ГОСТ 25580-83 (СТ СЭВ 2698-80). Государственный стандарт Союза ССР. Свиньи. Методы лабораторной диагностики трансмиссивного гастроэнтерита

(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 06.01.1983 № 15)

Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 6 января 1983 г. № 15

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

СВИНЬИ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТРАНСМИССИВНОГО ГАСТРОЭНТЕРИТА

Pigs. Methods of laboratory diagnostics of transmissive gastroenteritis

ГОСТ 25580-83 (СТ СЭВ 2698-80)

Группа С79

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 6 января 1983 г. № 15 срок действия установлен

с 1 июля 1983 года до 1 июля 1988 года

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

Э.В. Ивановский, Л.А. Мельникова, Л.И. Касюк, Н.Д. Насокина

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 6 января 1983 г. № 15

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на свиней и устанавливает методы лабораторной диагностики трансмиссивного гастроэнтерита.

Стандарт обязателен для научно-исследовательских учреждений.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2698-80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Пробы крови берут из вены cava cramalis в объеме 5 см3 с соблюдением правил асептики от свиней разных возрастных групп в количестве от 1 до 5% поголовья.

1.2. Сыворотку исследуют в течение 3 сут после взятия крови. Допускается исследовать сыворотки в течение до 3 мес при условии хранения ее при температуре минус 20 °C.

1.3. При диагностике острой вспышки заболевания берут парные пробы крови не менее чем от 20 животных. При взятии парных проб первую пробу берут от клинически больных свиней или подсосных свиноматок, поросята которых поносят, вторую — от тех же животных через 3 недели. Парные пробы исследуют одновременно.

2. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Сущность метода заключается в выявлении способностей сывороток нейтрализовать цитопатическое действие (ЦПД) вируса трансмиссивного гастроэнтерита в культуре клеток.

2.1 Аппаратура и материалы

Для проведения исследования применяют:

микротитратор;

пластины пластмассовые с 96 лунками;

термостат для культивирования клеточных культур в атмосфере, содержащей 5% углекислого газа;

термостат;

микроскоп;

горелку газовую;

баню водяную;

штативы для пробирок;

стерилизатор;

холодильник;

пипетки по ГОСТ 20292-74;

пробирки по ГОСТ 25336-82;

пробки резиновые;

культуры клеточные почек или щитовидных желез свиней;

среду поддерживающую с антибиотиком (пенициллин, стрептомицин или др.);

референтные штаммы вируса с известным титром;

сыворотки крови свиней отрицательную и положительную;

сыворотку крови телят для культивирования культур тканей;

трипсин, 0,2%-ный раствор для подготовки клеточных суспензий.

2.2 Проведение исследования

Исследования проводят макро- и микрометодами.

Макрометод применяют для оценки благополучия хозяйства на трансмиссивный гастроэнтерит, микрометод — для определения стадии развития инфекционного процесса.

При постановке реакции нейтрализации вирусов указанными методами проводят контрольное титрование разведенного вируса и известной положительной и отрицательной сывороток.

2.2.1 Макрометод

Сыворотки крови в разбавлении 1:2 или 1:4 инактивируют в термостате при 56 °C в течение 30 мин.

В пробирки вносят по 0,4 см3 поддерживающей среды и готовят двукратные разбавления сывороток крови в соотношении от 1:4 до 1:256.

Вирус с известным титром предварительно разбавляют в поддерживающей среде так, чтобы 1 см3 содержал 100 ТЦД50. Затем в каждую пробирку с разбавленной сывороткой добавляют по 0,4 см3 вируса и инкубируют их в течение 60 мин при температуре 37 °C.

Каждой полученной смесью в объеме по 0,2 см3 заражают четыре пробирки с культурой клеток, из которой удалена питательная среда.

Пробирки инкубируют в течение 30 мин при температуре 37 °C, после чего в каждую вносят по 0,8 см3 поддерживающей среды, затем продолжают инкубирование в течение 48 — 96 ч.

Контролем служат 5 пробирок с незараженной культурой клеток.

2.2.2 Микрометод

Во все лунки пластин вносят по 0,05 см3 поддерживающей среды без телячьей сыворотки.

С помощью петель готовят двукратные разбавления испытуемых сывороток в требуемом объеме и в соотношении от 1:4 до 1:256. Затем во все лунки с разбавленными сыворотками вносят по 0,05 см3 вируса, предварительно разведенного в поддерживающей среде так, чтобы 0,05 см3 содержало 100 ТЦД50.

После 60 мин инкубирования при комнатной температуре во все лунки вносят по 0,05 см3 клеточной суспензии вторичных пассажей клеток почек или щитовидных желез свиней в концентрации 300000 клеток в 1 см3 поддерживающей среды, содержащей 30% инактивированной телячьей сыворотки.

Пластины с культурами выдерживают в термостате с атмосферой, содержащей 5% углекислого газа, в течение 4 сут при температуре 37 °C.

Контролем служат восемь лунок с незараженной культурой.

2.3 Обработка результатов

Реакцию нейтрализации учитывают через 48 — 96 ч только при условии развития цитопатического действия (ЦПД) в пробирках, инфицированных вирусом в разведениях 10-1 и 10-2, и в пробирках, инфицированных смесью вируса с отрицательной сывороткой, а также при отсутствии ЦПД в пробирках или лунках, инфицированных смесью вируса со специфической сывороткой, и в пробирках или лунках, не зараженных вирусом.

Титр вируснейтрализующих антител представляет собой наибольшее разбавление сыворотки, которое предотвращает развитие цитопатического действия в 50% зараженных пробирок или лунок.

Положительными считают сыворотки, которые полностью нейтрализуют 100 ТЦД50 вируса, по крайней мере в разбавлении 1:4.

УДК 636:576.8.07:006.354	Группа С79

---