ГОСТ 33460-2015. Межгосударственный стандарт. Продукция соковая. Определение ксилита, сорбита и маннита методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
(введен в действие Приказом Росстандарта от 19.11.2015 № 1881-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей» (ТР ТС 023/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 28.01.2020 № 19). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 № 236). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств» (ТР ТС 029/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 07.02.2018 № 21). Документ введен в действие с 01.01.2017.
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 ноября 2015 г. № 1881-ст
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КСИЛИТА, СОРБИТА И МАННИТА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Juice products. Determination of xylite, sorbite and mannitol by high performance liquid chromatography
Дата введения 1 января 2017 года
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены».
1 РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией «Российский союз производителей соков» (РСПС) при участии Общества с ограниченной ответственностью «Аналит Продактс» (ООО «Аналит Продактс»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. № 81-П)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 ноября 2015 г. № 1881-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33460-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.
Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары, сокосодержащие напитки, фруктовые и овощные концентрированные соки, пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы (далее — соковую продукцию), в том числе диетические и предназначенные для детского питания, и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии определения массовой концентрации ксилита, сорбита и маннита.
Диапазон измерений массовой концентрации ксилита, сорбита и маннита — от 2,6 до 100,0 г/дм3.
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79 <1> Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
<1> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2222-95 Метанол технический. Технические условия
ГОСТ ISO 3696-2013 <2> Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний
<2> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
ГОСТ ИСО 5725-1-2003 <3> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
<3> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
ГОСТ ИСО 5725-6-2003 <4> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
<4> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
ГОСТ ISO 7886-1-2011 Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования
ГОСТ 9805-84 Спирт изопропиловый. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия
ГОСТ 26313-2014 Продукты переработки фруктов и овощей. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 26671-2014 Продукты переработки фруктов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов
ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 31643-2012 Продукция соковая. Определение аскорбиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
Метод основан на хроматографическом разделении ксилита, сорбита и маннита на аминопропильной колонке в изократическом режиме с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и воды, с последующим детектированием с помощью рефрактометрического детектора после очистки раствора пробы от сопутствующих примесей твердофазной экстракцией.
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
Хроматограф жидкостный высокоэффективный <5>, состоящий:
- из насоса с нижним и верхним пределами рабочего давления от 0 до 40 МПа и обеспечивающий скорость подачи подвижной фазы не менее 1,8 — 2 см3/мин;
- крана петлевого дозатора с рабочим объемом петли 0,02 см3;
- колонки хроматографической длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм с размером частиц 5 мкм с аминопропильной неподвижной фазой <6>;
- детектора рефрактометрического с пределом допускаемого значения относительного среднеквадратического отклонения выходного сигнала по площади или высоте пика не более 2%;
- компьютера с установленным программным обеспечением для управления хроматографом и обработки результатов измерений.
<5> Например, хроматограф жидкостный Shimadzu LC-20 Prominence. Данная информация не является рекламой указанного оборудования и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования хроматографов других типов.
<6> Например, колонка Zorbax Carbohydrate 250 x 4,6 мм, зернение 5 мкм, производства фирмы Agilent, с соответствующей предколонкой 12,5 x 4,6 мм, 5 мкм и держателем предколонки. Данная информация не является рекламой указанного оборудования, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования хроматографических колонок иных типоразмеров при условии соблюдения требований к эффективности разделения (см. приложение А).
Весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76-1, высокого класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г с поверочным интервалом весов +/- 0,001 г.
Микрошприцы вместимостью 100, 250 и 500 мм3 с пределами допускаемой относительной погрешности дозирования +/- 2,0%.
Цилиндры 1-20-2 по ГОСТ 1770.
Колбы мерные 1-10-2, 1-50-2, 1-100-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 1-2-1-0,5, 1-2-1-1, 1-2-1-5, 1-2-1-10 по ГОСТ 29227.
Емкости для жидких проб (виалы) со вставками и завинчивающимися крышками вместимостью 2 — 6 см3.
Картриджи (колонки) для твердофазной экстракции, заполненные сорбентом C18 <7>.
<7> Например, картриджи для твердофазной экстракции Strata SDB-L фирмы Phenomenex, кат. № 8B-S014-HCH. Данная информация не является рекламой указанного оборудования и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования картриджей других типов.
Установка для твердофазной экстракции (манифольд вакуумный) любого типа.
Дозаторы пипеточные одноканальные переменного объема от 100 до 1000 мм3 с метрологическими характеристиками по ГОСТ 28311, снабженные сменными наконечниками.
Фильтры мембранные из нейлона с диаметром пор 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы и проб.
Шприц медицинский одноразовый по ГОСТ ISO 7886-1.
Установка лабораторная для вакуумной фильтрации с насосом.
Центрифуга настольная с относительным центробежным ускорением ротора не менее 1000 g, снабженная соответствующими адаптерами для пробирок.
Пробирки полимерные центрифужные с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 см3.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Ацетонитрил для ВЭЖХ, с содержанием основного вещества не менее 99,9%.
Ксилит (ксилитол), с массовой долей основного вещества не менее 98%.
D(-)-Маннит, с массовой долей основного вещества не менее 98%.
Сорбит (сорбитол), с массовой долей основного вещества не менее 98%.
Спирт изопропиловый по ГОСТ 9805, х.ч.
Спирт этиловый технический по ГОСТ 17299 или ректификованный по ГОСТ 5962.
Метанол технический марки Б по ГОСТ 2222.
Вода по ГОСТ ISO 3696, не ниже второй степени чистоты.
Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательного оборудования с техническими характеристиками, а также посуды, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.
5.1 Отбор проб — по ГОСТ 26313. Подготовка лабораторных проб — по ГОСТ 26671.
5.2 Подготовку проб осветленной соковой продукции проводят по ГОСТ 31643 (пункт 6.2.1).
Подготовку проб соковой продукции с объемной долей мякоти до 10,0% включительно или содержащих нерастворимые в воде вещества предварительно разбавляют водой ГОСТ ISO 3696 в соотношении 1:5 для осветления раствора. Для этого в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см3 мерным цилиндром по ГОСТ 1770 отбирают 10 см3 пробы и доводят водой до метки. После этого пробу гомогенизируют, тщательно перемешивая содержимое стеклянной палочкой, и центрифугируют с фактором разделения не менее 1000 g в течение 15 мин. В случае неполного осаждения нерастворимых в воде частиц пробу вновь фильтруют через обеззоленный фильтр или центрифугируют в течение 15 мин.
Концентрированную соковую продукцию разбавляют водой в пять раз весовым методом и далее проводят подготовку по ГОСТ 31643 (пункты 6.2.1, 6.2.2).
5.3 Очистка проб на картридже
Раствор лабораторной пробы, полученный по 5.2, делят на две части и каждую очищают на картриджах, заполненных обращенно-фазовым сорбентом с помощью вакуумного манифольда в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
Предварительно проводят активацию сорбента в картриджах. Для этого картридж промывают сначала 2 см3 этанола (метанола, изопропанола), затем последовательно 4 см3 воды и 5 см3 пробы, подготовленной по 5.2.
Следующую порцию подготовленной по 5.2 аликвотной части пробы объемом от 2 до 3 см3 пропускают через картридж со скоростью приблизительно 1 см3/мин и собирают в приемник.
Полученный после очистки раствор пробы отфильтровывают через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
6 Подготовка к проведению измерений
6.1 Подготовка хроматографа к работе
Включение и подготовку прибора к работе, вывод его на режим и выключение по окончании работы осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации и условиями, указанными в 6.2.
Перед проведением измерений хроматографическую систему кондиционируют подвижной фазой до установления стабильной базовой линии в условиях проведения измерений.
6.2 Условия хроматографических измерений
При проведении хроматографических измерений соблюдают следующие условия: - температура термостата колонки, °C........(30 +/- 5); - режим элюирования.........................изократический; - объем вводимой пробы, мм3.................20; - скорость подачи подвижной фазы, см3/мин...1,8 — 2,0 (ориентировочное значение); - элюент....................................смесь ацетонитрил:вода в объемном соотношении 85:15; - температура ячейки детектора, °C..........30; - время измерений, мин......................25.
В зависимости от типа применяемого хроматографа и хроматографической колонки допускается изменение условий измерений, обеспечивающих требуемое разделение компонентов пробы в порядке, указанном в настоящем разделе.
6.3 Приготовление подвижной фазы для жидкостной хроматографии
Смешивают ацетонитрил и воду в объемном соотношении 85:15. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют под вакуумом в течение 15 мин.
Раствор хранят в течение 30 дней в холодильнике при температуре не выше 10 °C, при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ. Перед использованием подвижную фазу дегазируют путем фильтрации под вакуумом или другим способом.
7 Условия проведения измерений
При подготовке к проведению измерений и проведении измерений соблюдают следующие условия: - температура окружающего воздуха, °C.....(25 +/- 5); - атмосферное давление, кПа...............(97 +/- 10); - относительная влажность, %..............не более 80; - напряжение в питающей сети, В...........(220 +/- 20); - частота тока в питающей сети, Гц........(50 +/- 1).
В помещениях, предназначенных для проведения измерений, не должно быть загрязненности воздуха рабочей зоны пылью, агрессивными веществами, должны отсутствовать вибрация или другие факторы, влияющие на измерения массы и объема.
8.1 Приготовление градуировочных растворов
8.1.1 Приготовление основного градуировочного раствора с массовой концентрацией ксилита, сорбита и маннита 100 мг/см3
Взвешивают по (1,000 +/- 0,001) г ксилита, сорбита и маннита помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3 и добавляют, обмывая стенки колбы, от 2 до 5 см3 воды по ГОСТ ISO 3696, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят объем раствора в колбе до метки водой.
Срок хранения полученных растворов в холодильнике при температуре не выше 4 °C в герметично закрытой колбе — не более двух недель.
Фактическую концентрацию каждого компонента в основном растворе Cгр,исх, мг/см3, вычисляют по формуле
C_{\text{гр},\text{исх}} = \frac{m \cdot \omega \cdot 1000}{V \cdot 100} , (1)
где m — масса соответствующего компонента, г;
\omega — массовая доля определяемого компонента (ксилита, сорбита или маннита) (см. раздел 4), %;
1000 — коэффициент пересчета грамм через милиграммы;
V — объем мерной колбы, взятой для приготовления раствора, см3;
100 — коэффициент пересчета процентов в долю единицы.
8.1.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов
Из основного раствора последовательным разбавлением в мерных колбах вместимостью 10 см3 готовят градуировочные растворы по пяти уровням в порядке, указанном в таблице 1.
Приготовление рабочих градуировочных растворов для определения массовой концентрации ксилита, сорбита и маннита
| № градуировочного раствора | Компоненты | Объем мерной колбы, см3 | Способ приготовления | Массовая концентрация в полученном растворе, мг/см3 |
| 5 | Ксилит | 10 | В мерную колбу помещают 5 см3 раствора, приготовленного по 8.1.1, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 50 |
| Сорбит | ||||
| Маннит | ||||
| 4 | Ксилит | 10 | В мерную колбу приливают 1 см3 раствора, приготовленного по 8.1.1, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 10 |
| Сорбит | ||||
| Маннит | ||||
| 3 | Ксилит | 10 | В мерную колбу приливают 1 см3 градуировочного раствора № 5, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 5 |
| Сорбит | ||||
| Маннит | ||||
| 2 | Ксилит | 10 | В мерную колбу приливают 1 см3 раствора № 4, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 1 |
| Сорбит | ||||
| Маннит | ||||
| 1 | Ксилит | 100 | В мерную колбу приливают 1 см3 раствора № 3, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 0,5 |
| Сорбит | ||||
| Маннит |
Рабочие градуировочные растворы готовят непосредственно перед выполнением измерений.
8.2 Построение градуировочной зависимости
Построение и обработку градуировочной зависимости выполняют методом абсолютной градуировки с помощью программного обеспечения хроматографа.
Хроматограммы обрабатывают в соответствии с руководством пользователя программного обеспечения хроматографа. Компоненты идентифицируют по абсолютным значениям времени удерживания.
Проводят измерения всех градуировочных растворов, проводя по три параллельных измерения для каждого уровня, в порядке возрастания массовой концентрации компонентов, полностью заполняя петлю инжектора в условиях, указанных в 6.2. Регистрируют площади пиков, проверяя приемлемость выходных сигналов.
Выходные сигналы признают приемлемыми, если относительное среднеквадратичное отклонение (СКО), вычисленное с помощью программного обеспечения, при построении градуировочной характеристики не превышает 5%. В случае превышения — измерения повторяют.
Пример хроматограммы градуировочного раствора приведен в приложении Б, рисунок Б.1.
Градуировочную характеристику устанавливают с помощью программного обеспечения хроматографа (методом наименьших квадратов), в виде линейной зависимости средней площади пиков сорбита, ксилита и маннита \overline{S_{i}} , мВ·с, и их массовой концентрации в градуировочном растворе Cгр,i, мг/см3, следующего вида
\overline{S_{i}} = k_{\text{гр},i} \cdot C_{\text{гр},i} , (2)
где kгр,i — градуировочный коэффициент, вычисленный автоматически с помощью программного обеспечения хроматографа по методу наименьших квадратов, мВ·с/(мг/см3);
Cгр,i — массовая концентрация компонента в i-ом градуировочном растворе, мг/см3.
Градуировочную характеристику считают линейной, если коэффициент корреляции составляет не менее 0,995.
8.3 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят ежедневно перед началом измерений.
Проводят измерения двух градуировочных растворов, приготовленных по 8.1.2, с массовой концентрацией близкой к началу и концу диапазона измерений в тех же условиях, в которых была установлена градуировочная характеристика.
Градуировочную характеристику считают стабильной в случае, если для обоих растворов выполняется условие
\frac{|C_{i\text{изм}} - C_{i\text{гр}}|}{C_{i\text{гр}}} \cdot 100 \leq K_{i\text{гр}} , (3)
где Ciизм — массовая концентрация компонента в i-м градуировочном растворе, вычисленная по градуировочной характеристике, мг/см3;
Ciгр — массовая концентрация компонента в i-м градуировочном растворе (фактическое значение), мг/см3;
100 — коэффициент пересчета в проценты;
Для ксилита Ki,гр = 5%, маннита Ki,гр = 6%, сорбита Ki,гр = 5%.
Если условие стабильности (3) не выполняется только для одного градуировочного раствора, то выполняют повторное измерение этого раствора с целью исключения результата, содержащего ошибку.
Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других растворов для градуировки. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики градуировку проводят заново.
8.5 Измерение раствора пробы
Проводят измерения растворов проб, очищенных по 5.3, два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 5725-1 (подраздел 3.14).
Значения площадей пиков на хроматограмме раствора пробы используют для вычисления массовых концентраций ксилита, сорбита, маннита (см. раздел 9) при условии, что они не выходят за верхнюю границу диапазона градуировочной характеристики.
Регистрируют на хроматограммах пики, соответствующие временам удерживания ксилита, сорбита и маннита, найденных при измерении градуировочных растворов.
Если массовая концентрация ксилита, сорбита, маннита на хроматограммах раствора пробы выходит за верхнюю границу диапазона градуировки хроматографа, то пробу разбавляют водой так, чтобы результат измерений не превышал верхнюю границу градуировочной зависимости и проводят повторное измерение.
При разбавлении регистрируют объем аликвоты раствора пробы (V1, см3) и конечный объем разбавленного раствора (вместимость мерной колбы) (V2, см3).
Типовые хроматограммы ксилита, сорбита и маннита в соковой продукции приведены в приложении Б, рисунки Б.2 - Б.3.
9 Обработка и оформление результатов измерений
9.1 В соответствии с данными, полученными при измерениях градуировочных растворов, оформляют таблицу пиков с использованием программного обеспечения хроматографа.
Обработку хроматограмм проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных с использованием градуировочной зависимости, с учетом степени разведения раствора пробы.
9.2 Массовую концентрацию ксилита, сорбита и маннита C, г/дм3, вычисляют по формуле
C = \frac{C_{i} \cdot V_{2}}{V_{1}} , (4)
где Ci — массовая концентрация компонента в пробе, найденная по градуировочному графику, мг/см3;
V2 — вместимость мерной колбы, взятой для разбавления раствора пробы, см3;
9.3 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если выполняется условие приемлемости
\frac{2 \cdot |C_{i1} - C_{i2}| \cdot 100}{(C_{i1} + C_{i2})} \leq r_{\text{отн}} , (5)
где Ci1, Ci2 - результаты параллельных измерений массовой концентрации ксилита, сорбита и маннита, г/дм3;
100 — коэффициент пересчета в проценты;
rотн — значение предела повторяемости (см. таблицу 3), %.
9.4 В случае превышения предела повторяемости rотн получают в соответствии с ГОСТ ISO 5725-6 (подпунктом 5.2.2.1) еще два результата параллельных измерений. За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов четырех параллельных измерений, если относительное расхождение между ними при соблюдении условий ГОСТ ISO 5725-6 (раздел 5) не превышает значения критического диапазона CR0,95 (4), указанного в таблице 3.
9.5 Если расхождение полученных четырех результатов параллельных измерений больше CR0,95 (4), то целесообразно приостановить измерения для выяснения причин превышения критического диапазона.
9.6 Результаты измерений в документах, предусматривающих их использование, представляют согласно ГОСТ ИСО/МЭК 17025 с указанием метода измерений и настоящего стандарта в виде
\overline{\text{С}} \pm 0,01 \cdot \delta \cdot \overline{\text{С}}\text{при }P = 0,95 ,
где \overline{\text{С}} — среднеарифметическое значение результатов параллельных измерений ксилита, сорбита и маннита, признанных приемлемыми по условиям 9.3, 9.4, г/дм3;
\delta — границы относительной погрешности измерений (см. таблицу 2), %.
Если массовая концентрация ксилита, сорбита и маннита выходит за пределы границ диапазона измерений, проводят следующую запись в журнале: «Массовая концентрация ксилита менее 2,6 г/дм3», «Массовая концентрация сорбита менее 2,6 г/дм3», «Массовая концентрация маннита менее 2,6 г/дм3».
Вычисления проводят до третьего десятичного знака. Числовое значение окончательного результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение границ абсолютной погрешности, содержащей не более двух значащих цифр.
10 Метрологические характеристики
При соблюдении всех условий проведения измерений метод обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблице 2.
Диапазоны измерения концентраций ксилита, сорбита, маннита и значения показателей точности и прецизионности метода
Значения пределов повторяемости и воспроизводимости метода приведены в таблице 3.
Значения пределов повторяемости, воспроизводимости и критического диапазона CR0,95(4)отн при доверительной вероятности P = 0,95
11 Контроль результатов измерений при реализации метода
Контроль результатов измерений в лаборатории предусматривает проведение контроля стабильности результатов измерений с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6. Периодичность контроля и процедуры контроля регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.
Контроль результатов измерений в лаборатории при реализации метода выполняют по ГОСТ ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического отклонения промежуточной прецизионности по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 6.2.3) и показателя правильности по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 6.2.4). Проверку стабильности проводят с применением контрольных карт Шухарта.
Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.
При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.
12.1 Условия безопасного проведения работ
При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности — по ГОСТ 12.1.004 и ГОСТ 12.1.018, электробезопасности при работе с электроустановками — по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на хроматограф.
12.2 Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются инженеры-химики, лаборанты, имеющие высшее или средне-специальное образование, опыт работы с данным оборудованием и знакомые с настоящим методом.
Первое применение метода в лаборатории должно проводиться под руководством специалиста, владеющего теорией высокоэффективной жидкостной хроматографии и имеющего практические навыки в этой области.
Построение градуировочной характеристики, приготовление градуировочных растворов, проведение внутреннего контроля следует проводить специалисту высшей квалификации, имеющего стаж работы в данной области не менее двух лет.
ПРОВЕРКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ КОЛОНКИ
Проверку оптимальности условий хроматографического разделения осуществляют путем хроматографического анализа градуировочного раствора № 4 по таблице 1 (см. 8.1.2).
Данный раствор готовят из основных растворов ксилита, сорбита, маннита по 8.1.2.
Эффективность хроматографического разделения признается удовлетворительной, если коэффициент разрешения пиков ксилита, сорбита, маннита составляет не менее 1,3, а число эффективных теоретических тарелок, вычисленное по пику ксилита, составляет не менее 4000. В противном случае для достижения требуемой эффективности разделения экспериментальным путем подбирают новые условия хроматографического измерения, т.е. новый состав подвижной фазы (объемную долю ацетонитрила в ней) и скорость ее потока. При невозможности достижения требуемых условий эффективности хроматографического разделения проводят испытания других хроматографических колонок аналогичным образом.
Контроль эффективности хроматографического разделения проводят не реже одного раза в две недели.
ПРИМЕРЫ ХРОМАТОГРАММ СТАНДАРТНОГО РАСТВОРА КСИЛИТА, СОРБИТА И МАННИТА В СОКОВОЙ ПРОДУКЦИИ
Б.1 Примеры хроматограмм стандартного раствора ксилита, сорбита и маннита в соковой продукции представлены на рисунках Б.1 - Б.3.
Рисунок Б.1 — Пример хроматограммы стандартного раствора ксилита, сорбита, маннита в воде с концентрациями соединений в растворе по 5 мг/см3
Рисунок Б.2 — Пример хроматограммы яблочного сока с добавкой стандартного раствора ксилита, сорбита, маннита с концентрациями соединений по 5 мг/см3
Рисунок Б.3 — Пример хроматограммы стандартного раствора ксилита, сорбита, маннита в воде с концентрациями соединений в растворе по 50 мг/см3