Методические указания на метод определения трихотецина в воздухе
(утв. Минздравом СССР 05.06.1978 № 1872-78)
5 июня 1978 г. № 1872-78
НА МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИХОТЕЦИНА В ВОЗДУХЕ <*>
<*> Разработаны Е.Б. Кругляк, С.Г. Билуши (ВНИИбакпрепарат); Н.М. Кузенок (ВНИИГИНТОКС).
Краткая характеристика препарата. Трихотецин - антибиотик фунгицидного действия, продуцируемый грибом Trichotecium roseum. Применяется для защиты огурца от поражения мучнистой росой. Представляет собой изокротиловый эфир кетоспирта трихотеколона. Брутто-формула C H O . Молекулярная масса 333,5. Т. пл. 118 °C.
19 24 5
В воде практически нерастворим, хорошо растворяется в спирте, ацетоне, диметилформамиде, хлороформе. Выпускается микробиологической промышленностью в форме 1-процентного дуста и 10-процентного смачивающегося порошка с наполнителем каолином.
ОБУВ трихотецина в воздухе рабочей зоны 0,2 мг/куб. м.
Принцип метода. Метод основан на хроматографии трихотецина в тонком слое силикагеля. Подвижный растворитель — смесь дихлорэтана и ацетона в соотношении 9:1. Зона локализации антибиотика обнаруживается с помощью ультрахемископа.
Метрологическая характеристика метода. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг в анализируемом объеме. Погрешность определения +/- 15%. Диапазон измеряемых концентраций 0,1 — 4,0 мг/куб. м. Определению мешают вещества, поглощающие УФ-свет при длине волны 254 нм.
Реактивы и материалы, приборы и посуда. Этиловый спирт. Ацетон. Дихлорэтан х.ч. Стандартный раствор трихотецина 1 мг/10 мл, приготовленный на хлороформе. Хлороформ х.ч. Весы аналитические. Воронки делительные. Испаритель ротационный. Колбы грушевидные на 25 мл. Камера для хроматографирования. Микропипетки. Пластинки "Силуфол" УФ . Палочки стеклянные.
254
Ультрахемископ типа «Хроматоскоп» либо другой аналогичный. Цилиндры мерные.
Отбор проб воздуха. Пробу воздуха отбирают на фильтры АФА-ХП-18 с помощью электроаспиратора со скоростью 10 л/мин. в течение 30 мин.
Ход анализа. Фильтры с отобранной пробой помещают в делительную воронку на 25 мл, заливают 5 — 10 мл этилового спирта и экстрагируют, встряхивая 1 мин. Экстракт сливают в грушевидную колбу на 25 мл для отгонки и проводят повторную экстракцию. Спиртовые экстракты объединяют и упаривают на ротационном испарителе при слабом разрежении досуха. Сухой остаток растворяют в 0,5 — 1,0 мл хлороформа (в зависимости от предполагаемого количества трихотецина) и проводят хроматографическое определение антибиотика.
На предварительно промытую ацетоном и высушенную на воздухе пластинку "Силуфол" УФ размером 70 x 50 мм на расстоянии 1,5 см
254
от нижнего края пластинки и 1,0 см от вертикального края при помощи микропипетки наносят 3 пробы стандартных растворов одинакового объема. В промежутках между пятнами стандартных растворов наносят такой же объем исследуемой пробы. Размер пятна
на линии старта (диаметр) 2 — 4 мм.
Пластинку помещают под углом в хроматографическую камеру с подвижной системой, состоящей из дихлорэтана с ацетоном в соотношении 9:1. Камеру предварительно выдерживают в течение 15 — 20 мин. в закрытом состоянии для насыщения парами растворителей.
После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе и просматривают в УФ-свете с помощью
ультрахемископа. Трихотецин обнаруживается на хроматограмме в виде малинового пятна (R 0,36 +/- 0,04). f
Количественное определение проводят путем сравнения площади пятна пробы и того стандарта, площадь которого наиболее близка по размеру к площади пробы. Площадь пятен измеряют планиметром.
Количество трихотецина в воздухе (X, мг/куб. м) рассчитывают по формуле:
CS
x
C — количество трихотецина в стандарте, мкг;
S — площадь пятна пробы, кв. мм; x
S — площадь пятна стандарта, кв. мм; 0
V — объем пропущенного воздуха, приведенный к атмосферному o давлению 101,3 Па и температуре 20 °C, куб. м.
Требования безопасности. Соблюдаются меры безопасности, рекомендуемые для работы с химическими реактивами.