Статья: Как проводят эпидемиологическое расследование по ВИЧ-инфекции

(Гордеев И.А.)

(«Главный врач», 2021, № 2)

КАК ПРОВОДЯТ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ РАССЛЕДОВАНИЕ ПО ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

В статье на основе Методических указаний по эпидемиологическому надзору за ВИЧ-инфекцией рассмотрены задачи и порядок проведения эпидемиологического расследования по ВИЧ-инфекции. Публикация предназначена для организаторов здравоохранения, руководителей медицинских учреждений и специалистов, деятельность которых связана с организацией и проведением мероприятий по эпидемиологическому надзору и профилактике ВИЧ-инфекции.

Эпидемиологическое расследование проводится по каждому случаю ВИЧ-инфекции врачами-эпидемиологами территориальных Центров СПИД.

При подозрении на инфицирование ВИЧ в процессе оказания медицинской помощи эпидемиологическое расследование проводится специалистами органов, осуществляющих государственный эпидемиологический надзор, совместно со специалистами Центров СПИД.

Регистрация случая и противоэпидемические мероприятия в отношении источника инфекции начинают осуществляться сразу после выявления лабораторных маркеров заболевания, до проведения полного клинического обследования и установления клинического диагноза ВИЧ-инфекции у выявленного ВИЧ-инфицированного лица.

Задачами эпидемиологического расследования случая ВИЧ-инфекции являются:

• выявление источника инфекции;
• выявление путей и факторов передачи ВИЧ;
• определение границ очагов ВИЧ-инфекции во времени и по территории;
• выявление контактных лиц, их обследование и определение сроков их диспансеризации;
• выявление зараженных лиц среди контактировавших в целях их лечения и ограничения их активности в качестве источников ВИЧ;
• обучение больных ВИЧ-инфекцией и контактировавших лиц в очаге ВИЧ-инфекции противоэпидемическим и профилактическим мероприятиям с целью устранения факторов передачи и разрыва путей передачи;
• получение дополнительных данных об эпидемиологии ВИЧ-инфекции и особенностях эпидемического процесса на данной территории.

При проведении эпидрасследования целесообразно в первую очередь использовать информацию, содержащуюся в официальных документах: документ, удостоверяющий личность, свидетельство о рождении ребенка. Например, мужья, жены и дети перечисляются в паспорте или свидетельстве о рождении. Если первично выявлен зараженный ребенок, то наибольшее количество информации можно получить от матери. Предыдущие результаты обследования на ВИЧ, пребывание в медицинских учреждениях, донорство крови, а также получение препаратов крови фиксируются в документации соответствующих медицинских учреждений. Однако, учитывая характер информации, необходимой для расследования в очаге, ведущее значение имеет непосредственный опрос зараженного лица. Важным является установление и сохранение доверительных отношений между эпидемиологом и опрашиваемым, соблюдение конфиденциальности при этом имеет решающее значение.

Основными факторами, определяющими риск заражения в очаге, являются:

• уровень вирусной нагрузки (далее по тексту — ВН) у больного ВИЧ-инфекцией;
• опыт и особенности употребления наркотиков;
• характер полового поведения (включая оказание коммерческих сексуальных услуг, гомосексуальные контакты) и использование презервативов;
• длительность рискованного поведения;
• переливание компонентов крови, парентеральные медицинские и немедицинские процедуры;
• низкий уровень знаний о путях и факторах передачи ВИЧ;
• профессиональная деятельность (медицинские работники).

При изучении всех имеющихся факторов риска формируется предположение о том, какой путь и фактор передачи ВИЧ сыграли решающую роль в инфицировании пациента, предполагаемом времени и месте заражения и о том, что представляет наибольшую опасность в дальнейшем распространении ВИЧ. Окончательные выводы делаются после проведения серологического обследования в очаге.

Круг контактировавших лиц, подлежащих серологическому обследованию, определяется в зависимости от характера пути передачи возбудителя в очаге. Контактировавшими являются лица, имевшие контакт с больным ВИЧ-инфекцией с момента предполагаемого начала заболевания. Медицинское наблюдение за очагом обеспечивается силами учреждения здравоохранения (по месту нахождения очага инфекции) и Центром СПИД.

Комплекс мероприятий в отношении контактных лиц включает:

• полное выявление и учет их в специальном листе наблюдения за контактировавшим в карте эпидемиологического обследования;
• обследование на ВИЧ серологическими методами при выявлении контакта, через 3, 6, 12 месяцев после контакта, далее при продолжающемся контакте 1 раз в 6 месяцев весь период контакта (с их добровольного информированного согласия). Результаты обследования вносятся в лист наблюдения за контактировавшим;
• снятие с диспансерного учета лиц, у которых в течение 1 года после контакта не выявлены антитела к ВИЧ и отсутствует дальнейший контакт с больным ВИЧ-инфекцией (за исключением детей, рожденных ВИЧ-инфицированными женщинами). Дальнейшему обследованию не подлежат;
• беседу/консультирование о мерах профилактики ВИЧ-инфекции.

В случае сообщения контактировавшим лицам о наличии у них риска заражения ВИЧ-инфекцией имя источника инфекции не разглашается. Жен или мужей, имеющих риск заражения от инфицированных ВИЧ супругов, целесообразно предупредить о возможном наличии риска инфицирования ВИЧ половым путем, не называя имя источника инфекции, и обязательно провести их обучение профилактике ВИЧ-инфекции.

При проведении эпидемиологического расследования случая ВИЧ-инфекции заполняется карта эпидрасследования <1>.

---

<1> Форма карты, содержится в приложении 2 к методическим указаниям МУ 3.1.3342-16. 3.1. Эпидемиология. Профилактика инфекционных болезней. Эпидемиологический надзор за ВИЧ-инфекцией (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 26.02.2016).

Эпидемиологическое расследование по каждому случаю заражения ВИЧ в медицинских организациях или подозрения на него позволяет своевременно выявить, локализовать и предупредить возможные случаи инфицирования, связанные с оказанием медицинской помощи.

Для каждого лица, в отношении которого можно предполагать инфицирование при оказании медицинской помощи, необходимо:

• выяснить, какую медицинскую помощь в медицинской организации (далее по тексту — МО), включая парентеральные манипуляции, в какие сроки получал пациент;
• определить круг контактных лиц, включающий пациентов и медперсонал отделений, находившихся в МО в те же сроки, и изучить имеющиеся результаты тестирования на ВИЧ этих лиц. Составить списки контактных лиц с указанием персональных данных (как минимум Ф.И.О. и даты рождения);
• провести поиск в персонифицированной базе данных больных ВИЧ-инфекцией, зараженных ВИЧ пациентов среди контактных, получавших медицинскую помощь в МО одновременно с пациентом/ми, и медицинского персонала учреждения;
• использовать возможности генотипирования ВИЧ и филогенетического анализа целесообразно при выявлении инфицированных ВИЧ лиц среди контактных для определения наличия или отсутствия эпидемиологической связи между пациентами и выявления вероятного источника ВИЧ-инфекции;
• провести обследование на ВИЧ контактных лиц, включая пациентов и медперсонал, находившихся в МО в те же сроки, а также провести обследование на ВИЧ контактных со всеми выявленными инфицированными ВИЧ из вышеперечисленных контингентов;
• выяснить, были ли ранее обнаружены нарушения санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима в ходе плановых или внеплановых проверок МО, где предположительно могло произойти инфицирование ВИЧ при оказании медицинской помощи;
• выяснить, соответствовали ли объемы израсходованного одноразового и стерильного медицинского инструментария врачебным назначениям в отделениях МО, где предположительно могло произойти инфицирование ВИЧ при оказании медицинской помощи; определить, каким образом проводилась стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения в данных МО.

Внеочередное донесение о каждом случае заражения ВИЧ в медицинских организациях или подозрения на него представляется органам, осуществляющим государственный санитарно-эпидемиологический надзор по субъекту Российской Федерации, в Федеральный орган, осуществляющий санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации, и Федеральный научно-методический центр по профилактике и борьбе со СПИД.

После завершения эпидрасследования акт <2> и карта эпидемиологического расследования направляются в Федеральный орган, осуществляющий санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации (Роспотребнадзор), и Федеральный научно-методический центр по профилактике и борьбе со СПИД.

---

<2> Форма акта содержится в приложении 3 к Методическим указаниям «Эпидемиологический надзор за ВИЧ-инфекцией».

Генотипирование и филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей необходимо использовать в качестве дополнительного инструмента при проведении эпидемиологического расследования случаев ВИЧ-инфекции, предположительно связанных с оказанием медицинской помощи, или других сложных (с эпидемиологической точки зрения) случаев.

Филогенетический анализ может применяться с целью обеспечения дополнительной доказательной базы при определении связанности лиц — участников цепи передачи ВИЧ-инфекции. Методика может позволить сузить круг поиска предполагаемых источников заражения при недостатке эпидемиологических данных и выявить наиболее вероятный источник заражения при наличии нескольких вариантов. Метод филогенетического анализа обладает очень высокой ценностью отрицательного результата при ограниченной ценности положительного результата.

Для определения связи между биологическими образцами от пациентов предположительно из одной эпидемиологической цепи (исследуемая группа) необходимо провести генотипирование образцов крови от всех инфицированных ВИЧ из предполагаемого очага передачи ВИЧ-инфекции, а также образцов крови от инфицированных лиц из группы сравнения. В исследуемую группу необходимо включить пострадавшего/их и лицо/лиц, потенциально являющегося(ихся) для него источником инфекции. В группу сравнения (контрольную группу) необходимо включить не менее 20 — 30 образцов крови, полученных от ВИЧ-инфицированных из того же географического региона, социальной группы, группы риска заражения и инфицированных ВИЧ, в близкие (к исследуемой группе) сроки. Дополнительно в качестве контрольной группы возможно использовать охарактеризованные нуклеотидные последовательности из баз данных, подобранных по аналогичным критериям.

Образцы для проведения генотипирования должны быть направлены с сопроводительным письмом, каждый образец при этом должен сопровождаться заполненным бланком «Направления на генотипирование ВИЧ» <3>. Все образцы для генотипирования должны иметь свой индивидуальный номер в соответствии с бланком направления, тот же номер должен быть нанесен на пробирку с пробой.

---

<3> Форма направления содержится в приложении 4 к Методическим указаниям «Эпидемиологический надзор за ВИЧ-инфекцией».

В зависимости от уровня ВН у пациентов из исследуемой группы (инфицированные ВИЧ из предполагаемого группового очага заболевания) и доступности биологических образцов производится выбор вида доставляемого материала. Субстратом для получения нуклеотидных последовательностей для филогенетического анализа может быть использована как вирусная РНК, так и провирусная ДНК. В рамках проведения одного анализа должен быть использован только один тип субстрата для всех образцов как исследуемой группы, так и группы сравнения. Невозможно провести генотипирование образцов от пациентов с неопределяемой ВН, длительно получающих эффективную АРТ.

Если ВН всех образцов из исследуемой группы составляет более 1 000 копий/мл, для каждого пациента из обеих групп на исследование должно быть направлено не менее 1 — 2 мл плазмы крови.

В том случае, если ВН хотя бы у одного пациента из исследуемой группы окажется менее 1 000 копий/мл, то на исследование от такого пациента должны быть направлены пробирки с 5 — 10 мл цельной крови с ЭДТА или не менее 2 аликвот, содержащих лейкоциты плазмы крови.

Ввиду высокой разрешающей способности методики филогенетического анализа следует на всех этапах лабораторной работы минимизировать потенциально возможные технические ошибки, приводящие к контаминации, а также исключить вероятность неправильной маркировки образцов. Для минимизации ошибок во время проведения анализа и для подтверждения его результатов можно рекомендовать исследовать два образца от пациентов из исследуемой группы, забранных в разное время.

Для получения нуклеотидных последовательностей могут быть использованы как методы популяционного секвенирования, так и массового параллельного секвенирования с предварительным специфическим обогащением (например, ПЦР) или без него. По причине большей стандартизации рекомендуется использование наборов реагентов, предназначенных для определения лекарственной устойчивости ВИЧ, в том случае если они позволяют получить нуклеотидные последовательности в необходимом для анализа объеме. По каждому образцу необходимо получить нуклеотидные последовательности достаточной длины (не менее 500 пар нуклеотидов) для 2 — 3 регионов вирусного генома. Следует использовать гены с различными функциями и различной скоростью эволюции (обычно env, pol, pro/rev, int.). Полученные последовательности необходимо объединить в единый файл и провести их выравнивание. После проведения выравнивания все нуклеотидные последовательности должны быть обрезаны по краям для приведения их к одинаковой длине.

Филогенетический анализ полученных последовательностей проводится с использованием специализированного биоинформатического программного обеспечения с обязательным проведением бутстреп-анализа. Результатом филогенетического анализа является филогенетическое дерево, которое является визуальным отображением генетической дистанции между изучаемыми образцами.

При анализе структуры филогенетического дерева попарно оцениваются отношения между образцами исследуемой группы и группы сравнения. В случае если образец из исследуемой группы кластеризуется отдельно от других образцов исследуемой группы (генетическая дистанция между ним и образцами группы сравнения меньше, чем между ним и другими образцами исследуемой группы), можно сделать вывод о том, что по результатам филогенетического анализа данный образец и остальные образцы исследуемой группы эпидемиологически не связаны друг с другом. В случае если образец из исследуемой группы кластеризуется совместно с другими образцами исследуемой группы (генетическая дистанция между ним и образцами из группы сравнения больше, чем между ним и другими образцами исследуемой группы) можно сделать вывод о том, что результаты филогенетического анализа указывают на возможную эпидемиологическую связь между образцами в исследуемой группе.

Заключение по результатам филогенетического анализа содержит следующую информацию: детали применяемой методики, количество исследованных образцов, полученные филогенетические деревья, все выявленные субтипы ВИЧ у обследованных, генетическая дистанция между образцами разных групп, выводы.

Подписано в печать

26.01.2021

---