---
title: "\"ГОСТ ISO/TS 21872-1-2013. Межгосударственный стандарт. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения потенциально энтеропатогенных Vibrio spp. Часть 1. Обнаружение бактерий Vibrio parahaemoliticus и Vibrio cholerae\""
number: "ГОСТ ISO/TS 21872-1-2013"
issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/standart-gost-isots-21872-1-2013"
---

## "ГОСТ ISO/TS 21872-1-2013. Межгосударственный стандарт. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения потенциально энтеропатогенных Vibrio spp. Часть 1. Обнаружение бактерий Vibrio parahaemoliticus и Vibrio cholerae"

# "ГОСТ ISO/TS 21872-1-2013. Межгосударственный стандарт. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения потенциально энтеропатогенных Vibrio spp. Часть 1. Обнаружение бактерий Vibrio parahaemoliticus и Vibrio cholerae"

(введен в действие Приказом Росстандарта от 17.03.2014 N 157-ст)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия - национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Евразийского экономического союза "О безопасности рыбы и рыбной продукции" (ТР ЕАЭС 040/2016) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 19.07.2022 N 107).
> Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия - национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 N 236).
> Текст данного документа приведен с учетом [поправки](https://bukva.ai/docs/popravka-popravki-gost-isots-21872-1-2013), опубликованной в "ИУС", N 5, 2015.
> Документ [введен](#p100011) в действие с 01.07.2015.


<a id="p100001"></a>Введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 17 марта 2014 г. N 157-ст

<a id="p100002"></a>**МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ**

<a id="p100003"></a>**МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ**

<a id="p100004"></a>**ГОРИЗОНТАЛЬНЫЙ МЕТОД ОБНАРУЖЕНИЯ ПОТЕНЦИАЛЬНО**
**ЭНТЕРОПАТОГЕННЫХ VIBRIO SPP.**

<a id="p100005"></a>**ЧАСТЬ 1**

<a id="p100006"></a>**ОБНАРУЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ VIBRIO PARAHAEMOLITICUS**
**И VIBRIO CHOLERAE**

<a id="p100007"></a>Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal
method for the detection of potentially enteropathogenic
Vibrio spp.
Part 1. Detection of Vibrio parahaemolyticus
and Vibrio cholerae

<a id="p100008"></a>**(ISO/TS 21872-1:2007, IDT)**

<a id="p100009"></a>**ГОСТ ISO/TS 21872-1-2013**

<a id="p100010"></a>МКС 07.100.30

<a id="p100011"></a>Дата введения
1 июля 2015 года


#### <a id="p100012"></a>Предисловие


<a id="p100013"></a>Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"


### <a id="p100014"></a>Сведения о стандарте


<a id="p100015"></a>1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии)
<a id="p100016"></a>2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)
<a id="p100017"></a>3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 декабря 2013 г. N 63-П)
<a id="p100018"></a>За принятие проголосовали:


| <a id="p100019"></a>Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | <a id="p100020"></a>Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | <a id="p100021"></a>Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100022"></a>Армения | <a id="p100023"></a>AM | <a id="p100024"></a>Минэкономики Республики Армения |
| <a id="p100025"></a>Беларусь | <a id="p100026"></a>BY | <a id="p100027"></a>Госстандарт Республики Беларусь |
| <a id="p100028"></a>Казахстан | <a id="p100029"></a>KZ | <a id="p100030"></a>Госстандарт Республики Казахстан |
| <a id="p100031"></a>Киргизия | <a id="p100032"></a>KG | <a id="p100033"></a>Кыргызстандарт |
| <a id="p100034"></a>Молдова | <a id="p100035"></a>MD | <a id="p100036"></a>Молдова-Стандарт |
| <a id="p100037"></a>Россия | <a id="p100038"></a>RU | <a id="p100039"></a>Росстандарт |
| <a id="p100040"></a>Таджикистан | <a id="p100041"></a>TJ | <a id="p100042"></a>Таджикстандарт |


<a id="p100043"></a>4 Настоящий стандарт идентичен международному документу ISO/TS 21872-1:2007 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of potentially enteropathogenic Vibrio spp. - Part 1: Detection of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholerae (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения потенциально энтеропатогенных видов рода Vibrio. Часть 1: Выявление бактерий Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae).
<a id="p100044"></a>Международный документ разработан подкомитетом ISO/TC 34/SC 9 "Микробиология" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).
<a id="p100045"></a>Перевод с английского языка (en).
<a id="p100046"></a>Официальный экземпляр международного документа, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.
<a id="p100047"></a>Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном [приложении ДА](#p100442).
<a id="p100048"></a>Степень соответствия - идентичная (IDT)
<a id="p100049"></a>5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 марта 2014 г. N 157-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO/TS 21872-1-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.
<a id="p100050"></a>**6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ**

<a id="p100051"></a>Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

<a id="p100052"></a>ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Для гарантии здоровья лабораторного персонала необходимо, чтобы тесты для выявления Vibrio spp. и особенно токсигенного Vibrio cholerae проводились только в лабораториях, специально оснащенных для этих целей, и под руководством опытного микробиолога, и чтобы уделялось особое внимание обеззараживанию зараженного материала.


### <a id="p100053"></a>1 Область применения


<a id="p100054"></a>Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и корма для животных и устанавливает горизонтальный метод выявления двух главных патогенных видов Vibrio, вызывающих кишечные болезни у человека: Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae.
<a id="p100055"></a>Метод применим также для выявления данных микроорганизмов в объектах окружающей среды в сфере пищевого производства и оборота пищевых продуктов.


### <a id="p100056"></a>2 Нормативные ссылки


<a id="p100057"></a>В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
<a id="p100058"></a>ISO 6887-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)
<a id="p100059"></a>ISO 6887-2 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила подготовки мяса и мясных продуктов)
<a id="p100060"></a>ISO 6887-3 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов)
<a id="p100061"></a>ISO 6887-4 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления продуктов, кроме молока и молочных продуктов, мяса и мясных продуктов и рыбы и рыбопродуктов)
<a id="p100062"></a>ISO 7218 Microbiology of food and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)
<a id="p100063"></a>ISO 8261 Milk and milk products. General guidance for the preparation of tests samples, initial suspensions and decimal dilutions for microbiological examination (Молоко и молочные продукты - Общие правила приготовления проб для испытаний, исходных суспензий и десятикратных разведений для микробиологических исследований)


### <a id="p100064"></a>3 Термины и определения


<a id="p100065"></a>В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
<a id="p100066"></a>3.1 потенциально энтеропатогенные Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae: Микроорганизмы, которые образуют типичные колонии на плотной селективной среде и которые обладают описанными биохимическими характеристиками при проведении испытания в соответствии с настоящим стандартом.
<a id="p100067"></a>3.2 обнаружение потенциально энтеропатогенных Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae: Определение присутствия или отсутствия Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae в определенном количестве продукта, после проведения испытания в соответствии с настоящим стандартом.


### <a id="p100068"></a>4 Сущность метода



#### <a id="p100069"></a>4.1 Общие положения


<a id="p100070"></a>Метод обнаружения Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae состоит из четырех последовательных этапов (см. также [приложение A](#p100272)).
<a id="p100071"></a>*Примечание* - Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae могут присутствовать в небольших количествах, часто вместе с гораздо большим количеством других микроорганизмов, относящихся к семейству Vibrionaceae или к другим семействам, поэтому два последовательных обогащения необходимы для выявления определяемых микроорганизмов.


#### <a id="p100072"></a>4.2 Первичное обогащение в селективной жидкой среде


<a id="p100073"></a>Среду для обогащения (щелочную солевую пептонную воду, ASPW) [(5.1)](#p100085) инокулируют навеской при комнатной температуре. Посевы инкубируют при 37 °C в течение (6 +/- 1) ч для глубоко замороженных продуктов или при 41,5 °C в течение (6 +/- 1) ч для свежих продуктов.


#### <a id="p100074"></a>4.3 Вторичное обогащение в жидкой селективной среде


<a id="p100075"></a>Среду для обогащения (ASPW) инокулируют культурой, полученной по [4.2](#p100072). Посевы инкубируют при 41,5 °C в течение (18 +/- 1) ч.


#### <a id="p100076"></a>4.4 Выделение и идентификация


<a id="p100077"></a>Культуры, полученные по [4.2](#p100072) и [4.3](#p100074), пересевают на две селективные плотные среды:
- <a id="p100078"></a>тиосульфат, цитратный, желчный, сахарозный (TCBS) агар;
- <a id="p100079"></a>другая плотная селективная среда выбирается параллельно среде TCBS, позволяющей выделить Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae.
<a id="p100080"></a>Посевы на среде TCBS инкубируют при 37 °C, посевы просматривают через (24 +/- 3) ч. Посевы на второй селективной среде инкубируют в соответствии с рекомендациями изготовителя этой среды.


#### <a id="p100081"></a>4.5 Подтверждение


<a id="p100082"></a>Типичные колонии Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae, выделенные по [4.4](#p100076), пересевают и затем подтверждают с помощью биохимических тестов.


### <a id="p100083"></a>5 Реактивы и среды


<a id="p100084"></a>Примечание - В связи с большим количеством питательных сред и реагентов и для удобства пользования их состав и приготовление представлены в [приложении B](#p100275).

<a id="p100085"></a>5.1 Среда для обогащения: щелочная солевая пептонная вода (ASPW) См. [B.1](#p100276).


#### <a id="p100086"></a>5.2 Плотные среды для выделения


<a id="p100087"></a>5.2.1 Первая среда: тиосульфат, цитратный, желчный, сахарозный (TCBS) агар; см. [B.2](#p100284).


#### <a id="p100088"></a>5.2.2 Вторая среда


<a id="p100089"></a>Выбор второй среды остается за выбором лаборатории, проводящей тест. Приготовление среды должно строго соответствовать инструкциям изготовителя этой среды.
<a id="p100090"></a>*Примечание* - Соя пептон трифенил тетразолий хлорид агар (TSAT) и натрия додецил сульфат, полимиксин, сахароза агар (SDSPS), (mCPC, CPC, CC) агары не рекомендуются для выделения Vibrio parahaemolyticus.


#### <a id="p100091"></a>5.3 Солевой питательный агар (SNA)

<a id="p100092"></a>См. [B.3](#p100314).

#### <a id="p100093"></a>5.4 Реактив для определения оксидазы

<a id="p100094"></a>См. [B.4](#p100329).

#### <a id="p100095"></a>5.5 Солевой трехсахарный железистый (TSA) агар

<a id="p100096"></a>См. [B.5](#p100335).

#### <a id="p100097"></a>5.6 Солевая среда для определения орнитин декарбоксилазы (ODC)

<a id="p100098"></a>См. [B.6](#p100355).

#### <a id="p100099"></a>5.7 Солевая среда для определения лизин декарбоксилазы (LDC)

<a id="p100100"></a>См. [B.7](#p100366).

#### <a id="p100101"></a>5.8 Солевая среда для определения аргинин дегидролазы (ADH)

<a id="p100102"></a>См. [B.8](#p100377).

#### <a id="p100103"></a>5.9 Реактив для определения $\beta - \text{галактозидазы}$

<a id="p100104"></a>См. [B.9](#p100388).

#### <a id="p100105"></a>5.10 Солевая среда для определения индола

<a id="p100106"></a>См. [B.10](#p100409).

#### <a id="p100107"></a>5.11 Солевые пептонные воды

<a id="p100108"></a>См. [B.11](#p100426).

#### <a id="p100109"></a>5.12 Раствор хлорида натрия

<a id="p100110"></a>См. [B.12](#p100434).


### <a id="p100111"></a>6 Аппаратура и материалы


<a id="p100112"></a>*Примечание* - Инструменты одноразового применения - приемлемая альтернатива стеклянной посуде многократного пользования, если они имеют подходящие технические характеристики.

<a id="p100113"></a>Оборудование обычной микробиологической лаборатории (см. ISO 7218) и, в частности, следующее:

#### <a id="p100114"></a>6.1 Термостат, регулируемый до (37 +/- 1) °C.


#### <a id="p100115"></a>6.2 Термостаты или водяные бани, регулируемые до (41,5 +/- 1) °C.


#### <a id="p100116"></a>6.3 Водяная баня, регулируемая от 44 °C до 47 °C.


#### <a id="p100117"></a>6.4 Водяная баня, регулируемая до (37 +/- 1) °C.

<a id="p100118"></a>Рекомендуется использовать водяные бани (6.2, 6.3 и 6.4), содержащие антибактериальный агент.


### <a id="p100119"></a>7 Отбор проб


<a id="p100120"></a>Важно, чтобы для испытания в лабораторию поступила представительная проба, не поврежденная и не измененная в ходе транспортирования или хранения.
<a id="p100121"></a>Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Отбор проб - по стандарту на конкретный продукт. В случае отсутствия конкретного стандарта на отбор проб продукта рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по процедуре отбора проб.


### <a id="p100122"></a>8 Приготовление испытуемой пробы


<a id="p100123"></a>Пробу для испытания готовят в соответствии с определенной частью ISO 6887 и/или ISO 8261 или стандарту на конкретный продукт. В случае отсутствия конкретного стандарта рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по данному вопросу.


### <a id="p100124"></a>9 Проведение испытания (см. [приложение A](#p100272))



#### <a id="p100125"></a>9.1 Проба для испытания и исходная суспензия


<a id="p100126"></a>Для приготовления исходной суспензии используют первую среду для обогащения (ASPW), указанную в [5.1](#p100085).
<a id="p100127"></a>Берут пробу для испытания (x г, или x см3) в соответствии с требованиями, указанными на конкретный продукт, и гомогенизируют ее в 9x см3 (или 9x г) среды для обогащения.
<a id="p100128"></a>В случае больших количеств высеваемого продукта перед внесением навески ASPW должна быть нагрета до 37 °C.
<a id="p100129"></a>Если разведение продукта и инкубирование посевов не могут быть проведены в тот же день, исходную суспензию хранят до следующего дня при температуре (5 +/- 3) °C.
<a id="p100130"></a>Для уменьшения объема проводимой работы пробы могут быть объединены в случае, когда более чем одна проба (25 г) испытывается от той же партии анализируемого пищевого продукта и когда есть уверенность в том, что смесь (собранные вместе порции пробы) не изменят конечные результаты, связанные с этим продуктом.
<a id="p100131"></a>*Пример* - Если анализируют 10 проб для испытаний массой 25 г, возможно их объединение для того, чтобы получить в сумме объединенную пробу массой 250 г и добавить к ней 2,25 дм3 среды для обогащения.
<a id="p100132"></a>Количество клеток Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae значительно снижается за счет хранения при низких температурах. Хранение проб и в меньшей степени суспензий при таких температурах должно быть устранено или сведено к минимуму.


#### <a id="p100133"></a>9.2 Первичное селективное обогащение


<a id="p100134"></a>Инкубируют исходную суспензию [(9.1)](#p100125) при 37 °C в течение (6 +/- 1) ч для глубоко замороженных, сушеных или соленых продуктов или при 41,5 °C в течение (6 +/- 1 ч) для свежих продуктов.
<a id="p100135"></a>Необходимо особое внимание к применению метода для продуктов с высоким содержанием соли, так как конечная концентрация соли в среде может изменять ее качественные характеристики (см. ISO 6887-4).


#### <a id="p100136"></a>9.3 Вторичное селективное обогащение


<a id="p100137"></a>9.3.1 Переносят 1 см3 культуры, полученной по [9.2](#p100133), взятой с поверхности, в пробирку, содержащую 10 см3 ASPW [(5.1)](#p100085).

##### <a id="p100138"></a>9.3.2 Посевы по 9.3.1 инкубируют при 41,5 °C в течение (18 +/- 1) ч.



#### <a id="p100139"></a>9.4 Выявление и идентификация


<a id="p100140"></a>9.4.1 Культурами, выросшими на среде ASPW ([9.2](#p100133) и [9.3.2](#p100138)), засевают петлей поверхность чашек с TCBS агаром [(5.2.1)](#p100087) так, чтобы обеспечить рост хорошо изолированных колоний.
<a id="p100141"></a>Аналогично поступают со второй селективной средой [(5.2)](#p100086), используя новую петлю (после фламбирования).
<a id="p100142"></a>9.4.2 Переворачивают чашки Петри с посевами. Чашки с посевами на TCBS агар (9.4.1) помещают в термостат [(6.1)](#p100114), установленный на 37 °C. Посевы на вторую селективную среду инкубируют, следуя инструкции изготовителя.
<a id="p100143"></a>9.4.3 После инкубирования посевов ([9.4.1](#p100140) и 9.4.2) в течение (24 +/- 3) ч их просматривают на наличие типичных колоний предположительно патогенных Vibrio spp., отмечают их расположение на дне чашки Петри.
<a id="p100144"></a>Существуют две основные морфологические характеристики для колоний Vibrio spp. на TCBS агар:
- <a id="p100145"></a>типичные колонии V. parahaemolyticus гладкие зеленые (сахарозоотрицательные), от 2 до 3 мм в диаметре;
- <a id="p100146"></a>типичные колонии V. cholerae гладкие, желтые (сахарозоположительные), от 2 до 3 мм в диаметре.
<a id="p100147"></a>Вторую селективную среду инкубируют при соответствующей температуре в течение соответствующего периода времени, затем проверяют на наличие колоний, которые в соответствии с их характеристиками могут быть отнесены к возможно выделенным V. parahaemolyticus и V. cholerae.


#### <a id="p100148"></a>9.5 Подтверждение


<a id="p100149"></a>9.5.1 Для идентификации Vibrio до вида могут быть использованы разнообразные коммерчески доступные наборы для биохимической идентификации, обеспеченные базой данных или идентификационными таблицами. Наборы инокулируются суспензией определяемых бактерий. Суспензии для инокуляции готовятся в физиологическом растворе или жидкости для разбавления. Наборы для биохимической идентификации основаны на реакциях, полученных при использовании сред, аналогичных тем, которые описаны в настоящем стандарте. Данные наборы следует использовать в соответствии с требованиями инструкций изготовителей.
<a id="p100150"></a>*Примечание* - Распознавание колоний Vibrio в значительной степени вопрос опыта, их внешний вид может иногда различаться в зависимости не только от вида, а также от партии питательной среды.


##### <a id="p100151"></a>9.5.2 Отбор колоний для подтверждения и приготовления чистых культур

<a id="p100152"></a>Для подтверждения пересевают с каждой селективной среды (см. [9.4](#p100139)) по меньшей мере пять колоний, которые считаются типичными для каждого потенциально патогенного вида Vibrio spp. (V. parahaemolyticus, V. cholerae). Если на чашке менее пяти типичных колоний, то пересевают все эти колонии.
<a id="p100153"></a>*Примечание* - Пищевые продукты, особенно морепродукты, могут содержать большое число бактерий, включая непатогенные Vibrio spp., которые могут расти в процессе культивирования на селективных средах. Пересев малого количества колоний может привести к потере потенциально патогенных видов.

<a id="p100154"></a>Пересевают отобранные колонии на поверхность чашек с солевым питательным агаром или поверхность скошенного солевого питательного агара [(5.3)](#p100091) для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при температуре 37 °C в течение (24 +/- 3) ч.
<a id="p100155"></a>Для биохимического подтверждения используют чистые культуры.

##### <a id="p100156"></a>9.5.3 Тесты для идентификации


###### <a id="p100157"></a>9.5.3.1 Тест на оксидазу

<a id="p100158"></a>Используя петлю из платиново-иридиевого провода или стеклянный стержень, отбирают часть чистой культуры с солевого питательного агара [(9.5.2)](#p100151) и проводят по поверхности фильтровальной бумаги, увлажненной реактивом на оксидазу [(5.4)](#p100093), или используют коммерческие диски или растворы, следуя инструкциям изготовителя. Не допускается использовать никель-хромовую петлю для отбора или металлическую проволоку. Тест считается положительным, если цвет меняется на розовато-лиловый, фиолетовый или насыщенный фиолетовый в течение 10 с.

###### <a id="p100159"></a>9.5.3.2 Микроскопирование

<a id="p100160"></a>Каждую чистую культуру, полученную по [9.4.2](#p100142), тестируют в соответствии с a) и b) как указано далее.
<a id="p100161"></a>a) Готовят мазок для окраски по Граму. После окраски, используя микроскоп, проверяют морфологию и отношение к окраске по Граму.
<a id="p100162"></a>b) Инокулируют пробирку с щелочной солевой пептонной водой (ASPW) [(5.1)](#p100085). Посев инкубируют при 37 °C от 1 ч до 6 ч. Наносят каплю культуры на чистую поверхность предметного стекла, накрывают покровным стеклом и проверяют подвижность культуры под микроскопом. Отбирают культуры, которые показали положительный результат на подвижность.

###### <a id="p100163"></a>9.5.3.3 Отбор культур для биохимических тестов

<a id="p100164"></a>Отбирают для биохимического подтверждения оксидазоположительные, грамотрицательные культуры, которые показывают положительный результат в тесте на подвижность.

##### <a id="p100165"></a>9.5.4 Биохимическое подтверждение

<a id="p100166"></a>9.5.4.1 Используя петлю для посевов, инокулируют среды, указанные в 9.5.4.2 - [9.5.4.8](#p100199) каждой культурой, полученной из колоний, отобранных по [9.5.3.3](#p100163).

###### <a id="p100167"></a>9.5.4.2 Тест с солевым TSI агаром [(5.5)](#p100095)

<a id="p100168"></a>Инокулируют укалыванием основание столбика агара и проводят вдоль по скошенной поверхности. Посевы инкубируют при 37 °C в течение (24 +/- 3) ч.
<a id="p100169"></a>Результаты интерпретируют следующим образом:
<a id="p100170"></a>a) Столбик плотной среды:
- <a id="p100171"></a>желтый: глюкозоположительный (ферментация глюкозы);
- <a id="p100172"></a>красный или неизменившийся: глюкозоотрицательный (нет ферментации глюкозы);
- <a id="p100173"></a>черный: образование сероводорода;
- <a id="p100174"></a>пузыри или трещины: образование газа из глюкозы.
<a id="p100175"></a>b) Скошенная поверхность плотной среды
- <a id="p100176"></a>желтый: лактозо- и/или сахарозоположительный (ферментация лактозы и/или сахарозы);
- <a id="p100177"></a>красный или неизменившийся: лактозо- и сахарозоотрицательный (нет ферментации лактозы или сахарозы).
<a id="p100178"></a>Типичные реакции для Vibrio parahaemolyticus соответствуют щелочной поверхности (красный цвет среды) и кислотному основанию (желтый цвет среды), без образования сероводорода или газа.
<a id="p100179"></a>Типичные реакции для Vibrio cholerae соответствуют кислотной поверхности (желтый цвет среды) и кислому основанию (желтый цвет среды) без образования сероводорода или газа.
<a id="p100180"></a>Инкубирование не должно превышать 24 ч, так как желтая поверхность V. cholerae может через 24 ч преобразоваться в красную.

###### <a id="p100181"></a>9.5.4.3 Определение орнитин декарбоксилазы

<a id="p100182"></a>Инокулируют жидкую солевую среду [(5.6)](#p100097) чуть ниже поверхности. Добавляют около 1 см3 стерильного минерального масла на поверхность среды. Посевы инкубируют при 37 °C в течение (24 +/- 3) ч.
<a id="p100183"></a>Помутнение и фиолетовый цвет среды после термостатирования указывают на положительную реакцию (бактериальный рост и декарбоксилирование орнитина). Желтый цвет показывает отрицательную реакцию.

###### <a id="p100184"></a>9.5.4.4 Определение L-лизин декарбоксилазы

<a id="p100185"></a>Инокулируют жидкую солевую среду [(5.7)](#p100099) чуть ниже поверхности. Добавляют около 1 см3 стерильного минерального масла на поверхность среды. Посевы инкубируют при 37 °C в течение (24 +/- 3) ч.
<a id="p100186"></a>Помутнение и фиолетовый цвет после инкубирования указывают на положительную реакцию (бактериальный рост и декарбоксилирование лизина). Желтый цвет указывает на отрицательную реакцию.

###### <a id="p100187"></a>9.5.4.5 Определение аргинин дигидролазы

<a id="p100188"></a>Инокулируют жидкую солевую среду [(5.8)](#p100101) чуть ниже поверхности. Добавляют около 1 см3 стерильного минерального масла на поверхность среды. Посевы инкубируют при 37 °C в течение (24 +/- 3) ч.
<a id="p100189"></a>Помутнение и фиолетовый цвет после инкубирования указывают на положительную реакцию (бактериальный рост и дигидрирование аргинина). Желтый цвет указывает на отрицательную реакцию.

###### <a id="p100190"></a>9.5.4.6 Определение $\beta - \text{галактозидазы}$

<a id="p100191"></a>Инокулируют подозрительную колонию в пробирку, содержащую 0,25 см3 солевого раствора [(5.12)](#p100109). Добавляют одну каплю толуола и встряхивают пробирку.
<a id="p100192"></a>Помещают пробирку в водяную баню [(6.4)](#p100117), установленную на 37 °C и оставляют ее приблизительно на 5 мин.
<a id="p100193"></a>Добавляют 0,25 см3 реактива для определения $\beta - \text{галактозидазы}$ [(5.9)](#p100103) и перемешивают, после чего пробирку возвращают в водяную баню, установленную на 37 °C, оставляют ее на (24 +/- 3) ч, проверяя время от времени.
<a id="p100194"></a>Желтый цвет указывает на положительную реакцию (присутствие $\beta - \text{галактозидазы}$ ). Часто реакция видна через 20 мин. Отсутствие окрашивания через 24 ч указывает на отрицательную реакцию.
<a id="p100195"></a>Если используются диски, готовые к применению, то следуют инструкциям изготовителя.

###### <a id="p100196"></a>9.5.4.7 Определение индола

<a id="p100197"></a>Подозрительную колонию засевают в пробирку с 5 см3 триптон-триптофановой солевой среды [(5.10)](#p100105). Посевы инкубируют при 37 °C в течение (24 +/- 3) ч. После инкубирования добавляют 1 см3 реактива Ковача.
<a id="p100198"></a>Образование красного кольца указывает на положительную реакцию (образование индола). Желто-коричневое кольцо указывает на отрицательную реакцию.

###### <a id="p100199"></a>9.5.4.8 Тест на солеустойчивость

<a id="p100200"></a>Готовят серию сред с пептонной водой [(5.11)](#p100107) с возрастающей концентрацией соли (NaCl): 0, 2, 4, 6, 8 и 10%.
<a id="p100201"></a>Готовят суспензию из колоний, которые будут тестироваться, и засевают каждую из пробирок (с помощью петли). Посевы инкубируют при 37 °C в течение (24 +/- 3) ч.
<a id="p100202"></a>Появление помутнения указывает на то, что подозреваемая колония может расти при концентрации хлорида натрия, в соответствующей пробирке с солевой пептонной водой.

###### <a id="p100203"></a>9.5.4.9 Интерпретация биохимических тестов

<a id="p100204"></a>Виды V. parahaemolyticus, V. cholerae в основном дают реакции, представленные в таблице 1.

<a id="p100205"></a>Таблица 1

<a id="p100206"></a>Интерпретация биохимических тестов


<table>
<colgroup><col width="48%"><col width="21%"><col width="31%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100207"></a>Тесты (среды, содержащие <sub>1</sub>% NaCl)</td><td><a id="p100208"></a>V. cholerae <sup><a href="#p100253">a</a></sup></td><td><a id="p100209"></a>V. parahaemolyticus <sup><a href="#p100253">a</a></sup></td></tr>
<tr><td><a id="p100210"></a>Оксидаза</td><td><a id="p100211"></a>+</td><td><a id="p100212"></a>+</td></tr>
<tr><td><a id="p100213"></a>Выделение газа (глюкоза)</td><td><a id="p100214"></a>-</td><td><a id="p100215"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100216"></a>Лактоза</td><td><a id="p100217"></a>-</td><td><a id="p100218"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100219"></a>Сахароза</td><td><a id="p100220"></a>+</td><td><a id="p100221"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100222"></a>ODC</td><td><a id="p100223"></a>+</td><td><a id="p100224"></a>+</td></tr>
<tr><td><a id="p100225"></a>LDC</td><td><a id="p100226"></a>+</td><td><a id="p100227"></a>+</td></tr>
<tr><td><a id="p100228"></a>ADH</td><td><a id="p100229"></a>-</td><td><a id="p100230"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100231"></a>ONPG гидролиз</td><td><a id="p100232"></a>+</td><td><a id="p100233"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100234"></a>Образование индола</td><td><a id="p100235"></a>+</td><td><a id="p100236"></a>+</td></tr>
<tr><td><a id="p100237"></a>Рост в пептонной воде с:</td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100238"></a>0% NaCl</td><td><a id="p100239"></a>+</td><td><a id="p100240"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100241"></a>2% NaCl</td><td><a id="p100242"></a>+</td><td><a id="p100243"></a>+</td></tr>
<tr><td><a id="p100244"></a>6% NaCl</td><td><a id="p100245"></a>-</td><td><a id="p100246"></a>+</td></tr>
<tr><td><a id="p100247"></a>8% NaCl</td><td><a id="p100248"></a>-</td><td><a id="p100249"></a>+</td></tr>
<tr><td><a id="p100250"></a>10% NaCl</td><td><a id="p100251"></a>-</td><td><a id="p100252"></a>-</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100253"></a><sup>a</sup> Знак "+" означает от 76% до 89% положительных реакций.</td></tr>
</table>


<a id="p100254"></a>Примечание - Реакции, приведенные в [Таблице 1](#p100206), - руководство к идентификации перечисленных видов. Требуются дополнительные фенотипические тесты для полного различения этих видов друг от друга, от других непатогенных видов Vibrio и от других ферментативных грамотрицательных организмов, таких как Aeromonas spp. Vibrio mimicus, патогенных видов, указанных в ISO/TS 21872-2, так как показывают идентичные реакции с V. cholerae в этой серии тестов. Кроме того, что они являются сахарозоотрицательными.


###### <a id="p100255"></a>9.5.4.10 Пошаговое подтверждение (по желанию)

<a id="p100256"></a>С культурами, отобранными в [9.5.3.3](#p100163), проводят тесты на рост в 10%-ной солевой пептонной воде [(5.11)](#p100107) и аргинин дегидролазу [(5.8)](#p100101). Другие подтверждающие тесты проводят со всеми колониями, которые не показали рост в 10%-ной солевой пептонной воде и которые дают отрицательную реакцию на аргинин дегидролазу.
<a id="p100257"></a>*Примечание* - Желательно в то же время делать пересев либо в 2%-ную солевую пептонную воду, либо на солевой питательный агар, для того, чтобы быть уверенным, что "отсутствие роста" в 10%-ной солевой пептонной воде не вызвано гибелью культуры.


##### <a id="p100258"></a>9.5.5 Подтверждение биохимической идентификации и определение факторов патогенности

<a id="p100259"></a>Биохимическая идентификация Vibrio трудна, желательно получить подтверждение выявления V. parahaemolyticus, V. cholerae в специализированной лаборатории. В этом случае для транспортирования колонии пересевают на поверхность скошенного солевого питательного агара [(5.3)](#p100091).
<a id="p100260"></a>Не все виды V. parahaemolyticus и V. cholerae являются патогенными. Для того, чтобы подтвердить патогенный характер видов, предпочтительнее проводить серологические тесты для V. cholerae (по крайней мере, чтобы определить, являются ли они серогруппами O1 или O139) и обнаружить присутствие токсинообразования или токсигенных генов для V. cholerae и термостабильно направленного гемолизина (TDH) или TDH-родственных гемолизиновых генов для V. parahaemolyticus. Эти тесты следует проводить в специализированной лаборатории. Следует отметить, что соотношение патогенных видов в окружающей среде и образцах пищевых продуктов обычно невелико (для V. parahaemolyticus они обычно присутствуют приблизительно в 1% от общего содержания V. parahaemolyticus в образце) и, таким образом, вероятность обнаружения патогенных видов с помощью пересева небольшого количества колоний для идентификации и подтверждения очень низка.


### <a id="p100261"></a>10 Выражение результатов


<a id="p100262"></a>В зависимости от результатов интерпретации указывают присутствие или отсутствие потенциально энтеропатогенных Vibrio spp. в пробе для испытания x г или x см3 продукта (см. ISO 7218), указав название соответствующих бактериальных видов.


### <a id="p100263"></a>11 Протокол испытаний


<a id="p100264"></a>Протокол испытаний должен содержать:
- <a id="p100265"></a>всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;
- <a id="p100266"></a>используемый метод отбора проб, если он известен;
- <a id="p100267"></a>любое отклонение в плане характеристик среды для обогащения или использованных условий инкубирования;
- <a id="p100268"></a>все рабочие детали, не установленные в настоящем стандарте или рассматриваемые как дополнительные, вместе с деталями любых инцидентов, которые могли бы повлиять на результат испытаний;
- <a id="p100269"></a>полученные результаты и, в частности, информация о том, была ли подтверждена патогенность изолированных видов.
<a id="p100270"></a>Протокол испытаний должен также содержать информацию о том, были ли получены положительные результаты только при использовании среды для изоляции [(5.2)](#p100086), не указанной в настоящем стандарте.





<a id="p100271"></a>Приложение A
(обязательное)

<a id="p100272"></a>**СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ ИСПЫТАНИЯ**

<a id="p100273"></a> ![11 Протокол испытаний](https://i.bukva.ai/nXGW6Auq/img_0.png) 





<a id="p100274"></a>Приложение B
(обязательное)

<a id="p100275"></a>**СОСТАВ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И РЕАКТИВОВ**

<a id="p100276"></a>B.1 Щелочная солевая пептонная вода (ASPW)

<a id="p100277"></a>B.1.1 Состав:
<a id="p100278"></a>пептон - 20,0 г;
<a id="p100279"></a>натрия хлорид - 20,0 г;
<a id="p100280"></a>вода - 1000 см3.
<a id="p100281"></a>B.1.2 Приготовление
<a id="p100282"></a>Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости. Если необходимо, регулируют pH так, чтобы после стерилизации он составлял 8,6 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100283"></a>Разливают среду в пробирки или колбы подходящего объема, чтобы получить порции, в количествах, требуемых для анализа (см. [9.1](#p100125); [9.3.1](#p100137)). Стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 °C.

<a id="p100284"></a>B.2 Тиосульфат, цитратный, желчный, сахарозный (TCBS) агар

<a id="p100285"></a>B.2.1 Состав:
<a id="p100286"></a>пептон - 10,0 г;
<a id="p100287"></a>дрожжевой экстракт - 5,0 г;
<a id="p100288"></a>цитрат натрия - 10,0 г;
<a id="p100289"></a>тиосульфат натрия - 10,0 г;
<a id="p100290"></a>цитрат железа (iii) - 1,0 г;
<a id="p100291"></a>хлорид натрия - 10,0 г;
<a id="p100292"></a>сухая бычья желчь - 8,0 г;
<a id="p100293"></a>сахароза - 20,0 г;
<a id="p100294"></a>бромтимоловый голубой - 0,04 г;
<a id="p100295"></a>тимоловый голубой - 0,04 г;
<a id="p100296"></a>агар - 8,0 - 18,0 г <1>
<a id="p100297"></a>вода - 1000 см3.

<a id="p100298"></a>

---

<a id="p100299"></a><1> В зависимости от желирующих свойств агара.

<a id="p100300"></a>B.2.2 Приготовление
<a id="p100301"></a>Растворяют компоненты или дегидратированную основу в воде доведением до кипения. Если необходимо, регулируют pH так, чтобы он составлял 8,6 +/- 0,2 при 25 °C. Среду не автоклавируют.
<a id="p100302"></a>B.2.3 Приготовление чашек с агаром
<a id="p100303"></a>Разливают в чашки Петри по 15 - 20 см3 свежеприготовленной среды, охлажденной приблизительно до 50 °C, и оставляют для застывания.
<a id="p100304"></a>Непосредственно перед использованием тщательно подсушивают поверхность агаровой среды в чашках Петри (предпочтительнее после снятия крышек и переворачивания чашек).
<a id="p100305"></a>B.2.4 Контроль среды
<a id="p100306"></a>Для количественной оценки эффективности роста для каждой партии TCBS агара используют солевой питательный агар (SNA) как сравнительную среду и следующие штаммы:
- <a id="p100307"></a>V. parahemolyticus: NCTC 10885;
- <a id="p100308"></a>V. furnissii: NCTC 11218;
- <a id="p100309"></a>Escherichia coli: ATCC 25922, 8739 или 11775.
<a id="p100310"></a>Эффективность роста рассчитывают по формуле

<a id="p100311"></a>**(NTCBS/NSNA)·100,**

<a id="p100312"></a>где N - количество выросших колоний.
<a id="p100313"></a>Эффективность роста должна составлять как минимум 50% для каждых видов Vibrio (организмы положительного контроля) и менее 1% для E. coli (организмы отрицательного контроля). Колонии V. parahaemolyticus: NCTC 10885 должны быть зелеными (сахарозоотрицательными), а колонии V. furnissii: NCTC 11218 должны быть желтыми (сахарозоположительными).

<a id="p100314"></a>B.3 Солевой питательный агар (SNA)

<a id="p100315"></a>B.3.1 Состав:
<a id="p100316"></a>мясной экстракт - 5,0 г;
<a id="p100317"></a>пептон - 3,0 г;
<a id="p100318"></a>натрия хлорид - 10,0 г;
<a id="p100319"></a>агар - 8,0 - 18,0 г [<1>](#p100349);
<a id="p100320"></a>вода - 1000 см3.
<a id="p100321"></a>B.3.2 Приготовление
<a id="p100322"></a>Растворяют компоненты или дегидратированную основу среды в воде, нагревая, при необходимости. Регулируют pH так, чтобы после стерилизации он составлял 7,2 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100323"></a>Разливают среду в емкости подходящей вместимости. Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве при 121 °C.
<a id="p100324"></a>B.3.3 Приготовление чашек с солевым питательным агаром
<a id="p100325"></a>Разливают в стерильные чашки Петри по 15 - 20 см3 среды, охлажденной приблизительно до 50 °C. Оставляют для застывания.
<a id="p100326"></a>Непосредственно перед применением тщательно подсушивают поверхность агара в чашках Петри (предпочтительнее после снятия крышек и переворачивания чашек).
<a id="p100327"></a>B.3.4 Приготовление пробирок со скошенным агаром
<a id="p100328"></a>Разливают примерно по 10 см3 среды, охлажденной приблизительно до 50 °C, в пробирки подходящей вместимости. Оставляют до застывания в наклонном положении.

<a id="p100329"></a>B.4 Реактив для определения оксидазы

<a id="p100330"></a>B.4.1 Состав:
<a id="p100331"></a>N,N,N',N'-Тетраметил-пара-фенилендиамин дигидрохлорид - 1,0 г
<a id="p100332"></a>Вода - 100 см3.
<a id="p100333"></a>B.4.2 Приготовление
<a id="p100334"></a>Растворяют компоненты в холодной воде непосредственно перед использованием.

<a id="p100335"></a>B.5 Солевой трехсахарный железистый агар (TSI)

<a id="p100336"></a>B.5.1 Состав:
<a id="p100337"></a>пептон - 20,0 г;
<a id="p100338"></a>мясной экстракт - 3,0 г;
<a id="p100339"></a>дрожжевой экстракт - 3,0 г;
<a id="p100340"></a>натрия хлорид - 10,0 г;
<a id="p100341"></a>лактоза - 10,0 г;
<a id="p100342"></a>сахароза - 10,0 г;
<a id="p100343"></a>глюкоза - 1,0 г;
<a id="p100344"></a>железо (iii) цитрат, 0,3 г;
<a id="p100345"></a>феноловый красный - 0,024 г;
<a id="p100346"></a>агар - 8,0 - 18,0 г <1>;
<a id="p100347"></a>вода - 1000 см3.

<a id="p100348"></a>

---

<a id="p100349"></a><1> В зависимости от желирующих свойств агара.

<a id="p100350"></a>B.5.2 Приготовление
<a id="p100351"></a>Растворяют компоненты или дегидратированную основу среды в воде, нагревая при необходимости. Если необходимо, регулируют pH так, чтобы после стерилизации он был 7,4 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100352"></a>Разливают среду по 10 см3 в пробирки подходящей вместимости. Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве при 121 °C.
<a id="p100353"></a>Оставляют для застывания в наклонном положении так, чтобы получить столбик высотой 2,5 см.
<a id="p100354"></a>Если среда используется более чем через восемь дней после приготовления, ее регенерируют расплавлением в водяной бане при кипении или текучим паром в течение 10 мин. Оставляют для застывания, как указано выше.

<a id="p100355"></a>B.6 Солевая среда для определения орнитин декарбоксилазы (ODC)

<a id="p100356"></a>B.6.1 Состав:
<a id="p100357"></a>L-Орнитин моногидрохлорид - 5,0 г;
<a id="p100358"></a>дрожжевой экстракт - 3,0 г;
<a id="p100359"></a>глюкоза - 1,0 г;
<a id="p100360"></a>бромкрезоловый пурпурный - 0,015 г;
<a id="p100361"></a>натрия хлорид - 10,0 г;
<a id="p100362"></a>вода - 1000 см3.
<a id="p100363"></a>B.6.2 Приготовление
<a id="p100364"></a>Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости. Если необходимо, регулируют pH так, чтобы он составлял 6,8 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100365"></a>Разливают среду по 2 - 5 см3 в узкие пробирки. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при 121 °C.

<a id="p100366"></a>B.7 Солевая среда для определения лизин декарбоксилазы (LDC)

<a id="p100367"></a>B.7.1 Состав:
<a id="p100368"></a>L-Лизин моногидрохлорид - 5,0 г;
<a id="p100369"></a>дрожжевой экстракт - 3,0 г;
<a id="p100370"></a>глюкоза - 1,0 г;
<a id="p100371"></a>бромкрезоловый пурпурный - 0,015 г;
<a id="p100372"></a>хлорид натрия - 10,0 г;
<a id="p100373"></a>вода - 1000 см3.
<a id="p100374"></a>B.7.2 Приготовление
<a id="p100375"></a>Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости. Если необходимо, регулируют pH, так, чтобы он составлял 6,8 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100376"></a>Разливают среду по 2 - 5 см3 в узкие пробирки. Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве при 121 °C.

<a id="p100377"></a>B.8 Солевая среда для определения аргинин дегидроксилазы (ADH)

<a id="p100378"></a>B.8.1 Состав:
<a id="p100379"></a>аргинин моногидрохлорид - 5,0 г;
<a id="p100380"></a>дрожжевой экстракт - 3,0 г;
<a id="p100381"></a>глюкоза - 1,0 г;
<a id="p100382"></a>бромкрезоловый пурпурный - 0,015 г;
<a id="p100383"></a>натрия хлорид - 10,0 г;
<a id="p100384"></a>вода - 1000 см3.
<a id="p100385"></a>B.8.2 Приготовление
<a id="p100386"></a>Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости. Если необходимо, регулируют pH так, чтобы он составлял 6,8 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100387"></a>Разливают среду по 2 - 5 см3 в узкие пробирки. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при 121 °C.

<a id="p100388"></a>B.9 Реактивы для определения $\beta - \text{галактозидазы}$ 

<a id="p100389"></a>B.9.1 OPNG раствор
<a id="p100390"></a>B.9.1.1 Состав:
<a id="p100391"></a> $2 - \text{орто} - \text{нитрофенил} - \beta - D - \text{галактопиранозид}$ (OPNG) - 0,08 г;
<a id="p100392"></a>вода - 15 см3.
<a id="p100393"></a>B.9.1.2 Приготовление
<a id="p100394"></a>Растворяют OPNG в воде приблизительно при 50 °C. Охлаждают раствор.
<a id="p100395"></a>B.9.2 Буферный раствор
<a id="p100396"></a>B.9.2.1 Состав:
<a id="p100397"></a>натрия дигидрофосфат (NaH2PO4) - 6,9 г;
<a id="p100398"></a>натрия гидроксид (NaOH) (0,1 моль/дм3 раствор) - приблизительно 3 см3;
<a id="p100399"></a>вода до конечного объема - 50 см3.
<a id="p100400"></a>B.9.2.2 Приготовление
<a id="p100401"></a>Растворяют дигидрофосфат натрия в мерной колбе приблизительно в 45 см3 воды.
<a id="p100402"></a>Регулируют pH так, чтобы он составлял 7,0 +/- 0,2 при 25 °C с помощью раствора гидроксида натрия. Доводят объем водой до 50 см3.
<a id="p100403"></a>B.9.3 Готовый реактив
<a id="p100404"></a>B.9.3.1 Состав:
<a id="p100405"></a>буферный раствор [(B.9.2)](#p100395) - 5 см3;
<a id="p100406"></a>OPNG раствор [(B.9.1)](#p100389) - 15 см3.
<a id="p100407"></a>B.9.3.2 Приготовление
<a id="p100408"></a>Добавляют буферный раствор к раствору OPNG. Хранят при температуре от 0 °C до 5 °C.

<a id="p100409"></a>B.10 Солевая среда для определения индола

<a id="p100410"></a>B.10.1 Триптофановая солевая среда
<a id="p100411"></a>B.10.1.1 Состав:
<a id="p100412"></a>энзиматически переваренный казеин - 10,0 г;
<a id="p100413"></a>DL-Триптофан - 1,0 г;
<a id="p100414"></a>натрия хлорид - 10,0 г;
<a id="p100415"></a>вода - 1000 см3.
<a id="p100416"></a>B.10.1.2 Приготовление
<a id="p100417"></a>Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости, и фильтруют. Если необходимо, регулируют pH так, чтобы после стерилизации он составлял 7,0 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100418"></a>Разливают среду по 5 см3 в пробирки подходящей вместимости. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при 121 °C.
<a id="p100419"></a>B.10.2 Реактив Ковача
<a id="p100420"></a>B.10.2.1 Состав:
<a id="p100421"></a>4-диметиламинобензальдегид - 5,0 г;
<a id="p100422"></a>соляная кислота, плотностью $\rho$ от 1,18 г/см3 до 1,19 г/см3 - 25 см3;
<a id="p100423"></a>2-метилбутан-2-ол - 75 см3.
<a id="p100424"></a>B.10.2.2 Приготовление
<a id="p100425"></a>Смешивают компоненты.

<a id="p100426"></a>B.11 Солевые пептонные воды

<a id="p100427"></a>B.11.1 Состав:
<a id="p100428"></a>пептон - 10,0 г;
<a id="p100429"></a>натрия хлорид - 0, 20, 60, 80 или 100 г;
<a id="p100430"></a>вода - 1000 см3.
<a id="p100431"></a>B.11.2 Приготовление
<a id="p100432"></a>Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости. Если необходимо, регулируют pH так, чтобы после стерилизации он составлял 7,5 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100433"></a>Разливают среду по пробиркам подходящей вместимости. Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве при 121 °C.

<a id="p100434"></a>B.12 Раствор хлорида натрия

<a id="p100435"></a>B.12.1 Состав:
<a id="p100436"></a>натрия хлорид - 10,0 г;
<a id="p100437"></a>вода - 1000 см3.
<a id="p100438"></a>B.12.2 Приготовление
<a id="p100439"></a>Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости. Если необходимо, регулируют pH так, чтобы после стерилизации он составлял 7,5 +/- 0,2 при 25 °C.
<a id="p100440"></a>Разливают раствор по пробиркам подходящей вместимости. Стерилизуют 15 минут в автоклаве при 121 °C.





<a id="p100441"></a>Приложение ДА
(справочное)

<a id="p100442"></a>**СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫХ СТАНДАРТОВ**
**ССЫЛОЧНЫМ МЕЖДУНАРОДНЫМ СТАНДАРТАМ**

<a id="p100443"></a>Таблица ДА.1


<table>
<colgroup><col width="47%"><col width="17%"><col width="36%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100444"></a>Обозначение и наименование ссылочного международного стандарта</td><td><a id="p100445"></a>Степень соответствия</td><td><a id="p100446"></a>Обозначение и наименование межгосударственного стандарта</td></tr>
<tr><td><a id="p100447"></a>ISO 6887-1 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений</td><td><a id="p100448"></a>-</td><td><a id="p100449"></a><a href="#p100465">&lt;*&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100450"></a>ISO 6887-2 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила подготовки мяса и мясных продуктов</td><td><a id="p100451"></a>-</td><td><a id="p100452"></a><a href="#p100465">&lt;*&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100453"></a>ISO 6887-3 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов</td><td><a id="p100454"></a>-</td><td><a id="p100455"></a><a href="#p100465">&lt;*&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100456"></a>ISO 6887-4 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления продуктов, кроме молока и молочных продуктов, мяса и мясных продуктов и рыбы и рыбопродуктов</td><td><a id="p100457"></a>-</td><td><a id="p100458"></a><a href="#p100465">&lt;*&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100459"></a>ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям</td><td><a id="p100460"></a>IDT</td><td><a id="p100461"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-iso-7218-2011">ГОСТ ISO 7218-2011</a> Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям</td></tr>
<tr><td><a id="p100462"></a>ISO 8261 Молоко и молочные продукты. Общие правила приготовления проб для анализа, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований</td><td><a id="p100463"></a>-</td><td><a id="p100464"></a>&lt;*&gt;</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100465"></a><a id="p100466"></a><a id="p100467"></a>&lt;*&gt; Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его утверждения рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Перевод данного международного стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.<br>Примечание - В настоящей таблице использованы следующие условные обозначения степени соответствия стандартов:<br>- IDT - идентичные стандарты.</td></tr>
</table>







## <a id="p100468"></a>БИБЛИОГРАФИЯ



| <a id="p100469"></a>[1] | <a id="p100470"></a>ISO/TS 11133-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory |
| --- | --- |
| <a id="p100471"></a>[2] | <a id="p100472"></a>ISO/TS 11133-2 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media |




<a id="p100473"></a>

---