--- title: "\"Методические указания по определению диквата в семенах подсолнечника методом тонкослойной хроматографии\"" number: "2367-81" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-2367-81" --- ## "Методические указания по определению диквата в семенах подсолнечника методом тонкослойной хроматографии" # "Методические указания по определению диквата в семенах подсолнечника методом тонкослойной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 30.03.1981 N 2367-81) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Утверждены
Минздравом СССР
30 марта 1981 г. N 2367-81 **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИКВАТА В СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА**
**МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>**
--- <*> Разработаны В.Н. Кавецким, Г.Г. Андриенко (УкрНИИЗР). Краткая характеристика препарата. Действующее начало - дикват (1,1'-этилен-2,2'-дипиридиний дибромид). Брутто-формула C H Br N . Молекулярная масса 360,05. В чистом виде дикват - 12 12 2 2 белое кристаллическое вещество с т. пл. 335 - 340 °C. Дикват хорошо растворяется в воде, хуже - в спирте и не растворяется в не смешивающихся с водой органических растворителях. В кислой и нейтральной средах стабилен, под действием щелочей разлагается и образует окрашенный продукт. При облучении УФ-лучами препарат полностью разлагается в течение 192 ч. ДСД 0,008 мг/кг, МДУ в семенах подсолнечника 0,05 <*> мг/кг. --- <*> Временный норматив. Принцип метода. Метод основан на извлечении диквата из проб семян 1 н раствором серной кислоты, очистке экстракта на колонке с катионитом КУ-2 и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Хроматографирование проводят дважды в различных подвижных фазах. Первой подвижной фазой служит этиловый спирт, второй - смесь муравьиной кислоты с водой в соотношении 10:1. При сильно загрязненных экстрактах хроматографирование в этиловом спирте проводят дважды. Для обнаружения диквата пластинку вначале обрабатывают 3-процентным водным раствором сульфита натрия, а затем, после высушивания, - 0,1-процентным раствором бромтимолового синего. Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 1 - 20 мкг. Предел определения 0,05 мг/кг. Среднее значение определения при n = 5 равно 82%. Доверительный интервал среднего при p = 0,95 равен +/- 8,6%. Реактивы и растворы. Серная кислота х.ч., 1 н. Хлороводородная кислота 1 н и 4 н водные растворы. Азотная кислота 2 н раствор. Гидроксид натрия 10 н водный раствор. Динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты ч.д.а., 5-процентный раствор. Катионообменная смола КУ-2 в H-форме (фракция 0,25 - 0,5 мм). Сульфит натрия, 3-процентный водный раствор. Универсальная индикаторная бумага. Бромтимоловый синий, 0,1-процентный раствор в 50-процентном этаноле. Спирт этиловый ректиф., 96-процентный. Муравьиная кислота ч.д.а. 85-процентная. Стандартный 0,1-процентный спиртовой раствор диквата (0,1 г х.ч. 100-процентного препарата диквата растворяют в 100 г этилового спирта). Приборы и посуда. Хроматографическая колонка (стеклянная бюретка на 25 мл длиной 50 см, диаметром 9 - 10 мм). Колбы: круглодонная; Бунзена; мерные. Электроплитка. pH-Метр. Стеклянный обратный холодильник со шлифом. Воронка Бюхнера. Стаканы на 0,1; 0,5 л. Хроматографическая камера (эксикатор). Фарфоровые чашки для выпаривания. Стеклянные пипетки с оттянутым концом. Пластинки "Силуфол" УФ . 254 Подготовка колонки. В хроматографическую колонку диаметром 1 см помещают комок стекловаты и заполняют катионитом КУ-2 в H-форме на высоту до 5 м. Колонку с катионитом промывают водой до нейтральной реакции. Катионит КУ-2 в H-форме готовят по известным методикам. Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Пробу семян (50 г) помещают в круглодонную колбу, заливают 250 мл 1 н раствора серной кислоты, присоединяют к колбе обратный холодильник и кипятят на электроплитке 3 ч. Экстракт охлаждают и фильтруют через воронку Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 3 порциями воды по 25 мл. Объем экстракта доводят дистиллированной водой до 250 мл. Аликвотную часть (50 мл) фильтрата переносят в стакан, приливают 12 - 15 мл 10 н гидроксида натрия и, добавляя гидроксид натрия по каплям, доводят pH до 8 - 9. Контроль за изменением pH растворов проводят при помощи pH-метра. Затем, в этот же стакан приливая 5-процентный раствор динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, доводят pH фильтрата до 6 - 7. Нейтрализованный фильтрат пропускают через хроматографическую колонку со скоростью 8 - 10 мл/мин. Колонку промывают 25 - 30 мл 2 н раствором азотной кислоты со скоростью 4 - 5 мл/мин., а затем дистиллированной водой до нейтральной реакции по универсальной индикаторной бумаге. Элюируют дикват 50 мл 4 н раствором хлороводородной кислоты со скоростью 1 - 2 мл/мин. Колонку можно промывать и 1 н раствором хлороводородной кислоты, однако элюат при упаривании более загрязнен. Элюат собирают в стакан, переносят его в фарфоровую чашку и выпаривают досуха на электроплитке с закрытым элементом при температуре до 200 °C в вытяжном шкафу. Остаток растворяют в 2 мл этилового спирта и наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол" УФ . Диаметр нанесенного 254 пятна не более 0,5 см. Фарфоровую чашку трижды промывают этиловым спиртом. Хроматографирование. Для отделения диквата от примесей пластинку помещают в хроматографическую камеру с подвижной фазой - этиловым спиртом. При этом примеси поднимаются на пластинке с фронтом растворителя, в то время как дикват остается в точке нанесения. В случае если пластинка перегружена примесями, хроматографирование в камере с этиловым спиртом повторяют. Затем пластинку сушат и хроматографируют в камере с подвижной фазой муравьиная кислота - вода (10:1). После того как растворитель поднимается на 7 - 8 см, пластинку вынимают, сушат до полного удаления запаха муравьиной кислоты. Проявляют пластинку, обрабатывая ее 3-процентным раствором сульфита натрия. При наличии диквата на хроматограммах появляются пятна желтого цвета. Далее высушенную пластинку опрыскивают 0,1-процентным раствором бромтимолового синего в 50-процентном этаноле. Чувствительность этой реакции 0,1 мкг. Пятна при этом окрашиваются в синий цвет. R диквата 0,6. f Обработка результатов анализа. Количественное определение препарата проводят сравнением размеров площади пятен исследуемого вещества и стандартного раствора и по калибровочному графику зависимости площади пятен от логарифма концентрации. Количество диквата (X, мг/кг) рассчитывают по формуле: AV X = ---, PV 1 где: A - количество диквата в пробе, мкг; P - масса исследуемой пробы, г; V - объем экстракта, мл; V - объем аликвотной части анализируемого экстракта, мл. 1 Требования безопасности. Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами. ---