Методические указания по определению трифорина в растительной продукции (яблоки, огурцы), почве, воде методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 06.08.1981 № 2423-81)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРИФОРИНА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ (ЯБЛОКИ, ОГУРЦЫ), ПОЧВЕ, ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ

---

<*> Разработаны И.Ю. Юргайтене (НИИ эпидемиологии, микробиологии, гигиены); Н.И. Киселевой (ВНИИГИНТОКС).

    Краткая   характеристика   препарата.   Трифорин  -   N,N-бис-
(1-формиламино-2,2,2-трихлорэтил)пиперазин.         Брутто-формула
C  H  Cl N O .  Молекулярная  масса 434,96.  Торговое  название  -
 10 14  6 4 2
сапрол,  фунгинекс,  трифорин 20. Трифорин - белое кристаллическое
вещество  без  запаха.  Т.  пл.  156  -  158  °C  (с разложением).
Растворимость  при  комнатной  температуре  в  воде  27 - 29 мг/л.
Хорошо   растворяется   в   диметилформамиде,  диметилсульфоксиде,
тетрагидрофуране.  Растворяется  в  бензоле,  хлороформе. Давление

            -5

пара  2,67  x 10   Па  при  20  °C.  Летучесть  0,0047  мг/куб. м.
Выпускается    в   виде   эмульсионного   концентрата   трифорина.
Предназначен  для  борьбы  с  мучнистой  росой, паршой, ржавчиной,
монилиозами,  болезнями  листьев  злаковых,  плодовых,  овощных  и

декоративных культур. Можно применять на яблоне (парша и мучнистая

роса),   на  винограде  (сидиум  и  серная  гниль)  и  на  огурцах
(мучнистая  роса).  ДСД  0,002 мг/кг. МДУ 0,1 мг/кг (огурцы); 0,01

мг/кг (яблоки).

Принцип метода. Метод основан на экстракции пестицида из анализируемой пробы хлороформом, очистке экстракта колоночной и двумерной хроматографией и хроматографировании на пластинках «Силуфол» или в тонком слое силикагеля.

Метрологическая характеристика метода дана в таблице 159.

Таблица 159

Анализируемый объект	Предел определения трифорина, мг/кг или мг/л	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, %	Доверительный, интервал при p = 0,05, n = 5, %
Яблоки Огурцы Почва Вода	0,1 0,025 0,016 0,004	86 85 91 90	+/- 6,2 +/- 6,7 +/- 11,0 +/- 5,5	+/- 6,6 +/- 7,8 +/- 12,9 +/- 6,2

Предел обнаружения трифорина в растительной продукции, почве и воде показан в таблице 160.

Предел обнаружения	«Силуфол»			Силикагель
трифорина в анализируемом	проявляющий реагент			проявляющий реагент
объеме, мкг	AgNO 3	дифениламин	фосфорномолибденовая кислота	AgNO 3	дифениламин	фосфорномолибденовая кислота
Яблоки, огурцы Почва Вода	0,5 0,4 0,4	2,0 2,0 3,0	2,0 2,0 3,0 — 4,0	1,0 1,0 1,0	5,0 4,0 4,0	- — 5,0 — 6,0

Избирательность метода. Определению не мешают пестициды кельтан, хлорофос, оксихлорид меди, которые применяют для обработки тех же культур.

Реактивы и материалы. Нитрат серебра х.ч. Активированный уголь АГ-3. Аммиак 25-процентный. Ацетон ч.д.а. Хлороформ х.ч. Четыреххлористый углерод. Этилацетат. Бензол х.ч. Дифениламин 2-процентный раствор в ацетоне. н-Гексан х.ч. н-Гептан ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Пластинки «Силуфол». Силикагель ЛС 5/40. Смеси растворителей: № 1 — четыреххлористый углерод и этилацетат (2:1); № 2 — бензол и этилацетат (6:1); № 3 — н-гексан и ацетон (10:7); № 4 — н-гептан и ацетон (1:2). Оксид алюминия II степени активности. Этиловый спирт-ректиф. Стандартный раствор трифорина (растворяют 0,025 г х.ч. препарата в 50 мл этилового спирта, концентрация раствора 5000 мкг/мл). Фильтры обеззоленные «синяя лента».

Проявляющие реагенты: № 1 — раствор нитрата серебра и аммиака в ацетоне; № 2 — 2-процентный раствор дифениламина в ацетоне; № 3 — 5-процентный раствор фосфорномолибденовой кислоты.

Приборы, аппаратура, посуда. Аспирационное устройство. Аппарат для встряхивания. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Водяная баня. Воронки химические. Камера для опрыскивания пластин. Камера для хроматографирования. Колбы: конические вместимостью 100, 150 мл; грушевидные для отгонки растворителя. Лампа ультрафиолетовая марки ОКН-11. Микропипетки для нанесения проб. Микрошприцы на 1, 10 мкл. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм со слоем силикагеля. Поглотительные приборы с пористой пластинкой № 1. Пульверизатор стеклянный. Ротационный испаритель. Колонка стеклянная (длина 25 см, диаметр 1 см). Шкаф сушильный. Цилиндры мерные на 50, 100 мл. Эксикатор.

Приготовление пластинок. Стеклянные пластинки размером 90 x 120 мм тщательно моют раствором хромовой смеси, промывают проточной водой, затем дистиллированной и сушат. Взвешивают 14 г силикагеля и 1 г гипса, в фарфоровой ступке растирают с 40 мл дистиллированной воды. Наносят на пластинки одинаковые количества массы и оставляют сохнуть до следующего дня на воздухе. Хранят в эксикаторах над хлористым кальцием.

Ход анализа. Экстракция. Пробу измельченных яблок (40 г) заливают 40 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 1 ч. Отфильтровывают пробу, промывают ее хлороформом. Растворитель упаривают досуха в ротационном испарителе. К сухому остатку прибавляют охлажденную смесь ацетона и воды (2:1) и выдерживают 30 мин. в холодильнике. Воски отфильтровывают через бумажный фильтр, который промывают охлажденной смесью ацетона и воды (2:1). Трифорин из водно-ацетонового раствора реэкстрагируют хлороформом. Растворитель упаривают до 3 — 4 мл.

Пробу измельченных огурцов (20 г) заливают 40 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 1 ч. Отфильтровывают, промывают остаток на фильтре хлороформом. Объединяют экстракты и упаривают до объема 3 — 4 мл.

К 20 г анализируемой почвы прибавляют 50 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 15 мин. Отфильтровывают, промывают почву хлороформом 2 раза по 20 мл. Упаривают растворитель до объема 3 — 4 мл.

К 100 мл анализируемой воды в делительной воронке прибавляют 50 мл хлороформа и встряхивают 5 мин. Экстракцию хлороформом повторяют. Хлороформенный слой 2 раза профильтровывают через воронку, заполненную 4 — 5 г безводного сульфата натрия. Фильтрат упаривают до объема 0,05 — 0,1 мл и хроматографируют.

Из фильтра «синяя лента» трифорин извлекают хлороформом 2 раза по 15 мл в течение 30 мин. при периодическом встряхивании, объединяют его с хлороформом из поглотителей, упаривают до объема 0,05 — 0,1 мл и хроматографируют.

Очистка экстрактов из яблок, огурцов, почвы. Колонку, заполненную оксидом алюминия (высота слоя 8 см) и активированным углем (высота слоя 5 см), промывают 30 мл хлороформа. На колонку переносят сконцентрированный экстракт и элюируют трифорин 75 мл хлороформа. Элюат отгоняют до объема 0,05 — 0,1 мл и хроматографируют.

Условия хроматографирования. Сконцентрированный экстракт с помощью капилляра количественно наносят на правую сторону пластинки для хроматографирования. Колбу промывают по 0,1 мл хлороформа и наносят на пластинку. На левой стороне пластинки наносят стандартные растворы. Повернув на 90°, пластинку правой стороной опускают в камеру для хроматографирования в подвижную фазу № 1 или 2. Хроматографирование в одной из этих фаз проводят дважды для дополнительной очистки экстрактов. После улетучивания растворителей пластинку поворачивают на 90° в направлении движения первой подвижной фазы, затем хроматографируют в смеси растворителей № 3 или 4.

Для экстрактов из воды двумерное хроматографирование не проводят и пластинки после нанесения исследуемого экстракта и стандартных растворов помещают в смесь растворителей № 3 или 4.

    Обнаружение  зон  локализации трифорина в тонком слое сорбента
может   быть   проведено   тремя   способами.   При  использовании
проявляющего реагента  N  1  с последующим  УФ-облучением трифорин
проявляется в виде черных пятен  на  белом  фоне;  реагента  N 2 с
последующим УФ-облучением  -  в  виде темных пятен; реагента N 3 с

последующим нагреванием при 80 — 90 °C и УФ-облучением в течение 5 мин. — в виде желтых пятен на синем фоне. Величина R трифорина f

0,38 - 0,39 (подвижная фаза  н-гексан и ацетон в соотношении 10:7)
или 0,69 - 0,71 (подвижная фаза  н-гептан и ацетон  в  соотношении

1:2).

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности пятен рабочей пробы и серии стандартов. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией пестицида наблюдается в пределах от 0,5 до 10,0 мкг. При большем содержании трифорина в пробе на пластинку наносят аликвотную часть раствора.

Содержание пестицида в анализируемой пробе яблок, огурцов, почвы и воды (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

                           AS
                             2

X = ---, PS 1

где:

A — количество стандартного раствора, мкг;

    S , S  - площади пятен соответственно стандартного раствора  и
     1   2

пробы, кв. мм;

P — количество пробы, взятой для анализа, г или мл.

---