ГОСТ ISO 6222-2018. Межгосударственный стандарт. Качество воды. Подсчет культивируемых микроорганизмов. Подсчет колоний при посеве в питательную агаризованную среду
(введен в действие Приказом Росстандарта от 23.09.2020 № 672-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень стандартов (п.п. 286.1 и 735.1), содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Евразийского экономического союза «О безопасности упакованной питьевой воды, включая природную минеральную воду» (ТР ЕАЭС 044/2017) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 05.12.2017 № 164). Текст данного документа приведен с учетом поправки, опубликованной в «ИУС», № 8, 2023. Документ введен в действие с 01.01.2021.
Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 23 сентября 2020 г. № 672-ст
ПОДСЧЕТ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ. ПОДСЧЕТ КОЛОНИЙ
ПРИ ПОСЕВЕ В ПИТАТЕЛЬНУЮ АГАРИЗОВАННУЮ СРЕДУ
Water quality. Enumeration of culturable micro-organisms.
Colony count by inoculation in a nutrient
agar culture medium
1 января 2021 года
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 августа 2018 г. № 111-П)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 сентября 2020 г. № 672-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 6222-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2021 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 6222:1999 «Качество воды. Подсчет культивируемых микроорганизмов. Подсчет колоний при посеве в питательную агаровую среду» («Water quality — Enumeration of culturable micro-organisms — Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium», IDT).
Международный стандарт разработан подкомитетом SC 9 «Микробиология» Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных и европейских стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
7 Некоторые элементы настоящего стандарта могут являться объектами патентных прав
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета культивируемых микроорганизмов в воде путем подсчета колоний, сформированных в питательной агаризованной среде после аэробной инкубации при температурах 36 °C и 22 °C.
Настоящий стандарт применяется при оценке эффективности водоочистных процессов и для контроля воды всех типов. Он, в частности, применяется при исследовании воды, предназначенной для потребления человеком, в том числе упакованной, и природных минеральных вод.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных — последнее издание (включая все изменения).
EN ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
EN ISO 5667-3, Water quality — Sampling — Part 3: Preservation and handling of water samples (ISO 5667-3:1994) (Качество воды. Отбор проб. Часть 3. Консервация и обработка проб воды)
EN 25667-2 <1>, Water quality — Sampling — Part 2: Guidance on sampling techniques (ISO 5667-2:1991) (Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по составлению методик выборочного контроля)
<1> Заменен на EN ISO 5667-1:2006.
ISO 6887 <2>, Microbiology — General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examinations (Микробиология. Общее руководство по приготовлению разбавлений для микробиологического исследования)
<2> Действует ISO 6887-1:2017.
ISO 8199, Water quality — General guide to the enumeration of micro-organisms by culture (Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом посева на питательной среде)
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
3.1 культивируемые микроорганизмы (culturable micro-organisms): Все аэробные бактерии, дрожжи и плесневые грибы, способные формировать колонии в среде, указанной в условиях испытания, описанных в настоящем стандарте.
4 Сущность метода
Проведение глубинного посева определенного количества образца или его разведения в указанную питательную среду на чашках Петри. Инкубация одного комплекта чашек при температуре 36 °C в течение 44 ч и другого комплекта при температуре 22 °C в течение 68 ч.
Подсчет количества колониеобразующих единиц (КОЕ) на миллилитр (мл) образца, исходя из числа колоний, сформированных в питательной среде.
5 Оборудование и стеклянная посуда
Применяют стандартное лабораторное оборудование для микробиологических исследований, а также следующее:
5.1 Оборудование для стерилизации паром (автоклав).
5.2 Инкубатор, обеспечивающий поддержание температуры (36 +/- 2) °C.
5.3 Инкубатор, обеспечивающий поддержание температуры (22 +/- 2) °C.
5.4 Стеклянные или пластмассовые чашки Петри с диаметром 90 или 100 мм.
5.5 Водяная баня, обеспечивающая поддержание температуры (45 +/- 1) °C.
5.6 Оборудование для подсчета колоний методом подсвечивания на темном фоне.
6 Отбор проб
Отбор пробы воды проводят в соответствии с требованиями к отбору проб, обработке и сохранению, установленными в EN 25667-2 и EN ISO 5667-3. Исследуемую воду, включая природную минеральную воду, доставленную в закрытой упаковке, допустимо хранить не более 12 ч после розлива при температуре хранения (5 +/- 3) °C в течение всего периода.
7 Питательные среды и разбавители
7.1 Основные материалы
Для подготовки сред используют ингредиенты стабильного качества, в том числе химические реактивы аналитической степени чистоты. Допустимо использовать эквивалентную готовую сухую среду в соответствии с инструкциями изготовителя. При приготовлении сред используют дистиллированную в стеклянном сосуде или деионизированную воду степени чистоты 3, подготовленную в соответствии с EN ISO 3696, не содержащую веществ, которые могут ингибировать рост микроорганизмов в условиях испытания.
Примечание - Использование химических реактивов других степеней чистоты допустимо при условии получения таких же результатов испытания.
7.2 Разбавитель
Для разбавлений применяют пептонный разбавитель, соответствующий требованиям, установленным в ISO 8199.
7.3 Агар с дрожжевым экстрактом
| Триптон (пептон из казеина панкреатический), г | 6,0 |
|---|---|
| Сухой дрожжевой экстракт, г | 3,0 |
| Агар в виде порошка или гранул (в зависимости от необходимой прочности геля), г | От 10 до 20 |
| Вода, мл | 1000 |
Ингредиенты или готовую сухую среду растворяют в воде при нагревании. При необходимости pH корректируют таким образом, чтобы он был равен после стерилизации (7,2 +/- 0,2) pH при температуре 25 °C.
Разливают полученную среду в пробирки объемом от 15 до 20 мл, бутылки или другие емкости. Для хранения больших объемов применяют емкости объемом до 500 мл. Стерилизуют в автоклаве (см. 5.1) при температуре (121 +/- 3) °C в течение (15 +/- 1) мин.
Перед применением среду расплавляют, охлаждают до температуры (45 +/- 1) °C и поддерживают ее посредством водяной бани (см. 5.5). Среду рекомендуется хранить не более 4 ч при температуре 45 °C, после чего ее утилизируют.
8 Методика
8.1 Подготовка и посев
Пробу готовят, разводят и инокулируют в соответствии с требованиями ISO 8199, EN ISO 5667-3 и ISO 6887.
Применяют метод глубинного посева (см. ISO 8199). Из каждой пробы (или ее разведения) делают посев не более 2 мл в чашку Петри, добавляют 15 — 20 мл расплавленной среды (см. 7.3) и тщательно перемешивают путем плавного вращения. Дают среде застыть. Промежуток времени между внесением испытуемой пробы (или ее разведением) и моментом добавления расплавленной среды не должен превышать 15 мин. Посев проводят по меньшей мере в одну чашку для инкубации при каждом температурном режиме.
8.2 Инкубация и исследование
Переворачивают чашки и инкубируют один комплект при температуре (36 +/- 2) °C в течение (44 +/- 4) ч, другой комплект — при температуре (22 +/- 2) °C в течение (68 +/- 4) ч. Исследуют чашки, как только они будут извлечены из инкубаторов. Если это невозможно, их хранят при температуре (5 +/- 3) °C и проводят исследование в течение 48 ч. В чашках со сплошным ростом микроорганизмов подсчет не производят.
8.3 Подсчет колоний
Для каждого температурного режима инкубации и в соответствии с процедурами, описанными в ISO 8199, подсчитывают колонии, присутствующие на каждой чашке, и вычисляют предполагаемое количество колониеобразующих единиц, присутствующих в 1 мл образца.
9 Выражение результатов
Результаты испытаний выражаются в виде количества колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) в миллилитре образца для каждого температурного режима инкубации. Если в чашках, инокулированных испытательными объемами неразбавленного образца, колонии отсутствуют, то записывают результат как «не обнаружено в одном миллилитре». Если в чашках, инокулированных самым большим разведением, насчитывают более 300 колоний, результат записывают как «более 300» или как приближенное количество.
10 Протокол испытаний
Протокол должен содержать ссылку на настоящий стандарт и предоставлять всю соответствующую информацию, включая:
a) все необходимые для полной идентификации пробы сведения;
b) технику посева (глубинный посев), используемые оборудование и питательную среду;
c) время и температуру инкубации;
d) результаты подсчета, выраженные в соответствии с разделом 9;
e) все особенности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как дополнительные, а также сведения о любых нарушениях, которые могли повлиять на результаты испытаний.
СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ ССЫЛОЧНЫХ МЕЖДУНАРОДНЫХ
| Обозначение ссылочного международного (европейского) стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта |
| EN ISO 3696 | - | <*>, <1> |
| EN ISO 5667-3 | - | <*> |
| EN 25667-2 | - | <*> |
| ISO 6887 | - | <*> |
| ISO 8199 | - | <*> |
| <*> Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного (европейского) стандарта. | ||
<1> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия», идентичный ISO 3696:1987.
| УДК 543.3:543.95 | МКС 07.100.20 | IDT |
| Ключевые слова: вода, качество, инокуляция, подсчет колоний, питательная агаризованная среда | ||