---
title: "\"Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек\""
number: "4541-87"
status: утратил силу
canonical: "https://bukva.ai/docs/sanitarnye-pravila-4541-87"
---

## "Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек"

# "Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек"

(утв. Минздравом СССР 31.12.1987 N 4541-87)

> [!WARNING]
> Документ утратил силу на территории Российской Федерации в связи с изданием Постановления Главного государственного санитарного врача РФ от 27.07.2020 N 23.
> Взамен Методических указаний по определению токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек N 3239-85 и Методических [указаний](https://bukva.ai/docs/1829-78) по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки, пораженных грибами рода Фузариум секции Sporotrichlella N 1829-78.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Заместитель главного<br>
государственного<br>
санитарного врача СССР<br>
**А.И.ЗАИЧЕНКО**<br>
N 4541-87<br>
31 декабря 1987 г.

</div>


<a id="p100002"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ**
**ТОКСИЧНОСТИ ЗЕРНА (РЖИ, ПШЕНИЦЫ) С РОЗОВОЙ**
**ОКРАСКОЙ ОБОЛОЧЕК <*>**


<a id="p100003"></a>

---

<a id="p100004"></a><*> С выходом в свет Санитарных правил "Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек" отменяется действие "Методических указаний по определению токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек" N 3239-85 и "Методических [указаний](https://bukva.ai/docs/1829-78) по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки, пораженных грибами рода Фузариум секции Sporotrichlella" N 1829-78.

<a id="p100005"></a>Санитарные правила предназначаются для контроля безвредности зерна в лабораториях республиканских, краевых и областных СЭС.
<a id="p100006"></a>В условиях повышенной влажности в период созревания хлебных злаков (при дождливом лете и на поливных землях) возможно поражение зерновых культур, особенно ржи и пшеницы, микроскопическими грибами. Грибы могут также развиваться в зерне запоздалой уборки, а также в убранном своевременно, но недостаточно просушенном или хранившемся при высокой влажности. Отдельные представители микроскопических грибов, развиваясь на зерне, образуют продукты жизнедеятельности - микотоксины, ядовитые для человека, вследствие чего зерно приобретает токсические свойства. Особую опасность представляют грибы рода Fusarium. Термическая обработка (выпечка хлебов, варка пищи) не разрушает ядовитые вещества, образованные фузариями. Поэтому употребление в пищу фузариозного зерна и продуктов его переработки может стать причиной заболевания людей (алиментарно-токсическая алейкия, расстройства функции кишечного тракта и др.). Поражение зерна грибами рода Fusarium обычно приводит к появлению розовой окраски оболочек отдельных зерен, так как многие представители фузариев при своем росте на зерне образуют наряду с токсинами красно-розовый пигмент. Поэтому розовоокрашенные оболочки рассматриваются как косвенный признак фузариозного поражения. Однако розовую окраску оболочек зерна могут формировать и другие микроскопические грибы помимо фузариев.
<a id="p100007"></a>Исследования, проведенные в Институте питания АМН СССР, показали, что токсическими свойствами может обладать не только розовоокрашенное зерно с признаками фузариоза, но также зерно без признаков фузариозного поражения, если содержание в испытуемом образце розовоокрашенных зерен превышает 3%.
<a id="p100008"></a>В связи с этим для решения вопроса о путях использования розовоокрашенного зерна без признаков фузариоза все партии зерна с содержанием зерен с розовоокрашенными оболочками свыше 3% должны быть исследованы на токсичность.
<a id="p100009"></a>Поскольку в зерне с розовой окраской оболочек, пораженном микроскопическими грибами, может накапливаться целый ряд токсических грибных метаболитов, природа которых не всегда известна, для выявления токсичности такого зерна необходимо использовать биологические методы определения, позволяющие выявить в зерне весь комплекс токсических компонентов, независимо от его химической природы.
<a id="p100010"></a>Биологические методы исследования токсичности зерна с розовой окраской оболочек включают биопробы с культурами дрожжей - Saccharomyces lactis ВКМУ-459, бактерии Bacillus megaterium ВКМВ-44 и испытания на растущих крысятах.
<a id="p100011"></a>В качестве микромодели для выявления фузариотоксинов в зерне используют штамм дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459, чувствительный к Т-2 токсину.
<a id="p100012"></a>Культура Bacillus megaterium ВКМВ-44 чувствительна к действию афлатоксинов, а также к действию метаболитов грибов рода Aspergillus - продуцентов охратоксинов.
<a id="p100013"></a>Биопробы с дрожжами Saccharomyces lactis ВКМУ-459 и бактериями Bacillus megaterium ВКМВ-44 позволяют быстро провести предварительную проверку наличия у зерна токсических свойств, связанных с возможным загрязнением вышеперечисленными микротоксинами. В случае обнаружения токсичности по биопробам необходимо провести анализ зерна на содержание конкретных микотоксинов химическими методами.
<a id="p100014"></a>В связи с тем что розовоокрашенное зерно может содержать токсические метаболиты грибов неизвестной природы, кроме проверки с дрожжевыми и бактериальными тестами, токсичность зерна должна быть проверена в опытах на высших животных. В качестве животных, чувствительных к действию комплекса токсических компонентов розовоокрашенного зерна, предлагаются крысята вместо рекомендованных ранее голубей, так как голуби избирательно чувствительны только к фузариотоксинам.
<a id="p100015"></a>Исследования на штаммах бактерий и дрожжей должны проводиться в бактериологической лаборатории СЭС, определение токсичности зерна в опытах на крысятах должно выполняться в токсикологической лаборатории СЭС.
<a id="p100016"></a>Определение токсичности розовоокрашенного зерна следует проводить по прилагаемой схеме.


## 1. <a id="p100017"></a>Схема проведения исследования


<div align="center">

<a id="p100018"></a>Проба зерна (500 г)<br>
350 г смолоть

<a id="p100019"></a> ![1. Схема проведения исследования](https://i.bukva.ai/9I4GpHqM/img_0.png) 

</div>



## 2. <a id="p100020"></a>Посуда. Аппаратура. Реактивы


<a id="p100021"></a>Посуда

1. <a id="p100022"></a>Чашки Петри (диаметр 90 - 100 мм), ГОСТ 25336-82
2. <a id="p100023"></a>Пипетки на 1 и 10 мл, градуированные, ГОСТ 28336-82
3. <a id="p100024"></a>Микропипетки на 0,1 мл градуированные
4. <a id="p100025"></a>Пробирки (диаметр 15 - 16 мм), ГОСТ 25336-82
5. <a id="p100026"></a>Банки стеклянные с притертой пробкой емк. 1,0 л
6. <a id="p100027"></a>Фарфоровые чашки (диаметр - 13 мм)
7. <a id="p100028"></a>Стеклянные палочки
8. <a id="p100029"></a>Колбы конические емк. 50, 100, 250 и 750 мл, ГОСТ 25336-82
9. <a id="p100030"></a>Воронки стеклянные (диаметр - 10 мм), ГОСТ 25336-82
10. <a id="p100031"></a>Пробойник металлический (диаметр 6 - 7 мм)
11. <a id="p100032"></a>Микробиологическая петля

<a id="p100033"></a>Аппаратура

12. <a id="p100034"></a>Горелка спиртовая или газовая
13. <a id="p100035"></a>Весы торговые со стрелками на 200 г
14. <a id="p100036"></a>Весы технические
15. <a id="p100037"></a>Кофемолка или лабораторная мельница
16. <a id="p100038"></a>Оптический стандарт мутности ГИСК им. Тарасевича
17. <a id="p100039"></a>Ареометр АСТ-2
18. <a id="p100040"></a>Бумага фильтровальная лабораторная, ГОСТ 12026-76
19. <a id="p100041"></a>Шприц медицинский на 1 мл
20. <a id="p100042"></a>Иглы для шприца N 11 с напаянной на конце оливой
21. <a id="p100043"></a>Ножницы
22. <a id="p100044"></a>Скальпель глазной
23. <a id="p100045"></a>Пинцеты - глазной и анатомический
24. <a id="p100046"></a>Холодильник бытовой
25. <a id="p100047"></a>Термостат на 28 °C +/- 1 °C и 35 +/- 1 °C

<a id="p100048"></a>Реактивы

26. <a id="p100049"></a>Глюкоза х.ч., ГОСТ 975-75
27. <a id="p100050"></a>Агар микробиологический, ГОСТ 17206-71
28. <a id="p100051"></a>Подсолнечное масло пищевое
29. <a id="p100052"></a>Хлороформ медицинский
30. <a id="p100053"></a>Пикриновая кислота, насыщенный водный раствор
31. <a id="p100054"></a>Спиртовая настойка йода медицинская
32. <a id="p100055"></a>Спирт этиловый ректификованный, [ГОСТ 18300-72](https://bukva.ai/docs/gost-18300-72-gosstandart-sssr)
33. <a id="p100056"></a>Сусло пивное
34. <a id="p100057"></a>Хлористый натрий, ГОСТ 4233-77
35. <a id="p100058"></a>Натрий едкий очищенный, [ГОСТ 11078-78](https://bukva.ai/docs/gost-11078-78) - 10-процентный раствор


## 3. <a id="p100059"></a>Питательные среды


1. <a id="p100060"></a>Мясо-пептонный агар с глюкозой:
<a id="p100061"></a>Мясо-пептонный бульон - 1000 мл
<a id="p100062"></a>Агар - 20 г
<a id="p100063"></a>Стерилизовать в течение 20 мин. при 120 °C.
<a id="p100064"></a>В остуженный до 60 °C мясо-пептонный агар ввести 25 мл 40-процентного стерильного раствора глюкозы, размешать и использовать для постановки опыта с Bacillus megaterium или разлить в стерильные пробирки по 5 мл для приготовления скошенного агара. Пробирки со средой выдержать 24 ч в термостате при 37 °C, отбраковать проросшие, остальные хранить в холодильнике не более 1 мес. и использовать для пересева культуры Bacillus megaterium.
2. <a id="p100065"></a>Картофельный агар:
<a id="p100066"></a>Картофель тертый - 200 г
<a id="p100067"></a>Агар - 20 г
<a id="p100068"></a>Вода водопроводная - 1000 мл
<a id="p100069"></a>Картофель варят 1 ч, фильтруют через марлю, доливают водой до первоначального объема, добавляет агар. Стерилизуют 30 мин. при 120 °C и разливают по 5 мл в стерильные пробирки для приготовления скошенного агара. Хранят в холодильнике не более 1 мес., используют для пересева культуры Bacillus megaterium.
3. <a id="p100070"></a>Сусло-агар:
<a id="p100071"></a>Пивное сусло 14 Ball - 100 мл
<a id="p100072"></a>Вода водопроводная - 100 мл
<a id="p100073"></a>Агар - 4 г
<a id="p100074"></a>В пивном сусле определяют содержание сахара ареометром и разводят водопроводной водой до нужной концентрации (7 Ball). Определяют pH и доводят 10-процентным раствором NaOH до 5,8 - 6,0. Добавляют агар по 2 г на 100 мл разведенного сусла. Стерилизуют 30 мин. при 112 °C. Перед использованием в опыте с дрожжами расплавить на кипящей водяной бане, охладить до 50 °C и разлить в чашки Петри по 20 мл или в стерильные пробирки для приготовления скошенного агара. Хранить пробирки со средой в холодильнике не более 1 мес. и использовать для пересева дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459.


## 4. <a id="p100075"></a>Тест-объекты


1. <a id="p100076"></a>Культура дрожжей - Saccharomyces lactis - ВКМУ-459.
<a id="p100077"></a>Культуру засевают штрихом на скошенный сусло-агар в пробирки микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, инкубируют при 28 °C 24 ч. Выросшую односуточную культуру хранят в холодильнике и пересевают на свежие косяки сусло-агара 1 раз в мес.
2. <a id="p100078"></a>Культура бактерий - Bacillus megaterium ВКМВ-44.
<a id="p100079"></a>Культуру засевают штрихом на скошенный картофельный агар в пробирки микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, и инкубируют при 28 °C 24 ч. Выросшую односуточную культуру хранят в холодильнике и пересевают на свежие косяки картофельного агара через каждые 2 недели.


## 5. <a id="p100080"></a>Отбор зерна и его паспортизация


<a id="p100081"></a>Пробы отбирают от каждой поступающей партии зерна в соответствии с [ГОСТ 13586.3-83](https://bukva.ai/docs/gost-13586-3-83).
<a id="p100082"></a>Отобранные образцы должны быть паспортизированы. На этикетках указывается:
<a id="p100083"></a>а) место отбора зерна (область, район, колхоз, совхоз и т.д.);
<a id="p100084"></a>б) наименование зерновых культур (пшеница, рожь, просо и др.);
<a id="p100085"></a>в) количество зерна, от которого взята проба (или размер партии);
<a id="p100086"></a>г) содержание розовоокрашенных зерен;
<a id="p100087"></a>д) откуда взят образец (снят на корню, из валков, из зернохранилища и т.д.);
<a id="p100088"></a>е) дата отбора пробы;
<a id="p100089"></a>ж) вес взятого образца;
<a id="p100090"></a>з) фамилия ответственного за отбор проб.
<a id="p100091"></a>Отобранные образцы направляют на исследование в областную, краевую и республиканскую санитарно-эпидемиологическую станции.


## 6. <a id="p100092"></a>Подготовка материала для исследования


<a id="p100093"></a>Из поступившего на исследование образца зерна отбирают среднюю пробу около 500 г, подсушивают ее при температуре 40 - 50 °C, из них 350 г измельчают на лабораторной мельнице или кофемолке в течение 2 мин., делят на две порции по 100 г ("А") и 250 г ("Б") и помещают в две стеклянные банки с притертыми пробками. Порции заливают хлороформом в количестве: порцию "А" - 300 мл, порцию "Б" - 800 мл, взбалтывают, оставляют на 24 ч. Отфильтровывают через бумажный фильтр порцию "А" в фарфоровую чашку, порцию "Б" - в банку с притертой пробкой емкостью 1 л. Для приготовления экстрактов зерна используют чисто вымытую нестерилизованную посуду и нестерильные фильтры. Выпаривают порции "А" и "Б" каждую отдельно в фарфоровых чашках в токе воздуха при комнатной температуре до исчезновения следов хлороформа, определяемых по реакции с йодом.
<a id="p100094"></a>*Примечание.* Постановка йодной реакции на остаточный хлороформ в экстракте зерна, на дно пустой фарфоровой чашки наносят стеклянной палочкой каплю выпаренного экстракта и каплю 5-процентного спиртового раствора йода. Появление розовой окраски свидетельствует о присутствии хлороформа и необходимости дальнейшего выпаривания. Отсутствие порозовения свидетельствует о полном удалении хлороформа из экстракта.

<a id="p100095"></a>Полученный таким образом сгущенный экстракт порции "А" используют для постановки опыта с культурой дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459 и бактерий Bacillus megaterium. Если остаток экстракта затвердел, его слегка разводят добавлением 0,4 мл стерильного подсолнечного масла.
<a id="p100096"></a>Сгущенный экстракт из порции "Б" разводят 50 мл стерильного подсолнечного масла и получают масляный экстракт зерна, который хранят в холодильнике в стерильных колбочках емкостью 50 мл и используют для введения экспериментальным крысятам.
<a id="p100097"></a>В качестве контроля готовят, как описано выше, для порции "Б" масляный экстракт доброкачественного зерна нормальной окраски.


## 7. <a id="p100098"></a>Определение токсичности зерна при помощи чувствительного к фузариотоксинам штамма дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459


<a id="p100099"></a>Для проведения исследования культуру дрожжей из исходной пробирки, хранящейся в холодильнике, пересевают штрихом микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, на скошенный сусло-агар в пробирки и инкубируют при температуре 28 °C в течение 24 ч.
<a id="p100100"></a>Затем в пробирку с выросшей односуточной культурой дрожжей наливают 10 мл стерильной водопроводной воды и стерильной петлей взбалтывают дрожжи в воде до получения суспензии. Суспензию переносят стерильной пипеткой на 5 мл в пустую стерильную пробирку и разводят стерильной водой до мутности, соответствующей 5 единицам мутности (5 млн. клеток в 1 мл) стандарта мутности. По 2 мл приготовленной суспензии дрожжевых клеток наливают в заранее приготовленные стерильные чашки Петри (2 мл суспензии на 1 чашку) и заливают расплавленным и охлажденным до 50 °C сусло-агаром из расчета 20 мл на чашку и тщательно перемешивают. В застывшей пластинке агара пробочным пробойником диаметром 6 - 7 мм, обработанным методом фламбирования, делают лунки по 3 лунки на чашку согласно схеме. В лунку вносят по 0,1 мл экстракта порции "А" стерильными микропипетками. Для каждого образца закапывают две лунки. В качестве контроля в третью лунку вносят стерильное подсолнечное масло. Чашки, не перевертывая вверх дном, ставят в термостат и инкубируют сутки при 28 °C. Отмечают появление зон угнетения роста дрожжей вокруг лунок. Для каждой пробы зерна проводят два параллельных исследования. В контроле стерильные зоны отсутствуют. При наличии стерильных зон в контроле опыт повторяют со свежей культурой.
<a id="p100101"></a>Далее зерно исследуют в опытах с Bacillus megaterium и на крысятах.


## 8. <a id="p100102"></a>Определение контаминации зерна микотоксинами при помощи чувствительного штамма бактерий Bacillus megaterium ВКМВ-44


<a id="p100103"></a>Для проведения анализа культуру бактерий Bacillus megaterium ВКМВ-44 на картофельном агаре из пробирки, хранящейся в холодильнике, пересевают штрихом микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, на скошенный МПА с 1% глюкозы или картофельный агар <*> и инкубируют при температуре 28 °C 24 ч. Готовят суспензию клеток из выросшей односуточной культуры бактерий в стерильном физиологическом растворе NaCl (0,85%) по эталону мутности N 5, что соответствует 5 единицам мутности стандарта мутности.

<a id="p100104"></a>

---

<a id="p100105"></a><*> Картофельный агар обеспечивает лучший рост культуры, чем МПА с 1% глюкозы.

<a id="p100106"></a>В расплавленный и охлажденный до 50 °C МПА с 1% глюкозы или картофельный агар вносят приготовленную клеточную суспензию в количестве 15 мл на 100 мл агара и разливают в приготовленные чашки Петри из расчета 20 мл на чашку. В застывшей пластинке агара пробочным пробойником диаметром 6 - 7 мм, обработанным методом фламбирования, делают лунки, по 3 лунки на чашку согласно схеме. В две лунки вносят по 0,1 мл экстракта порции "А" стерильными микропипетками на 0,1 мл.
<a id="p100107"></a>В третью лунку в качестве контроля вносят стерильное подсолнечное масло. Чашки, не перевертывая вверх дном, ставят в термостат и инкубируют сутки при 28 °C. Отмечают появление зон угнетения роста бактерий вокруг лунок.
<a id="p100108"></a>В контроле стерильные зоны вокруг лунок не образуются. В случае появления стерильных зон вокруг лунок в контроле опыт повторяют со свежей культурой бактерий.
<a id="p100109"></a>Затем зерно исследуют в опытах с крысятами.


## 9. <a id="p100110"></a>Биологическая проба на крысятах


<a id="p100111"></a>Используют молодых крысят линии Вистар, самцов весом 50 - 70 г в количестве 6 - 7 животных на каждую пробу зерна.
<a id="p100112"></a>Животных осматривают, отбраковывают больных, взвешивают, метят пикриновой кислотой, в соответствии с меткой записывают номер животного, помещают по 5 штук в клетку. Клетки маркируют - "опыт", "контроль", ставят дату начала опыта.
<a id="p100113"></a>Ежедневно крысятам вводят в пищевод через рот по 0,5 мл масляного экстракта исследуемой пробы зерна. Для введения используют медицинский шприц, рассчитанный на дозу объемом 1 мл, и иглу для шприца N 11, на конец которой напаивается олива. Экстракт вводят ежедневно 1 раз в сутки утром натощак, для чего с вечера убирают из клетки обычный виварный корм, оставляя воду для питья. После введения экстракта ставят в клетку виварный корм. Длительность опыта с введением масляного экстракта зерна 8 сут. В качестве контроля используют 6 - 7 крысят того же возраста и веса, которым вводят в течение опыта ежедневно натощак по 0,5 мл масляного экстракта, приготовленного из доброкачественного зерна нормальной окраски, а также в качестве дополнительного контроля отсаживают 7 животных, которым не делают никаких введений (контроль - интактные крысята).
<a id="p100114"></a>Ежедневно следят за общим состоянием животных, отмечают вялость, расстройства пищеварения, тремор, взъерошенность шерсти как симптом возможного токсического действия испытуемых образцов зерна.
<a id="p100115"></a>Признаком острой токсичности служит гибель животного в течение опытного периода.
<a id="p100116"></a>При отсутствии острого токсического действия экстрактов зерна доброкачественность последнего оценивается на основе комплекса признаков, включающих клинические симптомы, весовые характеристики животных и состояние их органов.
<a id="p100117"></a>Для получения перечисленных сведений по окончании опыта контрольных животных натощак взвешивают, забивают методом декапитации, вскрывают и исследуют визуально состояние органов, сначала у контрольных животных, затем у опытных. Отклонения регистрируются по сравнению с контрольными животными. Отмечают светлую окраску или желтизну, зернистую консистенцию печени, воспаление легких, вздутость кишечника, увеличение пейеровых бляшек в тонкой кишке и увеличение размеров мезентерального брыжеечного лимфоузла, гиперемированные кровеносные сосуды. Печень, тимус и селезенку взвешивают.
<a id="p100118"></a>При визуально обнаруживаемых отклонениях в печени морфологические исследования выявляют наличие жировой и белковой дистрофии и другие нарушения микроструктуры органов; при визуально выявляемых отклонениях в лимфоузле морфологические исследования обнаруживают наличие кровоизлияний в этом органе, обеднение клеточного состава в фолликулярных центрах и другие нарушения микроструктуры; при визуальном осмотре пейеровых бляшек в тонкой кишке при токсическом действии наблюдаются увеличенные или уменьшенные размеры по сравнению с контролем, резкая гиперемия сосудов и изменения морфологической структуры органа; визуально обнаруживаемые изменения в кишечнике также сопровождаются нарушениями микроструктуры крипт, эпителия, субэпителиальных слоев с выраженной их инфильтрацией круглоклеточными элементами; кроме того, у этих животных обнаруживаются морфологическими методами нарушения в структуре тимуса, селезенке и почек. Морфологические исследования подтверждают правомочность суждения о наличии токсического действия по визуально выявляемым признакам патологических отклонений в органах забитых животных.
<a id="p100119"></a>Результаты испытаний регистрируются в журнале по [форме N 1](#p100157) и [2](#p100191).
1. <a id="p100120"></a>На основе полученных данных учитывают количество погибших животных и их процент; если гибели животных не отмечалось, то записывают - 0.
2. <a id="p100121"></a>На основе взвешивания животных рассчитывают прирост массы тела в граммах и процентах к исходному весу:
<a id="p100122"></a>а) прирост массы в г - масса конечная - масса начальная;
<a id="p100123"></a>б) относительный прирост массы тела в % = $\frac{\text{конечная масса} - \text{начальная масса} \cdot 100}{\text{начальная масса}}$ .
<a id="p100124"></a>*Пример.* Нач. масса 50 г, конечная - 65 г
<a id="p100125"></a>прирост в % = $\frac{(65 - 50) \cdot 100}{50} = 30\%$ .
<a id="p100126"></a>Рассчитывают среднее арифметическое значение массы тела и прирост массы у всех животных за опытный период.
3. <a id="p100127"></a>Подсчитывают средние весовые показатели массы печени и селезенки и высчитывают их относительную массу по следующей формуле:
<a id="p100128"></a> $\text{М отн}. = \frac{\text{масса органа} \cdot 100}{\text{конечная масса тела}}$ 
<a id="p100129"></a>*Пример.* Вес крысенка перед забоем 70 г
<a id="p100130"></a>вес печени 3,5 г
<a id="p100131"></a> $\text{М отн}.\text{печени } = \frac{3,5 \cdot 100}{70} = 5,0\text{г}$ на 100 г тела.
4. <a id="p100132"></a>Подсчитывают количество животных, у которых были обнаружены клинические симптомы заболевания и при вскрытии визуально обнаружены изменения в вышеперечисленных органах, вычисляют процент отклонения. По [формам 1](#p100157) и [2](#p100191) заполняют и результаты обследования контрольных животных.
5. <a id="p100133"></a>Затем составляют суммарную таблицу по [формам 3](#p100219) и [4](#p100234), где приводят полученные данные для всех исследованных опытных образцов зерна с розовой окраской оболочек и образцов контрольного зерна нормальной окраски.
6. <a id="p100134"></a>Оценивают токсичность зерна по данным [форм 3](#p100219) и [4](#p100234). При токсичности зерна наблюдаются изменения одновременно по ряду признаков.
<a id="p100135"></a>Зерно оценивается по 4-балльной системе:
1) <a id="p100136"></a>резкотоксичное - при гибели одного или более экспериментальных животных - (++++ или 4+);
2) <a id="p100137"></a>токсичное - при наличии клинических признаков токсичности и отклонений в макроскопических характеристиках одного органа у 100% опытных животных или при поражении двух, трех и более органов более чем у 50% опытных животных, что может сопровождаться потерей веса животными или резким снижением прироста массы тела по сравнению с контролем (например, шерстный покров взъерошен, все животные малоподвижны, прирост тела снижен: в опыте - 17%, в контроле - 30%, печень с желтизной и зернистостью - у 5 крысят; пневмония - у 4; лимфоузлы больше нормы - у 4; кишечник вздут - у 5 крысят) - (+++ или 3+);
3) <a id="p100138"></a>слаботоксичное - клинических проявлений нет, прирост массы близок к контролю, но при вскрытии обнаруживаются визуально у 2 - 3 из 7 животных 1 или 2 признака патологических отклонений (пневмония и желтизна печени; или вздутый кишечник и увеличенные лимфоузлы с гиперемированными сосудами и увеличенные пейеровы бляшки и т.д.) - (++ или +).
<a id="p100139"></a>При сопоставлении контрольных и опытных животных при взятии в опыт полноценных животных изменения в печени, кишечнике, лимфоузлах, а также свежая пневмония в контрольной группе животных не должны обнаруживаться более чем у одного животного. Если пневмония обнаружена у половины контрольных животных, то этот признак не может рассматриваться как свидетельство токсического действия исследуемого зерна при оценке показателей у опытных животных.


## 10. <a id="p100140"></a>Рекомендации по использованию розовоокрашенного зерна после проверки его токсичности


1. <a id="p100141"></a>При наличии стерильных зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium и гибели опытных крысят (+4) зерно оценивается как резкотоксичное и может быть использовано только на технические цели.
2. <a id="p100142"></a>При отсутствии стерильных зон угнетения роста дрожжей и Bacillus megaterium, но при гибели опытных крысят зерно также оценивается как резкотоксичное и может быть использовано только на технические цели.
3. <a id="p100143"></a>При наличии стерильных зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium и токсическом действии на опытных крысят (+3) без гибели животных зерно оценивается как токсичное. Для окончательного решения необходимо определить содержание соответствующих микотоксинов <*> (Т-2 токсина, вомитоксина, афлатоксина, охратоксина) и по результатам принимается решение о подсортировке зерна с содержанием розовоокрашенных зерен от 3 до 10% доброкачественным зерном до содержания розовоокрашенных зерен не выше 3%. Токсичность подсортированного зерна повторно проверяется на животных. Токсичное зерно с содержанием розовоокрашенных зерен свыше 10% может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.

<a id="p100144"></a>

---

<a id="p100145"></a><*> Вышеперечисленные микотоксины определяются химическими методами в соответствии с нижеперечисленными методическими указаниями и рекомендациями:
1. <a id="p100146"></a>Методические [указания](https://bukva.ai/docs/3184-84) по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье. N 3184-84, М., 1984 г.
2. <a id="p100147"></a>Методические [указания](https://bukva.ai/docs/3940-85) по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) в зерне и зернопродуктах. N 3940-85, М., 1985 г.
3. <a id="p100148"></a>Методические [рекомендации](https://bukva.ai/docs/2273-80) по обнаружению, идентификации и определению содержания афлатоксинов в пищевых продуктах. N 2273-80, М., 1981 г.
4. <a id="p100149"></a>Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению содержания охратоксина А в пищевых продуктах. N 3245-85, М., 1985 г.

4. <a id="p100150"></a>Если у зерна установлены слабые токсические свойства на животных (+2), но гибели экспериментальных животных не наблюдалось и не было выявлено зон угнетения роста дрожжей и Bacillus megaterium, зерно считается слабо токсичным. После анализа на вомитоксин зерно с содержанием розовоокрашенных зерен от 3 до 10% может быть использовано на продовольственные цели только с подсортировкой доброкачественным зерном нормальной окраски до содержания розовоокрашенных зерен не выше 3%. Зерно, содержащее свыше 10% розовоокрашенных зерен, может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.
5. <a id="p100151"></a>Наличие зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium при отсутствии токсического действия на опытных крысят является показанием для проведения химического анализа зерна, как условно токсичного, на содержание соответствующих микотоксинов (Т-2 токсина, вомитоксина, афлатоксина и охратоксина). Если микотоксины не обнаруживаются, зерно считается не токсичным и реализуется как не токсичное (см. п. 6).
6. <a id="p100152"></a>Если зерно, содержащее свыше 3% зерен с розовоокрашенными оболочками, в опытах по применяемой схеме не обнаруживает токсические свойства, то после определения содержания вомитоксина, зерно с содержанием розовоокрашенных зерен от 3 до 5% может быть использовано на продовольственные цели без ограничений, а при содержании розовоокрашенных зерен от 5 до 10% - с подсортировкой доброкачественным зерном до содержания розовоокрашенных зерен не выше 5%. Зерно, содержащее свыше 10% розовоокрашенных зерен, может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.
<a id="p100153"></a>По вопросам практического внедрения биологических методов определения токсичности зерна следует обращаться в Институт питания Академии медицинских наук СССР (Москва, 109240, Устьинский проезд, дом 2/14, телефоны: 227-88-64, 297-74-43).
<a id="p100154"></a>Культуры микроорганизмов Bacillus megaterium ВКМВ-44 и Saccharomyces lactis ВКМУ-459 можно выписать из Всесоюзной коллекции микроорганизмов по адресу: 142292, г. Пущино, Московской области, Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, телефон: 231-30-87, а также получить в Институте питания АМН СССР.
<a id="p100155"></a>Для получения стандарта мутности для оптической стандартизации бактериальных взвесей обращаться в Институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича.

<div align="right">

<a id="p100156"></a>Форма N 1

<a id="p100157"></a>Регистрация результатов испытаний зерна

</div>

<div align="center">

на токсичность на крысятах

</div>



<table>
<colgroup><col width="8%"><col width="9%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="7%"><col width="11%"><col width="6%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="8%"><col width="7%"><col width="10%"></colgroup>
<tr><td colspan="6"><a id="p100158"></a>Дата опыта:</td><td colspan="6"><a id="p100159"></a>Образец зерна N</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100160"></a>N животного</td><td colspan="3"><a id="p100161"></a>Масса тела</td><td rowspan="3"><a id="p100162"></a>Гибель животных</td><td rowspan="3"><a id="p100163"></a>Клинические симптомы: вялость, поносы, выделения из носа, взъерошенность и т.д.</td><td colspan="6"><a id="p100164"></a>Масса органов</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100165"></a>начальная (г)</td><td rowspan="2"><a id="p100166"></a>конечная (г)</td><td rowspan="2"><a id="p100167"></a>прирост в %</td><td colspan="2"><a id="p100168"></a>печень</td><td colspan="2"><a id="p100169"></a>селезенка</td><td colspan="2"><a id="p100170"></a>тимус</td></tr>
<tr><td><a id="p100171"></a>Масса печени в г</td><td><a id="p100172"></a>Относительная масса печени в г на 100 г тела</td><td><a id="p100173"></a>Масса селезенки в г</td><td><a id="p100174"></a>Относительная масса селезенки в г на 100 г тела</td><td><a id="p100175"></a>Масса тимуса в г</td><td><a id="p100176"></a>Относительная масса тимуса в г на 100 г тела</td></tr>
<tr><td><a id="p100177"></a>1.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100178"></a>2.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100179"></a>3.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100180"></a>4.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100181"></a>5.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100182"></a>6.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100183"></a>7.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100184"></a>Среднее М</td><td rowspan="2"></td><td rowspan="2"></td><td rowspan="2"></td><td><a id="p100185"></a>Всего погибших</td><td><a id="p100186"></a>Всего с клинич. симпт.</td><td colspan="6" rowspan="2"><a id="p100187"></a>Средние показатели по группе</td></tr>
<tr><td><a id="p100188"></a>% погибших</td><td><a id="p100189"></a>%</td></tr>
</table>


<a id="p100190"></a>Форма N 2

<a id="p100191"></a>Регистрация результатов испытаний зерна
на токсичность на крысятах.

<div align="center">

Макроскопические изменения в органах

</div>



<table>
<colgroup><col width="10%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="10%"><col width="9%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="7%"><col width="8%"><col width="6%"><col width="7%"><col width="8%"><col width="9%"></colgroup>
<tr><td colspan="6"><a id="p100192"></a>Дата опыта:</td><td colspan="7"><a id="p100193"></a>Образец N</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100194"></a>N животного</td><td colspan="5"><a id="p100195"></a>Визуально выявляемые изменения в органах</td><td colspan="7"><a id="p100196"></a>Результаты микроскопического изучения органов</td></tr>
<tr><td><a id="p100197"></a>Легкие (пневмония)</td><td><a id="p100198"></a>Печень (желтизна, зернистость и др.)</td><td><a id="p100199"></a>Кишечник (вздутие, гиперемия сосудов и др.)</td><td><a id="p100200"></a>Пейеровы бляшки</td><td><a id="p100201"></a>Мезентеральный брыжеечный лимфоузел</td><td><a id="p100202"></a>Тимус</td><td><a id="p100203"></a>Печень</td><td><a id="p100204"></a>Селезенка</td><td><a id="p100205"></a>Почки</td><td><a id="p100206"></a>Кишечник</td><td><a id="p100207"></a>Брыжеечные лимфоузлы</td><td><a id="p100208"></a>Пейеровы бляшки</td></tr>
<tr><td><a id="p100209"></a>1.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
<tr><td><a id="p100210"></a>2.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
<tr><td><a id="p100211"></a>3.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
<tr><td><a id="p100212"></a>4.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
<tr><td><a id="p100213"></a>5.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
<tr><td><a id="p100214"></a>6.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
<tr><td><a id="p100215"></a>7.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
<tr><td><a id="p100216"></a>Среднее по группе</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
<tr><td><a id="p100217"></a>Кол-во животн. (в %) с измен. в органах</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="7"></td></tr>
</table>


<a id="p100218"></a>Форма N 3

<a id="p100219"></a>Сравнение характеристик опытных и контрольных животных,
полученных при испытании токсичности зерна на крысятах

<a id="p100220"></a>Дата опыта:


<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="17%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="16%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="11%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100221"></a>N образца зерна</td><td rowspan="2"><a id="p100222"></a>Характеристика образца (откуда получен, % розовоокрашенных зерен)</td><td rowspan="2"><a id="p100223"></a>Кол-во погибших животных (в %)</td><td rowspan="2"><a id="p100224"></a>Средний прирост массы тела выживших животных (в %)</td><td rowspan="2"><a id="p100225"></a>Кол-во животных (в %) с клиническими симптомами</td><td colspan="3"><a id="p100226"></a>Средняя относительная масса органов животных по группе</td></tr>
<tr><td><a id="p100227"></a>Печень (г/100 г массы тела)</td><td><a id="p100228"></a>Селезенка (г/100 г массы тела)</td><td><a id="p100229"></a>Тимус (г/100 г массы тела)</td></tr>
<tr><td><a id="p100230"></a>1.<br>2.<br>3.<br>и т.д.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="3"></td></tr>
<tr><td><a id="p100231"></a>Контроль - доброкачественное зерно</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100232"></a>Контроль - интактные крысята</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
</table>


<div align="right">

<a id="p100233"></a>Форма N 4

</div>


<div align="center">

<a id="p100234"></a>Сравнение макроскопических и микроскопических изменений<br>
в органах опытных и контрольных животных, полученных<br>
при испытании токсичности зерна на крысятах

</div>


<a id="p100235"></a>Дата опыта


<table>
<colgroup><col width="10%"><col width="8%"><col width="6%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="9%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="5%"><col width="7%"><col width="6%"><col width="9%"><col width="6%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100236"></a>N образца зерна</td><td rowspan="2"><a id="p100237"></a>Характеристика образца (откуда получен, % розовоокрашенных зерен)</td><td colspan="5"><a id="p100238"></a>Количество животных (в %) с визуально выявляемыми изменениями в органах</td><td colspan="7"><a id="p100239"></a>Количество животных (в %) с микроскопическими изменениями в органах</td></tr>
<tr><td><a id="p100240"></a>Пневмония</td><td><a id="p100241"></a>Печень</td><td><a id="p100242"></a>Кишечник</td><td><a id="p100243"></a>Пейеровы бляшки</td><td><a id="p100244"></a>Брыжеечный лимфоузел</td><td><a id="p100245"></a>Тимус</td><td><a id="p100246"></a>Печень</td><td><a id="p100247"></a>Селезенка</td><td><a id="p100248"></a>Почки</td><td><a id="p100249"></a>Кишечник</td><td><a id="p100250"></a>Пейеровы бляшки</td><td><a id="p100251"></a>Брыжеечные лимфоузлы</td></tr>
<tr><td><a id="p100252"></a>1.<br>2.<br>3.<br>и т.д.</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100253"></a>Контроль - доброкачеств. зерно</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100254"></a>Контроль - интактные крысята</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
</table>




<a id="p100255"></a>

---