Методические указания по определению тербацила в продуктах растительного происхождения, вине, виноградном соке, почве, воде хроматографическими методами
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "Методические указания по определению тербацила в продуктах растительного происхождения, вине, виноградном соке, почве, воде хроматографическими методами". 1917-78. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-1917-78
(утв. Минздравом СССР 27.09.1978 № 1917-78)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
27 сентября 1978 г. № 1917-78
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТЕРБАЦИЛА В ПРОДУКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ВИНЕ, ВИНОГРАДНОМ СОКЕ,
ПОЧВЕ, ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ <*>
<*> Подготовлены по материалам В.И. Бобровой, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС) [1]; Н.В. Бажановой, Ж.А. Арутюнян, М.Г. Алтунян (АрмНИИЗР) [2]; Л.С. Самосват (КГИУВ) [3].
Краткая характеристика препарата. Тербацил - 3-трет-бутил-5- хлор-6-метилурацил. Брутто-формула C H ClN O . Молекулярная масса 9 13 2 2 216,7. Химически чистое действующее вещество - бесцветные кристаллы. Т. пл. 175 - 177 °C, давление пара 0,0625 МПа (29,5 °C). Растворимость в воде 710 мг/кг (25 °C). Хорошо растворим в диметилформамиде, циклогексаноне, умеренно - в ксилоле. ДСД 0,01 <*>, МДУ 0,01 <*> (яблоки, груши), 0,05 мг/кг
(виноград).
Принцип метода. Метод основан на извлечении тербацила из пробы водным раствором гидроксида натрия, экстракции органическим растворителем из подкисленного раствора, очистке перераспределением в системах двух несмешивающихся жидкостей и хроматографировании на колонке с оксидом алюминия с последующим определением методом ГЖХ или ТСХ.
При анализе вина, виноградного сока, виноградной лозы метод основан на экстракции препарата смесью спирт — ацетон (1:3), очистке окрашенных растворов смесью активированного угля с оксидом алюминия с последующим определением методом ТСХ.
Метрологическая характеристика метода. Пределы обнаружения методом ГЖХ — 3 нг, что составляет: в воде — 0,002 — 0,005; почве — 0,03; яблоках, грушах — 0,02; лимонах — 0,1 мг/кг или мг/л.
Доверительный интервал среднего определения: в воде — 89 +/- 5,6; почве — 78,5 +/- 6,1; растительном материале — 80,5 +/- 6,5%.
Пределы обнаружения методом ТСХ 2 — 5 мкг, что составляет: в воде — 0,01; почве — 0,1 — 0,15; в яблоках, грушах — 0,1; огурцах — 0,05; цитрусовых — 0,5; в вине, виноградном соке — 0,05; виноградной лозе, ее листьях, корнях, побегах — 0,1 — 0,2 мг/кг или мг/л.
Доверительный интервал среднего определения: в воде — 87 +/- 10, почве — 74 +/- 7, растительном материале — 70 +/- 9%.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Гексан х.ч. Хлороформ х.ч. Этиловый спирт-ректиф. Гидроксид натрия, 0,05 н и 1-процентные водные растворы. Серная кислота х.ч., 10 н раствор. Хлороводородная кислота. Сульфат натрия безводный х.ч. о-Толидин ч.д.а. Иодид калия х.ч. Марганцовокислый калий х.ч. Кислота уксусная ледяная х.ч. Крахмал водорастворимый ч.д.а. Силикагель КСК. Пластинки «Силуфол». Оксид алюминия 2-й степени активности для хроматографии. Сульфат кальция х.ч. Азот особой чистоты газообразный. Неподвижная фаза 5% SE-30 на хромосорбе W-DMCS (80 — 100 меш). Стекловата. Универсальная индикаторная бумага. Реактив для обнаружения тербацила № 1: 0,16 г о-толидина растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты и доводят дистиллированной водой до 500 мл, после чего прибавляют 1 г иодида калия. Реактив для обнаружения тербацила № 2: 50 мл 1-процентного водного раствора иодида калия смешивают с 50 мл свежеприготовленного 3-процентного раствора крахмала (раствор крахмала при приготовлении прокипятить). Прибавляют 20 мл этилового спирта. Реактив применять только свежеприготовленным.
Получение газообразного хлора: смешивают в эксикаторе 1,5-процентный раствор марганцовокислого калия и 10-процентный раствор соляной кислоты в равных объемах.
Стандартные растворы тербацила готовят в спирте — 200 мкг/мл; ацетоне — 100 и гексане — 1,5 и 10 мкг/мл.
Приборы и посуда. Газожидкостный хроматограф с ДЭЗ (например, «Цвет-106»). Хроматографическая колонка стеклянная длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм. Микрошприц. Ротационный вакуумный испаритель. Аппарат для встряхивания. Водяная баня. Вакуумный водоструйный насос. Делительные воронки различной вместимости. Колбы: грушевидные или круглодонные на шлифах; конические; Бунзена. Воронки с пористыми фильтрами № 1 и 2 (шоттовские фильтры). Камера хроматографическая. Стеклянные пластинки размером 9 x 12 см. Сито капроновое 100 меш. Пульверизатор стеклянный. Камера для хлорирования (эксикатор или сосуд с внутренним диаметром 250 — 300 мм). Ступки фарфоровые. Ртутная кварцевая лампа. Сита металлические с диаметром отверстий 2 — 3 мм. Шкаф сушильный. Колонка стеклянная для распределительной хроматографии высотой 20 см и внутренним диаметром 18 — 20 мм.
Подготовка к определению. Приготовление хроматографических пластинок:
40 г силикагеля КСК (100 меш), 1 г водорастворимого крахмала и 125 мл дистиллированной воды. Крахмал заваривают в небольшом количестве воды (20 — 30 мл), доливают остальную воду, засыпают силикагель и хорошо перемешивают. Массу наносят равномерно на 15 пластинок;
оксид алюминия (50 г) и 5 г сульфата кальция (оба компонента просеивают через сито 150 меш) и 75 мл воды.
Ход анализа. Экстракция. Пробу яблок, груш, винограда (50 г) измельчают, помещают в коническую колбу на 250 мл с притертой пробкой и дважды экстрагируют препарат 0,05 н NaOH порциями по 80
мл на аппарате для встряхивания в течение 5 мин. Экстракты сливают в делительную воронку, промывая пробу 2 раза по 20 мл 0,05 н NaOH. К экстракту приливают 3 — 5 раз по 70 мл н-гексана, встряхивают по
2 мин. и гексан отбрасывают. Затем к экстракту прибавляют 7 мл 10 н H SO (pH 1 - 2), перемешивают и препарат трижды экстрагируют 2 4 хлороформом порциями по 75 мл, встряхивая по 2 - 3 мин. Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, количественно фильтруют и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при
температуре 45 — 50 °C.
К сухому остатку в колбочку прибавляют 30 мл гексана, перемешивают 2 — 3 мин. и переносят в делительную воронку на 100 -
150 мл. После этого колбу промывают 2 раза 1-процентным NaOH порциями по 25 мл, переносят в ту же делительную воронку, энергично встряхивают 2 мин. и щелочной слой отделяют в колбочку, а гексан сливают в другую делительную воронку. Затем щелочной экстракт снова переносят в делительную воронку и дважды промывают его гексаном порциями по 30 мл, а потом 2 раза хлороформом по 30 мл, встряхивая по 1 - 2 мин. Промывные жидкости объединяют,
приливают к ним 20 мл 1-процентного NaOH, осторожно перемешивают 1
- 2 мин. и после разделения фаз щелочной слой присоединяют к
очищенному экстракту, а смесь растворителей отбрасывают. К
экстракту прибавляют 3,5 мл 10 н H SO , перемешивают и
2 4
экстрагируют тербацил трехкратным встряхиванием с 50 мл хлороформа
в течение 2 - 3 мин. Экстракты объединяют, сушат над сульфатом натрия и растворитель отгоняют до объема 0,5 - 1 мл. Остаток количественно переносят на колонку с оксидом алюминия. Колонку готовят, засыпая 15 г оксида алюминия II степени активности, сульфат натрия безводный на 2 см, и промывают 30 мл хлороформа. Гербицид элюируют хлороформом, отбрасывая первые 20 мл и собирая 35 - 40 мл элюата. Элюат упаривают на ротационном испарителе
досуха. Для ТСХ добавляют 0,2 — 0,5 мл хлороформа, для ГЖХ — 1 - 3 мл гексана.
Пробу лимонов (10 — 15 г) [1] измельчают и дважды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Объединенный хлороформный экстракт осушают над сульфатом натрия безводным и упаривают досуха на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 30 мл гексана, фильтруют через бумажный фильтр, а остаток обрабатывают еще 20 мл гексана, который также отфильтровывают. Объединенный гексановый экстракт обрабатывают 50 мл 1-процентного раствора NaOH. Далее поступают так, как описано выше.
Из воздушно-сухой почвы (30 — 50 г) [1], предварительно просеянной через сито с диаметром отверстий 2 — 3 мм, препарат дважды экстрагируют 0,05 н раствором NaOH порциями по 70 мл на аппарате для встряхивания в течение 5 мин. Экстракты фильтруют через воронку Бюхнера (диаметром 10 — 12 см) под вакуумом. Осадок на воронке промывают 50 мл раствора едкого натра, экстракт переносят в делительную воронку и экстрагируют 3 — 5 раз гексаном порциями по 70 мл. Дальнейший ход анализа аналогичен вышеописанному.
Пробу воды (200 — 500 мл) [1] помещают в воронку, подкисляют 10 н серной кислотой до pH 1 — 2 и препарат экстрагируют хлороформом трижды порциями по 75 мл хлороформа в течение 3 — 5 мин. Растворитель объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и отгоняют в условиях, указанных выше.
Измельченную пробу мандаринов, апельсинов (50 г без кожуры) [2] заливают хлороформом и в течение 1 ч экстрагируют на аппарате для встряхивания. Растворитель отфильтровывают, остаток промывают трижды хлороформом по 20 мл. Весь хлороформенный экстракт пропускают через колонку с оксидом алюминия, предварительно промытую 15 мл хлороформа. Диаметр колонки 19 — 20 мм, высота слоя сорбента 75 мм. После элюирования всего хлороформенного экстракта колонку промывают 25 мл хлороформа и весь элюат концентрируют до 0,1 мл.
Навеску чистых вымытых огурцов (50 г) [2] измельчают, подкисляют 10 н серной кислотой до pH 2 — 3, заливают хлороформом и 1 ч встряхивают. Экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия, пробу трижды промывают 20 мл хлороформа. Объединенный экстракт помещают в колбу прибора для отгонки растворителя и отгоняют до 0,1 мл.
Экстракцию почвы, зеленых листьев, виноградной лозы (побеги и корни) [3] проводят следующим образом. Навеску воздушно-сухой, просеянной через сито с диаметром отверстий 1 — 2 мм почвы (100 г) заливают смесью спирта с ацетоном (1:3) до покрытия пробы и оставляют на ночь в колбе с притертой пробкой или экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 2 ч. Полученный раствор отфильтровывают под вакуумом. Остаток в колбе и на фильтре трижды промывают небольшими порциями растворителя. Общий экстракт упаривают до небольшого объема и хроматографируют. Сильно окрашенные растворы обесцвечивают путем добавления активированного угля (5 г) или смеси его с окисью алюминия (5 г угля и 7 — 8 г окиси алюминия).
Навеску листьев (10 г), корней или побегов (20 г) растирают с кварцевым песком и безводным сульфатом натрия, заливают той же смесью спирта с ацетоном и обрабатывают аналогично пробам почвы. После добавления сорбента вытяжку для лучшего ее обесцвечивания выдерживают 30 мин. на водяной бане при 30 — 40 °C, затем перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 1 ч или оставляют на ночь. После этого раствор высушивают сульфатом натрия, упаривают и хроматографируют.
Вино, виноградный сок, воду (100 мл анализируемой пробы) [3] помещают в колбу прибора для отгонки растворителя под вакуумом и упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 10 — 15 мл охлажденной смеси этанол — ацетон (1:3). Встряхивают и фильтруют через воронку с фильтром, заполненную сульфатом натрия безводным. Операцию повторяют еще дважды. Объединенный спиртово-ацетоновый раствор упаривают до объема 0,1 мл и хроматографируют.
Газожидкостная хроматография. Используется для количественного определения содержания тербацила в пробах, обозначенных знаком [1].
Условия хроматографирования. Хроматограф с ДЭЗ. Рабочая шкала -12
электрометра 20 x 10 А. Скорость движения ленты самописца 240 мм/ч. Колонка стеклянная размером 1 м x 3 мм. Неподвижная фаза - 5% SE-30 на хромосорбе W-DMCS (80 - 100 меш). Температура, °C: термостата колонок - 190; детекторов - 210; испарителя - 220.
Расход газов (азот особой чистоты) — 40; на поддувку — 120 мл/мин.
Объем пробы, вводимой в хроматограф, 2 - 6 мкл. Линейный динамический диапазон 3 - 25 нг. Минимально детектируемое
количество 3 нг. Время удерживания 1,65 мин.
Тонкослойная хроматография. Используется для количественной оценки содержания тербацила в пробах, обозначенных знаками [2] и
[1] (можно использовать гексановый экстракт после ГЖХ).
На пластинку с силикагелем наносят пробы и стандартные растворы тербацила и хроматографируют в системе гексан -
этилацетат (3:2). После хроматографирования пластинку оставляют на
воздухе до полного удаления запаха растворителей и помещают под ртутно-кварцевую лампу на расстоянии 18 - 20 см на 15 мин. Затем пластинку помещают в камеру для хлорирования на 2 - 5 мин. (работать под тягой!) и после улетучивания хлора с проветренной
пластинки опрыскивают раствором о-толидина (реактив № 1). При этом на светлом фоне проявляются темно-синие пятна тербацила с R f 0,55 +/- 0,05.
При использовании системы хлороформ - ацетон (3:1) в качестве альтернативной величина R тербацила 0,67 +/- 0,05.
f
Экстракты проб, обозначенные знаком [2], хроматографируют на пластинках с оксидом алюминия или пластинках «Силуфол». В качестве
подвижной фазы используют смеси гексан - хлороформ - уксусная кислота (6:7:3) или гексан - ацетон - уксусная кислота (6:7:3). После хроматографирования и высушивания на воздухе пластинки помещают в камеру с газообразным хлором на 3 - 5 мин. Через 30 -
40 мин. пластинку опрыскивают йод-крахмальным реагентом (реактив № 2). Величина R тербацила на оксиде алюминия 0,57 — 0,6, на f пластинках «Силуфол» — 0,4 — 0,45 и 0,6 — 0,65 соответственно для указанных выше систем.
Обработка результатов анализа. Газожидкостная хроматография. Содержание препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по
методу абсолютной калибровки по формуле:
100 H V
пр 1
H — высота пика препарата в пробе, мм; пр
V — объем анализируемой пробы, мл; 1
V — объем хроматографируемой пробы, мкл; 2
P — навеска или объем, г или мл;
K — калибровочный коэффициент, мм/нг, определяется по формуле:
H H H
1 1 2 3
3 CV CV CV
1 2 3
C — концентрация стандартного раствора, вводимого в хроматограф, мкг/мл (нг/мкл);
V , V , V - объемы стандартного раствора, мкл; 1 2 3 H , H , H - высоты пиков препарата, мм. 1 2 3
Тонкослойная хроматография. Количество препарата определяют путем сравнения размера пятен и интенсивности их окраски проб и стандартных растворов. Содержание препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:
100A
A — количество препарата, найденное путем визуального сравнения со стандартом, мкг;