--- title: "\"ГОСТ 31477-2012. Межгосударственный стандарт. Мясо и мясные продукты. Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка\"" number: "ГОСТ 31477-2012" issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/standart-gost-31477-2012" --- ## "ГОСТ 31477-2012. Межгосударственный стандарт. Мясо и мясные продукты. Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка" # "ГОСТ 31477-2012. Межгосударственный стандарт. Мясо и мясные продукты. Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка" (введен в действие Приказом Росстандарта от 12.10.2012 N 488-ст) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия - национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности мяса и мясной продукции" (ТР ТС 034/2013) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 19.11.2019 N 198). > Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности мяса и мясной продукции" (ТР ТС 034/2013) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.05.2014 N 81). > Документ [введен](#p100008) в действие с 01.07.2013. > [!NOTE] > ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ ```mermaid flowchart LR n0["ГОСТ Р 53514-2009"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-53514-2009" "ГОСТ Р 53514-2009. Национальный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного... (утв." n1["ГОСТ 31477-2012"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-31477-2012" "ГОСТ 31477-2012. Межгосударственный стандарт. Мясо и мясные продукты. Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка (введен" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000; ``` Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября 2012 г. N 488-ст **МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ** **МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ** **ИММУНОПРЕЦИПИТАЦИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ** **ЖИВОТНОГО (ГОВЯЖЬЕГО, СВИНОГО, БАРАНЬЕГО) БЕЛКА** Meat and meat products. Immune method of determination of animal (pork, beef, mutton) proteins **ГОСТ 31477-2012** МКС 67.120.10 Дата введения 1 июля 2013 года ### Предисловие Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены" ### Сведения о стандарте 1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом мясной промышленности имени В.М. Горбатова Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии) 2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии 3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 41 от 23 - 24 мая 2012 г.) За принятие проголосовали: | Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации | | --- | --- | --- | | Азербайджан | AZ | Азстандарт | | Армения | AM | Минэкономики Республики Армения | | Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь | | Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан | | Кыргызстан | KG | Кыргызстандарт | | Молдова | MD | Молдова-Стандарт | | Российская Федерация | RU | Росстандарт | | Таджикистан | TJ | Таджикстандарт | | Узбекистан | UZ | Узстандарт | 4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября 2012 г. N 488-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г. 5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения [ГОСТ Р 53514-2009](https://bukva.ai/docs/gost-r-53514-2009) **6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ** Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе "Национальные стандарты". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе "Национальные стандарты", а текст изменений - в информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе "Национальные стандарты" ### 1. Область применения Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные полуфабрикаты и устанавливает иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка. Стандарт предназначен для идентификации свиного, говяжьего или бараньего белка в составе мясного сырья и мясных продуктов, не подвергнутых тепловой обработке. ### 2. Нормативные ссылки В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты: ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия [ГОСТ 9656-75](https://bukva.ai/docs/gost-9656-75) Реактивы. Кислота борная. Технические условия [ГОСТ 10652-73](https://bukva.ai/docs/gost-10652-73) Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия [ГОСТ 20903-75](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20903-75) Кюветы прямоугольные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования [ГОСТ 25011-81](https://bukva.ai/docs/gost-25011-81) Мясо и мясные продукты. Методы определения белка ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия *Примечание* - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. ### 3. Сущность метода Метод основан на проявлении особых свойств защитных систем высших позвоночных - вырабатывать новые сывороточные белки (антитела) при введении в организм посторонних для него веществ (антигенов). Используют диагностическую преципитирующую сыворотку к конкретному виду животного белка, вызывающую образование нерастворимого комплекса антиген-антитело. ### 4. Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода 4.1 Диапазон измерений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка от 1% до 85%. 4.2 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1. Таблица 1 | Наименование показателя | Диапазон измерений массовой доли, % | Границы относительной погрешности, $\pm \delta$ , % | Предел повторяемости rотн., % | Предел воспроизводимости, Rотн., % | | --- | --- | --- | --- | --- | | Массовая доля животного белка, % | От 1 до 85 включ. | 30 | 24 | 38 | ### 5. Отбор проб #### 5.1 Отбор проб - по [[1]](#p100208). 5.2 Пробу хранят в холодильнике при температуре от 0 °C до 5 °C до полного завершения испытания в течение суток. Допускается хранение проб при температуре от минус 20 °C до минус 10 °C в герметичной упаковке в течение одной недели с даты отбора проб на исследование. ### 6. Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы Спектрофотометр типа "Аквилон" <*>, обеспечивающий измерения в диапазоне длин волн от 200 до 900 нм. --- <*> Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. Кюветы кварцевые толщиной 1 см по [ГОСТ 20903](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20903-75). Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,1 мг. Микроизмельчитель тканей или гомогенизатор с частотой вращения 8000 - 24000 об/мин. Центрифуга с регулируемой скоростью вращения до 8000 об/мин. Пробирки центрифужные по ГОСТ 25336. Аппарат встряхивающий. Холодильник бытовой по ГОСТ 26678. Дозатор пипеточный переменного объема. Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Воронки стеклянные ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336. Диагностическая сыворотка. Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18% для использования в качестве контрольного образца. Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85%. Кислота борная по [ГОСТ 9656](https://bukva.ai/docs/gost-9656-75), ч. 2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99,9%. Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (трилон Б) по [ГОСТ 10652](https://bukva.ai/docs/gost-10652-73), ч.д.а. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709. Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте. ### 7. Подготовка к выполнению измерений #### 7.1 Приготовление растворов ##### 7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б массой 1,5 г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и при перемешивании добавляют 100 - 150 см3 дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавляют постепенно 5,5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают до растворения осадка. ##### 7.1.2 Приготовление рабочего буферного раствора В мерную колбу вместимостью 250 см3 с помощью мерного цилиндра вносят 50 см3 концентрированного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1 см3 0,012 г ТРИС, 0,001 г трилона Б и 0,0044 г борной кислоты. #### 7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы 7.2.1 Навеску пробы массой 5,0 г перемешивают с 5 см3 рабочего буферного раствора в гомогенизаторе в течение 5 мин и выдерживают смесь 1 ч при температуре от 5 °C до 8 °C, периодически встряхивая в течение 5 мин. 7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют верхний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка. #### 7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей для построения градуировочного графика Навески по 25,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400,0 г и 100,0 г соевого изолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100, 30, 15 и 3,5 г соевого изолята. Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси путем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая доля животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего белка равна 1,3%; 5,0%; 17,5%; 41,4%; 58,5% и 86,1%. Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по [ГОСТ 25011](https://bukva.ai/docs/gost-25011-81). ### 8. Проведение измерений #### 8.1 Измерение испытуемых растворов 8.1.1 20 мм3 экстракта пробы смешивают с 400 мм3 рабочего буферного раствора, измеряют фоновое поглощение на спектрофотометре при $\lambda = 405\text{нм}$ (контроль), затем добавляют 20 мм3 диагностической сыворотки, содержащей антитела, к определяемому виду белка, проводят реакцию осаждения при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического белка измеряют оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см. 8.1.2 Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок. 8.1.3 Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с помощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрации животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в этих растворах. #### 8.2 Построение градуировочного графика Градуировочный график строят по результатам двукратного определения в соответствии с [8.1.1](#p100127) массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в двухкомпонентных модельных мясо-растительных смесях, содержащих животный белок и добавки растительного соевого белка, соответственно в таблицах 2 - [4](#p100170). Таблица 2 | Оптическая плотность среды (D405) при 405 нм | 0,070 | 0,075 | 0,100 | 0,158 | 0,200 | 0,260 | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Массовая доля свиного белка в образце C, % от общего белка | 1,3 | 5,0 | 17,5 | 41,4 | 58,5 | 86,1 | Таблица 3 | Оптическая плотность среды (D405) при 405 нм | 0,065 | 0,085 | 0,110 | 0,135 | 0,155 | 0,175 | 0,200 | 0,225 | 0,250 | 0,275 | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Массовая доля говяжьего белка в образце C, % от общего белка | 1 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | Таблица 4 | Оптическая плотность среды (D405) при 405 нм | 0,060 | 0,090 | 0,115 | 0,130 | 0,160 | 0,170 | 0,190 | 0,230 | 0,260 | 0,280 | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Массовая доля бараньего белка в образце C, % от общего белка | 11 | 110 | 220 | 330 | 440 | 550 | 660 | 770 | 880 | 990 | ### 9. Обработка результатов 9.1 Массовую долю животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка Бж, %, относительно массовой доли общего белка, вычисляют по формуле $\text{Б}_{\text{ж}} = \frac{\text{С}}{\text{Б}_{\text{к}}} 100,$ (1) где C - среднеарифметическое значение массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в испытуемой пробе, %; Бк - массовая доля общего белка в анализируемом образце, определенная методом Кьельдаля, %. 9.2 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости: [(2|C1 - C2|)/(C1 + C2)]·100 <= rотн, (2) где C1 и C2 - результаты параллельных определений массовой доли животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка, определенные по градуировочному графику, %; rотн - предел повторяемости, приведенный в [таблице 1](#p100074). Результат вычислений округляют до целого числа. ### 10. Требования безопасности 10.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. 10.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. 10.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019. ## БИБЛИОГРАФИЯ | [1] | ИСО 17604:2003 | Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Отбор проб с туши для микробиологического анализа | | --- | --- | --- | ---