--- title: "\"ГОСТ ISO 6558-2-2019. Межгосударственный стандарт. Фрукты, овощи и продукты их переработки. Определение содержания каротина спектрофотометрическим методом\"" number: "ГОСТ ISO 6558-2-2019" issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/standart-gost-iso-6558-2-2019" --- ## "ГОСТ ISO 6558-2-2019. Межгосударственный стандарт. Фрукты, овощи и продукты их переработки. Определение содержания каротина спектрофотометрическим методом" # "ГОСТ ISO 6558-2-2019. Межгосударственный стандарт. Фрукты, овощи и продукты их переработки. Определение содержания каротина спектрофотометрическим методом" (введен в действие Приказом Росстандарта от 24.09.2019 N 742-ст) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия - национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей" (ТР ТС 023/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 28.01.2020 N 19). > Текст данного документа приведен с учетом [поправки](https://bukva.ai/docs/popravka-popravki-gost-iso-6558-2-2019), опубликованной в "ИУС", N 8, 2020. > Документ [введен](#p100009) в действие с 01.07.2020. > Взамен ГОСТ 8756.22-80. Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 сентября 2019 г. N 742-ст **МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ** **ФРУКТЫ, ОВОЩИ И ПРОДУКТЫ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ** **ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КАРОТИНА** **СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ** Fruits, vegetables and derived products. Determination of $\beta - carotene$ content by spectrophotometric method **(ISO 6558-2:1992,** Fruits, vegetables and derived products - Determination of carotene content - Part 2: Routine methods, IDT) **ГОСТ ISO 6558-2-2019** МКС 67.080.01 Дата введения 1 июля 2020 года ## Предисловие Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены [ГОСТ 1.0](https://bukva.ai/docs/gost-1-0-2015) "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и [ГОСТ 1.2](https://bukva.ai/docs/gost-1-2-2015) "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены" ## Сведения о стандарте 1 ПОДГОТОВЛЕН Всероссийским научно-исследовательским институтом технологии консервирования - филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова" РАН (ВНИИТеК - филиал ФГБНУ "ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова" РАН) на основе официального перевода на русский язык англоязычной версии указанного в [пункте 5](#p100039) стандарта, который выполнен ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ" 2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии 3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июля 2019 г. N 120-П) За принятие проголосовали: | Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации | | --- | --- | --- | | Армения | AM | Минэкономики Республики Армения | | Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь | | Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан | | Киргизия | KG | Кыргызстандарт | | Россия | RU | Росстандарт | | Узбекистан | UZ | Узстандарт | 4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 сентября 2019 г. N 742-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 6558-2-2019 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2020 г. 5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 6558-2:1992 "Фрукты, овощи и продукты их переработки. Определение содержания каротина. Часть 2. Общепринятые методы" ("Fruits, vegetables and derived products - Determination of carotene content - Part 2: Routine methods", IDT). Международный стандарт разработан Техническим комитетом ISO/TC 34 "Пищевые продукты", Подкомитетом SC 3 "Плодоовощные продукты" Международной организации по стандартизации (ISO). Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6) 6 ВЗАМЕН ГОСТ 8756.22-80 Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты" ## 1 Область применения Настоящий стандарт устанавливает два метода определения каротина (C40H56) во фруктах, овощах и продуктах их переработки в зависимости от содержания в них жира. [Метод A](#p100051) - для продуктов с содержанием жира до 5% по массе включительно <1>. --- <1> Предел 5% по массе установлен как арбитражный. [Метод B](#p100124) - для продуктов с содержанием жира свыше 5% по массе. ## 2 Метод A. Определение каротина в продуктах с содержанием жира до 5% по массе включительно #### 2.1 Сущность метода Метод основан на экстракции каротина из продукта смесью петролейного эфира и ацетона, последующем испарении растворителей, отделении каротина от других каротиноидов в полученном экстракте с применением колоночной хроматографии и спектрофотометрическом определении содержания каротина. #### 2.2 Реактивы и материалы Используют реактивы только признанного аналитического качества и дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты. 2.2.1 Петролейный эфир с пределами температуры кипения от 50 °C до 70 °C. ##### 2.2.2 Экстракционная смесь, готовят следующим образом. Растворяют 0,2 г гидрохинона в 40 см3 ацетона, а затем добавляют 160 см3 петролейного эфира [(2.2.1)](#p100056). ##### 2.2.3 Натрия сульфат, безводный. Высушивают при 120 °C в течение 2 - 3 ч и хранят в герметичном контейнере. 2.2.4 Кварцевый песок, промытый кислотой и прокаленный в муфельной печи. 2.2.5 Сорбент для заполнения колонки: используют один из вариантов, описанных в [2.2.5.1](#p100063) - [2.2.5.4](#p100067). 2.2.5.1 Алюминия оксид, деактивированный суспендированием в воде, готовят следующим образом. Прокаливают оксид алюминия в течение 3 ч в муфельной печи при 500 °C и охлаждают в эксикаторе. Перед использованием помещают 50 г прокаленного оксида алюминия в колбу со шлифом, добавляют 5,5 см3 воды и перемешивают до образования однородной суспензии. pH суспензии должно быть в пределах от 9 до 10. Суспензию можно хранить в закрытой колбе не более 24 ч. ###### 2.2.5.2 Магния оксид/стеклянная пыль, смесь 1:2 по массе. ###### 2.2.5.3 Алюминия оксид/натрия сульфат безводный, смесь 3:1 по массе. ###### 2.2.5.4 Алюминий оксид/кальций гидроксид, смесь 1:1 по массе. ##### 2.2.6 Натрия хлорид, раствор 300 г/дм3. #### 2.3 Оборудование Используют обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее. 2.3.1 Спектрофотометр, подходящий для измерений при длине волны 450 нм, оборудованный кюветным отделением с длиной оптического пути 10 мм. 2.3.2 Установка для фильтрования типа Витта, со стеклянной воронкой и колбой для фильтрования под уменьшенным давлением. ##### 2.3.3 Водяной насос. 2.3.4 Водяная баня, обеспечивающая поддержание температуры в диапазоне от 30 °C до 35 °C. ##### 2.3.5 Вакуумный роторный испаритель. ##### 2.3.6 Хроматографическая колонка диаметром 10 - 15 мм. ##### 2.3.7 Сетчатый фильтр класса P40. ##### 2.3.8 Вата, обезжиренная петролейным эфиром. ##### 2.3.9 Лабораторная ступка с пестиком. ##### 2.3.10 Эксикатор, содержащий эффективный осушитель. ##### 2.3.11 Коническая колба вместимостью 500 см3. 2.3.12 Круглодонные колбы вместимостью 100 и 500 см3, с коническими шлифами. ##### 2.3.13 Делительная воронка вместимостью 1000 см3. ##### 2.3.14 Мерные колбы с одной отметкой вместимостью 50 и 100 см3. #### 2.4 Подготовка проб ##### 2.4.1 Жидкие неоднородные продукты (например, соки, концентраты, сиропы) Тщательно перемешивают лабораторную пробу до однородного состояния. ##### 2.4.2 Вязкие продукты (например, мармелады, фрукты в сиропе) и твердые продукты (например, фрукты и овощи) Удаляют семена и кожуру, при необходимости, а затем тщательно перемешивают лабораторную пробу до однородного состояния. Взвешивают удаленные семена и кожуру для внесения поправки на полученный результат. ##### 2.4.3 Замороженные продукты и продукты глубокой заморозки Размораживают лабораторную пробу в закрытом контейнере. При необходимости повторяют операции по [2.4.2](#p100088). Присоединяют жидкость, образовавшуюся при размораживании, к продукту и тщательно перемешивают до однородного состояния. #### 2.5 Проведение испытаний ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ - Определение проводят в темном месте, без доступа прямого солнечного света. ##### 2.5.1 Проба для испытаний Взвешивают от 1 до 10 г подготовленной пробы [(2.4)](#p100085), содержащей от 5 до 150 мкг каротина. ##### 2.5.2 Приготовления раствора пробы для испытаний 2.5.2.1 Количественно переносят навеску пробы в ступку [(2.3.9)](#p100079) и добавляют около 20 см3 экстракционной смеси [(2.2.2)](#p100057). Добавляют 20 г безводного сульфата натрия [(2.2.3)](#p100059) и 30 г кварцевого песка [(2.2.4)](#p100061), тщательно растирают. Декантируют полученный экстракт на фильтр [(2.3.7)](#p100077) в коническую колбу вместимостью 500 см3 [(2.3.11)](#p100081). Экстракцию повторяют до тех пор, пока не будет получен прозрачный раствор. Переносят количественно остаток на фильтр и промывают его смесью, собирая фильтрат в коническую колбу. 2.5.2.2 Экстракты объединяют, переносят в делительную воронку вместимостью 1000 см3 [(2.3.13)](#p100083) и промывают несколько раз порциями воды, общим объемом от 300 до 400 см3 с целью удаления остатков ацетона. Экстракт встряхивают аккуратно, избегая образования эмульсии. Экстракцию повторяют с другой пробой, повторяя указанные операции, но используя вместо воды раствор хлорида натрия массовой концентрации 300 г/дм3 [(2.2.6)](#p100068). 2.5.2.3 К промытому экстракту добавляют 15 г безводного сульфата натрия [(2.2.3)](#p100059), перемешивают и оставляют на 15 мин. Раствор фильтруют через фильтр [(2.3.7)](#p100077), наполовину заполненный безводным сульфатом натрия, в круглодонную колбу вместимостью 500 см3 [(2.3.12)](#p100082). Промывают слой сульфата натрия тремя порциями по 10 см3 петролейного эфира [(2.2.1)](#p100056), собирая промывные воды вместе с фильтратом. 2.5.2.4 Полученный фильтрат упаривают на вакуумном испарителе [(2.3.5)](#p100075) на водяной бане [(2.3.4)](#p100074) при температуре от 30 °C до 35 °C и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 или 100 см3 [(2.3.14)](#p100084), доводят объем до метки петролейным эфиром (V1). *Примечание* 1 - В случае образования эмульсии допускается добавление 10 см3 этилового спирта. ##### 2.5.3 Хроматографическое разделение ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ - На протяжении всей процедуры разделения колонка всегда должна быть заполненной петролейным эфиром выше уровня поверхностного слоя адсорбента. 2.5.3.1 Помещают ватную пробку [(2.3.8)](#p100078) в широкую, нижнюю часть хроматографической колонки [(2.3.6)](#p100076). Присоединяют колонку к установке Витта [(2.3.2)](#p100072) и, аккуратно встряхивая, загружают в нее суспензию деактивированного оксида алюминия [(2.2.5.1)](#p100063) или смеси оксида магния со стеклянной пылью [(2.2.5.2)](#p100065), или смеси оксида алюминия с безводным сульфатом натрия [(2.2.5.3)](#p100066) на высоту 15 - 20 см. Оксид алюминия не является подходящим сорбентом для случая разделения ликопинов. Для продуктов, содержащих в составе ликопиновые каротиноиды (например, томатов и продуктов из них), используют смесь оксида алюминия с гидроксидом кальция [(2.2.5.4)](#p100067) в качестве адсорбента. Для сбора элюата из колонки используют круглодонную колбу вместимостью 100 см3 [(2.3.12)](#p100082). Установку для фильтрования Витта соединяют с водяным насосом [(2.3.3)](#p100073). 2.5.3.2 Заполняют колонку петролейным эфиром. Когда уровень петролейного эфира будет находиться на 1 см выше поверхности адсорбента, приливают 5 - 20 см3 (точно измеренного) раствора пробы (V2), в зависимости от интенсивности окраски. Когда уровень раствора пробы опустится около 1 см над поверхностью адсорбента, добавляют 30 см3 петролейного эфира. *Примечание* 2 - При проведении процедуры промывки $\alpha - ,\beta - ,\gamma - \text{каротины}$ движутся вниз по колонке в виде желтоватой зоны и элюируются количественно, в то время как каротиноиды (ксантофил, криптоксантин и др.) задерживаются в верхних слоях адсорбента. 2.5.3.3 Повторяют добавление до тех пор, пока не будет получен прозрачный элюат (обычно после добавления 20 см3 петролейного эфира). 2.5.3.4 В зависимости от интенсивности окраски полученного элюата корректируют его объем (концентрируя или разбавляя петролейным эфиром, при необходимости) таким образом, чтобы в 1 см3 содержалось 0,4 - 3,0 мкг каротина. Регистрируют конечный объем элюата (V3). ##### 2.5.4 Спектрофотометрическое измерение Измерения оптической плотности элюата проводят при длине волны 450 нм, в кюветах с длиной оптического пути 10 мм, используя в качестве раствора сравнения петролейный эфир. Коэффициент молярной абсорбции $\text{А}_{1\text{см}}^{1\%}$ для чистого раствора $\beta - \text{каротина}$ в петролейном эфире при 450 нм равен 2530. #### 2.6 Обработка результатов Содержание каротина (выраженное через $\beta - \text{каротин}$ ) в продукте вычисляют по формуле $W(C_{40}H_{56}) = \frac{A \cdot V_{1} \cdot V_{3}}{0,25 \cdot V_{2} \cdot m}$ , где W(C40H56) - содержание каротина, мкг/г продукта; A - величина оптической плотности полученного элюата; V1 - объем раствора пробы, см3 (например, 50 или 100 см3); V2 - объем раствора пробы, взятый для хроматографического разделения, см3; V3 - конечный объем элюата, см3; 0,25 - корректирующий коэффициент для $\beta - \text{каротина}$ ; m - масса пробы продукта, г. ## 3 Метод B. Определение каротина в продуктах с содержанием жира свыше 5% по массе #### 3.1 Сущность метода Метод основан на экстракции, предварительном гидролизе жира в продукте с помощью щелочного раствора гидроксида калия, последующей экстракции каротиноидов смесью петролейного и диэтилового эфиров, отделении каротина от других каротиноидов в полученном экстракте с применением колоночной хроматографии и спектрофотометрическом определении каротина в элюате при длине волны 450 нм. #### 3.2 Реактивы и материалы Используют реактивы и материалы, указанные в [2.2](#p100054), за исключением [2.2.2](#p100057), [2.2.4](#p100061) и [2.2.6](#p100068), только признанного аналитического качества, и в дополнение следующие: ##### 3.2.1 Азот газообразный. ##### 3.2.2 Этиловый спирт, с содержанием этанола не менее 96% по объему. ##### 3.2.3 Калия гидроксид, раствор 500 г/дм3. В мерном цилиндре с пробкой растворяют 5,0 г гидроксида калия в дистиллированной воде, доводят объем до 10 см3 и перемешивают. Раствор готовят непосредственно перед использованием. ##### 3.2.4 Пирогаллол, основной раствор, готовят следующим образом. Готовят раствор пирогаллола массовой концентрации 250 г/дм3: растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 25 см3 6,25 г пирогаллола в воде, доводят раствор до метки водой и перемешивают. Готовят раствор гидроксида калия массовой концентрации 600 г/дм3: растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см3 60,0 г гидроксида калия в воде, доводят раствор до метки водой и перемешивают. Готовят основной раствор, смешивая 15 см3 раствора пирогаллола и 90 см3 раствора гидроксида калия. ##### 3.2.5 Экстракционная смесь, готовят следующим образом. Смешивают одну часть петролейного эфира с одной частью диэтилового эфира (свободного от пероксидов). ##### 3.2.6 Калия гидроксид, раствор 30 г/дм3. В мерной колбе с одной отметкой вместимостью 50 см3 растворяют 1,5 г гидроксида калия в воде, доводят раствор до метки водой и перемешивают. ##### 3.2.7 Фенолфталеин, 1%-ный раствор. Растворяют 1,0 г фенолфталеина в 60%-ном (по объему) растворе этилового спирта и доводят объем раствора до 100 см3 раствором этилового спирта. 3.2.8 Антиоксидант, например, пирогаллол, гидрохинон, аскорбиновая кислота. #### 3.3 Оборудование Используют оборудование, указанное в [2.3](#p100069), за исключением [2.3.9](#p100079), [2.3.11](#p100081) и [2.3.13](#p100083), и в дополнение следующее: 3.3.1 Установка для гидролиза, оснащенная обратным холодильником и подключенная к линии инертного газа, включающей поглотительную склянку с основным раствором пирогаллола [(3.2.4)](#p100134) для удаления следов кислорода из инертного газа. ##### 3.3.2 Делительная воронка вместимостью 250 см3. #### 3.4 Подготовка проб Подготовку проб проводят в соответствии с [2.4](#p100085). #### 3.5 Проведение испытаний ##### 3.5.1 Проба для испытаний В круглодонную колбу вместимостью 100 см3 [(2.3.12)](#p100082) взвешивают необходимое количество подготовленной пробы [(3.4)](#p100149), содержащей от 5 до 150 мкг каротина. ##### 3.5.2 Приготовление экстракта пробы для испытаний 3.5.2.1 К пробе продукта добавляют 30 см3 раствора этилового спирта [(3.2.2)](#p100130), 3 см3 раствора гидроксида калия [(3.2.3)](#p100131) и небольшое количество антиоксиданта [(3.2.8)](#p100144), затем соединяют колбу с обратным холодильником [(3.3.1)](#p100147). Включают подачу азота [(3.2.1)](#p100129). Проводят процедуру гидролиза с обратным холодильником при нагревании раствора на водяной бане в течение 30 мин. 3.5.2.2 Содержимое колбы охлаждают и количество переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3 [(3.3.2)](#p100148), смывая остатки со стенок колбы водой. Проводят экстрагирование негидролизующихся соединений путем последовательного встряхивания: два раза - с 50 см3 экстракционной смеси и два раза - с 20 см3 экстракционной смеси. Полученный объединенный экстракт тщательно промывают 50 см3 раствора гидроксида калия [(3.2.6)](#p100140), а затем водой до тех пор, пока реакция экстракта с раствором фенолфталеина [(3.2.7)](#p100142) не будет отрицательной (отсутствие щелочи). 3.5.2.3 Удаляют воду из полученного экстракта в соответствии с процедурой, описанной в [2.5.2.3](#p100100). 3.5.2.4 Проводят концентрирование экстракта в соответствии с процедурой, описанной в [2.5.2.4](#p100101). ##### 3.5.3 Хроматографическое разделение и спектрофотометрическое измерение Хроматографическое разделение и спектрофотометрическое измерение проводят в соответствии с процедурами, описанными в [2.5.3](#p100103) и [2.5.4](#p100111). #### 3.6 Обработка результатов Содержание каротина (выраженное через $\beta - \text{каротин}$ ) в продукте вычисляют по формуле, указанной в [2.6](#p100114). ## 4 Повторяемость Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, полученными за короткий промежуток времени с использованием одного и того же метода на идентичном материале в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором на одинаковом оборудовании, не более чем в 5% случаев будет больше 5% среднего арифметического двух результатов. ## 5 Оформление результатов испытаний В протоколе испытаний должны быть указаны используемый метод (например, обозначение настоящего стандарта, [метод A](#p100051) или [B](#p100124)) и полученные результаты. В нем также должны быть отражены все детали проведения испытания, не оговоренные в настоящем стандарте или не считающиеся обязательными, а также любые обстоятельства, которые могли бы повлиять на конечный результат. Протокол испытаний должен содержать все сведения, необходимые для полной идентификации пробы.
УДК 664.841:664.851:543.06:006.354МКС 67.080.01IDT
Ключевые слова: фрукты, овощи, продукты переработки фруктов и овощей, каротин, содержание, спектрофотометр, определение
---