ГОСТ ISO 5983-2-2016. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина. Часть 2. Метод с использованием блока озоления и перегонки с водяным паром
(введен в действие Приказом Росстандарта от 24.10.2016 № 1491-ст)
Примечание
Документ введен в действие с 1 января 2018 года.
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 октября 2016 г. № 1491-ст
КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ ДОЛИ АЗОТА И ВЫЧИСЛЕНИЕ МАССОВОЙ ДОЛИ СЫРОГО ПРОТЕИНА
МЕТОД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БЛОКА ОЗОЛЕНИЯ И ПЕРЕГОНКИ С ВОДЯНЫМ ПАРОМ
Feeds, compound feeds, feed raw materials. Determination of mass fraction of nitrogen and calculation of mass fraction of crude protein. Part 2. Block digestion and steam distillation method
(ISO 5983-2:2009, Animal feeding stuffs — Determination of nitrogen content and calculation of crude protein content — Part 2: Block digestion and steam distillation method, IDT)
Дата введения 1 января 2018 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП») на основе официального перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5, который выполнен ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт классификации, терминологии и информации по стандартизации и качеству» (ВНИИКИ)
2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 31 августа 2016 г. № 90-П)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 октября 2016 г. № 1491-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 5983-2-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2018 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 5983-2:2009 «Корма для животных. Определение содержания азота и расчет содержания сырого белка. Часть 2. Метод с использованием блока для озоления и перегонки с водяным паром» («Animal feeding stuffs — Determination of nitrogen content and calculation of crude protein content — Part 2: Block digestion and steam distillation method», IDT).
Международный стандарт разработан подкомитетом SC 10 «Корма для животных» технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001 (подраздел 3.6) для увязки с наименованиями, принятыми в существующем комплексе межгосударственных стандартов.
В настоящем стандарте заменены единицы измерения объема: «литр» на «дециметр кубический», «миллилитр» на «сантиметр кубический» — для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001, пункт 4.14.1.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты» (по состоянию на 1 января текущего года), а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
Введение
ISO 5983 «Корма для животных. Определение содержания азота и вычисление содержания сырого протеина» состоит из двух частей:
- Часть 1: Метод Къельдаля;
- Часть 2: Метод с использованием блока озоления и перегонки с водяным паром.
Настоящий стандарт является второй частью ISO 5983 и устанавливает метод определения массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина с использованием блока озоления и перегонки с водяным паром.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Использование настоящего стандарта может включать опасные материалы, процессы и оборудование. Настоящий стандарт не ставит своей целью рассмотрение всех рисков для безопасности, связанных с его применением. Установление соответствующих правил по технике безопасности и охране здоровья и определение применимости регламентных ограничений перед его использованием является обязанностью пользователя настоящего стандарта.
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения массовой доли азота в кормах, комбикормах, комбикормовом сырье по Къельдалю и вычисление массовой доли сырого протеина.
Данный метод можно использовать в качестве полумикроэкспресс-метода с применением блока озоления, медного катализатора и перегонки с водяным паром в борную кислоту.
Данный метод распространяется на корма, комбикорма и комбикормовое сырье с массовой долей азота более 0,5%.
Данным методом не определяются окисленные формы азота или гетероциклические соединения азота.
Этим методом нельзя отдельно определить белковый и небелковый азот.
Примечание - Если необходимо определить массовую долю небелкового азота, следует использовать соответствующий метод.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на межгосударственные стандарты, которые являются обязательными. Для датированных ссылок применяют только указанное издание. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).
ISO 1871, Food and feed products — General guidelines for the determination of nitrogen by the Kjeldahl method (Продукты пищевые и кормовые. Определение содержания азота методом Къельдаля. Общие руководящие указания)
ISO 6498:1998, Animal feeding stuffs — Guidelines for sample preparation (Корма для животных. Руководящие указания по подготовке проб) <1>
<1> Стандарт заменен на ISO 6498:2012, однако для однозначного соблюдения требования настоящего стандарта, выраженного в датированной ссылке, рекомендуется использовать только указанное в этой ссылке издание.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями.
3.1 содержание азота (nitrogen content): Массовая доля азота, определенная по методике, установленной настоящим стандартом.
Примечание - Содержание азота выражают в виде массовой доли в процентах или в граммах на килограмм.
3.2 содержание сырого протеина (crude protein content): Содержание азота (см. 3.1) в виде массовой доли, умноженное на коэффициент 6,25.
Примечание - Содержание сырого протеина выражают в виде массовой доли в процентах или в граммах на килограмм.
4 Сущность метода
Сущность метода заключается в разложении навески в блоке озоления или на аналогичном оборудовании. При этом для превращения белкового азота в сульфат аммония используют концентрированную серную кислоту в присутствии катализатора (сульфата калия и сульфата меди) при температуре кипения.
Выделяемый аммиак отгоняют, используя ручной, полуавтоматический или полностью автоматический аппарат для перегонки с водяным паром. В случае использования ручной или полуавтоматической перегонки с водяным паром после отгонки аммиака в избыток раствора борной кислоты выполняют титрование раствором соляной кислоты до достижения колориметрической конечной точки. В случае использования полностью автоматической системы автоматическое титрование аммиака выполняется одновременно с перегонкой, а конечная точка титрования может быть также определена с помощью потенциометрической pH-системы.
Массовую долю азота вычисляют, исходя из количества полученного аммиака. Массовую долю сырого протеина получают, умножая результат на переводной коэффициент 6,25.
Примечание - Допускается для титрования использовать серную кислоту.
5 Реактивы
При анализе используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если не оговорено иначе, дистиллированную или деионизированную воду, или воду эквивалентной чистоты.
5.1 Таблетки катализатора Къельдаля, содержащие 3,5 г сульфата калия и 0,4 г пентагидрата сульфата меди (II) на таблетку.
Можно использовать и другие типы таблеток при условии, что:
a) они содержат такое количество сульфата калия, что может быть распределено 7 г сульфата калия и 0,8 г пентагидрата сульфата меди (II), используя целое число целых таблеток,
b) они не содержат солей токсичных металлов, таких как селен или ртуть.
5.2 Серная кислота (H2SO4) с массовой долей не менее 98%, не содержащая азот (\rho_{20} \approx 1,84\text{г}/\text{см}^{3}) .
5.3 Раствор перекиси водорода, содержащий приблизительно 30 г H2O2 в 100 см3.
5.4 Противовспенивающий реактив. Рекомендуются составы на основе силикона, например водная эмульсия с массовой долей 30%.
5.5 Раствор гидроокиси натрия (NaOH) с массовой долей приблизительно 40%, не содержащий азот (менее 5 мкг азота на грамм).
5.6 Растворы индикаторов
5.6.1 Раствор метилового красного. Растворяют 100 мг метилового красного (C15H15N3O2) в 100 см3 этанола или метанола.
5.6.2 Бромкрезоловый зеленый. Растворяют 100 мг бромкрезолового зеленого (C21H14Br4O5S) в 100 см3 этанола или метанола.
5.7 Концентрированный раствор борной кислоты, c(H3BO3) = 40,0 г/дм3
Растворяют 400 г борной кислоты приблизительно в 5 — 6 дм3 горячей воды. Перемешивают и добавляют еще горячей воды до объема приблизительно 9 дм3. Оставляют охлаждаться до комнатной температуры. Добавляют 70 см3 раствора метилового красного (см. 5.6.1), 100 см3 раствора бромкрезолового зеленого (см. 5.6.2) и перемешивают. Разбавляют водой до конечного объема 10 дм3 и тщательно перемешивают. В зависимости от используемой воды значение pH раствора борной кислоты может изменяться. Для получения положительного результата при контрольном опыте (от 0,05 до 0,15 см3 титрованного раствора) часто требуется сделать корректировку небольшим объемом щелочи. Окраска должна становиться зеленой при добавлении 100 см3 воды к 25 см3 раствора борной кислоты. Если окраска все еще красная, титруют раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 0,1 моль/дм3 до достижения «нейтрально-серого» цвета и рассчитывают объем щелочи, необходимый для приготовления 10 дм3 раствора.
Раствор с красной окраской хранят при комнатной температуре и защищают от воздействия света и источников паров аммиака.
5.8 Разбавленный раствор борной кислоты, c(H3BO3) = 10,0 г/дм3 (дополнительный улавливающий раствор для титраторов, которые автоматически начинают титрование с началом перегонки)
Растворяют 100 г борной кислоты приблизительно в 5 — 6 дм3 горячей воды, перемешивают и добавляют еще горячей воды до объема приблизительно 9 дм3. Оставляют охлаждаться до комнатной температуры. Добавляют 70 см3 раствора метилового красного (см. 5.6.1) и 100 см3 раствора бромкрезолового зеленого (см. 5.6.2) и перемешивают. Разбавляют водой до конечного объема 10 дм3 и тщательно перемешивают. В зависимости от используемой воды значение pH раствора борной кислоты может изменяться. Для получения положительного результата при контрольном опыте (от 0,05 до 0,15 см3 титрованного раствора) часто требуется сделать корректировку небольшим объемом щелочи. Окраска должна становиться зеленой при добавлении 100 см3 воды к 25 см3 раствора борной кислоты. Если окраска все еще красная, титруют раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 0,1 моль/дм3 до достижения «нейтрально-серого» цвета и рассчитывают объем щелочи, необходимый для приготовления 10 дм3 раствора.
Раствор со светло-зеленой окраской хранят при комнатной температуре в защищенном от воздействия света и источников паров аммиака месте.
Примечание - Оптимальные корректировки обычно получают при добавлении приблизительно от 3 до 4 см3 раствора гидроокиси натрия молярной концентрации 0,1 моль/дм3 к 1 дм3 раствора борной кислоты с массовой долей 1%.
5.9 Титрованный раствор соляной кислоты, c(HCl) = 0,1000 моль/дм3
Допускается использование растворов соляной или серной кислоты других молярных концентраций при условии, что в расчеты внесены соответствующие поправки. Концентрации всегда следует выражать с точностью до четвертого десятичного знака.
5.10 Сульфат аммония [(NH4)2SO4], с массовой долей не менее 99,5%, проверенной чистоты. Сушат сульфат аммония при температуре (102 +/- 2) °C в течение 4 ч и хранят в эксикаторе.
Массовая доля азота в сульфате аммония при чистоте 99,5% составляет 21,09%.
5.11 Сульфат железа(II)-аммония (соль Мора) [(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O] проверенной чистоты. Массовая доля азота в соли Мора при чистоте 100% составляет 7,145%.
5.12 Стандартные вещества
Используют одно из стандартных веществ, указанных в 5.12.1 и 5.12.2.
Кроме стандартных веществ, перечисленных в 5.12.1 и 5.12.2, следует использовать стандартные образцы с аттестованными значениями содержания азота по Къельдалю и сырого протеина всякий раз, когда это возможно.
Примечание - Содержание влаги можно проверить на отдельной навеске.
5.12.1 Триптофан (C11H12N2O2) с точкой плавления 282 °C и содержанием азота 137,2 г/кг. Перед использованием триптофан сушат.
5.12.2 Ацетанилид (C8H9NO) с массовой долей не менее 99% и содержанием азота 103,6 г/кг. Перед использованием в сушильном шкафу не сушат.
5.13 Сахароза (C12H22O11) с массовой долей азота не более 0,002%. Перед использованием в сушильном шкафу не сушат.
6 Оборудование
Используют следующее лабораторное оборудование.
6.1 Весы аналитические с точностью взвешивания и считывания до 0,1 мг.
6.2 Блок озоления из алюминиевого сплава или аналогичный блок, снабженный регулятором температуры и устройством для измерения температуры блока, способный поддерживать температуру (420 +/- 5) °C.
6.3 Пробирки для озоления вместимостью 250 см3, пригодные для использования в блоке озоления (см. 6.2).
6.4 Коллектор отсасывающего устройства, пригодный для использования с пробирками для озоления (см. 6.3).
6.5 Скруббер центрифужный, водоструйный насос или отсасывающее устройство, изготовленные из кислотоустойчивого материала, для использования с магистральным водопроводом.
6.6 Пипетки (дозаторы) автоматические, пригодные для подачи порций объемом до 25 см3 по [6], ([8]).
6.7 Цилиндры градуированные вместимостью 50 см3.
6.8 Аппарат для перегонки, пригодный для перегонки с водяным паром, ручной или полуавтоматический, пригодный для подсоединения к пробиркам для озоления (см. 6.3) и коническим колбам (см. 6.9), или для перегонки с водяным паром и автотитрования.
6.9 Колбы конические вместимостью 250 см3.
6.10 Бюретка вместимостью 25 см3 или другой подходящей вместимости, с возможностью считывания до 0,05 см3 по [1], класс А.
Допускается использование автоматической бюретки по [7], удовлетворяющей тем же требованиям.
6.11 Титратор автоматический с pH-метром, откалиброванным в диапазоне значений от 4 до 7 ед. pH.
7 Отбор проб
В лабораторию следует поставлять представительную пробу. Она не должна подвергаться порче или изменению во время транспортирования или хранения.
Рекомендуемый метод отбора проб приведен в [5].
8 Подготовка пробы для испытания
Подготовку пробы для испытания проводят в соответствии с ISO 6498.
9 Проведение испытания
9.1 Общие положения
Обычно пробы для испытания анализируют сериями в соответствии с установленной методикой. Общие положения по применению метода Къельдаля приведены в ISO 1871.
9.2 Подготовка навески
Навеску взвешивают с точностью до 0,1 мг:
a) приблизительно 1,0 г для продуктов с массовой долей протеина от 3% до 30% включительно;
b) приблизительно 0,5 г для продуктов с массовой долей протеина более 30% до 80% включительно;
c) приблизительно 0,3 г для продуктов с массовой долей протеина более 80%.
Масса навески не должна превышать 1,2 г.
Проводят контроль качества стандартных веществ, а также контрольное испытание на реактивы для каждой новой партии.
9.3 Определение
9.3.1 Озоление
Переносят навески (см. 9.2) в пробирки для озоления (см. 6.3) и добавляют по две таблетки катализатора (см. 5.1) в каждую пробирку. С помощью пипетки-дозатора в каждую пробирку добавляют по 12 см3 серной кислоты (см. 5.2). Для продуктов с высоким содержанием жира (с массовой долей жира более 10%) добавляют 15 см3 серной кислоты (см. 5.2). На этой стадии определение можно остановить и продолжить работу на следующий день.
Если происходит пенообразование, медленно добавляют от 3 до 5 см3 перекиси водорода (см. 5.3). Осторожно взбалтывают и оставляют до ослабления реакции. Допускается использовать несколько капель противовспенивающего реактива (см. 5.4).
Закрепляют теплозащитные боковые экраны на штативе с пробирками. Коллектор отсасывающего устройства (см. 6.4) плотно устанавливают на пробирки и включают водоструйное отсасывающее устройство или скруббер (см. 6.5) на полную мощность. Помещают штатив с пробирками в предварительно нагретый до температуры 420 °C блок озоления (см. 6.2).
Через 10 мин уменьшают ток воды в отсасывающем устройстве до тех пор, пока дым от кислоты не улетучится из вытяжного шкафа. Следует поддерживать зону конденсации в пределах пробирки. После образования большей части дыма от оксидов серы на начальных стадиях озоления необходимо снизить вакуум для предотвращения потерь серной кислоты.
Озоляют еще в течение 50 мин. Необходимо, чтобы общее время озоления составляло приблизительно 60 мин.
Выключают блок озоления. Вынимают штатив с пробирками, которые все еще подсоединены к коллектору отсасывающего устройства, и помещают его на подставку для охлаждения на 10 — 20 мин. После прекращения выделения дыма удаляют коллектор и выключают отсасывающее устройство. Вынимают боковые экраны.
Пробирки оставляют для охлаждения. Рекомендуется предварительно до начала перегонки разбавить пробы вручную. Осторожно, в перчатках, и обеспечивая защиту глаз, добавляют в каждую пробирку по несколько сантиметров кубических воды. Если происходит разбрызгивание, то это означает, что пробирки остаются все еще слишком горячими. Оставляют их для охлаждения еще на несколько минут. В каждую пробирку добавляют воду до достижения общего объема приблизительно 80 см3.
Если проба затвердевает, пробирку с разбавленным продуктом разложения помещают в блок озоления и осторожно нагревают, изредка взбалтывая, до растворения солей или перегоняют в течение еще 30 — 60 с.
1 В некоторых аппаратах добавление воды происходит автоматически. Предварительное разбавление перед размещением пробирок в аппарат для перегонки требуется только в том случае, если образуется очень твердый остаток.
2 В некоторых аппаратах для перегонки добавление водяного пара начинается до добавления щелочи, что приводит к растворению сульфатного остатка и менее интенсивной реакции во время добавления щелочи. Кристаллизация во время озоления может вызвать потери азота.
9.3.2 Перегонка
Пробирки с навесками после озоления (см. 9.3.1) переносят в аппарат для перегонки (см. 6.8).
Если титрование для определения содержания аммиака в дистилляте выполняется вручную, используют методику, описанную ниже. Если аппарат для перегонки полностью автоматизирован и включает титрование для определения содержания аммиака в дистилляте, следуют инструкциям изготовителя по эксплуатации этого аппарата.
Помещают коническую колбу (см. 6.9), содержащую от 25 до 30 см3 концентрированного раствора борной кислоты (см. 5.7), под выпускное отверстие холодильника таким образом, чтобы подающая трубка была ниже поверхности концентрированного раствора борной кислоты. Добавляют в аппарат для перегонки 50 см3 раствора гидроокиси натрия (см. 5.5). В соответствии с инструкцией изготовителя аппарата для перегонки отгоняют аммиак, выделенный при добавлении раствора гидроокиси натрия. Собирают дистиллят в полученный раствор борной кислоты. Количество дистиллята (время перегонки с водяным паром) зависит от содержания азота в пробе. Следуют инструкциям изготовителя.
Примечание - В случае использования полуавтоматического аппарата для перегонки добавление гидроокиси натрия и перегонка с водяным паром происходит автоматически.
9.3.3 Титрование
9.3.3.1 Колориметрическое титрование
Титруют содержимое конической колбы (см. 6.9) титрованным раствором соляной кислоты (см. 5.9) с помощью бюретки (см. 6.10) и записывают объем использованного титрованного раствора. Конечная точка достигается при появлении первых следов розовой окраски содержимого. Оценивают показание бюретки с точностью до 0,05 см3. Для облегчения визуального определения конечной точки титрования можно использовать магнитную мешалку с подсветкой или фотометрический детектор.
Титрование может выполняться автоматически при использовании аппарата для перегонки с водяным паром с автоматическим титрованием.
9.3.3.2 Потенциометрическое титрование
Титруют содержимое конической колбы (см. 6.9) титрованным раствором соляной кислоты (см. 5.9) с помощью надлежащим образом откалиброванного автоматического титратора с pH-метром (см. 6.11). Конечная точка титрования достигается при значении 4,6 ед. pH, причем она является самой высокой точкой на кривой титрования (точка перегиба). Считывают объем использованного титрованного раствора по автоматическому титратору.
При использовании специального аппарата для перегонки или аппарата для перегонки с титратором следуют инструкциям изготовителя.
В случае применения автоматической системы титрования титрование начинается сразу же после начала перегонки, при этом необходимо использовать разбавленный раствор борной кислоты (см. 5.8).
9.4 Контрольное испытание
Выполняют контрольное испытание, следуя методике, описанной в 9.1 - 9.3, используя вместо навески 2 см3 воды и приблизительно 0,7 г сахарозы (см. 5.13). Сохраняют запись контрольных значений. Если контрольные значения меняются, устанавливают причину.
Необходимо, чтобы объем титрованного раствора, использованного для контрольного опыта, был всегда более 0,0 см3. Контрольные значения в пределах одной и той же лаборатории должны быть постоянны со временем.
9.5 Испытания на извлечение
9.5.1 Общие положения
Для проверки точности методики и оборудования регулярно проводят испытания на извлечение, как описано в 9.5.2 - 9.5.4.
9.5.2 Потеря азота
Помещают 0,12 г сульфата аммония (см. 5.10) и 0,67 г сахарозы (см. 5.13) в колбу. Добавляют все другие реактивы, как указано в 9.3. Озоляют и перегоняют в тех же самых условиях, что и навеску. Массовая доля извлеченного азота должна составлять не менее 99%.
9.5.3 Эффективность озоления
Используют не менее 0,15 г триптофана (см. 5.12.1) или ацетанилида (см. 5.12.2), взвешенных с точностью до 0,1 мг, и приблизительно 0,7 г сахарозы (см. 5.13).
Определяют массовую долю азота в соответствии с методикой, описанной в 9.1 - 9.3. Массовая доля извлеченного азота должна составлять не менее 99,5% для ацетанилида и не менее 98,5% для триптофана [9].
9.5.4 Эффективность перегонки и титрования
Взвешивают в пробирку 0,10 — 0,15 г сульфата аммония (см. 5.10) или 0,3 — 0,5 г соли Мора (см. 5.11) с точностью до 0,0001 г. Добавляют 80 см3 воды и продолжают испытание в соответствии с 9.3.2 и 9.3.3. Массовая доля извлеченного азота должна составлять не менее 99,5%.
9.5.5 Пределы
Значение массовой доли извлеченного азота менее установленных значений или более 101,0% для любого из вышеперечисленных испытаний на извлечение указывает на нарушения методики и/или неточную концентрацию титрованного раствора соляной кислоты (5.9).
10 Обработка результатов
10.1 Вычисление
10.1.1 Вычисление массовой доли азота
Вычисляют массовую долю азота в пробе wN, %, по формуле
w_{N} = \frac{1,4007 \cdot (V_{s} - V_{b}) \cdot C_{s}}{m} , (1)
Vs — объем титрованного раствора соляной кислоты (см. 5.9), использованный при определении (см. 9.3), (выраженный с точностью до 0,05 см3), см3;
Vb — объем титрованного раствора соляной кислоты (см. 5.9), использованный в контрольном опыте (см. 9.4), (выраженный с точностью до 0,05 см3), см3;
Cs — точная молярная концентрация титрованного раствора соляной кислоты (см. 5.9), выраженная с точностью до четвертого десятичного знака, моль/дм3;
m — масса навески (см. 9.2), г.
Для выражения результата в граммах на килограмм в формуле (1) вместо коэффициента 1,4007 следует использовать коэффициент 14,007.
10.1.2 Вычисление массовых долей извлеченных солей аммония
Вычисляют массовую долю извлеченных солей сульфата аммония со степенью чистоты 99,5% w1, %, по формуле
w_{1} = \frac{w_{N,r} \cdot 100}{21,09} , (2)
где wN,r — массовая доля извлеченного азота, %;
100 — коэффициент перевода в проценты;
Вычисляют массовую долю извлеченной соли Мора со степенью чистоты 100% w2, %, по формуле
w_{2} = \frac{w_{N,r} \cdot 100}{7,145} , (3)
где wN,r — массовая доля извлеченного азота, %;
100 — коэффициент перевода в проценты;
При использовании солей аммония других степеней чистоты в формулах (2) и (3) в делители вносят поправки.
10.2 Вычисление массовой доли сырого протеина
Вычисляют массовую долю сырого протеина wp, %, по формуле
где wN — массовая доля азота в пробе, вычисленная с точностью до четвертого десятичного знака (10.1), %;
fK — коэффициент пересчета массовой доли азота по Къельдалю в массовую долю сырого протеина; для кормов fK = 6,25.
Для выражения содержания сырого протеина в граммах на килограмм полученный по формуле (4) результат умножают на коэффициент 10.
10.3 Выражение результатов содержания сырого протеина
Выражают результаты с точностью до четвертого знака, если они необходимы для дальнейших расчетов. В случае конечных результатов выражают результаты, полученные для вычисления содержания азота, с точностью до третьего десятичного знака, а результаты, полученные для вычисления белка, с точностью до второго десятичного знака.
Кроме того, не следует округлять полученные результаты, пока экспериментальное значение не будет использовано окончательно. Это особенно справедливо, когда значения будут использоваться для дальнейших расчетов.
1 Когда индивидуальные экспериментальные значения, полученные при анализе многих проб, используют для расчета статистических параметров метода для определения внутри- и межлабораторного отклонения.
2 Когда значения используют в качестве эталонных для градуировки прибора (например, инфракрасного анализатора), где значения, полученные при анализе многих проб, применяют для расчета простой или множественной регрессии до их использования для дальнейших расчетов.
11 Прецизионность
11.1 Межлабораторные испытания
Сведения о межлабораторных испытаниях по установлению прецизионности метода с использованием колориметрического определения конечной точки приведены в приложении A. Значения, полученные в результате проведения этих межлабораторных испытаний, не могут быть применены к диапазонам концентраций и пробам, отличающимся от указанных в настоящем стандарте.
Сведения о квалификационных испытаниях, в которых проведенное сравнение результатов определения конечной точки при колориметрическом и потенциометрическом титровании показало их эквивалентность, приведены в приложении B.
11.2 Повторяемость
Абсолютное расхождение между результатами двух отдельных независимых испытаний, полученными при использовании одного и того же метода на одной лабораторной пробе в одной лаборатории одним и тем же оператором на одном и том же оборудовании в пределах короткого промежутка времени, не должно превышать более чем в 5% случаев предел повторяемости r, определяемый в виде массовой доли сырого протеина в процентах по формуле
r = 0,234 + 0,005\overline{w_{P}} , (5)
где 0,234 — постоянная величина;
\overline{w_{P}} — среднеарифметическое значение результатов двух отдельных испытаний по определению массовой доли сырого протеина, %.
11.3 Воспроизводимость
Абсолютное расхождение между результатами двух независимых испытаний, полученными при использовании одного и того же метода на идентичных пробах в разных лабораториях разными операторами на различных экземплярах оборудования, не должно превышать более чем в 5% случаев предел воспроизводимости R, определяемый в виде массовой доли сырого протеина в процентах по формуле
R = 0,193 + 0,029\overline{w_{P}} , (6)
где 0,193 — постоянная величина;
\overline{w_{P}} — среднеарифметическое значение результатов двух независимых испытаний по определению массовой доли сырого протеина, %.
12 Протокол испытания
Протокол испытания должен включать следующее:
a) всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;
b) используемый метод отбора проб, если известен;
c) подробности используемого метода испытания вместе со ссылкой на данную часть ISO 5983;
d) все подробности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, вместе с подробностями всех случаев, которые могли бы повлиять на результаты испытания;
e) полученные результаты испытания, либо содержание азота, выраженное в виде массовой доли в процентах или в граммах на килограмм, либо содержание сырого протеина, выраженное в виде массовой доли в процентах или в граммах на килограмм, вместе с коэффициентом пересчета 6,25;
f) в случае проверки повторяемости — конечный полученный результат;
g) в случае проверки извлечения — конечный полученный результат.
РЕЗУЛЬТАТЫ МЕЖЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЙ
Первое межлабораторное испытание с применением метода, использующего блок озоления и перегонку с водяным паром, и колориметрическое определение конечной точки титрования было организовано AOAC International в 2001 г. и проведено в соответствии с [3]. В этом испытании участвовали 13 лабораторий из Северной Америки и Европы. Были исследованы четырнадцать обезличенных проб, включая мясо-костную муку, корм для собак, корм для шиншилл, семена для птиц, сою, кукурузный силос, травяную сечку, травяное сено, люцерновое сено, заменитель молока, альбумин, гранулированный корм для свиней, семена подсолнечника, белковый брикет (с мочевиной) и рыбную муку. Результаты испытаний приведены в таблице A.1.
Извлечение азота из стандартных веществ составляло 100,1% для ацетанилида и 98,8% для триптофана.
Второе межлабораторное испытание с применением колориметрического определения конечной точки титрования было организовано в Таиланде в 2004 г. и проведено в соответствии с [3] с участием 26 лабораторий, представляющих правительственные организации и государственный сектор экономики. Было испытано семь проб. Результаты испытаний приведены в таблице A.2
Результаты первого межлабораторного испытания
| Параметр | Проба | |||||||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | |
| Белковый брикет | Гранулированный корм для свиней | Кукурузный силос | Сено из травы | Рыбная мука | Корм для собак | Корм для шиншилл | Альбумин | Семена для птиц | Мясо-костная мука | Заменитель молока | Соя | Семена подсолнечника | Сено из бобовых растений | |
| Число лабораторий, оставшихся после исключения выбросов | 11 | 11 | 13 | 12 | 12 | 12 | 10 | 11 | 12 | 12 | 12 | 11 | 12 | 12 |
| Среднее значение массовой доли сырого протеина wp, % (в состоянии на момент поставки) | 40,20 | 37,00 | 7,10 | 7,10 | 64,60 | 24,50 | 18,10 | 79,10 | 13,50 | 50,10 | 20,80 | 38,80 | 17,40 | 18,80 |
| Среднее квадратическое отклонение повторяемости sr, % сырого протеина | 0,20 | 0,20 | 0,20 | 0,10 | 0,50 | 0,20 | 0,20 | 0,30 | 0,10 | 0,90 | 0,30 | 0,40 | 0,40 | 0,30 |
| Коэффициент вариации повторяемости, % | 0,40 | 0,50 | 1,90 | 1,90 | 0,70 | 0,80 | 0,80 | 0,40 | 0,80 | 1,80 | 1,30 | 0,90 | 2,30 | 1,40 |
| Предел повторяемости r (= 2,8 sr), % сырого протеина | 0,50 | 0,50 | 0,40 | 0,40 | 1,30 | 0,60 | 0,40 | 0,90 | 0,30 | 2,60 | 0,80 | 1,00 | 1,10 | 0,70 |
| Значение Хоррата, HorRat a | 0,3 | 0,3 | 1,0 | 1,0 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,3 | 0,5 | 1,3 | 0,8 | 0,6 | 1,3 | 0,8 |
| Среднее квадратическое отклонение воспроизводимости sR, % сырого протеина | 0,30 | 0,20 | 0,20 | 0,10 | 0,70 | 0,20 | 0,20 | 0,40 | 0,20 | 0,30 | 0,40 | 0,40 | 0,30 | |
| Коэффициент вариации воспроизводимости, % | 0,70 | 0,60 | 2,70 | 1,90 | 1,00 | 0,90 | 0,80 | 0,50 | 1,30 | 1,80 | 1,30 | 1,00 | 2,30 | 1,40 |
| Предел воспроизводимости R (= 2,8sR), % сырого протеина | 0,80 | 0,60 | 0,50 | 0,40 | 1,90 | 0,60 | 0,40 | 1,00 | 0,50 | 2,60 | 0,80 | 1,00 | 1,10 | 0,70 |
| Значение Хоррата, HorRat a | 0,3 | 0,2 | 0,9 | 0,6 | 0,5 | 0,4 | 0,3 | 0,2 | 0,5 | 0,8 | 0,5 | 0,4 | 0,9 | 0,5 |
| a Значение Хоррата, равное 1, обычно указывает на удовлетворительную прецизионность, в то время как значение более 2 указывает на неудовлетворительную прецизионность, т.е. на прецизионность, которая очень изменчива для большинства аналитических целей, или когда полученная вариация больше ожидаемой для определенного типа используемого метода [[9]](#p100660), [[10]](#p100662). | ||||||||||||||
Результаты второго межлабораторного испытания
| Параметр | Проба a | ||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | |
| Корм для рыб, мелкие обогащенные гранулы (экструдированные) | Корм для рыб, крупные обогащенные гранулы (экструдированные) | Корм для креветок, порошок | Корм для креветок, крупные обогащенные гранулы | Корм для креветок, мелкие обогащенные гранулы | Корм для личинок, хлопья | Зерно пшеницы | |
| Число лабораторий, оставшихся после исключения выбросов | 24 | 24 | 24 | 25 | 26 | 26 | 25 |
| Среднее значение массовой доли сырого протеина \overline{w_{P}} , % (в состоянии на момент поставки) | 33,65 | 29,18 | 40,48 | 37,73 | 38,04 | 51,07 | 15,76 |
| Среднее квадратическое отклонение повторяемости sr, % сырого протеина | 0,20 | 0,13 | 0,10 | 0,17 | 0,14 | 0,18 | 0,10 |
| Коэффициент вариации повторяемости, % | 0,58 | 0,44 | 0,24 | 0,44 | 0,37 | 0,35 | 0,63 |
| Предел повторяемости r (= 2,8 sr), % сырого протеина | 0,55 | 0,36 | 0,28 | 0,46 | 0,39 | 0,50 | 0,28 |
| Значение Хоррата, HorRat | 0,38 | 0,28 | 0,16 | 0,29 | 0,24 | 0,24 | 0,36 |
| Среднее квадратическое отклонение воспроизводимости sR, % сырого протеина | 0,40 | 0,38 | 0,42 | 0,40 | 0,45 | 0,64 | 0,25 |
| Коэффициент вариации воспроизводимости, % | 1,18 | 1,31 | 1,03 | 1,31 | 1,18 | 1,26 | 1,50 |
| Предел воспроизводимости R (= 2,8sR), % сырого протеина | 1,11 | 1,07 | 1,17 | 1,38 | 1,26 | 1,80 | 0,70 |
| Значение Хоррата, HorRat | 0,50 | 0,54 | 0,45 | 0,56 | 0,51 | 0,57 | 0,60 |
| a Метод отбора проб по [[5]](#p100652). | |||||||
\overline{w_{P}} — среднее значение массовой доли сырого протеина, %; Y — параметры прецизионности, %; r — предел повторяемости, r = 0,005\overline{w_{P}} + 0,234 ; R — предел воспроизводимости, R = 0,029\overline{w_{P}} + 0,193
Рисунок A.1 — Соотношение между параметрами прецизионности (r, R) и средним значением массовой доли сырого протеина \overline{w_{P}}
РЕЗУЛЬТАТЫ КВАЛИФИКАЦИОННОГО ИСПЫТАНИЯ; СРАВНЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЕЧНОЙ ТОЧКИ ПРИ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОМ И ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКОМ ТИТРОВАНИИ
При проведении в Нидерландах квалификационного испытания, организованного лабораторией Kwaliteitsdienst Landbouwkundige Laboratoria (KDLL), для различных типов кормов использовалось как потенциометрическое, так и колориметрическое определение конечной точки титрования. Результаты, представленные в таблице B.1, показывают, что оба метода определения конечной точки дают эквивалентные результаты.
Статистическая оценка квалификационного испытания
СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ ССЫЛОЧНЫХ МЕЖДУНАРОДНЫХ СТАНДАРТОВ МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫМ СТАНДАРТАМ
| Обозначение ссылочного международного стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта |
| ISO 1871 | - | <*> |
| ISO 6498:1998 | MOD | ГОСТ 31218-2003 «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб» |
| ISO 6498:2012 | IDT | ГОСТ ISO 6498-2014 «Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний» |
| <*> Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Примечание — В настоящей таблице использованы условные обозначения степени соответствия стандартов: - IDT — идентичные стандарты; - MOD — модифицированные стандарты. | ||