--- title: "\"Методические указания по определению трифорина в растительной продукции (яблоки, огурцы), почве, воде методом тонкослойной хроматографии\"" number: "2423-81" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-2423-81" --- ## "Методические указания по определению трифорина в растительной продукции (яблоки, огурцы), почве, воде методом тонкослойной хроматографии" # "Методические указания по определению трифорина в растительной продукции (яблоки, огурцы), почве, воде методом тонкослойной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 06.08.1981 N 2423-81) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Утверждены
Минздравом СССР
6 августа 1981 г. N 2423-81
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРИФОРИНА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ** **(ЯБЛОКИ, ОГУРЦЫ), ПОЧВЕ, ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ**
**ХРОМАТОГРАФИИ <*>**
--- <*> Разработаны И.Ю. Юргайтене (НИИ эпидемиологии, микробиологии, гигиены); Н.И. Киселевой (ВНИИГИНТОКС). Краткая характеристика препарата. Трифорин - N,N-бис- (1-формиламино-2,2,2-трихлорэтил)пиперазин. Брутто-формула C H Cl N O . Молекулярная масса 434,96. Торговое название - 10 14 6 4 2 сапрол, фунгинекс, трифорин 20. Трифорин - белое кристаллическое вещество без запаха. Т. пл. 156 - 158 °C (с разложением). Растворимость при комнатной температуре в воде 27 - 29 мг/л. Хорошо растворяется в диметилформамиде, диметилсульфоксиде, тетрагидрофуране. Растворяется в бензоле, хлороформе. Давление -5 пара 2,67 x 10 Па при 20 °C. Летучесть 0,0047 мг/куб. м. Выпускается в виде эмульсионного концентрата трифорина. Предназначен для борьбы с мучнистой росой, паршой, ржавчиной, монилиозами, болезнями листьев злаковых, плодовых, овощных и декоративных культур. Можно применять на яблоне (парша и мучнистая роса), на винограде (сидиум и серная гниль) и на огурцах (мучнистая роса). ДСД 0,002 мг/кг. МДУ 0,1 мг/кг (огурцы); 0,01 мг/кг (яблоки). Принцип метода. Метод основан на экстракции пестицида из анализируемой пробы хлороформом, очистке экстракта колоночной и двумерной хроматографией и хроматографировании на пластинках "Силуфол" или в тонком слое силикагеля. Метрологическая характеристика метода дана в таблице 159. Таблица 159
**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**
| Анализируемый объект | Предел определения трифорина, мг/кг или мг/л | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, % | Доверительный, интервал при p = 0,05, n = 5, % | | --- | --- | --- | --- | --- | | Яблоки Огурцы Почва Вода | 0,1 0,025 0,016 0,004 | 86 85 91 90 | +/- 6,2 +/- 6,7 +/- 11,0 +/- 5,5 | +/- 6,6 +/- 7,8 +/- 12,9 +/- 6,2 | Предел обнаружения трифорина в растительной продукции, почве и воде показан в таблице 160.
Таблица 160
**ПРЕДЕЛ ОБНАРУЖЕНИЯ ТРИФОРИНА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ,**
**ПОЧВЕ, ВОДЕ НА РАЗЛИЧНЫХ СОРБЕНТАХ**
Предел обнаружения"Силуфол"Силикагель
трифорина в анализируемомпроявляющий реагентпроявляющий реагент
объеме, мкгAgNO 3дифениламинфосфорномолибденовая кислотаAgNO 3дифениламинфосфорномолибденовая кислота
Яблоки, огурцы Почва Вода0,5 0,4 0,42,0 2,0 3,02,0 2,0 3,0 - 4,01,0 1,0 1,05,0 4,0 4,0- - 5,0 - 6,0
Избирательность метода. Определению не мешают пестициды кельтан, хлорофос, оксихлорид меди, которые применяют для обработки тех же культур. Реактивы и материалы. Нитрат серебра х.ч. Активированный уголь АГ-3. Аммиак 25-процентный. Ацетон ч.д.а. Хлороформ х.ч. Четыреххлористый углерод. Этилацетат. Бензол х.ч. Дифениламин 2-процентный раствор в ацетоне. н-Гексан х.ч. н-Гептан ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Пластинки "Силуфол". Силикагель ЛС 5/40. Смеси растворителей: N 1 - четыреххлористый углерод и этилацетат (2:1); N 2 - бензол и этилацетат (6:1); N 3 - н-гексан и ацетон (10:7); N 4 - н-гептан и ацетон (1:2). Оксид алюминия II степени активности. Этиловый спирт-ректиф. Стандартный раствор трифорина (растворяют 0,025 г х.ч. препарата в 50 мл этилового спирта, концентрация раствора 5000 мкг/мл). Фильтры обеззоленные "синяя лента". Проявляющие реагенты: N 1 - раствор нитрата серебра и аммиака в ацетоне; N 2 - 2-процентный раствор дифениламина в ацетоне; N 3 - 5-процентный раствор фосфорномолибденовой кислоты. Приборы, аппаратура, посуда. Аспирационное устройство. Аппарат для встряхивания. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Водяная баня. Воронки химические. Камера для опрыскивания пластин. Камера для хроматографирования. Колбы: конические вместимостью 100, 150 мл; грушевидные для отгонки растворителя. Лампа ультрафиолетовая марки ОКН-11. Микропипетки для нанесения проб. Микрошприцы на 1, 10 мкл. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм со слоем силикагеля. Поглотительные приборы с пористой пластинкой N 1. Пульверизатор стеклянный. Ротационный испаритель. Колонка стеклянная (длина 25 см, диаметр 1 см). Шкаф сушильный. Цилиндры мерные на 50, 100 мл. Эксикатор. Приготовление пластинок. Стеклянные пластинки размером 90 x 120 мм тщательно моют раствором хромовой смеси, промывают проточной водой, затем дистиллированной и сушат. Взвешивают 14 г силикагеля и 1 г гипса, в фарфоровой ступке растирают с 40 мл дистиллированной воды. Наносят на пластинки одинаковые количества массы и оставляют сохнуть до следующего дня на воздухе. Хранят в эксикаторах над хлористым кальцием. Ход анализа. Экстракция. Пробу измельченных яблок (40 г) заливают 40 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 1 ч. Отфильтровывают пробу, промывают ее хлороформом. Растворитель упаривают досуха в ротационном испарителе. К сухому остатку прибавляют охлажденную смесь ацетона и воды (2:1) и выдерживают 30 мин. в холодильнике. Воски отфильтровывают через бумажный фильтр, который промывают охлажденной смесью ацетона и воды (2:1). Трифорин из водно-ацетонового раствора реэкстрагируют хлороформом. Растворитель упаривают до 3 - 4 мл. Пробу измельченных огурцов (20 г) заливают 40 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 1 ч. Отфильтровывают, промывают остаток на фильтре хлороформом. Объединяют экстракты и упаривают до объема 3 - 4 мл. К 20 г анализируемой почвы прибавляют 50 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 15 мин. Отфильтровывают, промывают почву хлороформом 2 раза по 20 мл. Упаривают растворитель до объема 3 - 4 мл. К 100 мл анализируемой воды в делительной воронке прибавляют 50 мл хлороформа и встряхивают 5 мин. Экстракцию хлороформом повторяют. Хлороформенный слой 2 раза профильтровывают через воронку, заполненную 4 - 5 г безводного сульфата натрия. Фильтрат упаривают до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют. Из фильтра "синяя лента" трифорин извлекают хлороформом 2 раза по 15 мл в течение 30 мин. при периодическом встряхивании, объединяют его с хлороформом из поглотителей, упаривают до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют. Очистка экстрактов из яблок, огурцов, почвы. Колонку, заполненную оксидом алюминия (высота слоя 8 см) и активированным углем (высота слоя 5 см), промывают 30 мл хлороформа. На колонку переносят сконцентрированный экстракт и элюируют трифорин 75 мл хлороформа. Элюат отгоняют до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют. Условия хроматографирования. Сконцентрированный экстракт с помощью капилляра количественно наносят на правую сторону пластинки для хроматографирования. Колбу промывают по 0,1 мл хлороформа и наносят на пластинку. На левой стороне пластинки наносят стандартные растворы. Повернув на 90°, пластинку правой стороной опускают в камеру для хроматографирования в подвижную фазу N 1 или 2. Хроматографирование в одной из этих фаз проводят дважды для дополнительной очистки экстрактов. После улетучивания растворителей пластинку поворачивают на 90° в направлении движения первой подвижной фазы, затем хроматографируют в смеси растворителей N 3 или 4. Для экстрактов из воды двумерное хроматографирование не проводят и пластинки после нанесения исследуемого экстракта и стандартных растворов помещают в смесь растворителей N 3 или 4. Обнаружение зон локализации трифорина в тонком слое сорбента может быть проведено тремя способами. При использовании проявляющего реагента N 1 с последующим УФ-облучением трифорин проявляется в виде черных пятен на белом фоне; реагента N 2 с последующим УФ-облучением - в виде темных пятен; реагента N 3 с последующим нагреванием при 80 - 90 °C и УФ-облучением в течение 5 мин. - в виде желтых пятен на синем фоне. Величина R трифорина f 0,38 - 0,39 (подвижная фаза н-гексан и ацетон в соотношении 10:7) или 0,69 - 0,71 (подвижная фаза н-гептан и ацетон в соотношении 1:2). Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности пятен рабочей пробы и серии стандартов. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией пестицида наблюдается в пределах от 0,5 до 10,0 мкг. При большем содержании трифорина в пробе на пластинку наносят аликвотную часть раствора. Содержание пестицида в анализируемой пробе яблок, огурцов, почвы и воды (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле: AS 2 X = ---, PS 1 где: A - количество стандартного раствора, мкг; S , S - площади пятен соответственно стандартного раствора и 1 2 пробы, кв. мм; P - количество пробы, взятой для анализа, г или мл. ---