---
title: "\"ГОСТ 31781-2012. Межгосударственный стандарт. Рыба и продукция из нее. Видовая идентификация рыбы методом изоэлектрофокусирования в полиакриламидном геле\""
number: "ГОСТ 31781-2012"
issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/standart-gost-31781-2012"
---

## "ГОСТ 31781-2012. Межгосударственный стандарт. Рыба и продукция из нее. Видовая идентификация рыбы методом изоэлектрофокусирования в полиакриламидном геле"

# "ГОСТ 31781-2012. Межгосударственный стандарт. Рыба и продукция из нее. Видовая идентификация рыбы методом изоэлектрофокусирования в полиакриламидном геле"

(введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1626-ст)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия - национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Евразийского экономического союза "О безопасности рыбы и рыбной продукции" (ТР ЕАЭС 040/2016) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 19.07.2022 N 107).
> Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Евразийского экономического союза "О безопасности рыбы и рыбной продукции" (ТР ЕАЭС 040/2016) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 29.08.2017 N 106).
> Документ [введен](#p100009) в действие с 01.07.2013.


<a id="p100001"></a>Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 29 ноября 2012 г. N 1626-ст

<a id="p100002"></a>**МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ**

<a id="p100003"></a>**РЫБА И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НЕЕ**

<a id="p100004"></a>**ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЫБЫ МЕТОДОМ**
**ИЗОЭЛЕКТРОФОКУСИРОВАНИЯ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ**

<a id="p100005"></a>Fish and products from it.
Species identification of fish by IEF method

<a id="p100006"></a>**ГОСТ 31781-2012**

<a id="p100007"></a>Группа Н29

<a id="p100008"></a>МКС 67.120.30

<a id="p100009"></a>Дата введения
1 июля 2013 года


### <a id="p100010"></a>Предисловие


<a id="p100011"></a>Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"


### <a id="p100012"></a>Сведения о стандарте


<a id="p100013"></a>1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Научно-исследовательский и проектно-конструкторский институт по развитию и эксплуатации флота" (ОАО "Гипрорыбфлот")
<a id="p100014"></a>2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)
<a id="p100015"></a>3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 октября 2012 г. N 51)
<a id="p100016"></a>За принятие проголосовали:


| <a id="p100017"></a>Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | <a id="p100018"></a>Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | <a id="p100019"></a>Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100020"></a>Армения | <a id="p100021"></a>AM | <a id="p100022"></a>Минэкономики Республики Армения |
| <a id="p100023"></a>Беларусь | <a id="p100024"></a>BY | <a id="p100025"></a>Госстандарт Республики Беларусь |
| <a id="p100026"></a>Киргизия | <a id="p100027"></a>KG | <a id="p100028"></a>Кыргызстандарт |
| <a id="p100029"></a>Молдова | <a id="p100030"></a>MD | <a id="p100031"></a>Молдова-Стандарт |
| <a id="p100032"></a>Россия | <a id="p100033"></a>RU | <a id="p100034"></a>Росстандарт |
| <a id="p100035"></a>Узбекистан | <a id="p100036"></a>UZ | <a id="p100037"></a>Узстандарт |


<a id="p100038"></a>4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1626-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31781-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
<a id="p100039"></a>5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52840-2007
<a id="p100040"></a>**6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ**

<a id="p100041"></a>Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет


### <a id="p100042"></a>1 Область применения


<a id="p100043"></a>Настоящий стандарт распространяется на рыбу-сырец <*>, мороженые рыбу, филе рыбы и рыбный фарш, используемые для приготовления пищевой продукции, и устанавливает метод изоэлектрофокусирования (ИЭФ) в полиакриламидном геле для их видовой идентификации.

<a id="p100044"></a>

---

<a id="p100045"></a><*> Охлажденная (без применения льда и воды).


### <a id="p100046"></a>2 Нормативные ссылки


<a id="p100047"></a>В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
<a id="p100048"></a>ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
<a id="p100049"></a>ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
<a id="p100050"></a>ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
<a id="p100051"></a>ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
<a id="p100052"></a>ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
<a id="p100053"></a>ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
<a id="p100054"></a>ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия
<a id="p100055"></a>[ГОСТ 244-76](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-244-76) Натрия тиосульфат кристаллический. Технические условия
<a id="p100056"></a>ГОСТ 1277-75 Реактивы. Серебро азотнокислое. Технические условия
<a id="p100057"></a>[ГОСТ 1625-89](https://bukva.ai/docs/gost-1625-89) Формалин технический. Технические условия
<a id="p100058"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
<a id="p100059"></a>[ГОСТ 4165-78](https://bukva.ai/docs/gost-4165-78) Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия
<a id="p100060"></a>[ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67) Спирт этиловый ректификованный. Технические условия
<a id="p100061"></a>[ГОСТ 6259-75](https://bukva.ai/docs/gost-6259-75) Реактивы. Глицерин. Технические условия
<a id="p100062"></a>ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
<a id="p100063"></a>[ГОСТ 7631-85](https://bukva.ai/docs/gost-7631-85) Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний
<a id="p100064"></a>ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
<a id="p100065"></a>ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
<a id="p100066"></a>[ГОСТ 12738-77](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-12738-77) Колбы стеклянные с градуированной горловиной. Технические условия
<a id="p100067"></a>[ГОСТ 19814-74](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-19814-74) Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия
<a id="p100068"></a>ГОСТ 24104-2001 <*> Весы лабораторные. Общие технические требования

<a id="p100069"></a>

---

<a id="p100070"></a><*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

<a id="p100071"></a>ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
<a id="p100072"></a>ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
<a id="p100073"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
<a id="p100074"></a>*Примечание* - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты", опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.


### <a id="p100075"></a>3 Термины и определения


<a id="p100076"></a>В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:
<a id="p100077"></a>3.1 изоэлектрическая точка белка: Значение водородного показателя (pH), при котором заряд молекулы белка равен нулю.
<a id="p100078"></a>3.2 маркерные белки: Основные белки, характерные (видоспецифичные) для каждого вида анализируемого объекта.
<a id="p100079"></a>3.3 стандартные белки: Белки с известной изоэлектрической точкой.
<a id="p100080"></a>3.4 референс-образец: Образец рыбы, идентифицированный по морфологическим признакам.
<a id="p100081"></a>3.5 саркоплазматические белки: Белки, входящие в состав саркоплазмы клеток мышечной ткани.
<a id="p100082"></a>*Примечание* - На рыбу, отобранную для получения образца, должна быть оформленная декларация о соответствии или сертификат соответствия с указанием ее научного названия (на латинском языке). Образец хранят в герметично упакованном виде при температуре не выше минус 18 °C.


### <a id="p100083"></a>4 Сущность метода


<a id="p100084"></a>Метод основан на видовой специфичности саркоплазматических белков и заключается в разделении молекул белков по их изоэлектрическим точкам в полиакриламидном геле. Идентификация проводится путем сравнения картин распределения белковых полос анализируемого образца с референс-образцом для данного вида.


### <a id="p100085"></a>5 Оборудование и материалы



#### <a id="p100086"></a>5.1 Оборудование

<a id="p100087"></a>5.1.1 Универсальная модульная автоматизированная система для разделения белков с использованием готовых гелевых сред в программируемом режиме и автоматической обработкой гелей (фиксация, окрашивание, отмывка), с контролем условий разделения (температуры, параметров тока) со следующими программными параметрами: напряжение от 10 до 2000 В, сила тока от 0,1 до 50,0 мА, мощность от 0,1 до 7,0 Вт, температура от 0 °C до 70 °C или иное электрофоретическое оборудование для разделения белков методом ИЭФ.
<a id="p100088"></a>5.1.2 Центрифуга рефрижераторная с частотой вращения не менее 13000 мин-1.

##### <a id="p100089"></a>5.1.3 Пробирки центрифужные вместимостью 50 и 10 см3.


##### <a id="p100090"></a>5.1.4 Гели полиакриламидные (5% T, 3% C), содержащие фармалит.

<a id="p100091"></a>5.1.5 Аппликатор с капиллярными отверстиями объемом 1 мкл для внесения образцов в гель.
<a id="p100092"></a>5.1.6 Микродозатор с переменным объемом дозирования от 0,5 до 10,0 мм3 (шаг - 0,1 мм3, точность +/- (1,5 - 5,0)%, воспроизводимость от 1,0% до 5,0%.
<a id="p100093"></a>5.1.7 Наконечники для микродозаторов (микропипеток) с переменным объемом дозирования жидкостей.
<a id="p100094"></a>5.1.8 Колбы стеклянные мерные плоскодонные конические вместимостью от 50 до 1000 см3 по ГОСТ 25336.
<a id="p100095"></a>5.1.9 Колбы стеклянные с градуированной горловиной вместимостью 100 см3 по [ГОСТ 12738](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-12738-77).
<a id="p100096"></a>5.1.10 Штамп лунок для образца с лунками вместимостью не менее 1,5 мкл.
<a id="p100097"></a>5.1.11 Цилиндры стеклянные мерные лабораторные вместимостью 50 и 100 см3 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100098"></a>5.1.12 Пипетки стеклянные градуированные вместимостью 5 см3 по [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91).

##### <a id="p100099"></a>5.1.13 Ступка фарфоровая по ГОСТ 9147.

<a id="p100100"></a>5.1.14 Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,01 г.
<a id="p100101"></a>5.1.15 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда по ГОСТ 26678.

##### <a id="p100102"></a>5.1.16 Пленка парафиновая.

<a id="p100103"></a>5.1.17 Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

#### <a id="p100104"></a>5.2 Материалы


##### <a id="p100105"></a>5.2.1 Кислота уксусная ледяная по [ГОСТ 19814](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-19814-74), х.ч.


##### <a id="p100106"></a>5.2.2 Медь сернокислая 5-водная по [ГОСТ 4165](https://bukva.ai/docs/gost-4165-78), ч.д.а.


##### <a id="p100107"></a>5.2.3 Спирт этиловый ректификованный по [ГОСТ 5962](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67), х.ч.


##### <a id="p100108"></a>5.2.4 Краситель кумасси бриллиантовый голубой R 250.


##### <a id="p100109"></a>5.2.5 Глицерин по [ГОСТ 6259](https://bukva.ai/docs/gost-6259-75), ч.д.а.


##### <a id="p100110"></a>5.2.6 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

<a id="p100111"></a>5.2.7 Альдегид глутаровый с содержанием основного компонента не менее 25%.

##### <a id="p100112"></a>5.2.8 Серебро азотнокислое по ГОСТ 1277.


##### <a id="p100113"></a>5.2.9 Натрий углекислый по ГОСТ 83.


##### <a id="p100114"></a>5.2.10 Формальдегид по [ГОСТ 1625](https://bukva.ai/docs/gost-1625-89).


##### <a id="p100115"></a>5.2.11 Трис-HCl (CH2OH)3CNH2HCl.


##### <a id="p100116"></a>5.2.12 Кислота трихлоруксусная CCl3COOH.

<a id="p100117"></a>5.2.13 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная по [ГОСТ 19814](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-19814-74).
<a id="p100118"></a>5.2.14 Набор стандартных калибровочных белков с известными изоэлектрическими точками в диапазоне pH 3 - 9; 4 - 6,5; 5 - 8.

##### <a id="p100119"></a>5.2.15 Натрия тиосульфат кристаллический по [ГОСТ 244](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-244-76).



### <a id="p100120"></a>6 Отбор проб


<a id="p100121"></a>Отбор проб проводят по [ГОСТ 7631](https://bukva.ai/docs/gost-7631-85).


### <a id="p100122"></a>7 Подготовка к проведению анализа. Приготовление растворов



#### <a id="p100123"></a>7.1 Растворы для обработки гелей при окрашивании кумасси голубым

<a id="p100124"></a>7.1.1 Фиксирующий раствор: в колбу вместимостью 500 см3 помещают 100 г трихлоруксусной кислоты и доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор используют 3 - 4 раза.
<a id="p100125"></a>7.1.2 Промывной раствор (обесцвечивающий): в колбу вместимостью 1000 см3 вносят 300 см3 96%-ного этилового спирта, добавляют 600 см3 дистиллированной воды и 100 см3 ледяной уксусной кислоты. Раствор используют 3 - 4 раза.

##### <a id="p100126"></a>7.1.3 Окрашивающие растворы состоят из основного и рабочего.

<a id="p100127"></a>7.1.3.1 Основной раствор: в стеклянную плоскодонную колбу вместимостью 300 см3 помещают (0,400 +/- 0,001) г кумасси бриллиантового голубого, добавляют 80 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 10 мин. Затем добавляют 120 см3 96%-ного этилового спирта и перемешивают в течение 5 мин.
<a id="p100128"></a>7.1.3.2 Рабочий раствор: смешивают 10 см3 раствора по [7.1.3.1](#p100127) с 90 см3 раствора по [7.1.2](#p100125), добавляют (0,170 +/- 0,001) г сернокислой 5-водной меди. Сульфат меди добавляют, чтобы уменьшить окрашивание фона. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
<a id="p100129"></a>7.1.4 Консервирующий раствор: в колбу вместимостью 1000 см3 вносят 40 см3 глицерина, добавляют 920 см3 дистиллированной воды и 40 см3 уксусной ледяной кислоты.
<a id="p100130"></a>7.1.5 Промывной раствор готовят в количестве не менее 400 см3, фиксирующий, окрашивающий и консервирующий растворы - не менее 80 см3.

#### <a id="p100131"></a>7.2 Растворы для обработки гелей при окрашивании серебром

<a id="p100132"></a>7.2.1 Фиксирующий раствор: в колбу вместимостью 500 см3 помещают (100,00 +/- 0,01) г трихлоруксусной кислоты и доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор используют 3 - 4 раза.
<a id="p100133"></a>7.2.2 Промывной раствор: в колбу вместимостью 1000 см3 вносят 100 см3 96%-ного этилового спирта, добавляют 850 см3 дистиллированной воды и 50 см3 ледяной уксусной кислоты.
<a id="p100134"></a>7.2.3 Раствор, усиливающий окраску (сенсибилизатор): в колбе вместимостью 100 см3 смешивают 30 см3 25%-ного глутарового альдегида и 60 см3 дистиллированной воды.
<a id="p100135"></a>7.2.4 Окрашивающий раствор: в колбу вместимостью 100 см3 вносят (0,150 +/- 0,001) г азотнокислого серебра и доводят объем дистиллированной водой до метки.
<a id="p100136"></a>7.2.5 Раствор, развивающий окраску (проявитель): в колбу вместимостью 1000 см3 вносят 200 см3 12,5%-ного раствора углекислого натрия, 800 см3 дистиллированной воды и 400 мкл 37%-ного формальдегида.
<a id="p100137"></a>7.2.6 Раствор, останавливающий окраску: в колбу вместимостью 100 см3 вносят (1,60 +/- 0,01) г тиосульфата натрия и (3,70 +/- 0,01) г трис-HCl и доводят объем дистиллированной водой до метки.
<a id="p100138"></a>7.2.7 Консервирующий раствор: в колбу вместимостью 100 см3 вносят 10 см3 глицерина и доводят объем дистиллированной водой до метки.
<a id="p100139"></a>7.2.8 Промывной раствор готовят в количестве не менее 400 см3. Фиксирующий, окрашивающий, проявляющий растворы и растворы, усиливающий окраску и останавливающий окраску, готовят в количестве не менее 80 см3. Количество дистиллированной воды - не менее 400 см3.


### <a id="p100140"></a>8 Проведение анализа



#### <a id="p100141"></a>8.1 Приготовление проб для анализа

<a id="p100142"></a>8.1.1 Мышечную ткань исследуемого образца и референс-образца освобождают от крови, темных мышц. Навеску массой (5,0 +/- 0,1) г светлой мышечной ткани рыбы-сырца, филе или сырого фарша измельчают в течение 30 с в ступке с 5 см3 дистиллированной воды.
<a id="p100143"></a>8.1.2 Смесь, полученную по [8.1.1](#p100142), переносят в центрифужные пробирки вместимостью 50 см3 и центрифугируют при температуре 4 °C в рефрижераторной центрифуге при частоте вращения 4000 мин-1 в течение 15 мин.
<a id="p100144"></a>8.1.3 Надосадочную жидкость, полученную по [8.1.2](#p100143), переносят в центрифужные пробирки вместимостью 10 см3 и центрифугируют при температуре 4 °C в рефрижераторной центрифуге при частоте вращения 12000 мин-1 в течение 15 мин.
<a id="p100145"></a>8.1.4 Надосадочную жидкость, полученную по [8.1.3](#p100144), фильтруют через бумажный фильтр в колбу. Полученный прозрачный раствор используют для проведения ИЭФ.

#### <a id="p100146"></a>8.2 Приготовление раствора стандартных образцов

<a id="p100147"></a>Готовят раствор стандартных калибровочных белков в дистиллированной воде в зависимости от диапазона pH, выбранного для анализа: в 30 - 40 мкл дистиллированной воды для окрашивания кумасси и в 2 см дистиллированной воды для окрашивания серебром.

#### <a id="p100148"></a>8.3 Проведение изоэлектрофокусирования на приборе


##### <a id="p100149"></a>8.3.1 Включают систему.

<a id="p100150"></a>8.3.2 Помещают полиакриламидный гель в систему в соответствии с инструкцией, прилагаемой к ней.
<a id="p100151"></a>8.3.3 Формируют лунки в парафиновой пленке с помощью штампа: штамп с лунками, обращенными вверх, кладут на стол; накрывают парафиновой пленкой защитным покрытием вверх (по направлению линий отверстий); в парафиновой пленке, двигаясь вдоль линии лунок, делают углубления при помощи стеклянной палочки, а затем снимают защитный слой.
<a id="p100152"></a>8.3.4 Растворы, полученные по [8.1.4](#p100145) из анализируемого образца и референс-образца, а также раствор стандартного набора калибровочных белков с известной изоэлектрической точкой, выбранный в зависимости от заложенного в программе диапазона pH, вносят микродозатором в лунку в количестве 1,5 мкл.
<a id="p100153"></a>8.3.5 Аппликатор опускают на поверхность растворов исследуемого образца, референс-образца и стандартного набора калибровочных белков, помещенных в лунки, сформированные в парафиновой пленке с помощью штампа по [8.3.3](#p100151), нарушая поверхность капель для заполнения капилляров.
<a id="p100154"></a>8.3.6 Аппликатор, наполненный образцами по [8.3.5](#p100153), помещают в систему со стороны катода и проводят ИЭФ в автоматическом режиме на полиакриламидных гелях по программам в соответствии с [таблицами 1](#p100156) и (или) [2](#p100177).

<a id="p100155"></a>Таблица 1

<a id="p100156"></a>Программа проведения анализа ИЭФ в полиакриламидном геле
в широком диапазоне pH 3,0 - 9,0


<table>
<colgroup><col width="23%"><col width="18%"><col width="16%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100157"></a>Наименование этапа</td><td rowspan="2"><a id="p100158"></a>Номер этапа</td><td colspan="4"><a id="p100159"></a>Условия</td></tr>
<tr><td><a id="p100160"></a>Напряжение, В</td><td><a id="p100161"></a>Ток, мА</td><td><a id="p100162"></a>Мощность, Вт</td><td><a id="p100163"></a>Температура, °C</td></tr>
<tr><td><a id="p100164"></a>Префокусирование</td><td><a id="p100165"></a>1,1</td><td><a id="p100166"></a>2000</td><td rowspan="3"><a id="p100167"></a>2,5</td><td rowspan="3"><a id="p100168"></a>3,5</td><td rowspan="3"><a id="p100169"></a>15</td></tr>
<tr><td><a id="p100170"></a>Нанесение образца</td><td><a id="p100171"></a>1,2</td><td><a id="p100172"></a>200</td></tr>
<tr><td><a id="p100173"></a>Разделение</td><td><a id="p100174"></a>1,3</td><td><a id="p100175"></a>2000</td></tr>
</table>


<a id="p100176"></a>Таблица 2

<a id="p100177"></a>Программа проведения анализа ИЭФ в полиакриламидном геле
в узких диапазонах pH: 5,0 - 8,0 или 4,0 - 6,5


<table>
<colgroup><col width="23%"><col width="18%"><col width="16%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100178"></a>Наименование этапа</td><td rowspan="2"><a id="p100179"></a>Номер этапа</td><td colspan="4"><a id="p100180"></a>Условия</td></tr>
<tr><td><a id="p100181"></a>Напряжение, В</td><td><a id="p100182"></a>Ток, мА</td><td><a id="p100183"></a>Мощность, Вт</td><td><a id="p100184"></a>Температура, °C</td></tr>
<tr><td><a id="p100185"></a>Префокусирование</td><td><a id="p100186"></a>2,1</td><td><a id="p100187"></a>2000</td><td rowspan="3"><a id="p100188"></a>2,0</td><td rowspan="3"><a id="p100189"></a>3,5</td><td rowspan="3"><a id="p100190"></a>15</td></tr>
<tr><td><a id="p100191"></a>Нанесение образца</td><td><a id="p100192"></a>2,2</td><td><a id="p100193"></a>200</td></tr>
<tr><td><a id="p100194"></a>Разделение</td><td><a id="p100195"></a>2,3</td><td><a id="p100196"></a>2000</td></tr>
</table>


<a id="p100197"></a>Выбор программы зависит от цели анализа: для выбора оптимального диапазона pH при измерении изоэлектрических точек используют широкий диапазон pH 3,0 - 9,0, для характеристики и анализа белков с небольшими различиями в изоэлектрической точке используют более узкие диапазоны: pH 5,0 - 9,0 и pH 4,0 - 6,5.
<a id="p100198"></a>Программы проведения изоэлектрофокусирования в широком и узких диапазонах pH состоят из трех этапов:
- <a id="p100199"></a>префокусирование (происходит формирование градиента pH);
- <a id="p100200"></a>этап нанесения исследуемых образцов (белки вносятся в гель);
- <a id="p100201"></a>этап разделения (белки мигрируют к своим изоэлектрическим точкам).
<a id="p100202"></a>Этап фокусирования продолжается от 8 до 10 мин. Общее время ИЭФ составляет около 30 мин.
<a id="p100203"></a>После окончания ИЭФ полиакриламидный гель помещают в камеру для окрашивания.

#### <a id="p100204"></a>8.4 Проведение окрашивания

<a id="p100205"></a>Полиакриламидные гели окрашивают в автоматическом режиме с применением красителя кумасси бриллиантового голубого в соответствии с [таблицей 3](#p100207) для образцов с высоким (от 20 до 50 нг/мкл) содержанием белка или с применением азотнокислого серебра в соответствии с [таблицей 4](#p100233) для образцов с низким содержанием белка (от 1 до 5 нг/мкл).

<a id="p100206"></a>Таблица 3

<a id="p100207"></a>Программа окрашивания полиакриламидных гелей
с помощью раствора кумасси бриллиантового голубого


| <a id="p100208"></a>Номер этапа | <a id="p100209"></a>Наименование раствора | <a id="p100210"></a>Время, мин | <a id="p100211"></a>Температура, °C |
| --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100212"></a>1 | <a id="p100213"></a>Фиксирующий | <a id="p100214"></a>5 | <a id="p100215"></a>20 |
| <a id="p100216"></a>2 | <a id="p100217"></a>Промывной | <a id="p100218"></a>2 | <a id="p100219"></a>20 |
| <a id="p100220"></a>3 | <a id="p100221"></a>Окрашивающий | <a id="p100222"></a>10 | <a id="p100223"></a>50 |
| <a id="p100224"></a>4 | <a id="p100225"></a>Промывной | <a id="p100226"></a>5 | <a id="p100227"></a>50 |
| <a id="p100228"></a>5 | <a id="p100229"></a>Консервирующий | <a id="p100230"></a>10 | <a id="p100231"></a>50 |


<a id="p100232"></a>Таблица 4

<a id="p100233"></a>Программа окрашивания полиакриламидных гелей
с помощью раствора азотнокислого серебра


| <a id="p100234"></a>Номер этапа | <a id="p100235"></a>Наименование | <a id="p100236"></a>Время, мин | <a id="p100237"></a>Температура, °C |
| --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100238"></a>1 | <a id="p100239"></a>Фиксирующий | <a id="p100240"></a>5,0 | <a id="p100241"></a>20 |
| <a id="p100242"></a>2 | <a id="p100243"></a>Промывной | <a id="p100244"></a>2,0 | <a id="p100245"></a>50 |
| <a id="p100246"></a>3 | <a id="p100247"></a>Промывной | <a id="p100248"></a>4,0 | <a id="p100249"></a>50 |
| <a id="p100250"></a>4 | <a id="p100251"></a>Усиливающий окраску | <a id="p100252"></a>6,0 | <a id="p100253"></a>50 |
| <a id="p100254"></a>5 | <a id="p100255"></a>Промывной | <a id="p100256"></a>3,0 | <a id="p100257"></a>50 |
| <a id="p100258"></a>6 | <a id="p100259"></a>Промывной | <a id="p100260"></a>5,0 | <a id="p100261"></a>50 |
| <a id="p100262"></a>7 | <a id="p100263"></a>Дистиллированная вода | <a id="p100264"></a>2,0 | <a id="p100265"></a>50 |
| <a id="p100266"></a>8 | <a id="p100267"></a>Дистиллированная вода | <a id="p100268"></a>2,0 | <a id="p100269"></a>50 |
| <a id="p100270"></a>9 | <a id="p100271"></a>Окрашивающий | <a id="p100272"></a>10,0 | <a id="p100273"></a>40 |
| <a id="p100274"></a>10 | <a id="p100275"></a>Дистиллированная вода | <a id="p100276"></a>0,5 | <a id="p100277"></a>30 |
| <a id="p100278"></a>11 | <a id="p100279"></a>Дистиллированная вода | <a id="p100280"></a>0,5 | <a id="p100281"></a>30 |
| <a id="p100282"></a>12 | <a id="p100283"></a>Развивающий окраску | <a id="p100284"></a>0,5 | <a id="p100285"></a>30 |
| <a id="p100286"></a>13 | <a id="p100287"></a>Развивающий окраску | <a id="p100288"></a>0,5 | <a id="p100289"></a>30 |
| <a id="p100290"></a>14 | <a id="p100291"></a>Останавливающий окраску | <a id="p100292"></a>2,0 | <a id="p100293"></a>30 |
| <a id="p100294"></a>15 | <a id="p100295"></a>Консервирующий | <a id="p100296"></a>5,0 | <a id="p100297"></a>50 |


<a id="p100298"></a>Растворы используют только один раз (за исключением фиксирующего раствора), не применяя циркуляцию. Приготовленные растворы, за исключением проявителя, стабильны 2 - 3 сут при температуре от 20 °C до 25 °C.
<a id="p100299"></a>Окрашивание и обесцвечивание занимают от 30 до 35 мин. После консервирования полиакриламидные гели вынимают из системы и высушивают при температуре от 20 °C до 25 °C в течение 4 ч.


### <a id="p100300"></a>9 Обработка результатов анализа


<a id="p100301"></a>9.1 Полученную картину распределения белковых полос анализируемой пробы сравнивают с картиной распределения белковых полос референс-образца.
<a id="p100302"></a>9.2 Строят графическую зависимость значений изоэлектрических точек стандартных белков от расстояния каждой белковой полосы до катода (см. [приложение А.2](#p100322)).
<a id="p100303"></a>9.3 Измеряют расстояние от катода до локализации белковых полос исследуемого образца и референс-образца и с помощью калибровочного графика, построенного по [9.2](#p100302), находят соответствующие значения изоэлектрических точек белков.
<a id="p100304"></a>Графическое построение и определение изоэлектрических точек может осуществляться с помощью компьютерной программы после переноса изображения распределения белковых полос с полиакриламидного геля на монитор компьютера с использованием систем видеодокументирования.
<a id="p100305"></a>9.4 Совпадение картин распределения белковых полос и совпадение значений изоэлектрических точек маркерных белков анализируемого и референс-образцов свидетельствует об их идентичности и подтверждает правильность наименования анализируемого образца. Пример результата анализа и его компьютерной обработки для разных видов исследуемых объектов приведен в [приложении А](#p100313).
<a id="p100306"></a>9.5 Для подтверждения результатов идентификации проводят параллельное разделение белковых полос как из одной пробы, так и из разных проб, полученных из двух-трех образцов анализируемого объекта.
<a id="p100307"></a>9.6 Результаты анализа оформляют в виде протокола. Образцы протоколов приведены в [приложении Б](#p100405).


### <a id="p100308"></a>10 Требования безопасности


<a id="p100309"></a>10.1 При выполнении всех работ необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007.
<a id="p100310"></a>10.2 Помещение, в котором проводятся работы, должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.
<a id="p100311"></a>10.3 При работе с электроустановками электробезопасность должна соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.019. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.





<a id="p100312"></a>Приложение А
(справочное)

<a id="p100313"></a>**РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА И КОМПЬЮТЕРНОЙ ОБРАБОТКИ**
**ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ**

<a id="p100314"></a>А.1 Пример фотографии распределения белковых полос на экране монитора компьютера приведен на [рисунке А.1](#p100321).

<a id="p100315"></a> ![10 Требования безопасности](https://i.bukva.ai/H4IXj4fb/img_0.jpg) 

<a id="p100316"></a>*Примечание* - На фотографии представлены следующие линии:
- <a id="p100317"></a>1 и 2 - анализируемый образец филе форели N 1;
- <a id="p100318"></a>3 и 4 - анализируемый образец филе форели N 2;
- <a id="p100319"></a>5 - референс-образец форели;
- <a id="p100320"></a>6 - стандартный набор белков.

<a id="p100321"></a>Рисунок А.1

<a id="p100322"></a>А.2 График, полученный в результате разделения стандартных образцов, обработанный с помощью компьютерной программы, приведен на [рисунке А.2](#p100324).

<a id="p100323"></a> ![10 Требования безопасности](https://i.bukva.ai/H4IXj4fb/img_1.png) 

<a id="p100324"></a>Рисунок А.2

<a id="p100325"></a>А.3 Пример компьютерной обработки данных, полученных в результате анализа, приведен в [таблице А.1](#p100326).

<a id="p100326"></a>Таблица А.1


<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="14%"><col width="16%"><col width="14%"><col width="13%"><col width="16%"><col width="13%"></colgroup>
<tr><td colspan="3"><a id="p100327"></a>Образец N 1</td><td colspan="3"><a id="p100328"></a>Образец N 2</td><td rowspan="2"><a id="p100329"></a>Референс-образец (форель)</td></tr>
<tr><td><a id="p100330"></a>1-я проба</td><td><a id="p100331"></a>2-я проба</td><td><a id="p100332"></a>среднее значение pl <a href="#p100399">&lt;*&gt;</a></td><td><a id="p100333"></a>1-я проба</td><td><a id="p100334"></a>2-я проба</td><td><a id="p100335"></a>среднее значение pl <a href="#p100399">&lt;*&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100336"></a>9,23</td><td><a id="p100337"></a>9,21</td><td><a id="p100338"></a>9,22 +/- 0,01</td><td><a id="p100339"></a>9,33</td><td><a id="p100340"></a>9,37</td><td><a id="p100341"></a>9,35 +/- 0,02</td><td><a id="p100342"></a>9,34</td></tr>
<tr><td><a id="p100343"></a>8,80</td><td><a id="p100344"></a>8,80</td><td><a id="p100345"></a>8,80</td><td><a id="p100346"></a>-</td><td><a id="p100347"></a>-</td><td><a id="p100348"></a>-</td><td><a id="p100349"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100350"></a>7,41</td><td><a id="p100351"></a>7,45</td><td><a id="p100352"></a>7,43 +/- 0,02</td><td><a id="p100353"></a>7,39</td><td><a id="p100354"></a>7,39</td><td><a id="p100355"></a>7,39</td><td><a id="p100356"></a>7,38</td></tr>
<tr><td><a id="p100357"></a>6,85</td><td><a id="p100358"></a>6,85</td><td><a id="p100359"></a>6,85</td><td><a id="p100360"></a>6,94</td><td><a id="p100361"></a>6,96</td><td><a id="p100362"></a>6,95 +/- 0,01</td><td><a id="p100363"></a>6,93</td></tr>
<tr><td><a id="p100364"></a>6,16</td><td><a id="p100365"></a>6,20</td><td><a id="p100366"></a>6,18 +/- 0,02</td><td><a id="p100367"></a>6,68</td><td><a id="p100368"></a>6,74</td><td><a id="p100369"></a>6,70 +/- 0,02</td><td><a id="p100370"></a>6,73</td></tr>
<tr><td><a id="p100371"></a>-</td><td><a id="p100372"></a>-</td><td><a id="p100373"></a>-</td><td><a id="p100374"></a>6,13</td><td><a id="p100375"></a>6,13</td><td><a id="p100376"></a>6,13</td><td><a id="p100377"></a>6,15</td></tr>
<tr><td><a id="p100378"></a>5,39</td><td><a id="p100379"></a>5,41</td><td><a id="p100380"></a>5,40 +/- 0,01</td><td><a id="p100381"></a>5,50</td><td><a id="p100382"></a>5,48</td><td><a id="p100383"></a>5,49 +/- 0,01</td><td><a id="p100384"></a>5,50</td></tr>
<tr><td><a id="p100385"></a>5,33</td><td><a id="p100386"></a>5,33</td><td><a id="p100387"></a>5,33</td><td><a id="p100388"></a>-</td><td><a id="p100389"></a>-</td><td><a id="p100390"></a>-</td><td><a id="p100391"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100392"></a>4,64</td><td><a id="p100393"></a>4,60</td><td><a id="p100394"></a>4,62 +/- 0,02</td><td><a id="p100395"></a>4,40</td><td><a id="p100396"></a>4,42</td><td><a id="p100397"></a>4,41 +/- 0,01</td><td><a id="p100398"></a>4,41</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100399"></a>&lt;*&gt; pl - изоэлектрические точки маркерных белков.</td></tr>
</table>


<a id="p100400"></a>А.4 Обобщение результатов анализа для определения вида анализируемого объекта по [рисункам А.1](#p100321), [А.2](#p100324) и [таблице А.1](#p100326).
<a id="p100401"></a>А.4.1 В результате изоэлектрофокусирования в полиакриламидном геле выделенных белков светлой мышечной ткани двух исследованных образцов от разных производителей, имеющих одно торговое наименование, и референс-образца получены отличающиеся друг от друга картины распределения белковых полос.
<a id="p100402"></a>А.4.2 У анализируемого [образца N 1](#p100327) локализация маркерных белков не совпадает с основными белковыми полосами референс-образца. Таким образом, можно сделать вывод, что [образец N 1](#p100327) не соответствует своему наименованию.
<a id="p100403"></a>А.4.3 У анализируемого [образца N 2](#p100328) картина распределения маркерных белков и изоэлектрических точек полностью совпадают с локализацией основных белков референс-образца и их значениями pl. Наименование этого образца соответствует наименованию на этикетке.





<a id="p100404"></a>Приложение Б
(рекомендуемое)

<a id="p100405"></a>**ФОРМА ПРОТОКОЛА ИСПЫТАНИЙ**

<a id="p100406"></a>Наименование организации (испытательной лаборатории)

<a id="p100407"></a>**ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЙ**

<a id="p100408"></a>N __________ от "__" ____________ 20__ г.

<a id="p100409"></a>Даты: поступления на испытание: "__" ______________ 20__ г.
конца испытаний: "__" ______________ 20__ г.

<a id="p100410"></a>Продукция ___________________________________________________________
Производитель сырья или продукции ____________________________________
Предъявитель сырья или продукции _____________________________________
Отбор образцов проведен ______________________________________________
Акт отбора образцов и техническое задание на испытания N _ от "__" ____ 20__ г.
Испытания проведены на основании требований ___________________________
Номер образца _______________________________________________________
Характеристика анализируемого образца (вид и состояние упаковки, этикетки, штриховка) _____________________________________________________________________
Маркировка __________________________________________________________
Годен до _______________ Штриховой код ___________
Результаты анализа: установлено, что наименование анализируемого образца продукции


<table>
<colgroup><col width="21%"><col width="24%"><col width="9%"><col width="7%"><col width="39%"></colgroup>
<tr><td colspan="2"><a id="p100411"></a>____________________________<br>наименование образца<br>____________________________<br>наименование вида рыбы</td><td colspan="3"><a id="p100412"></a>________________________________<br>соответствует или не соответствует</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100413"></a>Исполнители:</td><td colspan="3"><a id="p100414"></a>________________________<br>личная подпись</td><td><a id="p100415"></a>_______________________<br>инициалы, фамилия</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100416"></a>________________________<br>личная подпись</td><td><a id="p100417"></a>_______________________<br>инициалы, фамилия</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100418"></a>Руководитель испытательной лаборатории</td><td colspan="2"><a id="p100419"></a>________________________<br>личная подпись<br>_______________________<br>инициалы, фамилия</td></tr>
</table>


<a id="p100420"></a>МП

<a id="p100421"></a>Заключение распространяется на образец, представленный на испытания.






<table>
<colgroup><col width="34%"><col width="33%"><col width="33%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100422"></a>УДК 576.8.078:006.354</td><td><a id="p100423"></a>МКС 67.120.30</td><td><a id="p100424"></a>Н29</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100425"></a>Ключевые слова: рыба и продукция из нее, видовая идентификация, метод изоэлектрофокусирования в полиакриламидном геле</td></tr>
</table>




<a id="p100426"></a>

---