--- title: "\"ГОСТ Р 55312-2012. Национальный стандарт Российской Федерации. Прополис. Метод определения флавоноидных соединений\"" number: "ГОСТ Р 55312-2012" issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-55312-2012" --- ## "ГОСТ Р 55312-2012. Национальный стандарт Российской Федерации. Прополис. Метод определения флавоноидных соединений" # "ГОСТ Р 55312-2012. Национальный стандарт Российской Федерации. Прополис. Метод определения флавоноидных соединений" (утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1580-ст) > [!IMPORTANT] > Документ [введен](#p100009) в действие с 1 января 2014 года. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1580-ст **НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ПРОПОЛИС** **МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ** Propolis. Method for determination of flavonoid compositions **ГОСТ Р 55312-2012** Группа С52 ОКС 65.140 Дата введения 1 января 2014 года ## Предисловие 1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Научно-исследовательский институт пчеловодства" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИ пчеловодства Россельхозакадемии) 2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 432 "Пчеловодство" 3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1580-ст **4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ** Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru) ## 1 Область применения Настоящий стандарт распространяется на прополис и устанавливает метод определения флавоноидных соединений. ## 2 Нормативные ссылки В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: [ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002) Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты [ГОСТ Р 51652-2000](https://bukva.ai/docs/gost-r-51652-2000) Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия [ГОСТ Р 52001-2002](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52001-2002) Пчеловодство. Термины и определения ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание ГОСТ 12.4.103-83 Система стандартов безопасности труда. Одежда специальная защитная, средства индивидуальной защиты ног и рук. Классификация [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры [ГОСТ 28886-90](https://bukva.ai/docs/gost-28886-90) Прополис. Технические условия [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования *Примечание* - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. ## 3 Термины и определения В настоящем стандарте приведены термины по [ГОСТ Р ИСО 5725-1](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002), [ГОСТ Р 52001](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52001-2002). ## 4 Отбор и подготовка пробы #### 4.1 Отбор проб - по ГОСТ 28886 [(подраздел 3.1)](https://bukva.ai/docs/gost-28886-90#p100119). 4.2 Прополис в комках, брикетах измельчают. Анализируемую пробу прополиса тщательно перемешивают не менее 3 мин. ## 5 Сущность метода Метод основан на спектрофотометрическом определении оптической плотности комплексов, образующихся при взаимодействии флавоноидов, входящих в состав продуктов пчеловодства, с хлоридом алюминия. В качестве стандарта служит рутин. Определение массовой доли суммы флавоноидов в продуктах пчеловодства в пересчете на рутин следует проводить в интервале длин волн 408 - 420 нм. ## 6 Требования безопасности проведения работ 6.1 При проведении измерений необходимо соблюдать требования электробезопасности при работе с приборами по ГОСТ Р 12.1.019. 6.2 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. 6.3 При выполнении анализов необходимо выполнять требования безопасности при работе с реактивами по ГОСТ 12.4.103. 6.4 К проведению анализов допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже среднего технического образования, владеющие навыками проведения анализов и изучившие инструкции по эксплуатации используемой аппаратуры. ## 7 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы 7.1 Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,001 г по ГОСТ Р 53228. 7.2 Спектрофотометр, позволяющий проводить измерение оптической плотности при длине волны 390 - 420 нм. 7.3 Кюветы кварцевые с толщиной слоя раствора, поглощающего свет, равной 1 см. 7.4 Горелка газовая, электроплитка или колбонагреватель по ГОСТ 14919. 7.5 Колбы мерные наливные 2-25-1, 2-50-1, 2-100-1 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). 7.6 Колбы конические Кн-1-100-14/23, Кн-1-250-14/23 по ГОСТ 25336. #### 7.7 Воронки В-36-60 или В-36-80 по ГОСТ 25336. 7.8 Механические дозаторы 1-канальные с варьируемыми объемами дозирования 100 - 1000 мкл, 1 - 5 см3 1-го класса точности. #### 7.9 Пипетки 2-1-1-1, 2-2-25, 2-2-5 по [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91). #### 7.10 Баня водяная лабораторная с электрическим или огневым подогревом. #### 7.11 Цилиндры мерные 1-100 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). 7.12 Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026. 7.13 Спирт этиловый ректификованный по [ГОСТ Р 51652](https://bukva.ai/docs/gost-r-51652-2000), с массовой долей 96%. #### 7.14 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709. 7.15 Алюминий хлористый 6-водный [AlCl3·6H2O], с содержанием основного вещества не ниже 99%, Fluka, каталожный номер 7784-13-6. #### 7.16 Рутин, ГСО. Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных. ## 8 Подготовка к выполнению измерений #### 8.1 Приготовление 5% раствора хлористого алюминия в 60%-ном этаноле В коническую колбу вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают (5,000 +/- 0,001) г хлористого алюминия, растворяют в (50,0 +/- 0,5) г 60%-ного этанола, массу раствора доводят до (100,00 +/- 0,01) г 60%-ным этанолом и тщательно перемешивают. Срок хранения раствора - не более одного года. #### 8.2 Приготовление раствора ГСО рутина (0,050 +/- 0,001) г ГСО рутина взвешивают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), добавляют 40 см3 60%-ного этанола, нагревают до 50 °C - 60 °C и выдерживают до полного растворения рутина. Затем охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки 60%-ным этанолом и тщательно перемешивают. #### 8.3 Построение калибровочного графика В две мерные колбы вместимостью 25 см3 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) дозатором вносят по 0,2 (0,4; 0,6; 0,8, 1,0 и 1,2) см3 раствора рутина по [6.7.2.2](#p100069) концентрацией 1 мг/см3; в одну колбу добавляют 4 см3 раствора хлористого алюминия по [6.7.2.1](#p100067) (рабочий раствор), доводят до метки обе колбы 60%-ным этанолом и тщательно перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность рабочих растворов относительно растворов сравнения (рутин без хлористого алюминия) при длине волны максимума поглощения в интервале 390 - 420 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см. При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают количество рутина в миллиграммах, содержащегося в 25 см3 рабочего раствора, а по оси ординат - максимальное значение оптической плотности в указанном диапазоне. Калибровочный график должен быть линейным и проходить через начало координат. ## 9 Проведение измерений #### 9.1 Подготовка пробы (1,000 +/- 0,001) г прополиса взвешивают в конической колбе вместимостью 10 см3 по ГОСТ 25336, добавляют (30,0 +/- 0,5) см3 60%-ного этанола, колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц прополиса со стенок. Надосадочную жидкость фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см3 так, чтобы частицы прополиса не попали на фильтр. Экстракцию флавоноидов повторяют еще дважды в описанных выше условиях, прибавляя к остатку по (30,0 +/- 0,1) см3 60%-ного этанола. Фильтраты объединяют, охлаждают до (20 +/- 3) °C и доводят до метки (100,00 +/- 0,01) см3 60%-ным этанолом. #### 9.2 Проведение испытания В две мерные колбы вместимостью 25 см3 дозатором вносят по (5,00 +/- 0,01) см3 экстракта по [6.7.2.4](#p100076). В одну колбу (анализируемый раствор) добавляют (4,0 +/- 0,1) см3 раствора хлористого алюминия по [6.7.2.1](#p100067), обе колбы доводят до метки 60%-ным этанолом и тщательно перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность анализируемого раствора относительно раствора сравнения (экстракт без хлористого алюминия) при длине волны максимума поглощения в интервале 390 - 420 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см. По калибровочному графику, зная оптическую плотность анализируемого раствора, находят количество рутина в мг в 25 см3 раствора. ## 10 Обработка и представление результатов испытаний #### 10.1 Массовую долю флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) X1, %, вычисляют по формуле X1 = C·100·100·m·5, (1) где C - количество рутина в 25 см3, найденное по калибровочному графику, мг; 100 - объем экстракта, см3; 100 - пересчет в проценты, %; m - масса прополиса, взятого для анализа, г; 5 - объем экстракта, взятого для анализа, см3. 10.2 За окончательный результат определения флавоноидных соединений принимают среднеарифметическое значение двух параллельных измерений, полученных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости, рассчитанное по формуле |X1 - X2| <= r, (2) где X1 и X2 - результаты двух параллельных определений флавоноидных соединений кислот, полученных в условиях повторяемости, %; rотн - значение предела повторяемости, приведенное в [таблице 1](#p100099), %. 10.3 Расхождение между результатами определения флавоноидных соединений, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости, должно соответствовать условию приемлемости по формуле |X1 - X2| <= R, (3) где X1 и X2 - результаты двух определений флавоноидных соединений, полученных в условиях воспроизводимости, %; Rотн - значение предела воспроизводимости, приведенное в [таблице 1](#p100099), %. Таблица 1 Диапазоны измерений, показатели точности и прецизионности метода определения флавоноидных соединений при доверительной вероятности P = 0,95 | Наименование показателя | Диапазон измерений | Предел повторяемости rотн, % | Предел воспроизводимости Rотн, % | Показатель точности (границы относительной погрешности) $\pm \delta$ , % | | --- | --- | --- | --- | --- | | Массовая доля флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) | 0,1 до 10 | 2 | 8 | 6 | #### 10.4 Форма представления результатов Результат содержания флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде $(X_{\text{ср}} \pm \Delta)\%$ , при P = 0,95, где $\Delta$ - абсолютная погрешность результатов измерений, %, вычисляемая по формуле $\Delta = \delta \cdot X_{\text{ср}} \cdot 0,01$ или $\Delta = \delta \cdot \text{К}_{\text{ср}} \cdot 0,01$ , (4) где $\delta$ - относительная погрешность измерений флавоноидных соединений по [таблице 1](#p100099), %. #### 10.5 Результаты испытаний оформляют протоколом. ---