ГОСТ ISO 3890-2-2013. Межгосударственный стандарт. Молоко и молочные продукты. Определение остаточного содержания хлорорганических соединений (пестицидов). Часть 2. Методы очистки экстракта и подтверждение
(введен в действие Приказом Росстандарта от 23.08.2016 № 936-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 № 236). Документ включен в Перечень стандартов (пункты 225 и 505), содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» (ТР ТС 033/2013) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.05.2014 № 80). Документ введен в действие с 01.07.2017.
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 августа 2016 г. № 936-ст
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ (ПЕСТИЦИДОВ)
МЕТОДЫ ОЧИСТКИ ЭКСТРАКТА И ПОДТВЕРЖДЕНИЕ
Milk and milk products. Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides). Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
(ISO 3890-2:2009/IDF 75-2:2009, IDT)
Дата введения 1 июля 2017 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт метрологии» (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. № 44-2013)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 августа 2016 г. № 936-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 3890-2-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 3890-2:2009/IDF 75-2:2009 «Молоко и молочные продукты. Определение остаточного содержания хлорорганических соединений (пестицидов). Часть 2. Методы очистки экстракта и подтверждение» («Milk and milk products — Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) — Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation», IDT).
Международный стандарт разработан подкомитетом SC 5 «Молоко и молочные продукты» Технического комитета ISO/TC 34 «Продукты пищевые сельскохозяйственные» Международной организации по стандартизации (ISO) и Международной молочной федерацией (IDF).
Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий государственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного международного стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
Введение
Международный стандарт ISO 3890/IDF 75 состоит из следующих частей под общим заголовком «Молоко и молочные продукты. Определение остаточного содержания хлорорганических соединений (пестицидов)»:
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Применение настоящего стандарта может быть связано с использованием опасных материалов, операций и оборудования. Настоящий стандарт не определяет все проблемы безопасности, связанные с его применением. Пользователь должен установить санитарно-гигиенические требования и определить применение регулирующих ограничений до начала их использования.
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает методы очистки экстрактов, полученных методами, описанными в ISO 3890-1/IDF 75-1. В настоящем стандарте также приведены рекомендуемые методы определения остаточного содержания хлорорганических соединений в молоке и молочных продуктах, а также подтверждающие тесты и процедуры очистки.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на межгосударственные стандарты, которые являются обязательными. Для датированных ссылок применяют только указанное издание. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения:
ISO 3890-1/IDF 75-1:2009 Milk and milk products. Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides). Part 1: General considerations and extraction methods (Молоко и молочные продукты. Определение остатков хлорорганических соединений (пестицидов). Часть 1. Общие положения и методы экстракции)
3 Метод A. Жидкость-жидкостное разделение ацетонитрилом и очистка на колонке с Florisil <1>
<1> Florisil (например, от Floridil Co) — это пример изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
3.1 Сущность метода
(См. ссылку [3]).
Хлорорганические соединения вместе с жиром экстрагируют из пробы, применяя один из методов, описанных в ISO 3890-1/IDF 75-1. Экстракт выпаривают почти досуха, затем повторно растворяют в петролейном эфире и хлорорганические соединения выделяют с помощью ацетонитрила. После смешивания ацетонитрила с большим количеством воды хлорорганические соединения выделяют с помощью петролейного эфира. Данную органическую фазу очищают хроматографированием на колонке с Florisil, используя петролейный эфир/диэтиловый эфир в качестве элюирующего растворителя. Элюаты концентрируют и затем анализируют методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Для сыра используют специальный метод.
3.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
3.2.1 Петролейный эфир с температурой кипения в диапазоне от 40 до 60 °C. Перегоняют над гидроксидом калия или гидроксидом натрия в гранулах.
3.2.2 Ацетонитрил (CH3CN), насыщенный петролейным эфиром.
Для очистки смешивают 4 дм3 ацетонитрила с 1 см3 ортофосфорной кислоты и 30 г пентоксида фосфора в стеклянной колбе с круглым дном. Добавляют стеклянные шарики и перегоняют при температуре от 81 до 82 °C (температура не должна превышать 82 °C).
Очищенный ацетонитрил смешивают с петролейным эфиром перед самым началом фазы разделения.
3.2.3 Диэтиловый эфир (C2H5OC2H5), не содержащий пероксидов.
Перегоняют и стабилизируют, используя 2-процентный по объему чистый этанол (C2H5OH).
3.2.4 Элюирующий растворитель A: смесь диэтилового эфира (3.2.3) и петролейного эфира (3.2.1) (6:94 по объему). Обезвоживают 10 — 25 г безводного сульфата натрия (3.2.6).
3.2.5 Элюирующий растворитель B: смесь диэтилового эфира (3.2.3) и петролейного эфира (3.2.1) (15:85 по объему). Обезвоживают 10 — 25 г безводного сульфата натрия (3.2.6).
3.2.6 Сульфат натрия (Na2SO4) гранулированный, безводный.
Нагревают при температуре (500 +/- 25) °C в течение 4 ч. Охлаждают и хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой.
3.2.7 Адсорбент: Florisil, 60 — 100 меш.
Активируют нагреванием при температуре (650 +/- 25) °C в течение 4 ч и немедленно высыпают адсорбент в стеклянную посуду с хорошо притертыми пробками, хранят в темном месте. Перед использованием нагревают до температуры 130 °C в течение не менее 5 ч.
Адсорбент должен храниться либо при температуре (130 +/- 2) °C, либо при комнатной температуре в эксикаторе. В последнем случае его следует нагревать до температуры (130 +/- 2) °C каждые два дня.
Каждую партию адсорбента проверяют время от времени следующим образом.
Пропускают 1 см3 стандартного раствора гексана, содержащего 0,1 мг/дм3 линдана, гептахлорэпоксида, альдрина и дильдрина, а также 0,3 мг/дм3 эндрина, через адсорбционную колонку (см. ISO 3890-1/IDF 75-1:2009, пункт 9.3). Элюируют и выпаривают, как описано в 3.4.3. Проводят определение, используя газовую хроматографию.
Адсорбент считают удовлетворительным, если линдан, гептахлор, альдрин и гептахлорэпоксид обнаруживают в элюирующем растворителе A (3.2.4), а дильдрин и эндрин в элюирующем растворителе B (3.2.5).
3.2.8 Раствор хлорида натрия (NaCl), 2-процентный раствор.
Перед изготовлением раствора сухой хлорид натрия нагревают при температуре (500 +/- 25) °C в течение 4 ч.
3.2.9 Этанол (C2H5OH), чистый.
3.2.10 Оксалат натрия (Na2C2O4) или оксалат калия (K2C2O4).
3.3 Оборудование
Применяют обычное лабораторное оборудование.
3.3.1 Хроматографические колонки внутренним диаметром 20 мм и длиной 300 мм с запорными кранами из политетрафторэтилена (ПТФЭ) и дисками из пористого стекла или тампоны из стекловаты.
3.3.2 Роторный испаритель (Kuderna-Danish <1> или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
<1> Испаритель Kuderna-Danish — пример изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
3.3.3 Высокоскоростной смеситель.
3.3.4 Делительные воронки вместимостью 125 и 1000 см3.
3.4 Методика
3.4.1 Экстракция жира и хлорорганических соединений
3.4.1.1 Общие методы
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
3.4.1.2 Специальный метод для сыра
Достаточное количество измельченной пробы (для выделения 3 г жира), около 2 г оксалата натрия или калия (3.2.10) и 100 см3 этанола (3.2.9) помещают в высокоскоростной смеситель (3.3.3) и смешивают в течение 2 — 3 мин. (если опыт обращения с продуктом показывает, что эмульсии не разрушатся при центрифугировании, то перед смешиванием добавляют 1 см3 воды на 2 г пробы). Гомогенизированную суспензию переливают в емкость центрифуги вместимостью 500 см3, добавляют 50 см3 диэтилового эфира (3.2.3) и энергично встряхивают в течение 1 мин. Добавляют 50 см3 петролейного эфира (3.2.1) и энергично встряхивают в течение 1 — 2 мин. (или разливают в две емкости вместимостью 250 см3 и экстрагируют каждую путем сильного встряхивания в течение 1 — 2 мин. с 25 см3 петролейного эфира. Продолжают, как описано в ISO 3890-1/IDF 75-1 (A.6.3.3).
3.4.2 Жидкостное разделение
Взвешивают 1 — 3 г экстрагированного жира с точностью до 0,01 г, переносят в делительную воронку вместимостью 125 см3 (3.3.4) и растворяют в 15 см3 петролейного эфира (3.2.1). Добавляют 30 см3 ацетонитрила, насыщенного петролейным эфиром (3.2.2), и энергично встряхивают в течение 1 — 2 мин. После разделения фаз переносят нижний слой ацетонитрила в делительную воронку вместимостью 1000 см3 (3.3.4), содержащую 700 см3 раствора хлорида натрия (3.2.8) и 100 см3 петролейного эфира (3.2.1). Слой петролейного эфира, оставшийся в делительной воронке вместимостью 125 см3, энергично встряхивают три раза с порциями ацетонитрила (3.2.2) объемом 30 см3.
Соединяют экстракты ацетонитрила в делительной воронке вместимостью 1000 см3 и осторожно встряхивают. Сливают нижнюю водную фазу во вторую делительную воронку вместимостью 1000 см3 и встряхивают ее в течение 12 с со 100 см3 петролейного эфира. Соединяют фазы петролейного эфира из обеих делительных воронок вместимостью 1000 см3. Воронки дважды промывают порциями воды или раствора хлорида натрия (3.2.8) объемом 100 см3. Обезвоживают петролейный эфир над сульфатом натрия (3.2.6) и фильтруют в колбу роторного испарителя (3.3.2) вместимостью 500 см3 с прикрепленной градуированной пробиркой. Промывают сульфат натрия тремя порциями петролейного эфира (3.2.1) по 10 см3. Затем выпаривают раствор петролейного эфира до объема 10 см3, используя роторный испаритель (3.3.2).
3.4.3 Очистка на Florisil
В хроматографическую колонку (3.3.1) добавляют слой адсорбента 100 мм (3.2.7). Покрывают слоем 10 мм сульфата натрия (3.2.6) и промывают 40 — 50 см3 петролейного эфира (3.2.1). В колонку (3.3.1) пипеткой добавляют 10 см3 концентрата петролейного эфира (3.4.2), дважды ополаскивают емкость порциями петролейного эфира объемом примерно по 5 см3. Элюируют в колбу испарителя (3.3.2) с прикрепленной градуированной пробиркой, используя 200 см3 элюирующего растворителя A (3.2.4). Скорость элюирования не должна превышать 5 см3/мин. Сменив емкость, таким же образом элюируют, используя 200 см3 элюирующего растворителя B (3.2.5).
Выпаривают оба элюата по отдельности до заданного небольшого объема, используя роторный испаритель (3.3.2). Каждый элюат проверяют с помощью газожидкостной хроматографии. Если требуется дополнительная очистка, то она может быть проведена во второй, заново приготовленной адсорбирующей колонке или как описано в ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
Первый элюат содержит любые ГХБ, изомеры ГХЦГ, гептахлор, гептахлорэпоксид, альдрин, ДДЕ, ДДД и ДДТ. Второй элюат содержит дильдрин и эндрин.
3.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 — 14).
4 Метод B. Жидкость-жидкостное разделение диметилформамидом (ДМФА) и очистка на колонке, заполненной оксидом алюминия
4.1 Сущность метода
(См. ссылки [4], [5]).
Хлорорганические соединения вместе с жиром экстрагируют из пробы по методике, описанной в ISO 3890-1/IDF 75-1 (A.6), затем остатки разделяют, используя диметилформамид. После добавления раствора сульфата натрия хлорорганические соединения далее разделяют н-гексаном. Органическую фазу очищают, применяя хроматографию на нейтральном оксиде алюминия с использованием н-гексана в качестве элюирующего растворителя. Элюат выпаривают и анализируют, используя газожидкостную хроматографию (ГЖХ).
Для молока и масла описаны специальные методы.
4.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
4.2.1 н-гексан [CH3(CH2)4CH3] с температурой кипения 68 — 70 °C.
Проверяют методом газовой хроматографии на чистоту при рабочих условиях. Перегоняют над гидроксидом калия, если необходимо.
4.2.2 Ацетон [CH3COCH3] общего назначения, лабораторного качества.
4.2.3 Диметилформамид (ДМФА).
Проверяют н-гексановый экстракт ДМФА водного раствора ДМФА на наличие интерферирующих пиков, используя газожидкостную хроматографию. Если необходимо, повторно перегоняют растворитель и собирают фракцию с температурой кипения 152 — 154 °C.
4.2.4 н-гексан, насыщенный диметилформамидом.
4.2.5 Диметилформамид, насыщенный н-гексаном.
4.2.6 Песок, промытый кислотой.
Нагревают при температуре 500 °C в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой.
4.2.7 Сульфат натрия (Na2SO4) гранулированный, безводный.
Нагревают при температуре 500 °C в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой.
4.2.8 Оксид алюминия (Al2O3) нейтральный, активированный.
Нагревают оксид алюминия до температуры 500 °C в течение 4 ч, затем охлаждают. Осторожно добавляют 7 частей воды к 93 частям оксида алюминия (массовая доля) и тщательно перемешивают твердую фазу в закрытом сосуде в течение не менее 90 мин. Сосуд хранят хорошо закупоренным и используют оксид алюминия в течение 10 дней.
4.2.9 Раствор сульфата натрия, 2-процентный раствор.
4.3 Оборудование
Применяют обычное лабораторное оборудование.
4.3.1 Прибор Сокслета для экстрагирования.
4.3.2 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
4.3.3 Высокоскоростной смеситель.
4.3.4 Хроматографические колонки внутренним диаметром 12 мм и длиной 300 мм с запорными кранами из политетрафторэтилена (ПТФЭ).
4.3.5 Микроколонка Snyder <1>.
<1> Микроколонка Snyder — пример изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
4.4 Методика
4.4.1 Экстракция жира и хлорорганических соединений
4.4.1.1 Общие методы
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
4.4.1.2 Специальные методы
4.4.1.2.1 Молоко
В вихревую мешалку вместимостью 250 см3 наливают в следующем порядке: 40 см3 хорошо перемешанного молока, 80 см3 ацетона (4.2.2) и 80 см3 н-гексана (4.2.1). Гомогенизируют смесь в течение 3 мин. Затем немедленно переливают ее в центрифужную пробирку вместимостью 250 см3, промывают лопасти мешалки 10 см3 н-гексана, затем 5 см3 воды и добавляют их в пробирку.
Пробирку вращают в центрифуге с частотой вращения 2500 об/мин в течение 5 мин. Отделяют н-гексановый слой и пропускают его через короткую колонку, заполненную безводным сульфатом натрия (4.2.7). Промывают содержимое пробирки последовательно двумя порциями н-гексана по 25 см3 и пропускают промывные воды через колонку. Объединенные экстракты концентрируют в роторном испарителе (4.3.2) примерно до 15 см3. Раствор переливают в делительную воронку вместимостью 100 см3, делают метку 25 см3 и доводят объем до 25 см3 (см. также метод 7.4.1.2.2 для молока).
4.4.1.2.2 Масло
Растворяют 5 г очищенного молочного жира (расплавленного и декантированного через фильтр) в 10 см3 н-гексана. Переносят раствор в делительную воронку вместимостью 100 см3, используя последовательно 3 порции н-гексана объемом 5 см3.
4.4.2 Разделение жира и хлорорганических соединений с применением ДМФА
Экстрагируют жир из 25 см3 раствора гексана (4.4.1), используя 10 см3 диметилформамида (ДМФА), насыщенного н-гексаном (4.2.5) путем встряхивания в делительной воронке. Через 2 — 3 мин. переносят нижний слой ДМФА во вторую делительную воронку вместимостью 100 см3 (оставляя межфазную эмульсию в первой делительной воронке). Процесс экстракции раствора н-гексана повторяют еще с двумя порциями ДМФА (4.2.5) объемом по 10 см3. Соединяют экстракты ДМФА и промывают их 10 см3 н-гексана, насыщенного ДМФА (4.2.4).
Отделяют 10 см3 н-гексана и опять промывают 10 см3 ДМФА (4.2.5). Отбрасывают н-гексан и добавляют промытый ДМФА в первоначальные 30 см3 экстракта ДМФА в делительную воронку вместимостью 500 см3 (или желательно 350 см3). Добавляют 6 см3 н-гексана (4.2.1) и 200 см3 раствора сульфата натрия (4.2.9) и энергично встряхивают в течение 2 мин.
Дают отстояться в течение 20 мин. для расслоения. Собирают фазу н-гексана посредством легкого вращения. Сливают водный слой, вытирают досуха делительную воронку фильтровальной бумагой и выливают н-гексан в градуированную пробирку со шлифом, в которой должно находиться 15 см3 растворителя. Делительную воронку ополаскивают небольшим количеством н-гексана и добавляют промывную жидкость в пробирку.
Соединяют пробирку с микроколонкой Snyder (4.3.5) и выпаривают экстракт н-гексана до объема приблизительно 2 см3.
4.4.3 Очистка на колонке, заполненной оксидом алюминия с н-гексаном
Суспензию из 5 г приготовленного оксида алюминия (4.2.8) в н-гексане (4.2.1) выливают в хроматографическую колонку (4.3.4), содержащую тампон из ваты, промытой растворителем (ISO 3890-1/IDF 75-1, A.5.15). Дают оксиду алюминия осесть и покрывают его слоем 30 см3 безводного сульфата натрия (4.2.7). Сливают н-гексан до тех пор, пока мениск не достигнет верха слоя сульфата натрия. Наносят экстракт н-гексана (4.4.2) на колонку и промывают колонку порциями н-гексана объемом 2 см3.
Элюируют 50 см3 н-гексана (4.2.1) при скорости потока не более 5 см3/мин, собирая элюат в градуированную пробирку роторного испарителя (4.3.2). Элюат выпаривают до объема приблизительно 5 см3. Отсоединяют градуированную пробирку, подсоединяют микроколонку Snyder (4.3.5) и выпаривают элюат до объема 1 см3.
4.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 — 14).
5 Метод C. Жидкость-жидкостное разделение диметилформамидом (ДМФА) и очистка на колонке, заполненной Florisil
5.1 Сущность метода
(См. ссылку [6]).
Хлорорганические соединения вместе с жиром экстрагируют из пробы по методике, описанной в 5.4.1. Экстракт выпаривают почти досуха, затем растворяют в петролейном эфире. Хлорорганические соединения затем выделяют, используя диметилформамид. После добавления раствора сульфата натрия хлорорганические соединения далее разделяют петролейным эфиром.
Органическую фазу очищают, используя хроматографию на колонке, заполненной Florisil, применяя петролейный эфир/диэтиловый эфир в качестве элюирующего растворителя. Элюат выпаривают и анализируют, используя газожидкостную хроматографию.
5.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
5.2.1 Петролейный эфир с температурой кипения 30 — 40 °C, подвергнутый повторной перегонке.
5.2.2 Диэтиловый эфир (C2H5OC2H5), не содержит пероксидов.
5.2.3 Петролейный эфир с температурой кипения 60 — 0 °C, подвергнутый повторной перегонке.
5.2.4 Элюирующий растворитель: смесь диэтилового эфира (5.2.2) и петролейного эфира (5.2.1) (6:94 по объему).
5.2.5 Адсорбент: Florisil, от 60 до 100 меш.
Адсорбент нагревают в муфельной печи при температуре 650 °C в течение 2 ч. Охлаждают до температуры 130 °C и выдерживают при этой температуре в течение 5 ч в сушильном шкафу. Дают остыть до комнатной температуры в эксикаторе, затем переносят в плотно закупоренный сосуд с широким горлом. Добавляют 5 частей дистиллированной воды к 95 частям адсорбента (по объему) и встряхивают, пока не исчезнут комочки. Дают отстояться в течение 24 ч и перед использованием встряхивают.
5.2.6 Сульфат натрия (Na2SO4) гранулированный, безводный.
Нагревают при температуре (500 +/- 25) °C в течение 4 ч. Охлаждают и хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой.
5.2.7 Диметилформамид (ДМФА), насыщенный петролейным эфиром. Перегоняют ДМФА и отбирают фракцию с температурой кипения 15 — 154 °C. Насыщают его петролейным эфиром (5.2.1).
5.2.8 Петролейный эфир, насыщенный диметилформамидом.
5.2.9 Раствор сульфата натрия, 2-процентный раствор.
5.2.10 н-гексан [CH3(CH2)4CH3].
5.3 Оборудование
Применяют обычное лабораторное оборудование.
5.3.1 Высокоскоростной смеситель.
5.3.2 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
5.3.3 Хроматографические колонки внутренним диаметром 20 мм и длиной 300 мм с запорными кранами из политетрафторэтилена (ПТФЭ) и пластинами из пористого стекла.
5.4 Методика
5.4.1 Экстракция жира и хлорорганических соединений
Для общих методов см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
5.4.2 Экстракция жира и пестицидов с применением ДМФА
Пробу экстракта, содержащего от 2 до 5 г жира, растворяют в 25 см3 петролейного эфира, насыщенного ДМФА (5.2.8). Переливают в делительную воронку вместимостью 250 см3. Экстрагируют небольшими порциями измеренного объема (например, 75 см3) ДМФА, насыщенного петролейным эфиром (5.2.7), который добавлен в делительную воронку. Каждый раз энергично встряхивают в течение 1 — 2 мин. и сливают ДМФА-фазу в делительную воронку вместимостью 500 см3. Перемешивают соединенные фазы с 200 см3 раствора сульфата натрия (5.2.9) и каждый раз встряхивают в течение 1 — 2 мин. с одной порцией в 40 см3 и тремя порциями по 25 см3 петролейного эфира (5.2.3). Фазы петролейного эфира собирают и промывают приблизительно 10 см3 воды. Обезвоживают над сульфатом натрия (5.2.6) и пропускают через фильтр из ваты. Добавляют через ватный тампон около 5 см3 н-гексана (5.2.10) и уменьшают объем примерно до 5 см3 в роторном испарителе (5.3.2).
5.4.3 Очистка на Florisil с петролейным эфиром
Хроматографическую колонку (5.3.3) до половины наполняют петролейным эфиром (5.2.3). Добавляют 20 г дезактивированного адсорбента (5.2.5) маленькими дозами через воронку, держа при этом запорный кран из политетрафторэтилена (ПТФЭ) частично открытым, и осторожно постукивают колонку. Используют только колонки без видимых вкраплений воздуха. Покрывают слоем 20 мм безводного сульфата натрия (5.2.6) и дают петролейному эфиру впитаться.
Экстракт пробы наносят на колонку с несколькими кубическими сантиметрами элюирующего растворителя (5.2.4). Дают ему просочиться в колонку через открытый кран до тех пор, пока мениск не достигнет слоя сульфата натрия (5.2.6).
Ополаскивают первоначальную емкость несколькими кубическими сантиметрами элюирующего растворителя (5.2.4) и продолжают, как описано выше. Элюируют колонку 200 см3 элюирующего растворителя в колбу с круглым дном вместимостью 500 см3 при скорости потока, не превышающей 5 см3/мин. Выпаривают элюат в роторном испарителе (5.3.2) до 5 см3. Перемещают выпаренный экстракт в градуированную пробирку с диэтиловым эфиром (5.2.2) и разбавляют до определенного объема 10 — 20 см3 диэтиловым эфиром.
5.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Для предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 — 14).
6 Метод D. Колоночная хроматография на оксиде алюминия точно определенной активности
6.1 Сущность метода
(См. ссылку [7]).
Хлорорганические соединения экстрагируют из пробы, используя ацетон/н-гексан. Ацетон отделяют с водным сульфатом натрия; н-гексан осушают и концентрируют. Определенное количество экстракта жира очищают, используя хроматографию на оксиде алюминия точно определенной активности, применяя н-гексан в качестве элюирующего растворителя.
Элюат осушают, затем анализируют с помощью ГЖХ.
6.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
6.2.1 Ацетон (CH3COCH3).
6.2.2 н-гексан [CH3(CH2)4CH3].
6.2.3 Сульфат натрия (Na2SO4) гранулированный, безводный.
Нагревают при температуре 500 °C в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в закрытом сосуде.
6.2.4 Раствор сульфата натрия, 2-процентный раствор.
6.2.5 Оксид алюминия (Al2O3), нейтральный (W 200 <1>), степень активности — Super 1 или эквивалентная.
<1> W 200 — пример изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
Материал при получении предварительно прогревают при температуре (500 +/- 25) °C в течение 3 — 4 ч для удаления влаги и любых лишних органических веществ и охлаждают над пентоксидом фосфора. Дезактивируют порцию, добавляя примерно 10 см3 воды на 90 г оксида алюминия, порциями по 2 или 3 см3, вращая при этом колбу или другую стеклянную посуду. Плотно закупоривают и встряхивают или помещают на вращающийся валик для тщательного перемешивания. Перед применением дают отстояться в течение 24 ч в закрытом сосуде и температуре окружающей среды. Материал проверяют следующим образом. Взвешивают 22,0 г оксида алюминия. Готовят суспензию в небольшом объеме н-гексана (6.2.2) и переносят ее в хроматографическую колонку (6.3.2). Добавляют слой 10 мм безводного сульфата натрия (6.2.3) и промывают колонку 15 — 20 см3 н-гексана. Устанавливают слой н-гексана немного ниже слоя сульфата натрия.
Помещают под колонку подходящий приемник (объемом не менее 250 см3). В верхнюю часть колонки пипеткой вводят небольшой объем раствора н-гексана, содержащий 1 г масла или животного жира. Пипетка должна быть сухой, и масло не должно пройти в нижнюю часть колонки. Дают уровню масла в растворе н-гексана впитаться ниже верхней поверхности слоя сульфата натрия. Добавляют 2 см3 н-гексана и опять дают ему впитаться.
Элюируют колонку 150 см3 н-гексана. Выпаривают элюат до небольшого объема в испарителе (6.3.3) и переносят его в сосуд для взвешивания, предварительно прогретый до 110 °C, охлажденный и взвешенный. Удаляют оставшийся растворитель нагревом под слабым потоком азота. Высушивают в печи при температуре 110 °C в течение 5 мин. Охлаждают в эксикаторе и взвешивают с точностью до 0,01 г. Необходимо удостовериться, что масса жира стала постоянной. Допустим, масса жира равна mA.
Отмеряют пипеткой такой же объем первоначального раствора н-гексана в другую предварительно взвешенную колбу, выпаривают, высушивают и взвешивают как описано раньше. Допустим, масса жира равна mB.
Способность поглощения жира в колонке равна (mB — mA) г, вычисленная с точностью до 0,01 г. Активность оксида алюминия регулируют при необходимости в несколько этапов так, чтобы способность поглощения жира в колонке была равна (0,62 +/- 0,02) г животного или рафинированного растительного жира или (0,52 +/- 0,02) г молочного жира.
Для проведения ряда анализов определенного объема жира дезактивируют достаточное количество оксида алюминия (например, остающееся количество в стеклянной посуде вместимостью 500 г).
6.3 Оборудование
Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.
6.3.1 Высокоскоростной смеситель.
6.3.2 Хроматографическая колонка внутренним диаметром 20 мм и длиной 300 мм с запорным краном из политетрафторэтилена (ПТФЭ).
6.3.3 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
6.3.4 Вата, промытая петролейным эфиром.
6.4 Методика
6.4.1 Общие методы
Для общих методов см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
6.4.2 Тестируемый образец
Взвешивают с точностью 0,01 г такое количество навески, чтобы получить приблизительно 0,7 г жира. Если продукты твердые, то их хорошо измельчают.
6.4.3 Экстракция жира и хлорорганических соединений
Измельчают тестируемый образец с 50 см3 ацетона (6.2.1) в высокоскоростном смесителе (6.3.1) в течение 2 мин. Добавляют 200 см3 н-гексана (6.2.2) и продолжают измельчать, пока не получат полностью измельченную пробу. Дают фазам разделиться. Декантируют максимальный объем экстракта в делительную воронку вместимостью 1 дм3 через фильтр из безводного сульфата натрия (6.2.3) на стекловате (6.3.4). Дважды промывают экстракт 500 см3 раствора сульфата натрия (6.2.4), сливая в отходы нижние водные слои и немного слоя н-гексана.
Переносят 10 см3 экстракта н-гексана в предварительно взвешенную стеклянную посуду для взвешивания и определяют экстрагированный жир в соответствии с 6.4.4. На основе вычислений по 6.4.4 переносят объем экстракта н-гексана, содержащего 0,40 г молока, сыра или молочного жира в роторный испаритель (6.3.3). Выпаривают перенесенное количество до объема 5 — 8 см3, разъединяют и продолжают выпаривать до 1 — 2 см3 на водяной бане при температуре 60 — 70 °C под током азота.
6.4.4 Определение экстрагированного жира
Помещают 10 см3 экстракта гексана в предварительно взвешенный сосуд для взвешивания. Выпаривают досуха при температуре 60 °C под током азота. Сушат остаток в шкафу при температуре 105 °C в течение 15 мин., охлаждают и взвешивают сосуд с его содержимым. Повторяют процесс сушки до тех пор, пока масса сосуда с содержимым не станет постоянной. Вычисляют количество жира в граммах на 10 см3 экстракта гексана, учитывая разницу между конечной массой (в граммах) после сушки и массой (в граммах) предварительно взвешенного сосуда для взвешивания. Данное определение жира не используют для вычисления содержания хлорорганических остатков.
6.4.5 Очистка
Готовят суспензию из 22 г дезактивированного оксида алюминия (6.2.5), имеющего приемлемую способность поглощения жира, в небольшом объеме н-гексана и переносят ее в хроматографическую колонку (6.3.2). Добавляют слой 10 мм безводного сульфата натрия (6.2.3) в верхнюю часть колонки и промывают колонку 15 — 20 см3 н-гексана. Регулируют уровень н-гексана чуть ниже верхней части слоя сульфата натрия. В верхнюю часть колонки переносят аликвотную часть концентрированного раствора н-гексана, содержащего 0,50 г жира (0,40 г — для масла, молока или сыра), подготовленного, как описано в 6.4.3. Колонку элюируют 150 см3 н-гексана, и элюат выпаривают примерно до 8 см3 в роторном испарителе.
При необходимости переносят в градуированную пробирку и продолжают выпаривание на водяной бане при температуре 50 °C под током азота до объема 2 — 3 см3. Пробирку с элюатом вынимают из водяной бани и продолжают выпаривание при температуре окружающей среды до конечного объема в 1,0 см3, затем пробирку закупоривают.
6.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 — 14).
7 Метод E. Колоночная хроматография на колонке, заполненной оксидом алюминия
7.1 Сущность метода
(См. ссылку [8]).
Хлорорганические соединения экстрагируют из пробы, используя петролейный эфир. Определенное количество экстракта жира очищают, используя хроматографию на основе оксида алюминия точно определенной активности, с применением петролейного эфира в качестве элюирующего растворителя. Элюат выпаривают, затем исследуют ГЖХ.
7.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
7.2.1 Петролейный эфир с интервалом кипения от 40 до 60 °C, перегнанный.
7.2.2 Ацетон (CH3COCH3).
7.2.3 Сульфат натрия (Na2SO4), гранулированный, безводный.
Нагревают при температуре 500 °C в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в закупоренном сосуде.
7.2.4 Песок, промытый кислотой.
Нагревают при температуре (500 +/- 25) °C в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в закупоренном сосуде.
7.2.5 Оксид алюминия (Al2O3), нейтральный (W 200), степень активности — Super 1 или эквивалентная.
Взвешивают стеклянную посуду, не открывая. Быстро добавляют к содержимому (обычно это 515 г) 27 г воды. Стеклянную посуду немедленно закрывают. Энергично встряхивают и оставляют на 24 ч. Содержимое переносят в хорошо закупоренную стеклянную посуду.
Взвешивают пустую стеклянную посуду и вычисляют содержание воды в дезактивированном оксиде алюминия. Соотношение полученных пропорций должно быть 9,5:0,5 (по объему). При необходимости следует отрегулировать. Проверяют активность оксида алюминия, проводя хроматографию стандартного раствора \beta - \text{ГХЦГ} с контрольным жиром в соответствии с описанной ниже процедурой. Степень извлечения \beta - \text{ГХЦГ} , так же как и удерживание жира, должно быть больше 95%. Если степень извлечения \beta - \text{ГХЦГ} слишком низкая, то необходимо увеличить содержание воды в оксиде алюминия, постепенно смешивая 0,2 части дистиллированной воды с 99,8 частями оксида алюминия (по массе).
7.3 Оборудование
Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.
7.3.1 Аппарат Сокслета.
7.3.2 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
7.3.3 Высокоскоростной смеситель.
7.3.4 Центрифуга, способная вращаться с частотой 2500 об/мин.
7.3.5 Кварцевая вата.
7.3.6 Хроматографическая колонка внутренним диаметром 6 мм и длиной 175 мм, имеющая выпускное отверстие внутренним диаметром 1 мм и длиной 40 мм и резервуар для растворителя внутренним диаметром 70 мм и длиной 125 мм.
7.3.7 Градуированная пробирка вместимостью 25 см3.
7.4 Методика
7.4.1 Экстрагирование жира и хлорорганических соединений
7.4.1.1 Общие методы
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
7.4.1.2 Специальные методы
7.4.1.2.1 Безводный молочный жир
Жир нагревают до температуры около 50 °C и пропускают через сухой теплый фильтр. Жир растворяют в петролейном эфире (7.2.1) для получения раствора, содержащего 35 — 50 мг/см3. Для анализа используют 2 см3.
7.4.1.2.2 Молоко
В высокоскоростной смеситель (7.3.3) наливают в следующем порядке 40 см3 молока, 80 см3 ацетона (7.2.2) и 80 см3 петролейного эфира (7.2.1). Перемешивают и центрифугируют смесь с частотой вращения 2500 об/мин в течение 5 мин. Отбирают аликвотную часть, например 10 см3, верхнего слоя (петролейного эфира). Высушивают фильтрованием через сульфат натрия (7.2.3) и промывают сульфат натрия небольшим количеством петролейного эфира. Удаляют основную массу петролейного эфира в роторном испарителе (7.3.2). Регулируют объем так, чтобы была получена концентрация жира 35 — 50 мг/см3. Для анализа используют 2 см3 (см. также метод B, 4.4.1.2).
7.4.1.2.3 Сыр
Смешивают 20 — 25 г пробы с 50 см3 петролейного эфира (7.3.3) в высокоскоростном смесителе (7.2.1). Высушивают фильтрованием через сульфат натрия (7.2.3) и промывают сульфат натрия небольшим количеством петролейного эфира. Удаляют основную массу петролейного эфира в роторном испарителе (7.3.2).
Регулируют объем так, чтобы была получена концентрация жира 35 — 50 мг/см3. Для анализа используют 2 см3.
7.4.2 Колоночная хроматография
Небольшой тампон кварцевой ваты (7.3.5) помещают в выходное отверстие хроматографической колонки (7.3.6). Взвешивают 4,0 г дезактивированного оксида алюминия (7.2.5) и помещают его в колонку. Хорошую укладку обеспечивают, постукивая по стенкам колонки. В колонку переносят 2 см3 раствора, полученного в соответствии с 7.4.1. Внутренние стенки колонки ополаскивают тремя порциями по 1 см3 петролейного эфира (7.2.1). Элюируют с 25 см3 петролейного эфира, собирают весь элюат в градуированную пробирку (7.3.7) и выпаривают до определенного объема.
Для достижения хорошей степени извлечения, в особенности \beta - \text{ГХЦГ} , важно использовать не менее 70 мг жира на колонке, заполненной 4,0 г оксида алюминия. Данная колонка может также аккумулировать до 100 мг жира. При необходимости анализа большего количества жира (например, когда чувствительность детекторов недостаточна) вышеупомянутое количество оксида алюминия и петролейного эфира должно быть увеличено соответствующим образом. На этапе очистки объем жира может быть постепенно увеличен до 250 см3.
7.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 — 14).
8 Метод F. Колоночная хроматография на частично дезактивированном Florisil
8.1 Сущность метода
(См. ссылки [9], [10] и [11]).
Хлорорганические соединения вместе с жиром экстрагируют из исследуемой пробы по методике, описанной в ISO 3890-1/IDF 75-1 (A.6). Экстракт выпаривают почти досуха и растворяют в петролейном эфире. Определенное количество экстракта жира очищают, используя хроматографию на Florisil, применяя петролейный эфир/дихлорметан в качестве элюирующего растворителя. Элюат выпаривают почти досуха, затем повторно растворяют в петролейном эфире для анализа ГЖХ.
Специальные методы разработаны для молока, сгущенного молока без сахара и сгущенного молока с сахаром.
8.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
8.2.1 Петролейный эфир с интервалом кипения от 40 до 60 °C, перегнанный.
8.2.2 Дихлорметан, подвергнутый перегонке над гранулами гидроксида натрия (точка кипения 39 °C).
8.2.3 Элюирующий растворитель: смесь петролейного эфира (8.2.1) и дихлорметана (8.2.2) (4:1 по объему).
8.2.4 Адсорбент: Florisil 60 — 100 меш.
В течение ночи нагревают при температуре (550 +/- 25) °C. Охлаждают и хранят в хорошо закупоренном контейнере.
Перед использованием нагревают при температуре (130 +/- 2) °C в течение не менее 5 ч и добавляют 3 части дистиллированной воды к 97 частям адсорбента (по массе). Смесь встряхивают в течение 20 мин. и затем хранят в хорошо закупоренном контейнере в течение 10 — 12 ч, чтобы обеспечить однородное распределение воды. Используют в течение 3 дней.
8.3 Оборудование
Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.
8.3.1 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
8.3.2 Хроматографические колонки внутренним диаметром 22 мм и длиной 600 мм с запорными кранами из политетрафторэтилена (ПТФЭ).
8.4 Методика
8.4.1 Экстрагирование жира и хлорорганических соединений
8.4.1.1 Общие методы
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
8.4.1.2 Специальные методы
8.4.1.2.1 Молоко и сгущенное молоко без сахара
Взвешивают 10 г навески в лабораторном стакане вместимостью 250 см3 и добавляют 25 г адсорбента (8.2.4), размешивают стеклянной палочкой. Важно, чтобы порошок был без комков и мог пройти через узкую воронку.
8.4.1.2.2 Сгущенное молоко с сахаром
Взвешивают 10 г навески в лабораторном стакане вместимостью 250 см3. Тщательно перемешивают с 5 см3 дистиллированной воды. Добавляют 25 г адсорбента (8.2.4) и перемешивают, как описано выше.
8.4.2 Очистка на Florisil
В хроматографическую колонку (8.3.2) помещают небольшое количество стекловаты. Вливают 100 см3 петролейного эфира (8.2.1) и добавляют 25 г адсорбента (8.2.4). После заполнения колонки до определенного уровня дают растворителю стечь до высоты на 10 мм выше слоя адсорбента. Растворяют 0,5 — 1,0 г экстрагированного жира в 10 см3 петролейного эфира и количественно переносят его на абсорбент в колонку.
При исследовании молока или сгущенного молока (8.4.1.2) добавляют адсорбент, пропитанный молоком или сгущенным молоком, через узкую воронку на адсорбент (8.2.4) в колонке, подготовленный как описано выше. Элюируют 300 см3 элюирующего растворителя (8.2.3). Скорость элюирования не должна превышать 5 см3/мин. Выпаривают элюат до объема 2 см3 в роторном испарителе (8.3.1) под пониженным давлением при температуре 40 °C. Удаляют оставшийся растворитель, используя поток воздуха, переносят остаток в градуированную пробирку с небольшими порциями петролейного эфира (8.2.1) и разбавляют до объема 5 см3.
Примечание - Полное высушивание после применения воздуха или азота необязательно. Оставшееся небольшое количество петролейного эфира не повлияет на результат, так как в ходе процедуры дихлорметан практически полностью испарится.
В целях экономии вышеописанная методика может быть модифицирована в методику с меньшим числом этапов, когда используют только 10% адсорбента и растворителей высокой чистоты следующим образом. Взвешивают 1,00 г экстрагированного жира в мерной колбе на 20 см3 с точностью 0,01 г. Доводят до метки 20 см3 петролейным эфиром и тщательно встряхивают для перемешивания.
Хроматографическую колонку 8 x 200 мм, снабженную краном на выходном отверстии и резервуаром вместимостью 30 см3 у верхнего края, закрывают небольшим тампоном из стекловаты. В колонку вводят 15 см3 петролейного эфира и медленно добавляют 3,0 г стандартного Florisil (8.2.4). Обеспечивают хорошее уплотнение адсорбента легким постукиванием по стенкам колонки стеклянной палочкой. Когда Florisil осаждается, дают растворителю стечь приблизительно до высоты 10 мм от верха колонки.
Пипеткой переносят в колонку с Florisil 2,00 см3 (что соответствует 100 мг пробы) жирового раствора, полученного нормальным либо экономичным методом. Дают растворителю стечь и элюируют хлорорганические соединения элюирующим растворителем (8.2.3) объемом 30 см3. Собирают элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см3. Полное элюирование не должно занимать менее 15 мин.
Выпаривают элюат в роторном испарителе (8.3.1) до объема 2 см3. Удаляют любой оставшийся растворитель аккуратной продувкой потоком чистого воздуха. Добавляют в колбу с остатком 2,00 см3 изооктана, закрывают и вращают. Данный концентрат используют для анализа газовой хроматографией.
8.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 — 14).
9 Метод G. Колоночная хроматография на частично дезактивированном силикагеле
9.1 Сущность метода
(См. ссылку [12]).
Хлорорганические соединения вместе с жиром экстрагируют из пробы. Экстракт очищают, используя хроматографию на колонке, заполненной силикагелем, проводя элюирование петролейным эфиром/дихлорметаном (80:20 по объему). Элюат выпаривают, затем проверяют ГЖХ.
9.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
9.2.1 Петролейный эфир с интервалом кипения от 40 до 60 °C, перегнанный. При необходимости перегоняют через трубку Рашига длиной не менее 500 мм.
9.2.2 Дихлорметан, подвергнутый перегонке над гранулами гидроксида натрия (точка кипения 39 °C).
9.2.3 Элюирующий растворитель: смесь петролейного эфира (9.2.1) и дихлорметана (9.2.2) (4:1 по объему).
9.2.4 Силикагель, 70 — 230 меш <1>.
<1> Пригодность продукта № 7734 от Merck (Дармштадт, Германия) была подтверждена. Количество и аналитическая процедура были проверены при использовании данного продукта. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
Активируют нагревом при температуре (450 +/- 25) °C в течение 3 ч. Охлаждают и хранят в хорошо закупоренном сосуде.
9.2.5 Дезактивированный силикагель.
Смешивают 90 частей активного силикагеля (9.2.4) и 10 частей воды (по объему). Смесь перемешивают в течение 20 мин., затем оставляют в хорошо закупоренном сосуде на 10 — 12 ч, чтобы удостовериться в однородности распределения воды.
9.2.6 н-гексан [CH3(CH2)4CH3] или н-гептан или изооктан.
При необходимости пропускают через трубку Рашига длиной не менее 500 мм.
9.3 Оборудование
Применяют обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.
9.3.1 Аналитические весы, позволяющие взвешивать с точностью до 0,01 г.
9.3.2 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
9.3.3 Хроматографические колонки внутренним диаметром 22 мм, с запорными кранами из политетрафторэтилена (ПТФЭ).
Приемлемы трубки длиной 250 мм с расширением на верхнем крае.
9.3.4 Колбы ротационного испарителя вместимостью 500 см3.
9.3.5 Стаканы лабораторные различных объемов.
9.3.6 Пипетки.
9.3.7 Воронки.
9.3.8 Вата, промытая петролейным эфиром.
9.3.9 Стеклянные палочки диаметром 8 мм.
9.3.10 Водяной вакуумный насос.
9.4 Методика
9.4.1 Экстрагирование жира и хлорорганических соединений
Относительно общих методов см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
9.4.2 Очистка
9.4.3 Жир и хлорорганические соединения
Хроматографическую колонку (9.3.3) предварительно закрывают ватой (9.3.8), наполняют 15 г дезактивированного силикагеля (9.2.5), тщательно встряхивают. Растворяют 0,5 г экстрагированного жира (9.4.1) в 5 см3 петролейного эфира (9.2.1) и количественно переносят подходящей пипеткой на верхнюю часть колонки, заполненной силикагелем.
Элюируют 130 см3 элюирующего растворителя (9.2.3). Добавляют 1 см3 раствора внутреннего стандартного раствора для элюирования. Выпаривают элюат медленно под пониженным давлением до объема 1 см3, используя роторный испаритель при температуре 40 °C и водяной насос (9.3.10). Удаляют оставшийся растворитель потоком воздуха и переносят остаток в мерную пробирку небольшими порциями н-гексана (9.2.6). Доводят объем до 1 см3.
9.4.2.1 Краткая методика для молока, сгущенного молока, сухого молока и сыра
(См. ссылку [13]).
Смешивают в стакане 10 г молока или 10 г сгущенного молока, разбавленного водой в соответствии с коэффициентом концентрации, или 2 — 4 г сухого молока, разведенного в 10 см3 воды при температуре 40 °C, или 2 — 5 г сыра с 8 — 9 см3 воды и 15 см3 активированного силикагеля (9.2.4). Постоянно перемешивают стеклянной палочкой (9.3.9) до получения сыпучего порошка без комочков.
Учитывая способность «разделяющего» слоя силикагеля с 10% (по массе) воды (внизу) поглощать жир, масса жира в пробе должна составлять 0,3 — 0,8 г.
Масса воды в пробе должна составлять около 10 г. Если это не так, то добавляют соответствующее количество воды. Только содержание воды 40% (по массе) обеспечивает дезактивацию силикагеля таким образом, что хлорорганические соединения перемещаются вверх «разделяющего» слоя силикагеля с 10% воды внизу с фронтом растворителя.
Хроматографическую колонку (9.3.3) наполняют 30 г дезактивированного силикагеля (9.2.5) и (сверху) вышеупомянутой смесью пробы с силикагелем. Споласкивают стакан двумя порциями по 50 см3 элюирующего растворителя (9.2.3) и осторожно добавляют эти порции сверху в колонку. Затем в колонку добавляют еще 300 см3 элюирующего растворителя (9.2.3) и элюируют со скоростью не выше 5 см3/мин. Добавляют раствор внутреннего стандарта. Выпаривают элюат медленно под пониженным давлением до объема около 1 см3, используя, например, роторный испаритель (9.3.2), при температуре 30 °C. Осторожно выпаривают оставшийся растворитель при атмосферном давлении и комнатной температуре почти досуха. Доводят объем остатка до 2 см3, используя н-гексан или изооктан (9.2.6).
Примечание - Описанная методика может применяться с вдвое меньшими порциями пробы и реактивов.
9.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 — 14).
10 Метод H. Гель-проникающая хроматография
10.1 Сущность метода
Хлорорганические соединения экстрагируют из пробы, и экстрагирующий растворитель выпаривают до малого объема. Полученные экстракты растворяют этилацетатом/циклогексаном и очищают, используя хроматографию с гель-проникающей колонкой, заполненной этилацетатом/циклогексаном в качестве элюирующего растворителя. Элюат выпаривают, затем проверяют ГЖХ.
10.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
10.2.1 Циклогексан (C6H12), подвергнутый перегонке над металлическим Na, хранящимся под слоем керосина.
10.2.2 Этилацетат (CH3CO2C2H5), перегнанный.
10.2.3 Этанол (C2H5OH), перегнанный.
10.2.4 Диэтиловый эфир (C2H5OC2H5), без пероксидов, очищенный над хлоридом кальция.
10.2.5 Сульфат натрия (Na2SO4) гранулированный, безводный.
Нагревают при температуре 500 °C в течение 4 ч, хранят в закупоренной стеклянной посуде.
10.2.6 Раствор сульфата натрия, 2-процентный раствор в бидистиллированной воде.
10.2.7 Петролейный эфир с интервалом кипения от 40 до 60 °C.
10.2.8 Хроматографический гель (Bio-beads S-X <1> 200 — 300 меш или эквивалентный).
<1> Хроматографический гель является примером изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
10.2.9 Элюирующий растворитель: смесь этилацетата (10.2.2) и циклогексана (10.2.1) (1:1 по объему).
10.3 Оборудование
Применяют обычное лабораторное оборудование.
10.3.1 Высокоскоростной смеситель.
10.3.2 Роторный встряхиватель.
10.3.3 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
10.3.4 Сублимационная сушилка.
10.3.5 Экстракционный аппарат Сокслета.
10.3.6 Гель-проникающий хроматограф (приобретенный или сконструированный в лаборатории).
10.3.7 Делительная воронка вместимостью 500 см3.
10.4 Методика
10.4.1 Экстракция жира и хлорорганических соединений
Для общих методов см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение A).
10.4.2 Очистка гель-проникающей хроматографией
3 г жира, полученного в соответствии с ISO 3890-1/IDF 75-1:2009 (A.3), взвешивают с точностью до 0,01 г. Разводят жир в элюирующем растворителе (10.2.9) и разбавляют данным растворителем до объема 50 см3. Помещают 5 см3 данного раствора в петлю гель-проникающего хроматографа.
Отделяют жир от остатков, используя хроматографическую колонку, заполненную гелем на высоту 320 мм (10.2.8), предварительно пропитанным элюирующим растворителем (10.2.9), и упаковывают в трубку диаметром 25 x 400 мм.
Настраивают скорость элюирования на 5 см3/мин, уменьшая давление на колонку (давление не должно превышать 0,5 бар <1>, и собирают 100 — 160 см3 элюата, который содержит жир, в круглодонную колбу. Выпаривают элюат до 5 см3 в роторном испарителе (10.3.3) под уменьшенным давлением при температуре 40 °C.
<1> 1 бар = 1·105 Па, 1 МПа = 1·106 Па.
После каждой пробы промывают колонку элюирующим растворителем (10.2.9) в течение 3 мин.
При использовании аппаратуры, построенной в лаборатории, количество пробы и реактивов должно быть точно соответствующим.
10.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительного анализа см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 — 14).
11 Подтверждающие тесты
11.1 Подтверждающий тест A. Определение хлорорганических соединений с помощью капиллярной газовой хроматографии
11.1.1 Сущность теста
11.1.2 Оборудование
Применяют обычное лабораторное оборудование.
11.1.2.1 Газовый хроматограф с электронозахватным детектором, оснащенный капиллярной системой инжекции.
11.1.2.2 Капиллярная колонка со следующими характеристиками:
<2> Примеры изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
- толщина пленки от 0,1 до 0,4 мкм;
- внутренний диаметр от 0,1 до 0,4 мм;
- подвижная фаза с контролируемым давлением (рабочий газ: гелий или водород);
- линейная скорость от 200 до 400 мм/с;
- газ для поддувки (водород или аргон/метан), расход около 20 см3/мин;
- продувка детектора 30 см3/мин (азот или аргон/метан);
- температура инжектора 210 °C;
- температура детектора 300 — 350 °C; программирование температуры зависит от способа инжекции (см. ниже).
11.1.3 Способ инжекции
11.1.3.1 Инжектор без деления потока
Закрывают делитель потока и обдув септы, если он есть.
Вводят 1 — 5 мм3 (без деления потока) при температуре колонки 100 °C. При использовании растворителей более летучих, чем изооктан, рекомендуется понижать температуру колонки до 90 °C или даже до 80 °C.
После ввода на короткое время (от 0,25 до 3 мин.) открывают делитель и обдув септы, если он есть. Время должно быть установлено экспериментально.
Спустя 1 мин. после открытия делителя начинают программировать температуру, изменяя ее в диапазоне от 5 до 40 °C/мин. Программирование температуры прекращают при достижении 210 — 230 °C.
Конечное время выдержки зависит от скорости программирования температуры, но она будет в пределах 15 — 0 мин.
Охлаждают до начальной температуры. Закрывают делитель потока и обдув септы, если он есть. Вводят следующий образец.
11.1.3.2 Стеклянная система инжекции
С помощью данного устройства в капиллярную колонку может быть введена компактная порция от 1,0 до 2 мм3. Поскольку растворитель уже практически полностью испарился, можно использовать изотермический анализ, делающий излишним охлаждение газовой хроматографической системы в конце анализа.
11.1.4 Проверка всей системы
11.1.4.1 Капиллярную колонку (приобретенную или изготовленную в лаборатории) периодически проверяют при нормальных условиях, используя интересующие соединения.
11.1.4.2 Смесь хлорорганических пестицидов, содержащую \beta - \text{ГХЦГ} , дильдрин, эндрин и п,п'-ДДТ, вводят при температуре 210 °C, при небольшом делении (1:20). Для дильдрина (сброс > 5) число теоретических тарелок должно быть не менее 80 000.
11.1.4.3 Равные количества эндрина и дильдрина, введенные без деления потока при условиях, описанных в 11.1.2, должны дать в результате соотношение высот пиков не менее 65%. Если это не так, то адсорбция мешает нормальному элюированию эндрина.
11.1.4.4 Очень чувствительный к разложению п,п'-ДДТ подходит в качестве контрольного соединения. При условиях, указанных в 11.1.3.1, время удерживания в инжекционном канале достаточно продолжительное. В частности, если стеклянный лайнер не был дезактивирован в достаточной степени, то происходит разложение. Изотермическая (210 °C) инжекция п,п'-ДДТ с делением потока (стеклянная система инжекции short residence time), с разделением на холодные колонки (объемы и температуры в соответствии с 11.1.3.1) и ввод без деления при условиях, описанных в 11.1.3.1, дают информацию, где и в какой степени произошло разложение. Контроль линейности должен проводиться регулярно. По мере использования качество колонок ухудшается и адсорбция повышается, особенно при более низких концентрациях.
11.1.4.5 Проверки на линейность должны проводиться с постоянным интервалом. В ходе выполнения испытаний качество колонки ухудшается и адсорбция увеличивается, особенно при низких температурах.
11.1.5 Применение и исследование проб
Хлорорганические соединения экстрагируют из проб в соответствии с одним из методов, описанных в настоящем стандарте. В частности, в случае с экстрактами из жирных образцов более высококипящие вещества также впрыскивают вместе с хлорорганическими соединениями. Эти более высококипящие соединения загрязняют стеклянные лайнеры в инжекторе, что приводит к адсорбции исследуемых соединений. Необходима регулярная очистка. В случае со стеклянным лайнером можно работать с предколонкой вместо стеклянного лайнера. Особое внимание следует уделить разложению п,п'-ДДТ.
11.2 Подтверждающий тест B. Тонкослойная хроматография хлорорганических соединений
11.2.1 Сущность теста
(См. ссылку [9]).
Аликвотную часть очищенного экстракта пробы наносят на тонкий слой оксида алюминия вместе с серией стандартных образцов. Хроматограмму развивают восходящим потоком, используя в качестве подвижной фазы петролейный эфир, и разделенные соединения становятся видимыми при опрыскивании нитратом серебра с последующим облучением ультрафиолетовой лампой.
11.2.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
11.2.2.1 Петролейный эфир с интервалом кипения от 40 до 60 °C, выдержанный над гранулами гидроксида натрия и перегнанный.
11.2.2.2 Раствор нитрата серебра (реагент для распыления).
Растворяют 0,5 г нитрата серебра (AgNO3) приблизительно в 1 см3 воды. Добавляют 99 см3 95-процентного этанола (C2H5OH) и смешивают.
11.2.2.3 Растворы стандартов хлорорганических соединений в изооктане, содержащем 0,05 мкг/мм3.
11.2.2.4 Пластины для тонкослойной хроматографии ТСХ, покрытые оксидом алюминия, тип E (нейтральный), F254, листы из алюминиевой фольги Merck № 5550 <1>.
<1> Merck № 5550 — пример изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
11.2.3 Оборудование
Применяют обычное лабораторное оборудование.
11.2.3.1 Ультрафиолетовая лампа для фотохимического определения хлорорганических соединений ТСХ (тонкослойной хроматографией).
Кварцевая лампа Zwecke от Philips, тип HPK 125 W/L <1>, рекомендована с преобразователем VGI HP 125 W.
<1> Philips, тип HPK 125 W/L, — пример изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
11.2.4 Методика
Упаривают пробу и экстракты холостых определений до подходящего объема в градуированной пробирке или виале Контеса. С помощью микропипетки переносят объем экстракта пробы, содержащего достаточное количество хлорорганических соединений, чтобы нанести пятно массой 0,025 — 0,25 мкг на предварительно покрытую оксидом алюминия E-пластинку. То же самое повторяют с таким же объемом холостой заготовки.
Используют растворы стандартов для нанесения проб, содержащих 0,025; 0,05; 0,10; 0,15; 0,20 и 0,25 мкг хлорорганических соединений соответственно. Для достижения лучшего результата размер (диаметр пятна) нанесенной аликвоты пробы и стандартов должен быть по возможности наименьшим.
Хроматограмму развивают на расстояние около 150 мм восходящим потоком в предварительно насыщенной камере, используя петролейный эфир (11.2.2.1) в качестве подвижной фазы. Когда подвижная фаза достигнет линии фронта, пластинку достают из камеры и дают адгезивному растворителю испариться.
Обильно опрыскивают спиртовым раствором нитрата серебра (11.2.2.2). Недостаточное опрыскивание приведет к низкой чувствительности. Спустя 10 мин. после распыления осторожно осматривают пластину. Если в это время появляются коричневые или черные пятна, то они не относятся к хлорорганическим соединениям. Иногда как холостая проба, так и проба проявляют желто-коричневую область на величине отклика fr, равной 0,70.
Отмечают расположение пятна (пятен) карандашом и помещают хроматограмму под ультрафиолетовую лампу. Освещают в течение 10 мин. Убирают пластинку из-под лампы и слегка опрыскивают ее дистиллированной водой так, чтобы она стала влажной.
Опять помещают пластинку под ультрафиолетовую лампу. Хлорорганические соединения теперь должны через 1 — 2 мин. проявиться как черно-фиолетовые пятна.
Если видимость пятен неудовлетворительна, то необходимо облучать пластинку еще 10 мин. Ее опять опрыскивают дистиллированной водой и продолжают освещать еще 1 — 2 мин., пока даже самая низкая концентрация стандартного раствора не станет различима. Если все значения (fr) достаточно низкие и разделение слабое, то повторяют хроматографию, используя петролейный эфир, содержащий 1% ацетона.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Для успешного определения хлорорганических соединений в тонких слоях, в лабораторной атмосфере должны отсутствовать даже ничтожные количества соляной кислоты, хлористых или сернистых соединений. Даже пары галогенизированных растворителей, таких как хлороформ, могут стать причиной появления значительного фонового потемнения и существенно снизить чувствительность определения.
11.2.5 Оценка хроматограммы
Идентифицируют пятно (пятна) в аликвотной пробе путем сравнения с пятнами стандартных соединений. Выбирают только те пятна, которые не присутствуют в «холостой пробе». Значения Rf для хлорорганических пестицидов приведены в таблице 1.
Значения величины отклика (fr) хлорорганических соединений и продуктов их разложения в системе Al2O3E/петролейный эфир
Определяют примерное количество пестицида в аликвотной пробе путем сравнения с пятном растворов стандартных веществ различной концентрации. В идеале ТСХ и ГЖХ должны выдавать количественно и качественно идентичные результаты. Однако из-за приблизительных расчетов ТСХ можно ожидать значительных различий.
В таких случаях надо руководствоваться здравым смыслом. Если, например, ГЖХ показывает 500 мкг/кг, а ТСХ — 350 мкг/кг, то можно считать данные результаты приемлемыми. С другой стороны, если ГЖХ получает 500 мкг/кг, а ТСХ — 150 мкг/кг, то рекомендуется повторить исследование.
11.3 Испытания на соответствие техническим условиям C. Модификации химической структуры
11.3.1 Общие положения
(См. ссылки [17], [18], [19], [20], [21]).
Многие хлорорганические соединения посредством химических реакций могут превращаться в различные соединения. Реакции производных получения осуществляют как на экстракте образца, содержащего экспериментально определенные остатки, так и на подходящем количестве стандартных соединений.
Сопоставление химических и хроматографических особенностей продуктов реакции из экстракта образца и стандартных соединений дает полезные дополнительные доказательства для подтверждения наличия экспериментально определенных остатков в образце.
Среди различных химических систем, разработанных с этой целью, рекомендуется образование производной в твердой матрице, поскольку она специфична, чувствительна и проста в выполнении.
Ниже описаны четыре способа получения химической производной твердой матрицы для подтверждения идентичности различных хлорорганических соединений. Для ГХБ не существует такого способа, и поэтому для данного соединения приведена методика подтверждения посредством получения производной в растворах.
11.3.2 Получение производной в твердой матрице
11.3.2.1 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
11.3.2.1.1 Оксид алюминия 60 (Al2O3), активный основной тип E, активность 1, Merck 1067 <1>.
11.3.2.1.2 Оксид алюминия 90 (Al2O3), активированный, кислый, активность 1, Merck 1078 <1>.
<1> Merck 1067, Merck 1078, Merck 8816 — пример изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
Чистоту обоих адсорбентов проверяют, смешивая 0,5 г с 2 см3 чистого толуола. Дают осадку осесть и вводят аликвотную часть надосадочной жидкости в аппарат ГЖХ при тех же условиях, которые использовались при анализе пестицидов. Если наблюдаются пики, то производят очистку нагреванием при температуре (550 +/- 25) °C в течение 3 ч.
11.3.2.1.3 Толуол, этилацетат или изооктан (2,2,4-триметилпентан), подходящий для анализа остатков.
11.3.2.1.4 Серная кислота, c(H2SO4) = 95 — 97% (массовая доля).
11.3.2.1.5 Соляная кислота (HCl), дымящая (массовая доля не менее 37%).
11.3.2.1.6 Хлорид цинка (ZnCl2), безводный, например, Merck 8816 <1>.
<1> Merck 1067, Merck 1078, Merck 8816 — пример изделий, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
11.3.2.1.7 Твердая матрица, для микроочистки щелочью (активированная щелочью окись алюминия).
Растворяют 5 г гранул гидроксида калия (KOH) в 4 см3 воды в стеклянном стакане вместимостью 400 см3. Добавляют небольшими порциями 50 г основного оксида алюминия (11.3.2.1.1), тщательно размешивая стеклянной палочкой. Переносят в колбу вместимостью 500 см3 и энергично встряхивают. До использования хранят в эксикаторе.
Раствор годен в течение более 6 мес. при условии хранения в сухом месте.
11.3.2.1.8 Твердая матрица для подтверждения идентичности эндрина (кислый оксид алюминия).
Осторожно добавляют 5 см3 серной кислоты (11.1.3.2.1.4) в 2,5 см3 воды. Охлаждают в ледяной бане в течение 20 — 30 мин. В предварительно охлажденной ступке быстро измельчают пестиком 50 г чистого ледяного оксида алюминия (11.3.2.1.2) с разведенной серной кислотой. Переносят смесь в стеклянную колбу с притертой пробкой и встряхивают в течение 2 ч в вибраторе. Хранят в плотно закупоренном контейнере в эксикаторе. Подготовленная таким образом твердая матрица активна в течение более 1 г.
11.3.2.1.9 Твердая матрица для подтверждения идентичности эндосульфана (сильно кислый оксид алюминия).
В течение 30 мин. раздельно охлаждают 5 см3 концентрированной серной кислоты (11.3.2.1.4) и 25 г очищенного кислого оксида алюминия (11.3.2.1.2) до температуры ниже нуля. Перемешивают в предварительно охлажденной ступе и быстро измельчают до получения однородного порошка.
До использования хранят в хорошо закупоренной колбе в эксикаторе.
11.3.2.1.10 Твердая матрица для подтверждения идентичности дильдрина (оксид алюминия, насыщенный хлоридом цинка и серной кислотой).
В стакан вместимостью 100 см3 помещают 0,4 г безводного хлорида цинка (11.3.2.1.6). Добавляют 0,8 см3 соляной кислоты (11.3.2.1.5) и быстро размешивают стеклянной палочкой до полного растворения твердых частей. Добавляют 10 г кислого оксида алюминия (11.3.2.1.2) и хорошо перемешивают до получения однородного порошка.
Хранят в хорошо закупоренной стеклянной посуде. Готовят заново каждые два дня.
11.3.2.2 Методика
11.3.2.2.1 Подтверждение ДДТ, ДДД, метоксихлора, \alpha - \text{хлордана} , гептахлора и гептахлор-эпоксида
В двух стеклянных пробирках вместимостью 10 см3 помещают по 1 г щелочной твердой матрицы (11.3.2.1.7). В одну контрольную пробирку добавляют подходящую аликвотную часть концентрированного очищенного экстракта пробы. В другую пробирку добавляют аликвотную часть стандартного раствора, содержащего такое количество хлорорганического соединения, которое сходно с количеством, содержащимся в экстракте пробы.
Удаляют любой растворитель продувкой струей чистого воздуха или незначительным нагревом пробирок. Смешивают сухую твердую матрицу, поместив пробирки в вибратор или в ультразвуковую ванну. Условия реакции и растворитель, необходимый для экстракции различных производных, приведены в таблице 2. Добавляют 1 или 2 см3 соответствующего растворителя и получают производную путем энергичного встряхивания или поместив пробирки на 2 мин. в ультразвуковую ванну. Дают частицам адсорбента осесть и вводят аликвотную часть всплывающей жидкости в газовый хроматограф. Идентичность продуктов реакции, их минимальное выявляемое количество и относительное время удерживания также приведены в таблице 2.
Подтверждение идентичности хлорорганического соединения образованием производного соединения в оксиде алюминия/твердой матрице KOH
Другие хлорорганические соединения, такие как ГХБ, ПХБ, \gamma - \text{хлордан} , альдрин, дильдрин, эндрин, во время реакции останутся неизменными. Изомеры ГХЦГ полностью превращаются в трихлоробензоловые изомеры, которые во время ГЖХ элюируют с пиком растворителя.
Если присутствует значительное количество ГХЦГ, то три изомера трихлорбензола могут быть выявлены при снижении температуры колонки до 110 °C. Преобладают 1, 2, 4-изомеры.
11.3.2.2.2 Подтверждение остатков эндрина
Готовят производные соединения, как описано в 11.3.2.2.1, используя твердую матрицу, описанную в 11.3.2.1.8. После удаления растворителя и перемешивания твердых составляющих пробирки плотно закрывают и оставляют реакцию протекать не менее 2 ч или всю ночь при комнатной температуре. Добавляют 1 или 2 см3 толуола. Экстрагируют производное соединение и подвергают анализу ГЖХ, как описано в 11.3.2.2.1, используя колонку 1,5% OV-17/1, 95% QF-1.
Производное вещество, гектахлорпентациклический кетон, имеет относительное время удерживания (альдрин = 1,00) 7,9 на 1,5% OV-17/1 <1>, 95% QF-1 <1> и 30,7 на 2% DEGS + 0,5% H3PO4.
<1> Пример продуктов, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
11.3.2.2.3 Подтверждение остатков эндосульфана
Готовят производные соединения, как описано в 11.3.2.2.1, используя твердую матрицу, описанную в 11.3.2.1.9 (сильно кислый оксид алюминия). Нагревают насыщенную твердую матрицу при температуре 95 °C в течение 1 ч.
Охлаждают и добавляют 2 см3 толуола в обе пробирки. Закупоривают и энергично встряхивают в течение 1 мин. для экстрагирования продукта реакции и анализируют надосадочную жидкость ГЖХ.
Идентичность эндосульфана подтверждается, если хроматограмма прореагировавшего экстракта пробы показывает отсутствие ранее наблюдавшихся пиков, соответствующих альфа- и бета-изомерам, и появление большого пика эфира эндосульфана, который также присутствует на хроматограмме очищенного таким же образом стандартного раствора. Относительное время удерживания (альдрин = 1,00) эфира эндосульфана составляет 0,77 на 1,5% OV-17/1, 95% QF-1 и 30,7 на 2% DEGS + 0,5% H3PO4.
11.3.2.2.4 Подтверждение остатков дильдрина
Подобно методике, описанной в 11.3.2.2.1, готовят производное вещество из дильдрина в соответствующей твердой матрице (11.3.2.1.10) при температуре от 120 °C в течение 30 мин. Экстрагируют производное вещество толуолом и анализируют ГЖХ.
Идентичность дильдрина подтверждается, если хроматограмма прореагировавшего экстракта пробы показывает отсутствие ранее наблюдавшегося дильдрина и появление большого пика эфира от производного вещества, который также присутствует на хроматограмме очищенного таким же образом стандартного раствора.
Относительное время удерживания (альдрин = 1,00) дильдрина составляет 5,35 на колонке 1,5% OV-17/1, 95% QF-1.
Другие пестициды не определяются. Изомеры ГХЦГ, ГХБ, ПХБ, гептахлорэпоксида, хлордана, п,п'-ДДЕ, п,п'-ДДД остаются неизменными. Эндрин превращается в хорошо известное кетоновое соединение, которое элюирует намного позднее, чем производное дильдрина. Гептахлор дает продукт реакции с таким же временем удерживания, как у гидроксихлордена, несмотря на то что п,п'-ДДТ превращается в п,п'-ДДЕ на колонке OV-17/QF-1. Скорость превращения редко превышает 50%.
11.3.3 Подтверждение идентичности остатков гексахлорбензола (ГХБ)
11.3.3.1 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
11.3.3.1.1 Петролейный эфир, предназначенный для анализа остатков.
11.3.3.1.2 Реактивы для метоксилирования.
Растворяют 4 г гидроксида натрия в 25 см3 метанола, используя магнитную мешалку. Медленно добавляют 50 см3 чистого пиридина (очищенного над гидроксидом калия). Свежий раствор готовят каждый день.
11.3.3.1.3 Сульфат натрия (Na2SO4), гранулированный, безводный.
11.3.3.2 Методика
Соответствующий объем очищенного экстракта пробы помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 см3 и выпаривают приблизительно до объема 2 см3. Добавляют 5 см3 реактивов для метоксилирования (11.3.3.1.2). Плотно закупоривают колбу и нагревают ровно 20 мин. на водяной бане при температуре 50 °C.
Охлаждают под проточной водой и переносят продукт реакции в делительную воронку вместимостью 125 см3, используя 30 см3 петролейного эфира (11.3.3.1.1). Добавляют 20 см3 воды, энергично встряхивают в течение 1 мин. и переносят нижнюю водную фазу во вторую делительную воронку. Дважды реэкстрагируют, используя 15 см3 петролейного эфира. Объединяют экстракты петролейного эфира и четырежды промывают порциями воды по 15 см3.
Высушивают экстракты безводным сульфатом натрия (11.3.3.1.3) и отбирают соответствующий объем для анализа ГЖХ.
Таким же образом обрабатывают соответствующую аликвотную часть стандартного раствора ГХБ.
Прореагировавшие экстракты исследуют ГЖХ. В обоих экстрактах наблюдают соединение со временем удерживания пентахлоранизола, если в экстракте пробы присутствует ГХБ.
11.4 Подтверждающий тест D. Фотохимические модификации
11.4.1 Общие положения
(См. ссылку [22]).
Ультрафиолетовое излучение с длиной волны 254 нм может быть использовано для подтверждения предполагаемых остатков, таких как альдрин, \gamma - \text{хлордан} , дильдрин, эндрин, гексахлорбензол и гептахлорэпоксид. Изменения в газовой хроматограмме, вызванные облучением, характерны для упомянутых соединений.
11.4.2 Оборудование
Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.
11.4.2.1 Стеклянные пробирки номинальным диаметром 8 мм и длиной 53 мм.
11.4.2.2 Ртутная лампа с длиной волны 254 нм (например, Pen-Ray, Agpe 11 8c-1 <1>, 5,5 Вт или эквивалентная).
<1> Пример продуктов, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
11.4.2.3 Водяная баня, способная поддерживать температуру (20 +/- 1) °C.
11.4.3 Методика
Переносят 1 см3 очищенного в петролейном эфире экстракта в стеклянную пробирку (11.4.2.1), которую помещают в водяную баню (11.4.2.3). В раствор помещают ультрафиолетовую лампу (11.4.2.2) и облучают в течение 5 — 10 мин. При необходимости опять разбавляют до объема 1 см3 и вводят 5 мм3 раствора таким же образом, как до облучения. Сравнивают газовые хроматограммы, полученные до и после облучения.
12 Дополнительные процедуры очистки
Примечание - Данная дополнительная очистка оксидом алюминия, насыщенным серебром и азотом, рекомендуется для удаления помех, встречающихся в ходе анализа сыров с чесночным ароматом.
12.1 Сущность метода
Экстракт очищают, используя хроматографию на колонке, заполненной оксидом алюминия, насыщенным серебром и азотом.
12.2 Реактивы
Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
12.2.1 Оксид алюминия (Al2O3), нейтральный (Merck № 1077 или эквивалентный).
Нагревают при температуре 500 °C в течение 4 ч. Дают остыть, добавляют 7 частей воды к 93 частям оксида алюминия (по объему) и энергично встряхивают до полной абсорбции воды и ее однородного распределения.
12.2.2 н-гексан [CH3(CH2)4CH3], аналитического качества, пригодный для анализа остатков.
12.2.3 Хроматографический адсорбент.
Растворяют 0,75 г нитрата серебра (AgNO3) в 0,7 см3 воды. Нагревают и медленно добавляют 4 см3 ацетона (CH3COCH3). Раствор быстро смешивают с 10 г оксида алюминия (12.2.1). Удаляют ацетон потоком азота.
12.3 Оборудование
Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.
12.3.1 Хроматографическая колонка с внутренним диаметром 8 мм и длиной 150 мм, с запорным краном из политетрафторэтилена (ПТФЭ).
12.3.2 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500 см3 и прикрепленной градуированной пробиркой.
12.4 Методика
Тампон из ваты или стекловаты помещают на дно хроматографической колонки (12.3.1) и наливают в колонку (12.3.1) 5 см3 н-гексана (12.2.2), кран закрывают. Смешивают 2 г адсорбента (12.2.3) и 10 см3 н-гексана в колбе вместимостью 100 см3. Суспензию наливают в колонку и промывают колбу, удостоверившись, что вся смесь была перелита. Дают н-гексану стечь до уровня на 10 мм выше адсорбента в колонке и элюат сливают. Добавляют в колонку 1,0 см3 концентрированного экстракта, полученного с использованием методики очистки.
Элюируют с 20 см3 н-гексана при расходе, не превышающем 3 см3/мин в испарительной колбе (12.3.2) вместимостью 100 см3. Выпаривают элюат до объема 2 — 3 см3 с помощью роторного испарителя (12.3.2) и потоком азота испаряют раствор до объема приблизительно 1,0 см3. Данный очищенный экстракт пригоден для анализа ГЖХ.
Во время этой процедуры гептахлор образует производное вещество, время удерживания которого похоже на время удерживания альдрина на некоторых колонках ГЖХ.
СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ ССЫЛОЧНОГО МЕЖДУНАРОДНОГО СТАНДАРТА МЕЖГОСУДАРСТВЕННОМУ СТАНДАРТУ
| Обозначение ссылочного международного стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование государственного стандарта |
| ISO 3890-1/IDF 75-1:2009 | IDT | ГОСТ ISO 3890-1-2013 «Молоко и молочные продукты. Определение остаточного содержания хлорорганических соединений (пестицидов). Часть 1. Общие положения и методы экстракции» |
| Примечание — В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандарта: - IDT — идентичный стандарт. | ||