ГОСТ EN 15607-2015. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые. Определение D-биотина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
(введен в действие Приказом Росстандарта от 21.07.2015 № 949-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 № 236). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания» (ТР ТС 027/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 16.10.2018 № 168). Документ введен в действие с 01.01.2017.
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 июля 2015 г. № 949-ст
ОПРЕДЕЛЕНИЕ D-БИОТИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Foodstuffs. Determination of D-biotin by high performance liquid chromatography
Дата введения 1 января 2017 года
Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены».
1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» на основе аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 мая 2015 г. № 77)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 июля 2015 г. № 949-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15607-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 15607:2009 Foodstuffs — Determination of D-biotin by HPLC (Продукты пищевые. Определение D-биотина высокоэффективной жидкостной хроматографией).
Европейский региональный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 «Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы», секретариатом которого является DIN (Германия).
Перевод с немецкого языка (de).
Официальные экземпляры европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейского регионального стандарта, на который дана ссылка, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.
Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным европейским региональным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.
Степень соответствия — идентичная (IDT)
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.
Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания D-биотина в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Метод прошел валидацию при межлабораторных сравнительных испытаниях с использованием как обогащенных проб, так и проб с естественным содержанием D-биотина, а именно концентратов типа сухого завтрака — мюсли, сухого молока для грудных детей, лиофилизированных зеленых овощей с ветчиной, лиофилизированного куриного бульона и обогащенного апельсинового сока в диапазоне значений содержания D-биотина от 16 до 200 мкг/100 г (см. приложение B).
1 Настоящим методом может также определяться D-биоцитин, хотя ни в одной из проб, использовавшихся при межлабораторных сравнительных испытаниях, D-биоцитин не содержался. Тем не менее открываемость как D-биотина, так и D-биоцитина превышает 90% (см. [2] и [3]).
2 При анализе проб, содержащих куриные яйца, метод приводит к заниженным значениям содержания D-биотина.
Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Для датированных ссылок применимо только цитируемое издание. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая все изменения.
EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use — Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
Метод основан на выделении D-биотина из проб пищевых продуктов обработкой ферментами и количественном определении методом ВЭЖХ с послеколоночной дериватизацией ([2], [3]).
Комплексообразование D-биотина с белком авидином является весьма специфическим. Поэтому авидин, ковалентно связанный с флуоресцентной меткой — флуоресцеин-5-изотиоцианитом, используется в качестве реагента для послеколоночной дериватизации D-биотина ([4], [5]).
4.1 Общие положения
Если не указано иное, то при анализе используют только реактивы гарантированной чистоты и воды, по крайней мере, степени чистоты 1 по EN ISO 3696 или повторно перегнанную дистиллированную воду.
4.2 Требования к химическим реактивам и приготовление растворов
4.2.1 Метанол для ВЭЖХ, массовая доля основного вещества w(CH3OH) не менее 99,8%.
4.2.2 Раствор серной кислоты молярной концентрации c(H2SO4) = 1 моль/дм3.
4.2.3 Раствор серной кислоты молярной концентрации c(H2SO4) = 1,5 моль/дм3.
4.2.4 Лимонная кислота моногидрат, массовая доля основного вещества w(C6H8O7·H2O) не менее 99,7%.
4.2.5 Гидрофосфат натрия 2-водный, массовая доля основного вещества w(Na2HPO4·2H2O) не менее 99,8%.
4.2.6 Глутатион, массовая доля основного вещества w(C10H17N3O6S) не менее 98%.
4.2.7 Этилендиаминтетраацетат натрия (ЭДТА) 2-водный, массовая доля основного вещества w(C10H14N2Na2O8·2H2O) не менее 99%.
4.2.8 Гидрофосфат калия, массовая доля основного вещества w(K2HPO4) не менее 96%.
4.2.9 Дигидрофосфат калия, массовая доля основного вещества w(KH2PO4) не менее 99,5%.
4.2.10 Приготовление цитратного буферного раствора
0,462 г моногидрата лимонной кислоты (4.2.4) и 1,05 г гидрофосфата натрия 2-водного (4.2.5) растворяют в 450 см3 дистиллированной воды. Устанавливают значение pH раствора, равное 5,7, при помощи раствора серной кислоты (4.2.3) и затем разбавляют раствор до объема 500 см3.
Срок хранения раствора — 1 день.
4.2.11 Приготовление раствора глутатиона массовой концентрации \rho(C_{10}H_{17}N_{3}O_{6}S) = 10\text{г}/\text{дм}^{3}
30 мг глутатиона (4.2.6) растворяют в 3 см3 дистиллированной воды.
Срок хранения раствора — 1 день.
4.2.12 Приготовление раствора ЭДТА массовой концентрации \rho(C_{10}H_{14}N_{2}Na_{2}O_{8} \cdot 2H_{2}O) = 10\text{г}/\text{дм}^{3}
0,1 г ЭДТА (4.2.7) растворяют в 10 см3 дистиллированной воды.
Срок хранения раствора — 1 день.
4.2.13 Приготовление раствора гидрофосфата калия молярной концентрации c(K2HPO4) = 0,1 моль/дм3
17,4 г гидрофосфата калия (4.2.8) растворяют в 1000 см3 воды.
Срок хранения раствора — 2 дня.
4.2.14 Приготовление раствора дигидрофосфата калия молярной концентрации c(KH2PO4) = 0,1 моль/дм3
13,6 г дигидрофосфата калия (4.2.9) растворяют в 1000 см3 воды.
Срок хранения раствора — 2 дня.
4.2.15 Приготовление фосфатного буферного раствора с pH 6,0
Растворы гидрофосфата калия (4.2.13) и дигидрофосфата калия (4.2.14) смешивают в такой пропорции, чтобы значение pH приготовленного раствора составляло 6,0 (например, 30 объемных частей раствора по 4.2.13 и 70 объемных частей раствора по 4.2.14).
Срок хранения раствора — 7 дней при комнатной температуре.
4.2.16 Приготовление фосфатного буферного раствора с pH 7,0
Растворы гидрофосфата калия (4.2.13) и дигидрофосфата калия (4.2.14) смешивают в такой пропорции, чтобы значение pH приготовленного раствора составляло 7,0 (например, 40 объемных частей раствора по 4.2.13 и 60 объемных частей раствора по 4.2.14).
Срок хранения раствора — 7 дней при комнатной температуре.
4.2.17 Папаин порошкообразный (CAS 9001-73-4) с удельной каталитической активностью 15 нкат/мг <1> по отношению к этиловому эфиру N-бензоил-L-аргинина (BAEE) при pH 6,2 и 25 °C. Удельная каталитическая активность 15 нкат/мг соответствует 1 МЕ/мг (МЕ — международная единица каталитической активности).
<1> Катал (кат) является производной единицей системы СИ для каталитической активности. 1 катал — это такая каталитическая активность, при которой скорость реакции при заданных условиях увеличивается на 1 моль/с.
4.2.18 Раствор папаина массовой концентрации 20 г/дм3
4.2.18.1 Приготовление раствора
1 г порошкообразного папаина (4.2.17) растворяют в 50 см3 цитратного буферного раствора (4.2.10). Срок хранения раствора — 5 дней при 4 °C.
4.2.18.2 Проверка активности папаина
Активность папаина может быть проверена путем приготовления второго экстракта (см. 6.2) с удвоенным количеством фермента. Найденное содержание биотина должно соответствовать расчетному значению и ни в коем случае не превышать его.
Примечание - При межлабораторных сравнительных испытаниях был использован порошкообразный папаин, поставщиком которого была компания VWR International GmbH, Hilperstra\beta e 20а, 64295 Darmstadt, Ref.-Nr 26.146.180t <1>.
<1> Эта информация приведена исключительно для удобства пользователя настоящего стандарта и не является поддержкой указанного поставщика. Могут быть использованы аналогичные продукты, если доказано, что их применение приводит к идентичным результатам.
4.2.19 Конъюгат Авидин — флуоресцеинизотиоцианат (Avidin-FITC), содержащий 80% протеина (от 2 до 4 моль флуоресцеинизотиоцианата на каждый моль авидина).
4.2.20 Исходный раствор для послеколоночной дериватизации массовой концентрации \rho(Avidin - FITC) = 50\text{мг}/\text{см}^{3}
2,5 мг конъюгата авидин — флуоресцеинизотиоцианат (4.2.19) растворяют в 50 см3 фосфатного буферного раствора с pH 7,0 (4.2.16). Срок хранения раствора — 14 дней при 4 °C.
4.2.21 Рабочий раствор для послеколоночной дериватизации массовой концентрации \rho(Avidin - FITC) = 2\text{мг}/\text{см}^{3}
25 см3 исходного раствора для послеколоночной дериватизации (4.2.20) смешивают с 600 см3 фосфатного буферного раствора с pH 7,0 (4.2.16). Полученный раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм (5.5). Раствор устойчив при хранении в темноте в течение 8 ч.
4.2.22 Подвижная фаза для ВЭЖХ
80 объемных частей фосфатного буферного раствора с pH 6,0 (4.2.15) смешивают с 20 объемными частями метанола (4.2.1) и фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм (5.5).
4.2.23 Така-диастаза, выделенная из Aspergillus Oryzae, удельная каталитическая активность 1500 нкат/мг (соответствует 100 МЕ/мг), для проб с высоким содержанием крахмала.
4.3 Образцы сравнения
4.3.1 Общие положения
D-биотин и D-биоцитин могут быть приобретены у разных поставщиков. Необходимо убедиться в том, что пики D-биотина и D-биоцитина разделяются до базовой линии на хроматограмме раствора их смеси. Массовая доля основного вещества в образце сравнения биотина может быть установлена в соответствии с методом Европейской Фармакопеи [6].
4.3.2 D-Биотин, массовая доля основного вещества w(C10H16N2O3S) не менее 99%.
4.3.3 D-Биоцитин, массовая доля основного вещества w(C16H28N4O4S) не менее 98%.
4.4 Исходные растворы
4.4.1 Приготовление исходного раствора D-биотина массовой концентрации \rho(C_{10}H_{16}N_{2}O_{3}S) = 100\text{мкг}/\text{см}^{3}
Приблизительно 10 мг образца сравнения D-биотина (4.3.2), взвешенного с погрешностью +/- 0,1 мг, растворяют в 100 см3 дистиллированной воды. Растворение может продолжаться от 4 до 5 ч. Срок хранения раствора — 2 мес при минус 18 °C.
4.4.2 Приготовление исходного раствора D-биоцитина массовой концентрации \rho(C_{16}H_{28}N_{4}O_{4}S) = 100\text{мкг}/\text{см}^{3}
Приблизительно 10 мг образца сравнения D-биоцитина (4.3.3), взвешенного с погрешностью +/- 0,1 мг, растворяют в 100 см3 дистиллированной воды. Срок хранения раствора — 2 мес при минус 18 °C.
4.5 Стандартные растворы
4.5.1 Стандартные растворы D-биотина массовой концентрации \rho(C_{10}H_{16}N_{2}O_{3}S) от 0,05 до 0,30 мкг/см3
Приготавливают промежуточный раствор D-биотина путем разбавления 1 см3 исходного раствора (4.4.1) до 10 см3 дистиллированной водой. Затем готовят шесть градуировочных растворов, разбавляя 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 и 3,0 см3 промежуточного раствора до 100 см3 дистиллированной водой. Срок хранения растворов 1 день.
4.5.2 Стандартный раствор D-биоцитина массовой концентрации \rho(C_{16}H_{28}N_{4}O_{4}S) = 0,30\text{мкг}/\text{см}^{3}
Приготавливают промежуточный раствор путем разбавления 1 см3 исходного раствора (4.4.2) до 10 см3 дистиллированной водой. Затем 3,0 см3 промежуточного раствора разбавляют до 100 см3 дистиллированной воды. Срок хранения раствора 1 день.
5.1 Общие положения
При проведении испытания используют обычное лабораторное оборудование, в частности, следующее.
5.2 Термостат, поддерживающий температуру на уровне (37 +/- 2) °C.
5.3 Система для ВЭЖХ, состоящая из насоса, устройства для ввода проб, флуориметрического детектора, позволяющего проводить измерения при длине волны возбуждения 490 нм и длине волны регистрации 520 нм, и системы для сбора и обработки данных, например интегратора.
5.4 Обращенно-фазовые аналитические колонки, например LiChrosper® 100 RP-18 endcapped <1>
Приведенные ниже характеристики аналитической колонки обеспечивают разделение пиков аналитов до базовой линии:
Допускается использовать колонки иных размеров и с иным размером частиц. При этом параметры разделения на таких колонках должны быть проверены, с тем чтобы гарантировать получение сопоставимых результатов. Критерием эффективности подходящих аналитических колонок является разделение пиков аналитов до базовой линии.
5.5 Устройства для фильтрования
Устройства для фильтрования подвижной фазы большого и малого размера, снабженные, например, фильтрами с размером пор 0,45 мкм.
Примечание - Фильтрование подвижной фазы и растворов проб через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм перед применением или инжектированием продлевает срок жизни колонок.
5.6 Послеколоночный реактор, состоящий из системы для ввода реагента, например Т-образного смесителя со следующим за ним капиллярным реактором длиной 10 м, выполненным из политетрафторэтиленовой трубки внутреннего диаметра 0,5 мм, смотанной по спирали диаметром 14 мм, изготовленной, например, по [7] (модель KOT2). Капиллярные реакторы могут быть приобретены у компаний Супелко или MicroSolv Tech <1>.
<1> Эта информация приведена только для удобства пользователя настоящего стандарта и не означает поддержки этих продуктов. Допускается использование аналогичных продуктов, если доказано, что их использование приводит к аналогичному результату.
6.1 Подготовка испытуемой пробы
Испытуемую пробу гомогенизируют. Грубые материалы размалывают в подходящей мельнице и тщательно перемешивают. Чтобы исключить длительное воздействие высоких температур, пробу предварительно охлаждают.
6.2 Экстракция
Пробу массой от 0,5 до 10 г (что приблизительно соответствует содержанию D-биотина от 2 до 15 мкг) взвешивают с точностью до 1 мг и помещают в колбу Эрленмейера. К пробе добавляют 300 мм3 раствора глутатиона (4.2.11), 300 мм3 раствора ЭДТА (4.2.12), 30 см3 цитратного буферного раствора (4.2.10) и 3 см3 раствора папаина (4.2.18). При высоком содержании крахмала добавляют 100 мг така-диатазы (4.2.23). Смесь выдерживают в течение ночи в термостате при 37 °C при постоянном перемешивании. После охлаждения раствор переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и разбавляют дистиллированной водой до метки. Раствор перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр. Перед вводом в хроматограф его фильтруют еще раз через фильтр с размером пор 0,45 мкм (5.5).
Примечание - Фильтрование как подвижной фазы, так и растворов проб через мембранный фильтр перед применением или вводом в хроматограф продлевает срок службы колонок.
6.3 Проведение хроматографического анализа
Дозируют в ВЭЖХ-систему равные объемы градуировочных растворов и растворов проб. D-биотин идентифицируют путем сравнения времен удерживания пика на хроматограмме раствора пробы и градуировочных растворов. Идентификацию пиков можно также осуществить при помощи добавки образца сравнения к раствору пробы.
Из-за ограниченной стабильности раствора для послеколоночной дериватизации (4.2.21) ее регулярно проверяют при проведении серии измерений путем ввода градуировочного раствора. Приведенные ниже условия обеспечивают разделение и количественное определение D-биотина:
Хроматографическая колонка: LiChrosper® 100 RP-18 endcapped, 5 мкм, 250 x 4,0 мм;
Подвижная фаза: 80 объемных частей фосфатного буферного раствора с pH 6 (4.2.15) и 20 объемных частей метанола (4.2.1);
Расход подвижной фазы: 0,4 см3/мин;
Флуоресцентное детектирование: длина волны возбуждения 490 нм, длина волны регистрации 520 нм;
Расход реагента для послеколоночной дериватизации: 1 см3/мин.
Примечание - Этот метод может быть также использован для оценки содержания D-биоцитина.
При использовании метода внешнего стандарта определяют площади или высоты пиков и затем устанавливают градуировочную характеристику, аппроксимируемую уравнением второго порядка.
Содержание D-биотина, w, мкг/100 г пробы, вычисляют по формуле (1):
w = \frac{\rho \cdot V_{e}}{m_{s}} \cdot 100 , (1)
где \rho — массовая концентрация D-биотина в растворе пробы (6.2), мкг/см3, вычисленная при помощи градуировочной характеристики;
Ve — объем раствора пробы (6.2), см3;
100 — множитель для пересчета содержания D-биотина к 100 г пробы.
8.1 Общие положения
Данные по прецизионности хроматографического метода определения D-биотина были получены согласно ИСО 5725-2 [1] в 2000 году в ходе межлабораторных сравнительных испытаний, организованных Генеральной комиссией по унификации методов анализа, Франция [3]. Все участники межлабораторных испытаний использовали градуировочные характеристики, установленные по трем точкам.
Полученные статистические данные приведены в приложении B.
8.2 Предел повторяемости
Абсолютная разность между двумя единичными результатами испытаний, полученными одним исполнителем на идентичном исследуемом материале на одном и том же оборудовании в течение возможно короткого промежутка времени, может превышать предел повторяемости r не чаще, чем в 5% случаев. Значения для D-биотина приведены ниже:
8.3 Предел воспроизводимости
Абсолютная разность между двумя единичными результатами, полученными в двух лабораториях на идентичном исследуемом материале, может превышать предел воспроизводимости R не чаще, чем в 5% случаев. Значения приведены ниже:
Протокол испытаний должен содержать, по меньшей мере, следующие сведения:
a) всю информацию, необходимую для идентификации пробы;
b) ссылку на настоящий стандарт или используемый метод;
c) результаты испытаний с указанием единиц измерений, в которых результат испытаний выражен;
d) дату и способ отбора проб (если он известен);
g) все особенности, наблюдавшиеся при проведении испытаний;
h) любые применявшиеся операции, не оговоренные в методе или рассматриваемые как необязательные, которые могли повлиять на результат испытаний.
Y — интенсивность флуоресценции
Рисунок A.1 — Пример хроматографического разделения D-биотина и D-биоцитина в градуировочном растворе
Хроматографическая колонка: LiChrosper® 100 RP-18 endcapped, 5 мкм, 250 мм·4,0 мм
Подвижная фаза: смесь восьми объемных частей фосфатного буферного раствора с pH 6 (4.2.15) и двух объемных частей метанола (4.2.1)
Расход подвижной фазы: 0,4 см3/мин
Флуоресцентное детектирование: возбуждение при 490 нм, регистрация при 520 нм
Расход реагента для послеколоночной дериватизации: 1,0 см3/мин
Y — интенсивность флуоресценции
Рисунок A.2 — Пример хроматограммы D-биотина в пробе питания для грудных детей (сухое молоко)
Хроматографическая колонка: LiChrosper® 100 RP-18 endcapped, 5 мкм, 250 мм·4,0 мм
Подвижная фаза: смесь восьми объемных частей фосфатного буферного раствора с pH 6 (4.2.15) и двух объемных частей метанола (4.2.1)
Расход подвижной фазы: 0,4 см3/мин
Флуоресцентное детектирование: возбуждение при 490 нм, регистрация при 520 нм
Расход реагента для послеколоночной дериватизации: 1,0 см3/мин
Значения, приведенные в таблице B.1, были получены при межлабораторных сравнительных испытаниях, организованных в 2000 году Генеральной комиссией по унификации методов анализа, Франция [3], [8]. Эти испытания были проведены в соответствии со стандартом ИСО 5725-2 [1]. Все участники межлабораторных испытаний использовали градуировочные характеристики, установленные по трем точкам.
Данные по прецизионности для проб мюсли, питания для грудных детей (сухое молоко), витаминизированного апельсинового сока, лиофилизированного пюре (зеленые овощи с ветчиной) и лиофилизированного куриного бульона
| Проба | Мюсли | Питание для грудных детей (сухое молоко) | Витаминизированный апельсиновый сок | Лиофилизированное пюре (зеленые овощи с ветчиной) | Лиофилизированный куриный суп |
|---|---|---|---|---|---|
| Год проведения испытаний | 2000 | 2000 | 2000 | 2000 | 2000 |
| Число лабораторий | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| Число параллельных проб | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| Число лабораторий после исключения выбросов | 10 | 9 | 10 | 10 | 10 |
| Число лабораторий, результаты которых признаны выбросами | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 |
| Число принятых результатов | 20 | 18 | 20 | 20 | 20 |
| Общее среднее \overline{x} , мкг/100 г | 197 | 16,0 | 40,7 | 88,9 | 168 |
| Стандартное отклонение повторяемости sr, мкг/100 г | 8,85 | 1,85 | 0,89 | 3,18 | 6,84 |
| Относительное стандартное отклонение повторяемости RSDr, % | 4,5 | 11,6 | 2,2 | 3,6 | 4,1 |
| Предел повторяемости r (r = 2,8sr), мкг/100 г | 25,1 | 5,24 | 2,51 | 8,99 | 19,4 |
| Стандартное отклонение воспроизводимости sR, мкг/100 г | 34,2 | 4,76 | 8,05 | 15,6 | 24,6 |
| Относительное стандартное отклонение воспроизводимости RSDR, % | 7,4 | 29,8 | 19,8 | 17,5 | 14,6 |
| Предел воспроизводимости R (R = 2,8sR), мкг/100 г | 96,7 | 13,5 | 22,8 | 44,1 | 69,5 |
| Индекс Горвица [8] | 1,2 | 1,4 | 1,1 | 1,1 | 1,0 |
СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫХ СТАНДАРТОВ ССЫЛОЧНЫМ ЕВРОПЕЙСКИМ РЕГИОНАЛЬНЫМ СТАНДАРТАМ
| Обозначение и наименование европейского регионального стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование межгосударственного стандарта |
| EN ISO 3696 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний | - | <*> |
| <*> Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его утверждения рекомендуется использовать перевод на русский язык данного европейского регионального стандарта. Перевод данного европейского регионального стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов. | ||
1. ISO 5725-2, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method
2. Lahely, S., Ndaw, S., Arella, F., Hasselmann, C: Determination of biotin in foods by high-performance liquid chromatography with post-column derivatization and fluorimetric detection, Food chem., 65, 253 — 258 (1999)
3. Arella, F., Deborde, J.L, Bourguignon, J.B., Bergaentlze, M., Ndaw, S., Hasselmann, C: Liquid chromatographic determination of biotin in foods. A collaborative study, Ann. Fals. Exp. Chim., 93. 951, 193 — 200 (2000)
4. Hentz. N.G., Bachas, L.G.: Class-selective detection systems for liquid chromatography based on the streptavidin-biotin interaction, Anal. Chem., 67, 1014 — 1018 (1995)
5. Przyjazny, A., Hentz, N.G,. Bachas, L.G.: Sensitive and selective liquid chromatographic post-column reaction detection system for biotin and biocytin using an homogeneous fluorophore-linked assay, J. chromatogr., 654, 79 — 86 (1993)
6. European Pharmacopoeia 5.0, 01/2005:1073, Seite 110
7. Selavska, C.M., Jino. K.S., Krull, I.S.: Construction and comparison of open tubular reactors for post-column reaction detection in liquid chromatography. Anal. Chem., 59, 2221 — 2224 (1987)
8. Horwitz, W.: Evaluation of Analytical Methods used for Regulation of Foods and Drugs, Anal. Chem. 1982, 54 (1), 67A — 76A
------------------------------------------------------------------