл. Пипетки Мора на 1, 5 и 10 мл. Пипетки мерные на 0,1, 1 и 5 мл, ГОСТ 20291-74. Фильтры бумажные ("красная лента"), ТУ 6-09-1706-72. Универсальная индикаторная бумага. Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-73. Колбы Бунзена на 500 мл, ГОСТ 6514-75. Центрифуга. Пробирки конические центрифужные, ГОСТ 10515-75. Секундомер, ГОСТ 16820-71. Кофейная мельница. ### 2.4. Отбор и подготовка проб Воду фильтруют от механических примесей и отбирают среднюю пробу. Предварительно высушенную до воздушно-сухого состояния пробу почвы растирают и просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм. Из просеянной пробы отбирают среднюю пробу массой 20 г. Растительный материал предварительно высушивают до воздушно-сухого состояния, размалывают на кофейной мельнице и отбирают среднюю пробу массой 5 г. ### 2.5. Проведение определения ##### 2.5.1 Экстрагирование пиклорама и очистка экстракта Вода. 200 мл воды после подкисления концентрированной серной кислотой до pH 2,0 помещают в делительную воронку вместимостью 500 мл и трижды экстрагируют хлороформом (по 40 мл), встряхивая каждый раз в течение 2 минут. Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сернокислым натрием, концентрируют досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C, остаток метилируют раствором диазометана в диэтиловом эфире в течение 10 минут. Эфирный раствор упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °C, остаток растворяют в 1 - 5 мл гексана и раствор хроматографируют на газовом хроматографе. Почва. 20 г почвы помещают в коническую колбу на 100 мл, приливают 40 мл 50% водного ацетона, подкисленного 0,1 М щавелевой кислотой до pH 2,0, и перемешивают на механическом встряхивателе в течение 1 часа. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр ("красная лента") и аликвоту фильтрата (20 мл) переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл. Приливают 20 мл дистиллированной воды и 30 мл хлороформа, смесь встряхивают в течение 2 мин. и отделяют слой хлороформа. Экстракцию хлороформом повторяют еще 2 раза. Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сернокислым натрием и далее поступают так, как описано выше. Зерно. Навеску размолотого зерна (5 г) заливают в центрифужном стакане (вместимостью 50 мл) 10 мл 0,05 М раствора гидроокиси натрия и экстрагируют при перемешивании 15 мин. Образец центрифугируют 10 мин. при 5000 об./мин. Супернатант сливают в мерный цилиндр вместимостью 50 мл. К осадку приливают еще 15 мл 0,05 М раствора гидроокиси натрия, перемешивают 15 мин. и суспензию центрифугируют при указанных выше условиях. Супернатант сливают в цилиндр, доливают до 50 мл дистиллированной водой и перемешивают. В делительную воронку вносят 30 мл экстракта, 2 мл 85% фосфорной кислоты, 6 г хлористого натрия и экстрагируют трижды диэтиловым эфиром (20, 10 и 10 мл) встряхиванием в течение 2 мин. при каждой экстракции. Объединенный эфирный экстракт упаривают на ротационном испарителе до 2 мл и затем досуха током сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл диэтилового эфира и раствор переносят на стеклянный фильтр N 4 (d = 2,5 см) с 1 г прокаленной нейтральной окиси алюминия. Помещают фильтр на колбу Бунзена и при слабом отсасывании промывают последовательно 30 мл диэтилового эфира и 30 мл ацетона. Пиклорам элюируют 30 мл 0,03 М водного раствора углекислого кислого натрия. Элюат подкисляют 2 мл 3 М раствора серной кислоты, прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора марганцовокислого калия и оставляют на 3 мин. при 20 °C. Добавляют по каплям 5 М раствор гидросернистокислого натрия до обесцвечивания раствора. К раствору прибавляют 6 г хлористого натрия и экстрагируют трижды диэтиловым эфиром (20, 10 и 10 мл). Объединенный эфирный экстракт промывают дистиллированной водой (10 - 15 мл), упаривают растворитель на ротационном испарителе до 2 мл и затем досуха током сухого воздуха. Остаток метилируют и подготавливают для газохроматографического определения таким же образом, как и при анализе воды. Трава, сено, солома. Измельченную навеску (5 г) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл с притертой пробкой, приливают 50 мл 0,05 М раствора гидроокиси натрия и помещают на аппарат для встряхивания на 15 мин. Гомогенат фильтруют через тканевый фильтр (бязь) и остаток промывают 20 мл 0,05 М раствора гидроокиси натрия. Объединенный фильтрат пропускают через стеклянный фильтр N 2, содержащий односантиметровый слой промытого водой фильтоцела. Осадок промывают двумя порциями по 10 мл 0,05 М раствора гидроокиси натрия. Фильтрат переносят в мерный цилиндр и доводят дистиллированной водой до 90 мл. Отбирают 30 мл экстракта и далее анализ вплоть до метилирования проводят так, как описано в предыдущем [разделе](#p100082). Полученный после метилирования сухой остаток растворяют в 2 мл диэтилового эфира и раствор вносят на стеклянный фильтр N 4 (d = 2,5 см) с 1 г прокаленной нейтральной окиси алюминия. Помещают фильтр на колбу Бунзена и метиловый эфир пиклорама элюируют 30 мл диэтилового эфира. Элюат концентрируют на ротационном испарителе до объема 2 мл и затем упаривают досуха током сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл гексана и аликвоту раствора хроматографируют на газовом хроматографе. ##### 2.5.2 Условия хроматографирования Хроматограф "Цвет-106" или другой модели с детектором по захвату электронов или постоянной скорости рекомбинации. Стеклянная колонка длиной 2 м и внутренним диаметром 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-DMCS с 5% SE-30. Температура колонки, испарителя и детектора соответственно 160, 230 и 240 °C. Скорость потока азота через колонку 40 мл/мин., через детектор - 150 мл/мин. Рабочая шкала электрометра -12 20 x 10 А. Скорость движения диаграммной ленты - 0,4 см/мин. Время удерживания метилового эфира пиклорама - 6,5 мин. В хроматограф вводят 1 - 3 мкл рабочего раствора. Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,02 - 1,6 мг. ### 2.6. Обработка результатов анализа Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами по высоте хроматографических пиков. Содержание пиклорама в анализируемой пробе вычисляют по формуле: H x C x V x 100 пр ст C = -------------------, H x V x P x K ст a где: C - содержание пиклорама в пробе, мг/кг или мг/л; H - высота пика анализируемой пробы, мл; пр H - высота пика стандарта, мм; ст C - содержание пиклорама в стандарте, нг; ст V - объем вводимой в хроматограф аликвоты рабочего раствора, мкл; a V - общий объем рабочего раствора пробы, мл; P - количество анализируемой пробы, г или мл; K - открываемость пиклорама в анализируемом объеме, %. ### 2.7. Альтернативная колонка для газожидкостной хроматографии Колонка стеклянная длиной 2 м и внутренним диаметром 3 мм, наполненная носителем газ-хромом Q (100 - 120 меш), пропитанным 3% OV-225. Температура колонки, испарителя, детектора соответственно 180, 230 и 250 °C. Скорость потока газа-носителя (азота) 40 мл/мин. Время удерживания метилового эфира пиклорама 11,37 мин. ## 3. Требования безопасности Общепринятые установленные требования техники безопасности при работе с ЛВЖ, вредными химическими веществами, электроприборами, сосудами под давлением и вакуумом. ---