ГОСТ ISO 29841-2024. Межгосударственный стандарт. Жиры и масла растительные. Определение содержания продуктов распада хлорофиллов a и a' (феофитинов a, a' и пирофеофитина)
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "ГОСТ ISO 29841-2024. Межгосударственный стандарт. Жиры и масла растительные. Определение содержания продуктов распада хлорофиллов a и a' (феофитинов a, a' и пирофеофитина)". ГОСТ ISO 29841-2024. https://bukva.ai/docs/standart-gost-iso-29841-2024
(введен в действие Приказом Росстандарта от 20.11.2024 № 1718-ст)
Примечание
Документ введен в действие с 01.05.2025.
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 ноября 2024 г. № 1718-ст
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПРОДУКТОВ РАСПАДА ХЛОРОФИЛЛОВ a И a' (ФЕОФИТИНОВ a, a' И ПИРОФЕОФИТИНА)
Vegetable fats and oils. Determination of the degradation products of chlorophylls a and a' (pheophytins a, a' and pyropheophytin)
(ISO 29841:2009+Amd.1:2016, IDT)
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
1 ПОДГОТОВЛЕН Некоммерческой организацией «Ассоциация производителей и потребителей масложировой продукции» на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 238 «Масла растительные и продукты их переработки»
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 31 октября 2024 г. № 178-П)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 ноября 2024 г. № 1718-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 29841-2024 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 мая 2025 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 29841:2009 «Жиры и масла растительные. Определение содержания продуктов распада хлорофиллов a и a' (феофитинов a, a' и пирофеофитинов)» [«Vegetable fats and oils — Determination of the degradation products of chlorophylls a and a' (pheophytins a, a' and pyropheophytins)», IDT], включая изменение Amd.1:2016.
Изменение к указанному международному стандарту, принятое после его официальной публикации, внесено в текст настоящего стандарта и выделено двойной вертикальной линией, расположенной на полях напротив соответствующего текста, а обозначение и год принятия изменения приведены в скобках после соответствующего текста.
Международный стандарт разработан Подкомитетом SC 11 «Животные и растительные жиры и масла» Технического комитета ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
7 Некоторые элементы настоящего стандарта могут быть объектом патентных прав. Международная организация по стандартизации (ISO) не несет ответственность за идентификацию каких-либо или всех патентных прав
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»
| В ходе систематического пересмотра ISO 29841:2009 в 2014 году было предложено дать более подробное разъяснение по миниатюрным колонкам с силикагелем собственного изготовления в примечании к 6.6. Также необходимо заменить размер колб в 6.2, так как объем на 10 см3 является недостаточным и проба может быть потеряна при размещении в ротационном испарителе. Дополнительно было решено изменить наименование подраздела 9.2, указав что рассчитывается именно относительное содержание аналитов. (Amd.1:2016) |
|---|
Настоящий стандарт устанавливает метод определения продуктов распада хлорофиллов — феофитинов a, a' и пирофеофитина a. Метод применим только к растительным жирам и маслам.
В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт [для датированной ссылки применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированной — последнее издание (включая все изменения)]:
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample (Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания)
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
3.1 пирофеофитин a (содержание в продуктах распада хлорофилла) [pyropheophytin a (content in chlorophyll degradation products)]: Масса пирофеофитина a, поделенная на сумму масс феофитинов a, a' и пирофеофитина a.
Отделение пигментов (хлорофиллов, феофитинов a и a', пирофеофитина a) от основной части липидов (триглицеридов) выполняют с помощью миниатюрной колоночной хроматографии на колонке с силикагелем. Элюат анализируют с помощью ВЭЖХ, используя силикагель RP18, а контроль разделенных компонентов проводят при длине волны 410 нм с помощью фотометрического детектора.
Для анализа некоторых растительных масел (например, рапсового) требуется более высокая чувствительность, которую можно достичь при использовании флуоресцентной детекции с длиной волны возбуждения 430 нм и длиной волны эмиссии 670 нм.
Возможно также прямое определение методом ВЭЖХ с флуоресцентной детекцией, описание приведено в приложении C.
Предупреждение — Следует уделить особое внимание правилам обращения с опасными веществами. Необходимо соблюдать технические, организационные и личные меры безопасности.
При проведении анализа, если не указано иное, необходимо использовать только реактивы признанной аналитической чистоты.
5.1 Хлорофилл a.
Примечание — Из-за отсутствия эталонных образцов феофитинов и пирофеофитина для получения данных продуктов распада используется хлорофилл a. Феофитины получают из раствора хлорофилла a за счет подкисления, а пирофеофитин — дополнительным нагреванием (> 100 °C) (См. [4]).
5.2 Ацетон.
5.3 Метанол.
5.4 Диэтиловый эфир.
5.5 Петролейный эфир, диапазон температур кипения от 40 °C до 60 °C.
5.6 н-Гептан или, в случае его отсутствия, н-гексан.
Предупреждение — Из-за токсичности н-гексана рекомендуется использовать н-гептан при его наличии.
5.7 Смесь растворителей петролейного эфира и диэтилового эфира, объемные доли: \phi_{C_{7}H_{7}BrMg} = 90\text{см}^{3}/100\text{см}^{3} ; \phi_{(CH_{3}CH_{2})_{2}O} = 10\text{см}^{3}/100\text{см}^{3} .
Используют стандартное лабораторное оборудование, в том числе перечисленное ниже.
6.1 Прибор ВЭЖХ
6.1.1 Система ВЭЖХ, состоящая из насоса, устройства для ввода пробы (петлевой дозатор объемом 20 мкл) или автоматического пробоотборника, фотометрического детектора для измерений при длине волны 410 нм или флуоресцентного детектора (с длиной волны возбуждения, \lambda_{ex} = 430\text{нм} и длиной волны эмиссии \lambda_{em} = 670\text{нм} ), а также системы расчета результатов.
6.1.2 Колонка ВЭЖХ длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,0 или 4,6 мм, заполненная частицами типа RP18 с обращенной фазой, размером 5 мкм.
следующие условия являются наиболее подходящими:
| неподвижная фаза: | partisil ODS 3, 5 мкм, 250 x 4,6 мм <1>; |
|---|---|
| подвижная фаза: | вода, метанол и ацетон (6.1.3); |
| скорость потока: | 1,0 см3/мин. |
6.1.3 Подвижная фаза, смесь воды, метанола и ацетона, объемные доли: \phi_{H_{2}O} = 4\text{см}^{3}/100\text{см}^{3} ; \phi_{CH_{3}OH} = 36\text{см}^{3}/100\text{см}^{3} ; \phi_{CH_{3}COCH_{3}} = 60\text{см}^{3}/100\text{см}^{3} . Все растворители должны быть класса ВЭЖХ.
6.2 Конусообразная колба вместимостью 25 см3 или 50 см3. (Amd.1:2016)
6.3 Лабораторные стаканы различной вместимости.
6.4 Ротационный испаритель с водяной баней.
6.5 Виалы, предназначенные для автоматического отбора проб, подходящей вместимости.
| 6.6 Картридж с силикагелем, 500 мг/6 см3 или 1000 мг/6 см3, 55 мкм, 7 нм или картридж с диолом, 3 см3. Примечание — Для разделения можно также использовать миниатюрные колонки с силикагелем собственного изготовления. Для этого берется Силикагель 60 для колоночной хроматографии (от 0,063 до 0,100 мм), очищенный до содержания влаги w = 5% (массовая доля). Активация силикагеля происходит за счет нагревания в течение ночи при температуре (160 +/- 5) °C. После нагревания силикагель помещают в эксикатор, чтобы охладить его, затем силикагель переносят в колбу с пробкой. Необходимо добавить 5% воды и встряхивать до тех пор, пока не появятся комочки и порошок не станет свободно плавать (1 ч в автоматическом встряхивателе). Перед использованием хранить кондиционированный силикагель в течение ночи 1 <2>. (Amd.1:2016) |
|---|
7.1 Отбор проб
Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в ISO 5555 [1].
В лабораторию следует направлять представительную пробу. Она не должна быть повреждена или изменена во время транспортирования или хранения.
7.2 Приготовление пробы для испытания
Готовят пробу для испытания в соответствии с ISO 661.
Важно — Пробы хранят в стеклянной таре в холодном и защищенном от света месте. После очистки тестовые растворы следует сразу проанализировать, чтобы избежать распада и окисления. Следует избегать контакта анализируемых проб с пластиковыми изделиями.
8.1 Взвешивают 300 мг пробы для испытания (7.2) в небольшом лабораторном стакане (6.3), растворяют в 1 см3 н-гептана или н-гексана (5.6) и выливают раствор на картридж с силикагелем (колонку с силикагелем) (6.6). Ополаскивают лабораторный стакан два раза по 1 см3 петролейного эфира (5.5), также выливая промывочную жидкость на картридж (колонку).
8.2 Как только растворитель стечет в верхнюю часть картриджа (колонки), элюируют неполярные вещества дважды по 5 см3 смеси растворителей петролейного/диэтилового эфиров (5.7).
8.3 Элюируют фракцию феофитина два раза 5 см3 ацетона (5.2) и собирают полученную фракцию в коническую колбу (6.2), защищенную от воздействия света.
8.4 Выпаривают растворитель досуха на ротационном испарителе (6.4) при температуре не выше 20 °C. Остаток растворяют в 200 мкл ацетона. Сразу вводят этот раствор в установку ВЭЖХ (6.1).
Важно — Феофитины очень неустойчивы и под воздействием света быстро окисляются.
8.5 Стандартные хроматограммы, полученные при использовании колонки с характеристиками, указанными в 6.1.2, приведены на рисунках A.1 и A.2.
9.1 Идентификация пиков
На хроматограмме могут наблюдаться пики пигментов хлорофилла a, хлорофилла b, соответствующих феофитинов и пирофеофитина. Следует ориентироваться на типичные хроматограммы, представленные на рисунках A.1 и A.2, поскольку другие пигменты не доступны в качестве стандартных образцов из-за их нестабильности. Для идентификации феофитинов a, a' и пирофеофитина a см. рисунки A.1 и A.2.
9.2 Расчет относительного содержания пирофеофитина a (Amd.1:2016)
Рассчитывают по площадям пиков относительные доли аналитов в растворе пробы. При применении настоящего метода принимается, что коэффициенты отклика всех пигментов равны. Массовую долю пирофеофитина a wPPPa, %, рассчитывают на основе соотношения площадей пиков следующим образом:
w_{PPPa} = \frac{A_{PPPa} \cdot 100}{(A_{PPPa} + \sum A_{PP})} , (1)
где APPPa — площадь пика пирофеофитина a;
\sum A_{PP} — сумма площадей пиков феофитинов a и a'.
Значения результатов указывают с точностью до первого десятичного знака.
10.1 Межлабораторные испытания
Результаты межлабораторных испытаний по определению точности метода приведены в приложении B. Значения, полученные на основании этих межлабораторных испытаний, не могут применяться к диапазонам и матрицам, отличным от приведенных в настоящем стандарте.
10.2 Повторяемость
Абсолютное расхождение между результатами двух независимых единичных испытаний, полученными при использовании одного и того же метода, на идентичном испытуемом материале, в одной лаборатории, одним оператором, на одном и том же оборудовании, в пределах короткого промежутка времени, не должно более чем в 5% случаев превышать значение предела повторяемости r, приведенное в таблице B.1.
10.3 Воспроизводимость
Абсолютное расхождение между результатами двух единичных испытаний, полученными при использовании одного и того же метода, на идентичном испытуемом материале, в разных лабораториях, разными операторами, на различном оборудовании, не должно более чем в 5% случаев превышать значение предела воспроизводимости R, приведенное в таблице B.1.
Протокол испытания должен включать:
a) всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;
b) используемый метод отбора проб, если он известен;
c) используемый метод испытания вместе со ссылкой на настоящий стандарт;
d) все подробности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, а также данные о любых инцидентах, которые могли повлиять на результат(ы) испытания;
e) полученный результат испытания;
f) окончательный результат, если соблюдены условия повторяемости.
ПРИМЕР СТАНДАРТНОЙ ХРОМАТОГРАММЫ
1 — феофитин a; 2 — феофитин a'; 3 — пирофеофитин; t — время элюирования, мин; V — разность потенциалов, вольт
Рисунок A.1 — Хроматограмма ВЭЖХ оливкового масла первого холодного отжима с массовой долей пирофеофитина 5% в продуктах распада хлорофилла
1 — феофитин a; 2 — феофитин a'; 3 — пирофеофитин; t — время элюирования, мин; V — разность потенциалов, вольт
Рисунок A.2 — Хроматограмма ВЭЖХ оливкового масла первого холодного отжима с массовой долей пирофеофитина 30% в продуктах распада хлорофилла
РЕЗУЛЬТАТЫ МЕЖЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЙ
Точность метода является результатом межлабораторного испытания, организованного Объединенным комитетом по анализу жиров, масел, жировых продуктов, сопутствующих продуктов и сырья (DIN/DGF), в котором приняли участие 16 лабораторий из Франции, Германии и Италии. Испытание было проведено в 2005 году на пяти образцах, и точность данных была рассчитана в соответствии с ISO 5725-1 [2] и ISO 5725-2 [3].
Обзор статистических результатов оливкового масла
ПРЯМОЙ МЕТОД ВЭЖХ С ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ДЕТЕКЦИЕЙ
Данное приложение описывает альтернативный метод. Масла подвергают ВЭЖХ без какой-либо предварительной обработки.
C.3.1 Система бинарной ВЭЖХ, состоящая из насоса, устройства для ввода пробы (петлевого дозатора объемом 20 мкл) или автоматического пробоотборника, флуоресцентного детектора ( \lambda_{ex} = 430\text{нм} и \lambda_{em} = 670\text{нм} ) и системы интеграции.
C.3.2 Колонка ВЭЖХ длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,0 или 4,6 мм, заполненная частицами типа RP18 с обращенной фазой, размером 5 мкм.
C.4.1 Переносят масла в виалу для ВЭЖХ из темного стекла.
C.4.2 Вводят лабораторную пробу в аппарат для ВЭЖХ (раздел C.3). Было установлено, что условия, перечисленные в таблице C.1, являются подходящими и позволяют получить типичную хроматограмму, как показано на рисунке C.1.
Программа элюирования со скоростью 1,0 см3/мин
1 — феофорбид; 2 — метилфеофорбид; 3 — феофитин b; 4 — феофитин a; 5 — феофитин a'; 6 — пирофеофитин; M — флуоресцентное детектирование, люкс; t — время элюирования, мин
Рисунок C.1 — Хроматограмма ВЭЖХ рапсового масла с пирофеофитином
СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ ССЫЛОЧНЫХ МЕЖДУНАРОДНЫХ СТАНДАРТОВ МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫМ СТАНДАРТАМ
| Обозначение ссылочного международного стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта |
| ISO 661 | IDT | ГОСТ ISO 661-2016 «Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания» |
| Примечание — В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандарта: - IDT — идентичный стандарт. | ||
| УДК 665.3:006.354 | МКС 67.200.10 | IDT |
| Ключевые слова: жиры растительные, масла растительные, продукты распада хлорофиллов, феофитины a, a', пирофеофитин a | ||