ГОСТ Р ИСО 13496-2013. Национальный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Обнаружение красителей. Метод тонкослойной хроматографии
Актуально на 02.11.2026.
Как цитировать: "ГОСТ Р ИСО 13496-2013. Национальный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Обнаружение красителей. Метод тонкослойной хроматографии". ГОСТ Р ИСО 13496-2013. https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-iso-13496-2013
(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 22.11.2013 № 1615-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств» (ТР ТС 029/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 07.02.2018 № 21). Документ введен в действие с 01.01.2015.
Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. № 1615-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБНАРУЖЕНИЕ КРАСИТЕЛЕЙ. МЕТОД ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Meat and meat products. Detection of colouring agents. Method using thin-layer chromatography
Дата введения 1 января 2015 года
Предисловие
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт птицеперерабатывающей промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИИПП» Россельхозакадемии) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. № 1615-ст
4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 13496:2000 «Мясо и мясные продукты. Обнаружение красителей. Метод с применением тонкослойной хроматографии» (ISO 13496:2000 «Meat and meat products — Detection of colouring agents — Method using thin-layer chromatography», IDT).
ИСО 13496 подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34 «Пищевые продукты», Подкомитетом SC 6 «Мясо и мясные продукты».
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 Следует иметь в виду, что некоторые элементы международного стандарта могут быть объектом патентных прав. ISO не несет ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных прав
7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Октябрь 2019 г.
Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод тонкослойной хроматографии для обнаружения синтетических водорастворимых красителей в мясе и мясных продуктах.
Данный метод может быть использован для обнаружения следующих красителей:
Синонимы и идентификационные номера этих красителей приведены в приложении A.
Растительные красители и растительные экстракты, не препятствующие обнаружению с помощью данного метода, приведены в приложении B.1.
Натуральные красители, которые в некоторых случаях могут препятствовать обнаружению по данному методу, приведены в приложении B.2.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных — последнее издание (включая все изменения).
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
AOAC 46.1.08:1995, Official Methods of Analysis (AOAC International) (Официальные методы анализа)
3 Термин и определение
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
3.1 обнаружение красителей: Обнаружение наличия или отсутствия красителей с помощью метода, описанного в настоящем стандарте.
4 Сущность метода
Красители экстрагируют из пробы горячей водой и адсорбируют на полиамидном порошке. Экстрагированные красители очищают с помощью колоночной хроматографии и затем элюируют из колонки. Идентификацию красителей проводят с помощью метода тонкослойной хроматографии.
5 Реактивы
Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если не указано иное.
5.1 Вода, соответствующая по крайней мере степени чистоты 3 по ИСО 3696.
5.2 Петролейный эфир с диапазоном температуры кипения от 40 °C до 60 °C.
5.3 Метанол.
5.4 Аммиак, 25%-ный водный раствор, \rho_{20} = 0,910\text{г}/\text{см}^{3} .
5.5 Кислота уксусная массовой долей 100%, \rho_{20} = 1,050\text{г}/\text{см}^{3} .
5.6 Цитрат натрия дигидрат.
5.7 Пропан-1-ол.
5.8 Этилацетат.
5.10 Кислота пропионовая.
5.11 Раствор — элюент для колоночной хроматографии
Смешивают 95 объемов метанола (см. 5.3) с пятью объемами раствора аммиака (см. 5.4).
5.12 Кислота уксусная, 50%-ный раствор в метаноле
Смешивают один объем уксусной кислоты (см. 5.5) с одним объемом метанола (см. 5.3).
5.13 Полиамидный порошок с размером частиц от 0,05 до 0,16 мм.
5.14 Песок мелкозернистый, промытый в соляной кислоте и прокаленный.
5.15 Стандарты красителей
Чистота стандартов красителей может быть различной, поэтому необходимо знать чистоту красителей, используемых в качестве стандартов. Чистота должна определяться по методу AOAC 46.1.08.
Примечание - Сертифицированные пищевые красители также могут использоваться в качестве стандартов.
5.16 Стандартные растворы для тонкослойной хроматографии
Стандартные водные растворы каждого красителя (см. 5.15) концентрацией около 1 г/дм3 готовят отдельно.
Растворы индигокармина готовят в день использования. Растворы других красителей могут храниться в темноте не более трех месяцев (растворы эритрозина — в течение одного месяца).
5.17 Элюент для тонкослойной хроматографии: раствор I
В мерной колбе с одной отметкой вместимостью 1000 см3 взвешивают 25 г дигидрата цитрата натрия (см. 5.6) с точностью 0,1 г. Растворяют в воде, доводят до метки водой и перемешивают.
Смешивают 80 объемов полученного раствора цитрата с 20 объемами раствора аммиака (см. 5.4) и 12 объемами метанола (см. 5.3).
Для предотвращения или снижения влияния сафлора или шафрана рекомендуется использовать раствор II (см. 5.18).
5.18 Элюент для тонкослойной хроматографии: раствор II
Смешивают шесть объемов пропан-1-ола (см. 5.7) с одним объемом этилацетата (см. 5.8) и тремя объемами воды.
5.19 Элюент для тонкослойной хроматографии: раствор III
Смешивают 50 объемов 2-метил-2-пропанола (см. 5.9) с 12 объемами пропионовой кислоты (см. 5.10) и 38 объемами воды.
6 Оборудование
Применяется обычное лабораторное оборудование, и в частности следующее.
6.1 Оборудование механическое или электрическое для гомогенизации лабораторных проб
Используют высокоскоростной измельчитель куттерного типа или мясорубку с диаметром отверстий решетки не более 4,0 мм.
6.2 Пробирки центрифужные стеклянные вместимостью 75 см3.
6.3 Колбы плоскодонные вместимостью 250 см3 с притертыми стеклянными пробками.
6.4 Колбы круглодонные вместимостью 100 см3 с притертыми стеклянными пробками.
6.5 Центрифуга, обеспечивающая радиальное ускорение примерно 2000 gn.
6.6 Испаритель ротационный.
6.7 Колонка хроматографическая стеклянная с пористым фильтром и краном, длиной около 20 см, диаметром около 30 мм и размером пор фильтра от 40 до 100 мкм (класс пористости P 100 по [2]).
В колонку помещают небольшой кусок стекловаты и добавляют от 1 до 2 г песка (см. 5.14).
6.8 Емкость из пластика вместимостью около 10 см3 с крышкой.
6.9 Пластинки для тонкослойной хроматографии, покрытые слоем порошка из целлюлозы толщиной 0,10 мм, или эквивалентные пластинки.
Допускается использование готовых пластинок.
6.10 Микропипетки вместимостью около 5 мм3.
6.11 pH-метр, обеспечивающий измерение с точностью до 0,1 pH.
7 Отбор проб
Отбор проб не является частью метода, установленного настоящим стандартом. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в [1].
Важно, чтобы в лабораторию поступала представительная проба, которая не была повреждена или изменена во время транспортирования или хранения.
Масса пробы должна быть не менее 200 г. Пробу необходимо хранить таким образом, чтобы не допустить ее порчи и изменения состава.
8 Подготовка пробы
Лабораторную пробу гомогенизируют с помощью соответствующего оборудования (см. 6.1). При этом принимают меры, чтобы температура материала пробы не превышала 25 °C. При использовании мясорубки пробу необходимо измельчить не менее двух раз.
Подготовленную пробу помещают в соответствующую герметичную емкость. Емкость закрывают крышкой и хранят таким образом, чтобы не допустить порчи и изменения состава пробы. Анализ пробы проводят как можно скорее, но не более чем в течение 24 ч после гомогенизации.
9 Процедура
Если проба содержит индигокармин, то ее температура в течение всего анализа не должна превышать 35 °C. Индигокармин частично распадается в хроматографическом растворе I, поэтому необходимо использовать хроматографический раствор II.
Эритрозин чувствителен к воздействию света. Поэтому при любых перерывах в ходе анализа растворы и пластинки необходимо хранить в темном месте. То же самое относится к индигокармину.
9.1 Проба для анализа
В центрифужной пробирке (см. 6.2) взвешивают 5 г подготовленной пробы (см. раздел 8) с точностью до 0,1 г.
Дальнейшие процедуры для проб, содержащих жир, описаны в 9.2.
Дальнейшие процедуры для проб, не содержащих жир, описаны в 9.3.
9.2 Пробы, содержащие жир
В центрифужную пробирку добавляют около 20 см3 петролейного эфира (см. 5.2) и перемешивают стеклянной палочкой. Петролейный эфир декантируют.
Эту процедуру повторяют три раза.
9.3 Пробы, не содержащие жир
В центрифужную пробирку добавляют 25 см3 кипящей воды (см. предупреждение выше) и перемешивают. Добавляют 25 см3 элюента (см. 5.11).
С помощью pH-метра (см. 6.11) проверяют, находится ли pH в интервале (9 +/- 0,5) ед. pH. Если pH выходит за указанный интервал, то его доводят до необходимой величины уксусной кислотой (см. 5.5) или раствором аммиака (см. 5.4).
Тщательно перемешивают. Охлаждают пробу в морозильной камере в течение 15 мин (для предотвращения помутнения).
Центрифугируют (см. 6.5) в течение 10 мин при радиальном ускорении около 2000 gn.
Декантируют прозрачный раствор в плоскодонную колбу (см. 6.3). В случае присутствия индигокармина используют круглодонную колбу (см. 6.4).
В центрифужную пробирку, содержащую осадок, добавляют 5 см3 воды. Перемешивают и добавляют 10 см3 элюента (см. 5.11). Снова перемешивают и центрифугируют, как описано выше.
Эту процедуру повторяют, пока все красители не экстрагируются из пробы, затем объединяют все экстракты.
Смешанный экстракт упаривают на водяной бане до объема около 25 см3 для удаления метанола. В случае присутствия индигокармина используют круглодонную колбу (см. 6.4) и ротационный испаритель (см. 6.6) при температуре 35 °C.
Добавляют 25 см3 кипящей воды (см. предупреждения) и перемешивают.
9.4 Перенос красителей на полиамидный порошок
С помощью уксусной кислоты (см. 5.5) или раствора аммиака (см. 5.4) доводят pH до значения от 4 до 5 ед. pH.
К теплому раствору (см. предупреждения) добавляют 1 г полиамидного порошка (см. 5.13). Энергично встряхивают в течение 1 мин.
Дают возможность порошку сформировать осадок.
Проверяют, окрашен ли раствор. Если раствор окрашен, то добавляют еще немного полиамидного порошка и энергично встряхивают.
Примечание — Некоторые натуральные красители (см. приложение B) не полностью адсорбируются на полиамидном порошке, оставляя раствор окрашенным, даже если все синтетические красители были полностью адсорбированы. Обычно по типу пробы можно заключить, присутствуют ли в ней такие натуральные красители.
Встряхивают и переносят теплую суспензию в хроматографическую колонку (см. 6.7).
Промывают плоскодонную колбу тремя порциями по 10 см3 горячей воды (см. предупреждения), добавляют каждый раз промывные воды в колонку. Промывают колонку другими тремя порциями по 10 см3 горячей воды (см. предупреждения) и затем тремя порциями по 5 см3 метанола (см. 5.3). Если натуральные красители элюируются, то продолжают промывать колонку метанолом, пока он не обесцветится.
9.5 Элюирование и концентрирование выделенных красителей
Помещают колбу (см. 6.4) под колонкой и элюируют красители из полиамидного порошка порциями по 5 см3 элюента (см. 5.11) при объемной скорости потока элюента 2 см3/мин, пока полиамид не станет бесцветным.
Выпаривают полученный элюат досуха с помощью испарителя (см. 6.6) при температуре не выше 35 °C (см. предупреждения).
В зависимости от содержания и числа красителей, добавляют 1,0 или 2,0 см3 элюента (см. 5.11) и растворяют высушенный остаток. Помещают раствор красителей в пластиковую емкость (см. 6.8).
9.6 Разделение с помощью тонкослойной хроматографии
9.6.1 Пластинки со стандартными растворами
Готовят три стандартные пластинки для тонкослойной хроматографии со стандартными растворами (см. 5.16). Используя микропипетку (см. 6.10), наносят около 5 мм3 каждого стандартного раствора (см. 5.16) отдельно на каждую пластинку в виде пятна (диаметр < 5 мм) на каждую пластинку (см. 6.9). Развитие хроматограмм на пластинках проводят отдельно в ненасыщенных камерах с каждым из элюентов для хроматографии (см. 5.17, 5.18 и 5.19), пока фронт растворителя не достигнет расстояния около от 10 до 12 см от стартовой линии. Вынимают пластинки из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Пластинки хранят в темном месте. Пятна всех красителей, за исключением индигокармина, являются устойчивыми в течение нескольких лет.
9.6.2 Пробы
На пластинку для тонкослойной хроматографии (см. 6.9) с помощью микропипетки (см. 6.10) наносят едва видимое количество раствора пробы (см. 9.5). Сушат пластинку с помощью фена. В случае присутствия индигокармина сушат на воздухе.
Развитие хроматограммы на пластинке проводят в ненасыщенной камере до высоты около от 10 до 12 см, используя подходящий раствор для хроматографии (см. 5.16, 5.17 или 5.18), то есть тот раствор, который обеспечивает наилучшее разделение красителей, обнаруженных в пробе (см. раздел 1). В некоторых случаях для получения наилучшего разделения может потребоваться приготовление второй пластинки с пробой и развитие хроматограммы с одним из двух других элюентов.
Вынимают пластинку из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу.
Сравнивают пятна на пластине с пробой с пятнами на соответствующих пластинах со стандартными растворами (см. 9.6.1).
В случае присутствия смеси красителей рекомендуется наносить различные количества раствора пробы, так как в концентрате красители могут присутствовать в разных концентрациях.
Образование «хвостов» обычно вызвано недостаточной очисткой. При наличии «хвостов» краситель снова адсорбируют адсорбентом, промывают горячей водой и выделяют из адсорбента, как описано выше.
9.7 Подтверждение
Идентичность красителей подтверждают хроматографированием концентрата (см. 9.6.2) в смеси со стандартными красителями, идентифицированными на первой хроматограмме.
В сомнительных случаях краситель элюируют с пластинки нейтральным раствором (вода, или этиловый спирт, или раствор ацетата аммония концентрацией 0,2 г/дм3), кислотой (соляная кислота концентрацией 0,1 моль/дм3) и щелочью (раствор гидроокиси натрия концентрацией 0,1 моль/дм3) и сравнивают спектр поглощения красителя со спектром стандарта. Спектры поглощения красителей представлены в приложении C.
Примечание — Участок пластинки с пятном анализируемого красителя осторожно соскабливают скальпелем, помещают в пробирку, добавляют несколько см3 нейтрального элюирующего раствора (см. выше в 9.7) и энергично встряхивают (если краситель не элюируется, то используют другой раствор из перечисленных выше в 9.7). Отфильтрованный через фильтровальную бумагу или слой ваты раствор помещают в кювету спектрофотометра и регистрируют спектр поглощения в диапазоне длин волн от 350 до 750 нм. Полученный спектр сравнивают качественно со спектрами поглощения стандартных растворов красителей, приведенными в приложении C.
10 Протокол испытаний
В протоколе должны быть указаны:
- вся информация, необходимая для полной идентификации пробы;
- использованный метод отбора проб, если он известен;
- использованный метод анализа со ссылкой на настоящий стандарт;
- все особенности методики, не указанные в настоящем стандарте или считающиеся необязательными, а также все факторы, которые могут повлиять на результат(ы) испытания;
- полученный(е) результат(ы) испытаний.
СИНОНИМЫ И ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЕ НОМЕРА СИНТЕТИЧЕСКИХ ВОДОРАСТВОРИМЫХ КРАСИТЕЛЕЙ
| Наименование | Синоним 1 | Синоним 2 | C.I a | E No. b |
| Тартразин | FD&C Желтый № 5 | 19140 | E102 | |
| Хинолиновый желтый | 47005 | E104 | ||
| Желтый «солнечный закат» FCF | FD&C Желтый № 6 | 15985 | E110 | |
| Амарант | FD&C Красный № 2 | Нафтол красный S | 16185 | E123 |
| Понсо 4R | Новый кокцин | Кошениль красная A | 16255 | E124 |
| Эритрозин | FD&C Красный № 3 | 45430 | E127 | |
| Синий патентованный V | 42051 | E131 | ||
| Индигокармин | FD&C Синий № 2 | 73013 | E132 | |
| Черный блестящий PN | 28440 | E151 | ||
| Черный 7984 | 27755 | E152 | ||
| Зеленый прочный FCF | FD&C Зеленый № 3 | 42053 | c | |
| Синий VRS | 2045 | c | ||
| a C.I. — идентификационный номер согласно Colour Index [[4]](#p100305). b E No. — номер красителя, действующий в странах Европейского экономического сообщества (ЕЭС). c Номер красителя E No. не существует. | ||||
ВОЗМОЖНОЕ ВЗАИМНОЕ ВЛИЯНИЕ КРАСИТЕЛЕЙ
B.1 Красители, не препятствующие обнаружению
Известно, что следующие красители растительного происхождения или растительные экстракты, не препятствующие обнаружению по данному методу:
B.2 Красители, которые могут препятствовать обнаружению
В некоторых случаях натуральные красители могут препятствовать обнаружению данным методом. В таблице B.2.1 приведено их применение в пищевых продуктах, а также синтетические красители, обнаружению которых эти натуральные красители могут препятствовать.
| Вещество | Применение в пищевых продуктах | Краситель, обнаружению которого препятствует данное вещество |
| Куркумин | Специи; также используется как желтый краситель | Хинолиновый желтый (E104) a Черный блестящий PN (E151) a Черный 7984 (E152) a |
| Шафран | Специи (слишком дорогостоящий для использования в качестве красителя) | Эритрозин (E127) a Хинолиновый желтый (E104) a, b Черный блестящий PN (E151) a, b Черный 7984 (E152) b |
| Сафлор | Заменитель шафрана | Тартразин (E102) b |
| a Влияние можно рассматривать как незначительное. b Для предотвращения или уменьшения влияния сафлора или шафрана рекомендуется использовать для хроматографирования раствор II (см. 5.18). | ||
 |
Хинолиновый желтый |
|---|---|
 |
Эритрозин |
 |
Тартразин |
 |
Черный 7984 |
 |
Амарант |
 |
Синий VRS |
Рисунок C.1 — Спектры поглощения амаранта, черного 7984, синего VRS, эритрозина, тартразина и хинолинового желтого
 |
Желтый «солнечный закат» FCF |
|---|---|
 |
Черный блестящий PN |
 |
Зеленый прочный FCF |
 |
Синий патентованный V |
 |
Понсо 4R |
 |
Индигокармин |
Рисунок C.2 — Спектры поглощения черного блестящего PN, зеленого прочного FCF, индигокармина, синего патентованного V, понсо 4R и желтого «солнечный закат» FCF
СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ ССЫЛОЧНЫХ МЕЖДУНАРОДНЫХ СТАНДАРТОВ НАЦИОНАЛЬНЫМ СТАНДАРТАМ
| Обозначение ссылочного международного стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование соответствующего национального стандарта |
| ISO 3696:1987 | MOD | ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) «Вода для лабораторного анализа. Технические условия» |
| AOAC 46.1.08:1995 | - | <*> |
| <*> Соответствующий национальный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Примечание — В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов: - MOD — модифицированный стандарт. | ||
БИБЛИОГРАФИЯ
| УДК 637.5:543.06:006.354 | ОКС 67.120.10 |
| Ключевые слова: мясо, мясные продукты, синтетические водорастворимые красители, обнаружение, метод тонкослойной хроматографии | |