ГОСТ ISO 16931-2014. Межгосударственный стандарт. Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания полимеризованных триацилглицеринов методом высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ)
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "ГОСТ ISO 16931-2014. Межгосударственный стандарт. Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания полимеризованных триацилглицеринов методом высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ)". ГОСТ ISO 16931-2014. https://bukva.ai/docs/standart-gost-iso-16931-2014
(введен в действие Приказом Росстандарта от 24.05.2016 № 393-ст)
Примечание
Текст данного документа приведен с учетом поправки, опубликованной в «ИУС», № 6, 2019. Документ введен в действие с 1 июля 2017 года.
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 мая 2016 г. № 393-ст
ЖИРЫ И МАСЛА ЖИВОТНЫЕ И РАСТИТЕЛЬНЫЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПОЛИМЕРИЗОВАННЫХ ТРИАЦИЛГЛИЦЕРИНОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЭКСКЛЮЗИОННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (ВЭЭХ)
Animal and vegetable fats and oils. Determination of polymerized triacylglycerols by high-performance size-exclusion chromatography (HPSEC)
Дата введения 1 июля 2017 года
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским государственным предприятием «Казахстанский институт стандартизации и сертификации» и Техническим комитетом по стандартизации Республики Казахстан ТК 72 в области нанотехнологий
2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. № 45)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 мая 2016 г. № 393-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 16931-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен ISO 16931:2009 («Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания полимеризованных триацилглицеринов методом высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ)» («Animal and vegetable fats and oils — Determination of polymerized triacylglycerols by high-performance size-exclusion chromatography (HPSEC)», IDT).
Настоящий межгосударственный стандарт был разработан Техническим комитетом ISO/TC 34 «Пищевые продукты», Подкомитетом SC 11 «Животные и растительные жиры и масла».
Официальные экземпляры международных стандартов, на основе которых подготовлен настоящий межгосударственный стандарт и на которые даны ссылки, имеются в базе Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии. При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
Настоящий стандарт устанавливает метод с использованием высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ) для определения содержания, в массовых долях, полимеризованных триацилглицеринов (PTAGs) в маслах и жирах, которые содержат не менее 3% (по площадям пиков) этих полимеров. PTAGs (это двумерные и олигомерные триацилглицерины) образуются при нагреве жиров и масел, и этот метод применяют для оценки термической деградации обжарочных жиров после использования.
Этот метод применим к обжарочным жирам и маслам, которые были термически обработаны, при условии, что содержание PTAGs составляет не менее 3%. Данный метод применим для определения полимеризованных триацилглицеринов в жирах для животных кормов, в этом случае используемый метод экстрагирования может повлиять на результат.
Примечание — Подробное описание метода см. в [1].
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующий международный стандарт:
ISO 661 Animal and vegetable fats and oils. Preparation of test sample (Жиры и масла животные и растительные. Подготовка пробы для испытания).
В настоящем стандарте применяется следующий термин с соответствующим определением:
3.1 полимеризованные триацилглицерины (polymerized triacylglycerols; PTAGs): Составляющие нагретых жиров и масел, которые определяют методом ВЭЭХ в условиях, установленных в настоящем стандарте.
Примечание - Содержание PTAGs выражается как процентная массовая доля в граммах на 100 г продукта и рассчитывается как процент площади пика от суммы площадей всех пиков, обусловленных элюированными полимеризованными и моно-, ди- и триацилглицеринами (PTAGs, MAGs, DAGs и TAGs).
Пробу тщательно смешивают с тетрагидрофураном (THF) до образования однородной смеси, и PTAGs разделяют с применением гель-проникающей хроматографии в соответствии с молекулярным весом. Соединения проверяют с помощью рефрактометрического детектора.
Примечание - Для лучшего разрешения используют последовательно две колонки (2 x 300 мм).
Используют реактивы только признанной аналитической чистоты.
Примечание - Необходимо обратить внимание на регламент, который устанавливает процедуры работы с опасными веществами. Должны соблюдаться технические, организационные и индивидуальные меры безопасности.
5.1 Тетрагидрофуран (THF) для высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), стабилизированный бутилгидрокситолуолом (BHT), дегазированный, безводный. THF, используемый в качестве растворителя для пробы, должен иметь такое же содержание воды, как элюент; иначе может наблюдаться отрицательный пик.
5.2 Толуол для HPLC.
5.3 Оливковое масло первого холодного отжима в качестве стандартного образца: добавить от 100 до 300 мг масла к 10 см3 THF и смесь гомогенизировать.
Примечание - Оливковое масло первого холодного отжима не содержит PTAGs и может быть использовано для определения времени удержания мономерных TAGs.
Используют следующее лабораторное оборудование:
6.1 Сосуд для растворителя вместимостью от 500 до 1000 см3, с политетрафторэтиленовым линейным фильтром для подвижной фазы.
6.2 HPLC-насос, безымпульсный, с объемным расходом от 0,5 до 1,5 см3/мин.
6.3 Инжекционный клапан с петлей 20 мкл и соответствующим шприцем объемом от 50 до 100 мм3 или с соответствующей автоматической пипеткой.
6.4 Колонки из нержавеющей стали, 2 шт., длиной 300 мм, внутренним диаметром от 7,5 до 7,8 мм, наполненные гранулами высокоэффективного геля из сополимера стирола и дивинилбензола диаметром 5 мкм; размер пор от 10 до 50 нм <1>.
Примечание — Хроматограммы в приложении A показывают требуемое разрешение с двумя колонками.
<1> 1\text{нм } = 10\text{А}^{\circ} .
Рекомендуют использование защитной колонки. Эффективность колонки, определяемая как число n теоретических тарелок для мономерных TAGs, должна быть не менее 6000.
Температуру колонки поддерживают от 30 °C до 35 °C с помощью устройства управления.
Колонку держать в токе THF. При необходимости можно хранить в толуоле (5.2).
6.5 Детектор, рефрактометрический детектор с регулируемой температурой.
Идеальная температура для детектора должна быть выше температуры колонки (от 30 °C до 35 °C).
6.6 Система хроматографических данных (CDS) обеспечивает отображение и точный количественный анализ площадей пиков.
6.7 Шприцы одноразового использования объемом 1 см3.
6.8 Нейлоновые фильтры, размер пор 0,45 мм3 <2>.
<2> Nalgene 4 mm Syringe Filter является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства пользователей настоящего стандарта и не является поддержкой этого продукта. Можно использовать аналогичные продукты, если есть данные, что они дают такие же результаты.
6.9 HPLC-шприц объемом от 50 до 100 мм3.
Проба, поступающая в лабораторию, должна быть репрезентативной и не должна быть повреждена или изменена во время транспортировки или хранения.
Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте.
Рекомендованный метод отбора проб приведен в [2].
8 Приготовление пробы для испытания
Проба для испытания должна быть приготовлена согласно ISO 661.
9.1 Запуск HPLC-оборудования
Необходимо точно следовать рекомендациям изготовителей. Включить систему и закачать THF с объемным расходом от 0,5 до 1 мл/мин, чтобы прочистить всю систему до инжекционного клапана. Соединить колонку с инжекционным клапаном и промыть его, используя 30 см3 THF.
Присоединить колонку к детекторной ячейке для пробы. Наполнить контрольную ячейку THF.
Установить скорость элюента подвижной фазы от 0,5 до 1,0 см3/мин. Подождать, пока не будет получена соответствующая стабилизация системы (без существенного отклонения базовой линии).
Если используют колонку, рекомендованную в этом подразделе, приемлемая стабилизация системы наступит примерно через 15 мин. С другими наполнителями колонки стабилизация системы может быть более трудной.
Изменение подвижной фазы должно быть ступенчатым от толуола к THF, с применением различных смесей, каждая из которых содержит на 25% больше THF. Приемлемая стабилизация наступит примерно через 12 ч.
Установлены следующие оптимальные условия:
| Колонка: | PLgel <3> 10 нм, 2 x 300 мм x 7,6 мм, 5 мкм; |
|---|---|
| Элюент: | THF; |
| Течение: | 0,8 мл/мин; |
| Термостат колонки: | 35 °C; |
| Детектор: | RI (показатель преломления) установлен на 35 °C; |
| Инжекционный объем: | 20 мкл. |
<3> PLgel является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства пользователей данного стандарта и не является поддержкой этого продукта со стороны ISO. Можно использовать аналогичные продукты, если есть данные, что они дают такие же результаты.
9.2 Приготовление испытательного образца и анализ
Для приготовления раствора необходимо добавить пробу для испытания в количестве от 100 до 300 мг (раздел 8) к 10 см3 THF и гомогенизировать. При необходимости отфильтровать через нейлоновый фильтр (6.8). Ввести HPLC-шприцем (6.9) от 20 до 40 мм3 этого раствора.
10.1 Качественный анализ
Хроматограмма определения показывает основной пик, характерный для мономерных TAGs (относительная молекулярная масса около 900), и один или несколько меньших пиков с более коротким временем удержания, характерных для PTAGs (димеры и высшие олигомеры).
При соблюдении условий (9.1 и 9.2) TAGs и PTAGs могут быть разделены с хорошим разрешением (рисунки A.1 и A.2) даже при низких уровнях PTAGs.
В некоторых случаях (которые, очевидно, связаны со сложными явлениями деградации) картина пиков, предшествующих пикам триацилглицеринов, может быть менее четкой, с последующими трудностями для вычислений (рисунок A.2).
10.2 Количественный анализ
Вычисление проводят методом внутренней нормализации, предполагая, что все компоненты пробы, которые элюируются, имеют один и тот же коэффициент отклика. Важно иметь прямую базовую линию.
Массовую долю PTAGs, в граммах на 100 г продукта wPTAG, вычисляют по формуле
w_{PTAG} = \frac{\sum A_{PTAG}100}{\sum A_{tot}} ,
где APTAG — сумма площадей пиков для всех PTAGs;
Atot — сумма площадей пиков для всех ацилглицеринов (PTAGs, TAGs, DAGs and MAGs).
Результаты округляют до первого десятичного знака.
11.1 Межлабораторные испытания
Подробная информация о точности метода межлабораторных испытаний приведена в приложении B. Значения, полученные при проведении межлабораторных испытаний, не применимы к диапазонам концентраций и матрицам, кроме указанных в приложении B.
11.2 Сходимость
Если значения двух независимых результатов испытаний, полученных с использованием одного и того же метода на идентичном исследуемом материале в той же лаборатории одним и тем же оператором с использованием одного и того же оборудования в течение короткого промежутка времени, лежат в пределах диапазона средних значений, приведенных в таблице B.1, абсолютная разница между двумя полученными результатами испытаний должна не более чем в 5% случаев быть больше, чем предел повторяемости r, который в общем случае может быть вычислен путем линейной интерполяции из значений в таблице B.1.
11.3 Воспроизводимость
Если значения двух независимых результатов испытаний, полученных с использованием одного и того же метода на идентичном исследуемом материале в разных лабораториях разными операторами, использующими различное оборудование, лежат в пределах значений, указанных в таблице B.1, абсолютная разница между этими двумя результатами испытаний должна не более чем в 5% случаев быть больше, чем предел воспроизводимости R, который в общем случае может быть выведен путем линейной интерполяции из значений в таблице B.1.
Протокол испытаний должен содержать следующую информацию:
а) всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;
б) используемый метод отбора проб, если известно;
в) использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;
г) все рабочие подробности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, вместе с подробностями о любых случаях, которые могут повлиять на результат(ы);
е) полученный(ые) результат(ы) или, если воспроизводимость была проверена, конечный результат.
| Обозначение | |
| 1a/1b | поли-/олигомерные TAGs |
| 1b | двумерные TAGs |
| 2 | TAGs |
| 3 | DAGs |
| 4 | MAGs |
| 5 | жирные кислоты |
| t | время |
| V | отклик |
| Примечание — Условия указаны в 9.1. | |
Рисунок A.1 — ВЭЭХ испытываемой смеси TAGs, DAGs, MAGs и свободных жирных кислот
| Обозначение | |
| 1a/1b | поли-/олигомерные TAGs |
| 1b | двумерные TAGs |
| 2 | TAGs |
| 3 | DAGs |
| 4 | MAGs |
| 5 | жирные кислоты |
| t | время |
| V | отклик |
| Примечание 1 — Условия указаны в 9.1. Примечание 2 — Порядок элюирования определяется молекулярным размером и относительной молекулярной массой. Во время жарки DAGs не образуются. Однако пик от DAGs увеличивается из-за окисления, обусловленного термической деградацией TAGs до TAGs с двумя фрагментами, C7 или C8, и жирной кислотой C18. Относительная молекулярная масса равна массе DAGs. | |
Рисунок A.2 — ВЭЭХ TAGs и PTAGs: хроматограммы обжарочных масел с различными массовыми долями PTAGs
РЕЗУЛЬТАТЫ МЕЖЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЙ
Межлабораторные испытания, проведенные на международном уровне DIN и DGF в 2007 году с участием 15 лабораторий, каждая из которых получила по два результата для каждой пробы, дали статистические результаты (оцененные согласно [3] и [4]), приведенные в таблице B.1.
Результаты межлабораторных испытаний
Приложение ДА (информационное)
СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ МЕЖГОСУДАРСТВЕННОГО СТАНДАРТА ССЫЛОЧНОМУ МЕЖДУНАРОДНОМУ СТАНДАРТУ (МЕЖДУНАРОДНЫМ ДОКУМЕНТАМ)
1. ISO 6492, Корма для животных. Определение содержания жира (Animal feeding stuffs — Determination of fat content)
2. ISO 5555, Жиры и масла животные и растительные. Отбор проб (Animal and vegetable fats and oils — Sampling)
3. ISO 5725-1:1994, Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерения. Часть 1. Общие принципы и определения (Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 1: General principles and definitions)
4. ISO 5725-2:1994, Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерения. Часть 2. Основной метод для определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерения (Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method)
5. IUPAC Method 2.508, Определение полимеризованных триглицеридов в маслах и жирах с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа (Determination of polymerized triglycerides in oils and fats by high performance liquid chromatography. Pure Appl. Chem. 1991, 63, pp. 1168 — 1171. Available (2008-10-16) at: http://www.iupac.org/publications/pac/1991/pdf/6308x1163.pdf)
------------------------------------------------------------------