| Уровень 1. Литературные данные, методы in silico |
- все доступные данные;
- физико-химические свойства;
- токсикологические и экотоксикологические показатели;
- методы in silico (англ. read-across) |
| Уровень 2. Методы in vitro |
- сродство связывания эстрогена (Метод ОЭСР N 493);
- сродство связывания андрогеновых рецепторов (US EPA TG OPPTS 890.1150);
- исследование транскрипционной активации, опосредованной стабильно трансфицированным человеческим $\alpha - \text{рецептором}$ эстрогена, для выявления эстроген-агонистической активности веществ (Метод ОЭСР N 455);
- скрининг по эстрогену с использованием штамма дрожжей;
- анализ транскрипционной активации стабильно трансфицированных андрогеновых рецепторов человека для обнаружения андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ (Метод ОЭСР N 458);
- H295R in vitro тест на стероидогенез с использованием человеческой клеточной линии адренокарциномы (Метод ОЭСР N 456);
- анализ ароматазы (US EPA TG OPPTS 890.1200);
- анализ нарушения работы щитовидной железы (например, ингибирование тиреопероксидазы, связывание транстиретина);
- анализ трансактивации ретиноидных рецепторов;
- анализ других гормональных рецепторов при необходимости;
- скрининг с высокой пропускной способностью |
| Уровень 3. Методы in vivo, механизмы действия |
| Млекопитающие | Немлекопитающие |
- утеротропный биотест на грызунах: краткосрочный скрининг-тест для выявления эстрогенной активности (Метод ОЭСР N 440);
- тест Хешбергера на крысах (Метод ОЭСР N 441) | - анализ метаморфоза земноводных (Метод ОЭСР N 231);
- оценка репродуктивной способности рыб (Метод ОЭСР N 229);
- 21-дневное исследование на рыбах (Метод ОЭСР N 230);
- скрининг андрогенизированной самки колюшки (Метод ОЭСР N 148);
- обнаружение веществ, действующих через рецепторы эстрогена, с использованием трансгенных эмбрионов cyp19a1b GFP Danio rerio;
- анализ передачи сигналов щитовидной железы эмбриона Xenopus;
- скрининговый анализ антиандрогенов у ювенильной медаки;
- кратковременный скрининг активности ювенильных гормонов с использованием Daphnia magna;
- быстрый репортерный анализ неблагоприятных последствий андрогенного нарушения |
| Уровень 4. Методы in vivo, механизмы действия и неблагоприятные эффекты |
| Млекопитающие | Немлекопитающие |
- изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 28-дневных опытах на грызунах (Метод ОЭСР N 407);
- изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 90-дневных опытах на грызунах (Метод ОЭСР N 408);
- исследование пубертатного развития и функции щитовидной железы у крыс-самцов перипубертатного периода (анализ самцов PP) (US EPA TG OPPTS 890.1500);
- исследование пубертатного развития и функции щитовидной железы у самок крыс в перипубертатном возрасте (анализ самок PP) (US EPA TG OPPTS 890.1450);
- оценка токсического действия на пренатальное развитие (Метод ОЭСР N 414);
- комбинированные исследования хронической токсичности и канцерогенности (Методы ОЭСР N 451, 452, 453);
- оценка репродуктивной (эмбриональной) токсичности скрининговым методом (Метод ОЭСР N 421);
- совместное исследование токсичности при повторном воздействии с репродуктивной (эмбриональной) токсичностью (Метод ОЭСР N 422);
- исследование нейротоксичности в процессе онтогенеза (Метод ОЭСР N 426);
- кожная токсичность при повторных дозах: 21/28-дневное исследование (Метод ОЭСР N 410);
- субхроническая кожная токсичность: 90-дневное исследование (Метод ОЭСР N 411);
- оценка подострой токсичности при ингаляционном поступлении: 28-дневное исследование (Метод ОЭСР N 412);
- оценка субхронической токсичности при ингаляционном поступлении в 90-дневном исследовании (Метод ОЭСР N 413);
- изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 90-дневных опытах на негрызунах (Метод ОЭСР N 409) | - испытания по воздействию на половозрелость рыб (Метод ОЭСР N 234);
- исследование роста и развития личинок земноводных (Метод ОЭСР N 241);
- птицы: репродукционный тест (Метод ОЭСР N 206);
- определение токсичности для рыб на ранних стадиях развития (Метод ОЭСР N 210);
- новый руководящий документ по тесту развития и размножения гарпактикоидов с Amphiascus (РД ОЭСР N 201);
- тест на размножение Potamopyrgus antipodarum (Метод ОЭСР N 242);
- тест на размножение Lymnaea stagnalis (Метод ОЭСР N 243);
- тест на токсичность хирономида (Методы ОЭСР N 218, 219);
- тест на размножение Daphnia (с индукцией самцов) (Метод ОЭСР N 211) |
| Уровень 5. Методы in vivo, расширенные исследования |
| Млекопитающие | Немлекопитающие |
- расширенное изучение репродуктивной токсичности на одном поколении (Метод ОЭСР N 443);
- оценка репродуктивной токсичности на 2 поколениях (Метод ОЭСР N 416) | - тест на токсичность для рыб на протяжении жизненного цикла (US EPA TG OPPTS 850.1500);
- расширенный тест на воспроизводство одного поколения медаки (Метод ОЭСР N 240);
- тест на токсичность двух поколений птиц Coturnix japonica (US EPA TG OCSPP 890.2100/740-C-15-003);
- испытание токсичности на хирономидах на протяжении цикла развития с использованием седиментационной воды (Метод ОЭСР N 233);
- тест на нескольких поколениях дафний для оценки эндокринных разрушителей;
- расширенный тест воспроизводства Danio rerio в одном поколении |
| Наименование метода | Уровень метода | Потенциальные механизмы эндокринного действия |
| Э | А | С | Щ | Ю | Эк | Р |
| Сродство связывания эстрогена (Метод ОЭСР N 493) | 2 | # | | | | | | |
| Исследование транскрипционной активации, опосредованной стабильно трансфицированным человеческим $\alpha - \text{рецептором}$ эстрогена, для выявления эстроген-агонистической активности веществ (Метод ОЭСР N 455) | 2 | # | | | | | | |
| Анализ транскрипционной активации стабильно трансфицированных андрогеновых рецепторов человека для обнаружения андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ (Метод ОЭСР N 458) | 2 | | # | | | | | |
| H295R in vitro тест на стероидогенез с использованием человеческой клеточной линии адренокарциномы (Метод ОЭСР N 456) | 2 | | | # | | | | |
| Сродство связывания андрогеновых рецепторов (US EPA TG OPPTS 890.1150) | 2 | | # | | | | | |
| Анализ ароматазы (US EPA TG OPPTS 890.1200) | 2 | | | # | | | | |
| Утеротропный биотест на грызунах: краткосрочный скрининг-тест для выявления эстрогенной активности (Метод ОЭСР N 440) | 3 | # | | | | | | |
| Тест Хешбергера на крысах (Метод ОЭСР N 441) | 3 | | # | | # | | | |
| Оценка репродуктивной способности рыб (Метод ОЭСР N 229) | 3 | # | # | # | | | | |
| 21-дневное исследование на рыбах (Метод ОЭСР N 230) | 3 | # | # | # | | | | |
| Анализ метаморфоза земноводных (Метод ОЭСР N 231) | 3 | | | | # | | | |
| Скрининг андрогенизированной самки колюшки (Метод ОЭСР N 148) | 3 | | # | | | | | |
| Обнаружение веществ, действующих через рецепторы эстрогена, с использованием трансгенных эмбрионов cyp19a1b GFP Danio rerio | 3 | # | | | | | | |
| Скрининговый анализ антиандрогенов у ювенильной медаки | 3 | | # | | | | | |
| Анализ передачи сигналов щитовидной железы эмбриона Xenopus | 3 | | | | # | | | |
| Быстрый репортерный анализ неблагоприятных последствий андрогенного нарушения | 3 | | # | | | | | |
| Кратковременный скрининг активности ювенильных гормонов с использованием Daphnia magna | 3 | | | | | & | | |
| Изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 28-дневных опытах на грызунах (Метод ОЭСР N 407) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 90-дневных опытах на грызунах (Метод ОЭСР N 408) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Комбинированные исследования хронической токсичности и канцерогенности (Методы ОЭСР N 451, 452, 453) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| 28-дневная совместная оценка репродуктивной/эмбриональной токсичности (скрининговый метод) (Методы ОЭСР N 421, 422) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Оценка токсического действия на пренатальное развитие (Метод ОЭСР N 414) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Исследование нейротоксичности в процессе онтогенеза (Метод ОЭСР N 426) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Кожная токсичность при повторных дозах: 21/28-дневное исследование (Метод ОЭСР N 410) | 4 | # | # | # | | | | & |
| Субхроническая кожная токсичность: 90-дневное исследование (Метод ОЭСР N 411) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Оценка подострой токсичности при ингаляционном поступлении в 28-дневном исследовании (Метод ОЭСР N 412) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Оценка субхронической токсичности при ингаляционном поступлении в 90-дневном исследовании (Метод ОЭСР N 413) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 90-дневных опытах на негрызунах (Метод ОЭСР N 409) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Исследование пубертатного развития и функции щитовидной железы у крыс-самцов перипубертатного периода (анализ самцов PP) (US EPA OPPTS 890.1500) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Исследование пубертатного развития и функции щитовидной железы у самок крыс в перипубертатном периоде (US EPA OPPTS 890.1450) | 4 | # | # | # | # | | | & |
| Определение токсичности для рыб на ранних стадиях развития (Метод ОЭСР N 210) | 4 | | | | & | | | |
| Испытание по воздействию на половозрелость рыб (Метод ОЭСР N 234) | 4 | # | # | # | & | | | |
| Исследование роста и развития личинок земноводных (Метод ОЭСР N 241) | 4 | # | # | & | # | | | |
| Птицы: репродукционный тест (Метод ОЭСР N 206) | 4 | & | & | & | & | | | |
| Тест на размножение Potamopyrgus antipodarum (Метод ОЭСР N 242) | 4 | | | | | | | & |
| Тест на размножение Lymnaea stagnalis (Метод ОЭСР N 243) | 4 | | | | | | | & |
| Тест на токсичность хирономида (Методы ОЭСР N 218, 219) | 4 | | | | | & | & | |
| Тест на размножение Daphnia (с индукцией самцов) (Метод ОЭСР N 211) | 4 | | | | | & | & | |
| Новый руководящий документ по тесту развития и размножения гарпактикоидов с Amphiascus (РД ОЭСР N 201) | 4 | | | | | & | & | |
| Оценка репродуктивной токсичности на двух поколениях (Метод ОЭСР N 416) | 5 | # | # | # | # | | | & |
| Расширенное изучение репродуктивной токсичности на одном поколении (Метод ОЭСР N 443) | 5 | # | # | # | # | | | & |
| Расширенный тест на воспроизводство одного поколения медаки (Метод ОЭСР N 240) | 5 | # | # | # | & | | | |
| Тест на токсичность для рыб на протяжении жизненного цикла (US EPA OPPTS 850.1500) | 5 | & | & | & | & | | | |
| Расширенный тест воспроизводства Danio rerio в одном поколении | 5 | # | # | # | & | | | |
| Тест на токсичность двух поколений птиц Coturnix japonica (US EPA TG OCSPP 890.2100/740-C-15-003) | 5 | # | # | & | # | | | |
| Испытание токсичности на хирономидах на протяжении цикла развития с использованием седиментационной воды (Метод ОЭСР N 233) | 5 | | | | | & | & | |
| Тест на нескольких поколениях Daphnia для оценки эндокринных разрушителей | 5 | | | | | & | & | |
Примечание:
Темно-синий цвет - ответ в тесте вызван данным эндокринно-обусловленным механизмом и подтверждает его. |
Светло-голубой цвет - ответ в тесте вызван данным эндокринно-обусловленным механизмом, но не подтверждает его.
Э - эстроген-опосредованный; А - андроген-опосредованный; Щ - опосредованный гормонами щитовидной железы; С - вмешательство в стероидогенез; Ю - ювенильные гормоны; Эк - экдистероидные гормоны; Р - метаболизм ретиноевой кислоты.
4.3. Концептуальная модель оценки токсичности химических веществ, воздействующих на эндокринную систему, на основании уровневого подхода не является стратегией тестирования, которой нужно следовать линейно от 1 до 5 уровня. Линейный подход к тестированию рекомендуется для новых и (или) малоизученных химических веществ. |
| 1,2-Дибром-3-хлорпропан (CAS <12> 96-12-8) |
| Параметры острой токсичности | Уровень тестирования | Результаты тестирования |
DL50 170 мг/кг, в/ж, крысы;
DL50 257 мг/кг, в/ж, мыши;
DL50 150 мг/кг, в/ж, морские свинки;
DL50 123 мг/кг, в/б, мыши;
DL50 1400 мг/кг, н/к, кролики;
DL50 100 мг/кг, п/к, крысы | 4 | 350 мг/кг/4 дня (прерывисто), парентерально, крысы - изменение уровня лютеинизирующего гормона, влияние на сперматогенез (морфологию, подвижность и количество сперматозоидов) [[45]](#p102256) |
| 350 мг/кг/4 дня (прерывисто), п/к, крысы - изменение уровней гонадотропинов, андрогенное влияние, влияние на яички, придаток яичка, семявыносящий проток [[46]](#p102257) |
| 3 ppm/6 ч/84 недели (прерывисто), инг., крысы - опухоли коры надпочечников [[47]](#p102258) |
| 1 ppm ( $\approx 10$ мг/м3, LOAEC), 0,1 ppm ( $\approx 1$ мг/м3, NOAEC), 6 ч/5 дней в неделю/14 недель, инг., кролики - атрофия яичек, аномалии сперматозоидов [[48]](#p102259) |
| 912,5 мг/кг/26 недель (прерывисто), п/к, крысы - изменения уровня лютеинизирующего гормона, массы яичек [[49]](#p102260) |
| 4562 мг/кг/26 недель (прерывисто), п/к, крысы - изменения уровней гонадотропинов, массы простаты [[49]](#p102260) |
| 600 ppb/6 ч/76 недель (прерывисто), инг., крысы - опухоли коры надпочечников [[50]](#p102261) |
| 15,45 мг/кг/103 недели (прерывисто), в/ж, крысы - опухоли коры надпочечников [[51]](#p102262) |
| 15 и 29 мг/кг, в/ж, 5 р/нед, в течение 73 и 64 недель соответственно, крысы - у самок аденокарциномы молочной железы (у 24/50 в группе 15 мг/кг, 31/50 в группе 29 мг/кг) [[52]](#p102263) |
| 5 | Клинико-эпидемиологические исследования (на производстве) - нарушение сперматогенеза (морфология, подвижность и количество сперматозоидов, азооспермия, разной степени выраженности олигоспермия) [[53]](#p102264) |
| Класс опасности 1A | Виды нарушений:
- нарушение морфологии и функции надпочечников (опухоли);
- нарушение морфологии и функции молочных желез (опухоли);
- нарушение морфологии и функции мужских репродуктивных органов (снижение массы яичек и придатков, простаты);
- изменение уровней гонадотропинов - нарушение сперматогенеза (снижение количества и подвижности сперматозоидов, азооспермия, олигоспермия) |
| Примечание: отнесение к классу 1A основано на результатах 9 исследований методов уровня 4, выполненных на различных тест-объектах при различных путях поступления и длительности экспериментов, и на 1 исследовании уровня 5 на людях. Наблюдаются множественные нарушения морфологии и функции нескольких эндокринных органов и систем. |
| Бисфенол A (CAS 80-05-7) |
| Параметры острой токсичности | Уровень тестирования | Результаты тестирования |
DL50 3200 - 5000 мг/кг, в/ж, крысы;
DL50 1600 - 4100 мг/кг, в/ж, мыши;
DL50 3000 мг/кг, п/к, кролики;
DL50 3000 мг/кг, н/к, кролики;
DL50 200 - 800 мг/кг, в/б, крысы;
DL50 150 - 200 мг/кг, в/б, мыши;
DL50 150 мг/кг, в/б, кролики;
CL50 1700 мг/кг, инг., 6 ч, крысы | 3 | 100, 300 мг/кг, п/к, овариэктомированные мыши, 7 дней - агонистические и антагонистические эффекты; при 300 мг/кг 2-кратное увеличение массы матки (Метод ОЭСР N 440) [[54]](#p102265) |
0,002, 0,02, 0,2, 2, 20, 200, 400, 800 мг/кг/день, в/ж, крысы, 1 день и 3 дня - через 4 часа после однократных доз:
0,002 - 20 мг/кг - отсутствие утеротропного эффекта и транскрипционного эффекта для экспрессии генов матки;
200 - 800 мг/кг - утеротропный эффект, увеличение экспрессии генов и массы матки (Метод ОЭСР N 440) [[55]](#p102266) |
| 50, 200 и 600 мг/кг, в/ж, крысы, 10 дней (начиная с 56 послеродового дня) - сомнительные результаты, андроген-агонистическое свойство не установлено (Метод ОЭСР N 441) [[56]](#p102267) |
| 0,228 мг/л, Danio rerio, 21 день - увеличение соотношения эстрадиол/тестостерон (Метод ОЭСР N 230) [[57]](#p102268) |
| 4 | LOAEL 600 мг/кг/день, в/ж, крысы, 28 дней - увеличение массы щитовидной железы, печени, яичек и надпочечников, изменения морфологии надпочечников, аномальные половые циклы, снижение массы простаты, изменение эстрального цикла (Метод ОЭСР N 407) [[58]](#p102269) |
| 0,25, 25 мг/кг, в/ж, с питьевой водой в период полового созревания (с 28 по 56 день после рождения), мыши - снижение уровня тироксина, когнитивные нарушения [[59]](#p102270) |
| 0,25, 2,5, 25 мг/кг, п/к, с 1 дня после рождения до 10, крысы - изменение работы гипоталамо-гипофизарно-тиреоидную ось у взрослых крыс в эструсе с эффектами на гипофиз и щитовидную железу (снижение уровня тироксина, повышение уровня тиреотропного гормона) [[60]](#p102271) |
| 0,002 мг/кг, п/к, с 10 дня беременности до 7 дня лактации, крысы - повышенный уровень кортикотропин-рилизинг-гормона, кортикостерона, гормонов коры надпочечников, влияние на передачу сигналов нейронов, пониженный уровень тестостерона, влияет на сексуальное поведение [[61]](#p102272) |
| 11 - 250 мг/кг/день, п/к, 7 дней, крысы - влияние на развитие гипофиза, влияние на развитие матки, изменение массы матки, повышенный уровень пролактина [[62]](#p102273) |
| 0,1, 50 мг/кг/день, в/ж, 6 - 21 дни беременности, крысы - изменения в морфологии эндометрия, влияние на экспрессию рецептора эстрогена-альфа, влияние на экспрессию рецептора эстрогена-бета, влияние на морфологию матки [[63]](#p102274) |
| 0,0025, 0,25, 1 мг/кг, в/ж, крысы - развитие протоковой гиперплазии и карциномы молочных желез на 50 и 95 день после рождения у крыс, изменения морфологии молочной железы, влияет на аногенитальное расстояние [[64]](#p102275) |
| 0,01 мг/кг/день, п/к, 9 - 16 дни беременности, крысы - влияние на метаболизм жирных кислот, нарушение толерантности к глюкозе, повышенный уровень триглицеридов, приводит к ожирению [[65]](#p102276) |
| | 0,005 - 5 мг/кг/день, через питьевую воду, 8 месяцев, мыши - повышенный уровень холестерина, влияние на биосинтез холестерина, влияние на метаболизм глюкозы; влияние на развитие ожирения и связанных с ним патологий: диабет 2 типа и сердечно-сосудистые заболевания;
NOAEL 5000 мг/кг/день [[66]](#p102277) |
| 5, 50 мг/кг/день, в/ж, 6,5 - 16,5 дни беременности, крысы - влияние на транспорт кальция, влияет на передачу сигналов кальция [[67]](#p102278) |
| 5 | Концентрация вещества в моче и уровни тестостерона, лютеинизирующего гормона и фолликулостимулирующего гормона в сыворотке крови измерялись у мужчин-маляров, работающих с эпоксидной смолой и использующих краску, содержащую от 10% до 30% вещества. Уровни вещества в моче, сывороточного лютеинизирующего гормона и сывороточного фолликулостимулирующего гормона были выше у маляров, чем в контрольной группе. Уровни сывороточного тестостерона были ниже у маляров, чем в контрольной группе [[68]](#p102279) |
| Класс опасности 1A | Виды нарушений:
- нарушение морфологии и функции щитовидной железы (увеличение массы, изменение метаболизма гормонов);
- нарушение морфологии и функции мужских репродуктивных органов (увеличение массы яичек, простаты, изменение уровня тестостерона);
- нарушение менструального цикла;
- нарушение развития плода (изменение аногенитального расстояния);
- нарушение морфологии и функции надпочечников (увеличение массы, изменение уровня кортикостерона);
- нарушение морфологии тимуса;
- изменение уровней кортикотропин-рилизинг-гормона,
адренокортикотропного гормона;
- влияние на сексуальное поведение;
- нарушение оси гипоталамус-гипофиз-яички;
- изменение уровней лютеинизирующего, фолликулостимулирующего гормонов;
- нарушение морфологии и функции женских репродуктивных органов (гиперплазия молочных желез, матки, яичников);
- нарушение углеводного обмена (влияние на метаболизм глюкозы, изменение уровня инсулина, лептина, инсулинорезистентность);
- нарушение липидного обмена (ожирение) |
| Примечание: отнесение к классу 1A основано на результатах 10 исследований методов уровня 4 (одно исследование является стандартизированным), выполненных на низких дозах, различных тест-объектах, при различных путях поступления и длительности экспериментов и на 1 исследовании уровня 5 на людях. В одном исследовании на рыбах установлена эндокринная активность. В исследованиях уровня 3 на грызунах наблюдается корреляция утеротропного эффекта с увеличением экспрессии генов матки. Наблюдаются множественные нарушения морфологии и функции нескольких эндокринных органов и систем. |
| Резерпин (CAS 50-55-5) |
| Параметры острой токсичности | Уровень тестирования | Результаты тестирования |
DL50 420 мг/кг, в/ж, крысы;
DL50 > 50 мг/кг, в/ж, мыши;
DL50 44 мг/кг, в/б, крысы;
DL50 5 мг/кг, в/б, мыши;
DL50 25 мг/кг, п/к, крысы;
DL50 5,61 мг/кг, п/к, мыши;
DL50 15 мг/кг, в/в, крысы;
DL50 21 мг/кг, в/в, мыши | 3 | Утеротропный эффект (агонист эстрогена) (Метод ОЭСР N 440) [[69]](#p102280) |
| 0,4 мг/кг/5 дней (прерывисто), п/к, крысы - изменения в уровне гонадотропинов <*> [[70]](#p102281) |
| 4 | 384 мг/кг/26 нед (непрерывно), 2,11 мг/кг день, перорально, мыши - влияние на менструальный цикл; изменение со стороны матки, шейки матки, влагалища, изменения массы яичников [[71]](#p102282) |
| 163,8 мг/кг/39 нед (непрерывно), 0,6 мг/кг день, перорально, мыши - изменения массы почек; изменения массы тимуса [[72]](#p102283) |
| 216 мг/кг/2 года (непрерывно), перорально, крысы - опухоли коры надпочечников [[73]](#p102284) |
| 340 мг/кг/ 3 года (прерывисто), в/ж, крысы - опухоли желудочно-кишечного тракта, щитовидной железы [[74]](#p102285) |
| Класс опасности 1B | Виды нарушений:
- нарушение морфологии и функции щитовидной железы (опухоли);
- нарушение морфологии и функции надпочечников (опухоли коры);
- нарушение морфологии тимуса (изменение массы);
- изменение уровней гонадотропинов;
- утеротропный эффект |
| Примечание: отнесение к классу 1B основано на результатах 2 исследований методов уровня 3 и 4 исследований уровня 4. Один из методов уровня 3 (отмечен звездочкой) является нестандартизированным, однако отнесен к уровню 3 на основании выявленных эффектов в краткосрочном эксперименте in vivo. К уровню 4 отнесены 4 исследования на грызунах в длительном эксперименте. Наблюдаются множественные нарушения морфологии и функции нескольких эндокринных органов и систем, в том числе опухоли. Отнесение к классу 1A невозможно ввиду отсутствия данных на людях. |
| Бутилбензилфталат (CAS 85-68-7) |
| Параметры острой токсичности | Уровень тестирования | Результаты тестирования |
DL50 2330 мг/кг, в/ж, крысы;
DL50 4170 - 6160 мг/кг, в/ж, мыши;
DL50 > 10000 мг/кг, н/к, кролики;
DL50 6700 мг/кг, н/к, крысы, мыши; CL50 > 6700 мг/м3, инг., 4 ч, крысы | 4 | 70500 мг/кг/141 день (прерывисто), в/ж, крысы - гипофункция щитовидной железы, изменения массы яичников [[75]](#p102286) |
| 10500 мг/кг/21 день (прерывисто), в/ж, крысы - изменения массы печени, почек и щитовидной железы [[75]](#p102286) |
| 32000 мг/кг/64 дн (прерывисто), в/ж, крысы - изменения массы печени, почек и щитовидной железы [[75]](#p102286) |
| 700 мг/кг/14 дн (прерывисто), в/ж, крысы - изменения массы надпочечников, печеночная микросомальная смешанная оксидаза [[76]](#p102287) |
| 250 мг/кг/день, в/ж, 6 нед, крысы - повышенный уровень фолликулостимулирующего гормона, нарушение функции яичников, влияние на популяцию фолликулов яичников [[77]](#p102288) |
| 0, 300, 900, 2800, 8300 или 25000 ppm в рационе/0, 30, 60, 180, 550 или 1660 мг/кг/, 26 нед, крысы - при 25000 ppm/1660 мг/кг/ - снижение средней массы тела на 30% меньше; абсолютной массы яичек, хвоста и придатка яичка, простаты; увеличение относительной массы печени и почек; увеличение гипоспермии и атрофии семенных канальцев и гипоспермии в придатке яичка; снижение концентрации спермы в ткани хвоста придатка яичка; NOAEL - 8300 ppm (~ 550 мг/кг массы тела в день) [[78]](#p102289) |
| 750 мг/кг, в/ж, с 14 дня беременности по 3 день после рождения, крысы - отсутствие материнской токсичности или снижения размеров помета; уменьшение массы тела детенышей при рождении; у детенышей мужского пола наблюдалось сокращение аногенитального расстояния (около 30%) и снижение массы яичек (около 35%); в младенчестве у самцов наблюдались женские ареолы (соски) - изменения половой дифференциации потомства (антиандроген) [[79]](#p102290) |
| 120 мг или 500 мг/кг/день через зонд, с 10 дня беременности до родов, крысы - задержка полового созревания и изменения морфологии молочной железы у потомства (задержку открытия влагалища и изменения в постнатальной молочной железе в течение длительного времени после окончания воздействия, в основном к 35-дневному возрасту) [[80]](#p102291) |
| 500 мг/кг/день, в/ж, 9 - 16 дни беременности, мыши - задержка открытия влагалища у самок; у потомства - уменьшение аногенитального расстояния у самцов на 10 и 20 нед; снижение концентрации сывороточного тестостерона у самцов на 20 нед и увеличение концентрации сывороточного тестостерона у самок на 20 нед [[81]](#p102292) |
| 5 | Исследование на двух поколениях: 100, 200, 400 мг/кг/день, в/ж, крысы - размягчение яичек, диффузная атрофия семенных канальцев яичек, снижение количества сперматозоидов и (или) остаточных половых клеток в просвете придатка яичка в поколении F1 после доз > 100 мг/кг, снижение массы придатка яичка F1 при дозах > 200 мг/кг, совместно с низкой массой придатка яичка F0, гиперплазией клеток Лейдига, остаточными половыми клетками в просвете придатка яичка и низкой массой семенных пузырьков, маленькими яичками и придатками яичек, частичной аплазией или аплазией придатков яичек и гиперплазией клеток Лейдига в поколении F1 при дозе 400 мг/кг. Репродуктивная способность: родители F1 при 400 мг/кг - сниженный индекса фертильности и задержку препуциального отделения полового члена. У потомства наблюдались снижение массы тела в случае F1 и изменение аногенитального расстояния у самок F1 и самцов F2 при дозах > 100 мг/кг, с низкой массой селезенки при 400 мг/кг в обоих поколениях. У родительских животных NOEL и NOAEL были < 100 мг/кг/день, и никаких серьезных эффектов на репродуктивную способность не было вызвано при дозах менее 200 мг/кг/день. NOEL и NOAEL для роста и развития потомства составляют < 100 мг/кг/день [[82]](#p102293) |
| Исследование на двух поколениях: 0, 20, 100 и 500 мг/кг, в/ж, крысы - при 500 мг/кг у самцов-отъемышей поколения F - значительное снижение массы яичек и придатков яичек, сопровождающееся повреждением яичек, у самок F1, которым вводили 500 мг/кг - снижение массы яичников и увеличение массы матки. Снижение уровня тестостерона у самцов F0 и F1, которым вводили 500 мг/кг; значительное сокращение аногенитального расстояния (указание на андрогенное действие) у самцов F1 при 500 мг/кг. В поколении F2 к 21-му дню после рождения не наблюдалось никаких существенных эффектов, связанных с воздействием вещества; NOAEL 100 мг/кг для репродуктивной и внутриутробной токсичности; 20 мг/кг - для системной токсичности (Метод ОЭСР N 416) [[83]](#p102294) |
| Класс опасности 1B | Виды нарушений:
- нарушение морфологии и функции щитовидной железы (гипофункция);
- нарушение морфологии надпочечников (изменение массы);
- изменение уровня фолликулостимулирующего гормона;
- нарушение морфологии и функции женских репродуктивных органов (изменение популяции фолликулов яичников);
- нарушение морфологии и функции мужских репродуктивных органов (снижение массы придатков яичек, семенных пузырьков, количества клеток Лейдига, атрофия семенных канальцев);
- нарушение сперматогенеза (изменение морфологии, снижение количества сперматозоидов);
- нарушение развития плода (изменение аногенитального расстояния, аномалии развития эндокринной системы);
- нарушение морфологии и функции молочных желез (опухоли) |
| Примечание: отнесение к классу 1B основано на результатах 9 исследований нестандартизированных методов уровня 4 и 2 исследований уровня 5 (одно - стандартизированное, второе - нестандартизированное), выполненных на двух поколениях. Наблюдаются множественные нарушения морфологии и функции нескольких эндокринных органов и систем, в том числе опухоли. Отнесение к классу 1A невозможно ввиду отсутствия данных на людях. |
| Бензофенон (CAS 119-61-9) |
| Параметры острой токсичности | Уровень тестирования | Результаты тестирования |
DL50 10000 мг/кг, в/ж, крысы;
DL50 2895 мг/кг, в/ж, мыши;
DL50 727 мг/кг, в/б, мыши;
DL50 3535 мг/кг, н/к, кролики | 1* | 50, 100, 250 мг/кг/день, в/б, 3 дня, крысы - влияние на метаболизм ксенобиотиков [[84]](#p102295) |
| 2 | Установлено ингибирующее действие на активность пероксидазы щитовидной железы in vitro [[85]](#p102296) |
| 3 | 900 мг/кг/3 дня (прерывисто), в/б, крысы - эстрогенное влияние, изменение массы матки [[86]](#p102297) |
| 1200 мг/кг/3 дня (прерывисто), в/ж, крысы - эстрогенное влияние, изменение массы матки [[87]](#p102298) |
| 5 | 100, 450, 2000 ppm (~ 6 - 9, 29 - 40 и 130 - 179 мг/кг), в/ж, два поколения, крысы - явных признаков воздействия на эндокринную и репродуктивную системы не обнаружено даже при дозе 2000 ppm у родителей F0 или потомства F1 (NOEL); NOEL 450 ppm для поколения F1 и F2 (Метод ОЭСР N 416) [[88]](#p102299) |
| Класс опасности 2 | Виды нарушений:
- нарушение морфологии и функции щитовидной железы (влияние на активность ферментов);
- эстрогенное влияние (изменение массы матки) |
| Примечание: для данного вещества получены результаты исследования по Методу ОЭСР N 416, выполненных на низких дозах в 100 - 1000 раз ниже среднесмертельных, чем объясняется отсутствием признаков воздействия на эндокринную систему. В методах исследования уровня 3 при высоких дозах (1/10 DL50) установлено эстрогенное влияние. Результаты исследования, отмеченного звездочкой, отнесены к уровню 1 ввиду неполноты информации о характере нарушений. Отнесение к классу опасности 2 выполнено на основе одного теста in vitro уровня 2 и 2 тестов in vivo уровня 3. |
| 1,4-Диаминобензол (CAS 106-50-3) |
| Параметры острой токсичности | Уровень тестирования | Результаты тестирования |
DL50 80 - 133 мг/кг, в/ж, крысы;
DL50 145 мг/кг, в/ж, морские свинки;
DL50 > 2500 мг/кг, н/к, кролики;
DLmin 5000 мг/кг, н/к, кролики;
CL50 920 мг/м3, инг., 4 ч, крысы | 4 | 1, 2 и 3 мг/кг/сут, н/к, 90 дн., крысы - при 2 и 3 мг/кг дозозависимые изменения морфологии семенных канальцев, снижение количества сперматозоидов, увеличение количества ненормальных сперматозоидов, снижение массы яичек, окислительный стресс в яичках [[89]](#p102300) |
| Класс опасности 3 | Виды нарушений:
- нарушение сперматогенеза (изменение морфологии, снижение количества, увеличение аномальных сперматозоидов);
- нарушение морфологии и функции мужских репродуктивных органов (изменение массы яичек, морфологии семенных канальцев, окислительный стресс) |
| Примечание: для данного вещества выявлены нарушения в единственном нестандартизованном тесте при наименее чувствительном пути поступления. Поскольку отсутствуют доказательства эндокринного механизма действия, то вещество отнесено к классу опасности 3, необходимы дополнительные исследования. |
| CAS | Наименование | Подкласс опасности <*> | Связывание эстрогеновых рецепторов <**> | ERBA/Рекомбинантный эстрогенный рецептор человека, %; экспериментальные данные | ERBA/Рекомбинантный эстрогенный рецептор человека, %; расчетные данные | ARBA/Рекомбинантный андрогенный рецептор человека, %; экспериментальные данные | ARBA/Рекомбинантный андрогенный рецептор человека, %; расчетные данные |
| <...>58-18-4 | Метилтестостерон | 1B | + | н/д | 0/0,00796 | 78,8 | 16,4/28,6 |
| <...>50-28-2 | $17\beta - \text{Эстрадиол}$ | н/д | + | 126 | 16,2/16,2 | 6,6 | 0,0308/0,0811 |
| <...>57-91-0 | $17\alpha - \text{Эстрадиол}$ | н/д | + | 80,1 | 25,4/26,8 | 0,0885 | 1,33/1,33 |
| <...>57-63-6 | Этинилэстрадиол | 1B | + | 142 | 9,47/42,8 | 0,482 | 0,0681/0,0152 |
| <...>434-22-0 | 19-Нортестостерон | н/д | + | 0,031 | 0,00486/0,00486 | 98,1 | 35,9/35,9 |
| <...>599-64-4 | 4-Кумилфенол | н/д | + | 0,107 | 0,415/0,00405 | 0,00739 | 0,00695/н/д |
| <...>140-66-9 | 4-Терт-октилфенол | 1B | + | 0,124 | 0,362/0,0697 | 0,0125 | 0,0153/0,00448 |
| <...>0-05-7 | 2,2-Бис(4-гидроксифенил)пропан (Бисфенол A) | 1A | + | 0,195 | 0,201/0,201 | 0,03 | 0,0165/0,011 |
| <...>5-68-7 | Бутилбензилфталат | 1B | + | 0,00318 | 0,00429/0,00452 | 0,0168 | 0,00228/0,00228 |
| <...>479-13-0 | Куместрол | 2 | + | 0,264 | 0,186/0,186 | н/д | 0,017/0,014 |
| <...>56-53-1 | Диэтилстильбестрол | 1A | + | 88,9 | 13,4/13,4 | 0,0136 | 0,0157/0,0157 |
| <...>20-47-8 | Этилпарабен | 1B | + | н/д | 0,000564/0,00796 | 0 | 0/н/д |
| <...>446-72-0 | Генистеин | 1B | + | 0,12 | 0,0595/0,0508 | 0 | 0,0548/0,0147 |
| <...>520-18-3 | Кемпферол | н/д | + | 0,029 | 0,0097/0,011 | н/д | 0,0457/0,0136 |
| <...>43-50-0 | Хлордекон | 1B | + | 0,0155 | 0/0 | 0,0186 | 0,000756/0,000756 |
| <...>4-16-2 | мезо-Гексэстрол | н/д | + | 37,6 | 0,194/0,194 | 0,0127 | 0,017/0,017 |
| <...>72-43-5 | Метоксихлор | 1B | + | 0,00238 | 0,00147/н/д | 0,0159 | 0,000856/н/д |
| <...>68-23-5 | Норэтинодрел | н/д | + | 0,282 | 0,0316/0,0316 | 2,36 | 43,1/12,7 |
| <...>1912-24-9 | Атразин | 1B | - | 0 | 0/0 | 0 | 0,00137/0 |
| <...>50-22-6 | Кортикостерон | н/д | - | 0 | 0,0062/0 | 0,299 | 16,3/5,86 |
| <...>55277-42-1 | Кетоконазол | 1B | - | 0 | 0/0 | н/д | 0,0222/0 |
| <...>330-55-2 | Линурон | 2 | - | 0 | 0/0 | 0,0259 | 0,0107/0 |
| <...>50-55-5 | Резерпин | 1B | - | 0 | 0/0 | н/д | 0,0222/0 |
| <...>52-01-7 | Спиронолактон | н/д | - | 0 | 0/0 | 3,08 | 0/0 |
| <...>66575-29-9 | Форсколин | н/д | н/д | н/д | 0,0159/0,00436 | н/д | 36,7/36,5 |
| <...>67747-09-5 | Прохлораз | 1B | н/д | 0 | 0/0 | н/д | 0,0154/0,00553 |
| <...>25-84-8 | Аминоглютетимид | н/д | н/д | н/д | 0,00765/0 | н/д | 0,00882/0,00244 |
| <...>002-61-3 | Гонадотропин | н/д | н/д | н/д | н/д | н/д | н/д |
| <...>61-82-5 | 2-Амино-1,3,4-триазол (Амитрол) | 1B | н/д | 0 | 0/0 | 0 | 0,00806/0 |
| <...>50-32-8 | Бензо(а)пирен | 1B | н/д | 0 | 0,0104/0,0104 | 0,00428 | 0/0,00494 |
| <...>20-92-8 | Бис(4-гидроксифенил)метан (Бисфенол F) | 1B | н/д | 0,0719 | 0,209/0,106 | 0,00692 | 0,0399/0,0468 |
| <...>0-09-1 | Бис(4-гидроксифенил)сульфон (Бисфенол S) | 1B | н/д | 0,0055 | 0,115/0,0837 | 0 | 0,0116/0,0142 |
| <...>478-61-1 | 4-[1,1,1,3,3,3-Гексафтор-2-(4-гидроксифенил)проп-2-ил]фенол (Бисфенол AF) | 1B | н/д | 0,774 | 0,196/0,196 | 0,0442 | 0,0156/0,0217 |
| <...>7-40-7 | 4,4'-(1-Метилпропилиден)бисфенол (Бисфенол B) | 1B | н/д | 0,593 | 0,0919/0,0919 | 0,0208 | 0,0346/0,02 |
| <...>06-99-0 | Бута-1,3-диен | 1B | н/д | н/д | 0/0 | н/д | 0/0 |
| <...>99-76-3 | Метил-4-гидроксибензоат (Метилпарабен) | 1B | н/д | н/д | 0,000249/0,0203 | 0 | 0/н/д |
| <...>4-26-8 | Бутил-4-гидроксибензоат (Бутилпарабен) | 1B | н/д | 0,018 | 0,0114/0,0144 | н/д | 0,0109/н/д |
| <...>20-83-2 | 2,4-Дихлорфенол | 1B | н/д | 0 | 0/0 | 0 | 0/0 |
| <...>7554-50-1 | 2-Октилфенол | 1B | н/д | н/д | 0,0765/0,098 | н/д | 0.00682/0,00682 |
| <...>18-74-1 | Гексахлорбензол | 1B | н/д | н/д | 0,0144/0,000414 | н/д | 0,0393/0,00682 |
| <...>31-57-7 | 2-Гидрокси-4-метоксибензофенон (Бензофенон-3) | 1B | н/д | 0 | 0,0103/0,00278 | 0 | 0,00801/0,0237 |
| <...>03-90-2 | N-(4-Гидроксифенил)ацетамид (Ацетаминофен) | 1B | н/д | 0 | 0,00128/0,00128 | 0 | 0/0 |
| <...>01-77-9 | 4,4'-Диаминодифенилметан | 1B | н/д | 0 | 0,0001/0 | 0 | 0/0 |
| <...>6-12-8 | 1,2-Дибром-3-хлорпропан | 1A | н/д | 0 | 0/0 | 0 | 0/0 |
| <...>83-18-1 | Дибутилоловодихлорид | 1B | н/д | н/д | 0,000932/0,000932 | н/д | 0,0744/0,000932 |
| <...>002-53-5 | Дибутилстаннан | 1B | н/д | н/д | 0/0 | н/д | 0/0 |
| <...>4-74-2 | Дибутилфталат | 1B | н/д | н/д | 0,0009/0,000726 | н/д | 0,00686/0,00336 |
| <...>4-75-3 | Дигексилфталат | 1B | н/д | 0,000918 | 0,000556/0,000556 | 0 | 0,000908/0,000908 |
| <...>4-69-5 | Диизобутилфталат | 1B | н/д | 0,000452 | 0,000814/0,000636 | н/д | 0,00686/0 |
| <...>31-11-3 | 1,2-Диметилбензол-1,2-дикарбонат (Диметилфталат) | 1B | н/д | 0 | 0,000178/0,000726 | н/д | 0,00902/0,00655 |
| <...>17-84-0 | Диоктилфталат | 1B | н/д | н/д | 0,000616/0,00074 | н/д | 0/0 |
| <...>4-61-7 | Дициклогексилфталат | 1B | н/д | 0,00105 | 0,000989/0,000989 | 0,00454 | 0/0 |
| <...>4-66-2 | Диэтилфталат | 1B | н/д | 0 | 0,000726/0,000726 | 0 | 0,00566/0,00336 |
| <...>376-20-9 | Моно(2-этилгексил)фталат | 1B | н/д | 0,00132 | 0/0 | н/д | 0,00686/0,0035 |
| <...>634-04-4 | 2-Метил-2-метоксипропан | 1B | н/д | н/д | 0/0,000142 | н/д | 0/0 |
Примечание: в числителе расчетные данные с использованием профилировщика "Estrogen Receptor Binding", а в знаменателе - "rtER Expert System - USEPA"; "+" - положительный результат (эффект присутствует); "-" - отрицательный результат (эффект отсутствует); "н/д" - отсутствуют экспериментальные данные или программа не совершила расчет по причине отсутствия достаточного числа аналогов с экспериментальными данными.
<*> - подкласс опасности химического вещества по эндокринному эффекту, установленный в соответствии с методическими документами <17>.
<**> - Duijndam B., Tedeschi M. et all. Evaluation of an imaging-based in vitro screening platform for estrogenic activity with OECD reference chemicals. Toxicology in Vitro - 2022. - V. 81 (105348). - p. 11.
Для целей моделирования набор данных был разделен на пять диапазонов активности по отношению к значениям RBA. Сильные связывающие вещества (RBA > 10%), умеренные (10% > RBA > 0,1%), слабые связывающие вещества (0,1% > RBA > 0,001%), мало связывающие (0,001% > RBA > 0%) и неактивные (не связывающие) химические вещества (RBA 0%) [[95]](#p102306). |
| IN VIVO | Грызуны (крысы) |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | 10 животных (5 самцов и 5 самок) |
| Количество групп | Минимум 3 опытные группы и контрольная группа |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Молодые здоровые половозрелые животные; самки нерожавшие и небеременные. Самки должны быть спарены с самцами того же вида |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | Оптимальное значение 50 - 60% (не ниже 30% и не выше 70%) |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Животные содержатся небольшими группами одного пола, но могут быть размещены индивидуально, если это научно обосновано. При групповом содержании в одной клетке размещается не более 5 животных |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Изучаемое вещество вводится желудочным зондом, с диетой или с питьевой водой |
| Частота и длительность введений | Животные получают изучаемое вещество 7 дней в неделю в течение 28 дней. Если изучаемое вещество вводится внутрижелудочно, то рекомендуется делать в одноразовой дозе для животных с использованием желудочного зонда или подходящей интубационной канюли |
| Наблюдения |
| Общие клинические наблюдения | Ежедневно, минимум 1 раз в день |
| Гематологические исследования |
| Показатели | - гематокрит;
- концентрация гемоглобина;
- количество эритроцитов;
- общий лейкоцитоз и лейкоцитарная формула;
- количество тромбоцитов и время (потенциал) свертываемости крови |
| Клиническая биохимия |
| Показатели | - натрий;
- калий;
- глюкоза;
- общий холестерин;
- мочевина;
- креатинин;
- общий белок;
- альбумин;
- не менее двух ферментов - индикаторов гепатоцеллюлярных эффектов (аланинаминотрансфераза (далее - АЛТ), аспартатаминотрансфераза (далее - АСТ), щелочная фосфотаза (далее - ЩФ), гамма-глютамилтранспептидаза и глютаматдегидрогеназа) и желчные кислоты |
| Эндокринзависимые показатели |
| Показатели | - Т3;
- Т4;
- ТТГ |
| Патологические исследования |
| Измерение массы органов и проведение гистопатологического исследования | - головной мозг (репрезентативные области, включая большой мозг, мозжечок и Варолиев мост);
- спинной мозг;
- глаза;
- желудок, тонкий и толстый кишечники (включая Пейеровы бляшки);
- печень;
- почки;
- надпочечники;
- селезенка;
- сердце;
- щитовидная железа;
- трахея и легкие;
- гонады (семенники и яичники);
- вспомогательные половые органы (матка и шейка матки, эпидидимисы, простата + семенные пузырьки с коагулирующими железами), влагалище;
- мочевой пузырь;
- лимфатические узлы;
- периферический нерв (седалищный или большеберцовый);
- скелетная мышца;
- кость с костным мозгом |
| Ткани индикаторы эндокринно-зависимых эффектов | - гонады (семенники и яичники);
- вспомогательные половые органы (матка и шейка матки, эпидидимисы, семенные пузырьки с коагулирующими железами, дорзолатеральная и вентральная части простаты), вагина;
- надпочечники;
- гипофиз;
- молочные железы самцов;
- щитовидная железа;
- надпочечники |
| IN VIVO | Грызуны (крысы) |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | 20 животных (10 самцов и 10 самок) |
| Количество групп | Опытная и контрольная группы |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Молодые здоровые половозрелые животные; самки нерожавшие и небеременные. Самки должны быть спарены с самцами того же вида. |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | Оптимальное значение 50 - 60% (не ниже 30% и не выше 70%) |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Животные могут содержаться индивидуально или размещаться небольшими группами одного пола. |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Изучаемое вещество вводится желудочным зондом, с диетой или с питьевой водой |
| Частота и длительность введений | Ежедневно перорально в течение 90 дней |
| Наблюдения |
| Общие клинические наблюдения | Ежедневно, минимум 1 раз в день |
| Гематологические исследования |
| Показатели | - гематокрит;
- концентрация гемоглобина;
- количество эритроцитов;
- общий лейкоцитоз и лейкоцитарная формула;
- количество тромбоцитов и время (потенциал) свертываемости крови |
| Клиническая биохимия |
| Показатели | - натрий;
- калий;
- глюкоза;
- общий холестерин;
- мочевина;
- креатинин;
- общий белок;
- альбумин;
- не менее двух ферментов - индикаторов гепатоцеллюлярных эффектов (АЛТ, АСТ, ЩФ, гамма-глютамилтранспептидаза и сорбитолдегидрогеназа) |
| Патологические исследования |
| Измерение массы органов и проведение гистопатологического исследования | - головной мозг (репрезентативные области, включая большой мозг, мозжечок и продолговатый мозг (Варолиев мост);
- спинной мозг (все три уровня: шейный, среднегрудной и поясничный);
- гипофиз;
- щитовидная железа, паращитовидные железы;
- тимус;
- пищевод;
- слюнные железы;
- желудок, тонкий и толстый кишечник (включая Пейеровы бляшки);
- печень;
- поджелудочная железа;
- почки;
- надпочечники;
- селезенка;
- сердце;
- трахея и легкие;
- аорта;
- гонады;
- матка;
- вспомогательные половые органы;
- молочные железы самок;
- простата;
- мочевой пузырь;
- желчный пузырь (мыши);
- лимфатические узлы;
- периферический нерв (седалищный или большеберцовый);
- срез костного мозга (и (или) свежий пунктат костного мозга) |
| IN VIVO | Собаки, свиньи |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | В каждой дозе используются как минимум 8 животных (четыре самки и четыре самца) |
| Количество групп | Три экспериментальные группы с различными дозами тестируемого вещества, плюс группа положительного контроля |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Здоровые молодые животные, 4 - 6-месячного и не позднее 9-месячного возраста животных |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | 50 - 60% - не ниже 30% и не выше 70% |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды. На выбор диеты может повлиять необходимость обеспечить хорошее смешивание изучаемого вещества, если оно вводится с кормом |
| Содержание | Содержание в клетках должно быть подходящим для используемого вида животных. Клетки должны быть расставлены так, чтобы свести к минимуму возможные эффекты, связанные с размещением клеток |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Изучаемое вещество вводят с диетой или с питьевой водой, желудочным зондом или в капсулах. Метод перорального введения зависит от целей исследования и физико-химических свойств изучаемого вещества |
| Частота введений | Однократная суточная доза |
| Объем вводимого раствора тестируемого вещества при желудочном и инъекционном введении | Уровни доз могут быть основаны на результатах экспериментов с повторным введением вещества или исследований по поиску диапазона доз |
| Длительность тестирования | 90 дней |
| Наблюдения и контролируемые показатели |
| Общие клинические наблюдения | Один раз в день |
| Клинико-патологические параметры (в начале эксперимента, через один месяц или в середине исследования и при завершении) | - гематология (гематокрит, концентрацию гемоглобина, количество эритроцитов, общий лейкоцитоз и лейкоцитарную формулу, количество тромбоцитов и время свертываемости крови, протромбиновое время или тромбопластиновое время);
- клиническая биохимия (кальций, фосфор, хлориды, натрий, калий, глюкозу натощак, АЛТ, АСТ, орнитин декарбоксилазу, гамма глютамил транспептидазу, азот мочевины, альбумин, креатинин крови, общий билирубин и общий белок сыворотки);
- анализ мочи (внешний вид (цвет и мутность), осмотическое давление и удельный вес, pH, белок, глюкоза, кровь и клетки крови);
- исследования для выявления маркеров общего повреждения тканей;
- анализы липидов, гормонов, кислотно-щелочного баланса, метгемоглобина и угнетения холинэстеразы (если необходимо) |
| Гистопатологическое исследование (органы и ткани, сохраняемые при проведении некропсии) | - головной мозг (репрезентативные области, включая большой мозг, мозжечок и продолговатый мозг (Варолиев мост);
- спинной мозг (на трех уровнях: шейном, среднегрудном и поясничном);
- гипофиз;
- щитовидная и паращитовидные железы;
- тимус;
- пищевод;
- слюнные железы;
- желудок;
- тонкий и толстый кишечник (включая Пейеровы бляшки);
- печень;
- желчный пузырь;
- поджелудочная железа;
- почки;
- надпочечники;
- селезенка;
- сердце и аорта;
- трахея и легкие;
- гонады;
- матка;
- вспомогательные половые органы;
- молочные железы самок;
- простата;
- мочевой пузырь;
- лимфатические узлы (желательно один лимфатический узел вблизи пути введения вещества и еще один лимфатический узел, удаленный от пути введения вещества, для выявления системных эффектов);
- периферический нерв (седалищный или большеберцовый) желательно в непосредственной близости к мышце;
- срез костного мозга (и (или) свежий пунктат костного мозга);
- кожа;
- все макроскопические повреждения |
Гистопатологическое исследование
(условия проведения) | Полное гистопатологическое исследование проводится с фиксированными органами и тканями всех животных контрольной группы и всех животных, получавших максимальную дозу вещества. Исследование распространяется и на всех животных, получавших вещество в других дозах, если у животных, получавших максимальную дозу, выявлены изменения, обусловленные воздействием изучаемого вещества. Все макроскопические патологические изменения изучаются.
Если использовалась сателлитная группа, гистопатологические исследования проводятся с тканями и органами, в которых выявлены изменения, вызванные воздействием изучаемого вещества |
| IN VIVO | Крысы |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | Группа состоит из 5 мужских и 5 женских особей грызунов |
| Количество групп | 3 опытные группы (по группе на каждый уровень воздействия) и контрольная группа (с воздухом и (или) растворителем) и группа исследования обратимости (при необходимости) |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Молодые здоровые половозрелые животные (самки нерожавшие и небеременные). На день экспозиции испытываемого препарата животные должны быть в возрасте от 7 до 9 недель |
| Масса тела | Диапазон колебания массы животных для каждого пола не должен превышать $\pm$ 20% от средней массы животных |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | Оптимальный уровень 30 - 70% |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Индивидуальное (предпочтительно при воздействии через все тело) или небольшой группой при исследовании одного уровня концентрации (число животных в камере не должно затруднять возможность наблюдать за каждым из них, а также должно сократить вероятность потерь из-за каннибализма и борьбы) |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Ингаляционный |
| Условия воздействия (экспозиции) | Интраназальная модель экспозиции (воздействие через голову, нос, мордочку) (предпочтительна для изучения жидких и твердых аэрозолей и для паров, которые могут конденсироваться в форме аэрозолей) или воздействие через все тело |
| Целевые концентрации (уровни воздействия) | - высокий уровень концентрации должен показывать токсический эффект, но не вызывать устойчивые проявления летальности, препятствующие эффективной оценке результатов;
- средний уровень (средние уровни) концентрации подбирается для получения градации токсических эффектов между низким и высоким уровнями;
- низкий уровень концентрации должен показывать слабые признаки токсичности или полное их отсутствие |
| Ингаляционная камера (количество животных) | Для поддержания стабильности атмосферы объем, занимаемый телами тестируемых животных, не должен превышать 5% объема камеры |
| Частота и длительность воздействия | Разовая экспозиция: крысы допускается до 6 часов.
Общая экспозиция: в течение 6 часов в день 5 дней в неделю на протяжении 4-недельного периода (28 дней) или 7 дней в неделю (например, при испытании ингаляционных лекарственных препаратов) |
| Ограничения | Во время затравки следует исключить кормление животных |
| Время вскрытия животных | Приблизительно через 24 часа после введения последней дозы |
| Наблюдения и контролируемые показатели |
| Общие клинические наблюдения | До, во время и после воздействия |
| Клинико-патологические параметры | - гематология (количество эритроцитов, гематокрит, концентрация гемоглобина, средний эритроцитный гемоглобин, среднее гематокритное число, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, ретикулоциты, тельца Гейнца, общее количество лейкоцитов, дифференциальное количество лейкоцитов, количество тромбоцитов, потенциал свертывания (один параметр на выбор), протромбиновое время, время свертывания, частичное тромбопластиновое время);
- клиническая биохимия (сахар, общий холестерин, триглицериды, азот мочевины крови, общий билирубин, креатинин, лактатдегидрогеназа (далее - ЛДГ, общий белок, альбумин, глобулин, АЛТ, АСТ, ЩФ, сорбитодегидрогеназа, калий, натрий, кальций, фосфор, хлорид);
- анализ мочи (внешний вид (цвет и мутность), объем, удельный вес или осмотическая концентрация, уровень pH, общий белок, сахар);
- бронхоальвеолярный лаваж (определение ЛДГ, общего белка или альбумина, числа клеток дифференцированных альвеолярных макрофагов, лимфоцитов, нейтрофилов и эозинофилов) |
| Офтальмологическое исследование | Обследование глазного дна, преломляющей среды, радужной оболочки и конъюнктивы с использованием офтальмоскопа или эквивалентного устройства |
| Гистопатологическое исследование (органы и ткани, сохраняемые при проведении некропсии) | - надпочечники;
- костный мозг (и (или) свежий аспират);
- мозг (включая срезы головного мозга, мозжечка, продолговатого мозга (Варолиева моста);
- глаза (сетчатка, зрительный нерв) и веки;
- сердце;
- почки;
- гортань (3 уровня, один из которых включает основание надгортанника);
- печень;
- легкое (все доли на одном уровне, включая главные бронхи);
- лимфатические узлы прикорневой зоны легкого, особенно при использовании слаборастворимого испытуемого вещества. Для более глубокого и (или) иммунологического исследования могут рассматриваться дополнительные лимфатические узлы, например, средостенные, шейные (поднижнечелюстные) и (или) околоушные;
- ткани носоглотки (как минимум 4 уровня, один из которых включает носоглоточный проход и назально-ассоциированную лимфоидную ткань);
- пищевод;
- обонятельная луковица;
- яичники;
- семенные пузырьки;
- спинной мозг (шейный, среднегрудной и поясничный отделы);
- селезенка;
- желудок;
- семенники;
- тимус (вилочковая железа);
- щитовидная железа;
- трахея (как минимум 2 уровня, включая один продольный срез через киль и 1 поперечный срез)
- мочевой пузырь;
- матка (включая шейку);
- все макроскопические повреждения |
| Гистопатологическое исследование (условия проведения) | Проводится для контрольной группы и групп, подвергавшихся воздействию высоких концентраций, а также для всех животных, умерших или умерщвленных во время исследования.
При наличии повреждений органов и тканей у животных, подвергавшихся воздействию высоких концентраций, те же органы и ткани исследуются во всех остальных группах.
Если в группе, подвергавшейся воздействию высокой концентрации, наблюдается чрезмерное количество ранних смертей или другие проблемы, снижающие значимость полученных данных, гистопатологическому исследованию подлежит следующая более низкая концентрация |
| Примечание: органы, наименование которых выделено полужирным шрифтом, иссекают и взвешивают во влажном состоянии насколько возможно быстро после вскрытия, чтобы не допустить их высыхания. Ткани и органы фиксируют в 10% растворе забуференного формалина или другого фиксатора сразу после вскрытия, но не менее чем за 24 - 48 часов до иссечения в зависимости от применяемого фиксатора. |
| IN VIVO | Крысы |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | группа из 10 мужских и 10 женских особей грызунов |
| Количество групп | 3 опытные группы (по группе на каждый уровень воздействия) и контрольная группа (с воздухом и (или) растворителем) и группа исследования обратимости (при необходимости) |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Молодые здоровые половозрелые животные;
(самки нерожавшие и небеременные).
На день экспозиции испытываемого препарата животные должны быть в возрасте от 7 до 9 недель |
| Масса тела | Диапазон колебания массы животных для каждого пола не должен превышать $\pm$ 20% от средней массы животных |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | Оптимальный уровень 30 - 70% |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Индивидуальное (предпочтительно при воздействии через все тело) или небольшой группой при исследовании одного уровня концентрации (число животных в камере не должно затруднять возможность наблюдать за каждым из них, а также должно сократить вероятность потерь из-за каннибализма и борьбы) |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Ингаляционный |
| Условия воздействия (экспозиции) | Интраназальная модель экспозиции (воздействие только через голову, нос, мордочку). Предпочтительна для изучения жидких и твердых аэрозолей и для паров, которые могут конденсироваться в форме аэрозолей или воздействие через все тело |
| Целевые концентрации (уровни воздействия) | - высокий уровень концентрации должен показывать токсический эффект, но не вызывать устойчивые проявления летальности, препятствующие эффективной оценке результатов;
- средний уровень (средние уровни) концентрации подбирается для получения градации токсических эффектов между низким и высоким уровнями;
- низкий уровень концентрации должен показывать слабые признаки токсичности или полное их отсутствие |
| Ингаляционная камера (количество животных) | Для поддержания стабильности атмосферы объем, занимаемый телами тестируемых животных, не должен превышать 5% объема камеры |
| Частота и длительность воздействия | Разовая экспозиция: крысы допускается до 6 часов.
Общая экспозиция: в течение 6 часов в день 5 дней в неделю на протяжении 90-дневного периода (13 недель) или 7 дней в неделю (например, при испытании ингаляционных лекарственных препаратов) |
| Ограничения | Во время затравки следует исключить кормление животных |
| Время вскрытия животных | Приблизительно через 24 часа после введения последней дозы |
| Наблюдения и контролируемые показатели |
| Общие клинические наблюдения | До, во время и после воздействия |
| Клинико-патологические параметры | - гематология (количество эритроцитов, гематокрит, концентрация гемоглобина, средний эритроцитный гемоглобин, среднее гематокритное число, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, ретикулоциты, тельца Гейнца, общее количество лейкоцитов, дифференциальное количество лейкоцитов, количество тромбоцитов, потенциал свертывания (один параметр на выбор), протромбиновое время, время свертывания, частичное тромбопластиновое время);
- клиническая биохимия (сахар, общий холестерин, триглицериды, азот мочевины крови, общий билирубин, креатинин, ЛДГ, общий белок, альбумин, глобулин, АЛТ, АСТ, ЩФ, сорбитодегидрогеназа, калий, натрий, кальций, фосфор, хлорид);
- анализ мочи (внешний вид (цвет и мутность), объем, удельный вес или осмотическая концентрация, уровень pH, общий белок, сахар);
- бронхоальвеолярный лаваж (определение ЛДГ, общего белка или альбумина, числа клеток дифференцированных альвеолярных макрофагов, лимфоцитов, нейтрофилов и эозинофилов) |
| Офтальмологическое исследование | Обследование глазного дна, преломляющей среды, радужной оболочки и конъюнктивы с использованием офтальмоскопа или эквивалентного устройства |
| Гистопатологическое исследование (органы и ткани, сохраняемые при проведении некропсии) | - надпочечники;
- аорта;
- костный мозг (и (или) свежий пунктат);
- мозг (включая отделы головного мозга, мозжечок и медулла (Варолиев мост);
- слепая кишка;
- коагулирующие (свертывающие) железы;
- толстая кишка;
- двенадцатиперстная кишка;
- придатки яичка;
- глаза (сетчатка, зрительный нерв) и веки;
- бедро и коленный сустав;
- желчный пузырь (при наличии)
- гардеровы железы;
- сердце;
- подвздошная кишка;
- тонкая кишка;
- почки;
- слезные железы (экстраорбитальные);
- гортань (3 уровня, включая основание надгортанника);
- печень;
- легкое (обычно левое легкое, включая главные бронхи и плевру, но может быть использовано правое легкое);
- лимфатические узлы из области корня легкого, особенно для плохо растворимых частиц исследуемых химических веществ. Для более тщательного изучения и (или) исследований с иммунологическим фокусом дополнительно могут быть исследованы дренирующие лимфатические узлы, например, из задних медиастинальных, внутренних яремных, паратимических, цервикальных, околоушных и (или) цервикальных (подчелюстных) областей;
- лимфатические узлы (периферические от места попадания в организм);
- молочная железа (самца и самки);
- мышца (бедра);
- носоглоточные ткани (не менее четырех уровней; 1 уровень, включающий носоглоточный проток и нозально-ассоциированную лимфоидную ткань);
- пищевод;
- обонятельная луковица;
- яичники;
- поджелудочная железа;
- паращитовидная железа;
- периферический нерв (седалищный или большеберцовый, по возможности, близко к мышце);
- гипофиз;
- предстательная железа;
- пищевод;
- прямая кишка;
- слюнные железы;
- семенные пузырьки;
- шкурка (кожа);
- спинной мозг (шейный, среднегрудной и поясничный);
- селезенка;
- грудина;
- желудок;
- зубы;
- яички;
- тимус (вилочковая железа);
- щитовидная железа;
- язык;
- трахея (не менее двух уровней, включая один продольный срез через киль и один поперечный срез);
- мочеточник;
- мочеиспускательный канал (уретра);
- мочевой пузырь;
- матка;
- органы-мишени;
- влагалище (вагина);
- все макроскопические поражения и массы |
| Гистопатологическое исследование (условия проведения) | Проводится для контрольной группы и групп, подвергавшихся воздействию высоких концентраций, а также для всех животных, умерших или умерщвленных во время исследования.
При наличии повреждений органов и тканей у животных, подвергавшихся воздействию высоких концентраций, те же органы и ткани исследуется во всех остальных группах.
Если в группе, подвергавшейся воздействию высокой концентрации, наблюдается чрезмерное количество ранних смертей или другие проблемы, снижающие значимость полученных данных, гистопатологическому исследованию подлежит более низкая концентрация |
| Примечание: органы, наименования которых выделены полужирным шрифтом, иссекают и взвешивают во влажном состоянии по возможности сразу после вскрытия для предотвращения высыхания. Ткани и органы фиксируют в 10% растворе нейтрального забуференного формалина или другого подходящего фиксатора сразу после вскрытия и не менее чем за 24 - 48 часов до иссечения (в зависимости от используемого фиксатора). |
| IN VIVO | Грызуны (крысы), негрызуны (кролики) |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | 20 животных (самок) в каждой группе (не менее 16 животных с имплантацией) |
| Количество групп | Минимум 3 опытные группы и контрольная группа |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Молодые здоровые половозрелые животные; самки нерожавшие. Самки должны быть спарены с самцами того же вида |
| Условия содержания и питания |
| Температура и комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C для грызунов; плюс (18 $\pm$ 3) °C для кроликов |
| Относительная влажность воздуха | Оптимальное значение 50 - 60% (не ниже 30% и не выше 70%) |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Процедуры спаривания проводятся в клетках, подходящих для этой цели. Индивидуальное содержание оплодотворенных животных является предпочтительным, содержание небольшими группами также приемлемо |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Пероральный через желудочный зонд или интубационную канюлю (если используется другой способ введения (например, дермальный, ингаляционный), необходимо представить обоснование и аргументировать выбор) |
| Частота и длительность введений | Ежедневно после имплантации (на 5 день после спаривания) до дня, предшествующего дню запланированного кесарева сечения. Если проведенные предварительные исследования не указывают на высокий потенциал предимплантационной гибели, исследование продлевается на весь период беременности, от спаривания до дня, предшествующего запланированному умерщвлению |
| Наблюдения |
| Общие клинические наблюдения | Ежедневно, минимум 1 раз в день |
| Исследование материнских особей |
| Показатели | - масса органов и гистопатология (щитовидная железа);
- измерения уровней гормонов (Т3, Т4, ТТГ в крови) |
| Изучение содержимого матки |
| Показатели | - измерение массы беременных маток;
- измерение массы шейки матки;
- определение количества желтых тел;
- наличие погибших эмбриональных клеток или плодов;
- наличие жизнеспособных плодов |
| Осмотр плодов |
| Показатели | - определение пола;
- определение массы плода;
- осмотр на наличие внешних и внутренних изменений (мягких тканей и скелета (отклонения или пороки развития, или аномалии);
- определение аногенитального расстояния у обоих полов;
- неполное опущение (крипторхизм) яичка |
| IN VIVO | Крысы |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | Не менее 20 самцов и 20 самок |
| Количество групп | Три экспериментальные группы с различными дозами тестируемого вещества, плюс группа положительного контроля |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Молодые здоровые половозрелые животные (самки нерожавшие и небеременные) от 5 до 9 недель |
| Масса тела | Изменение массы животных должно быть минимальным и не превышать 20% от среднего веса особей обоего пола |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | 50 - 60% - не ниже 30% и не выше 70% |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Содержание в лабораторных клетках по отдельности или небольшими группами одного пола |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | С пищей, питьевой водой или через желудочный зонд. При необходимости допустимы другие пути введения вещества (например, через кожу или ингаляционно). Пероральный путь введения является предпочтительным |
| Частота введений | Однократная суточная доза |
| Объем вводимого раствора тестируемого вещества при желудочном и инъекционном введении | Как минимум, три уровня доз тестируемого вещества, которые распределяются по диапазону токсических воздействий. Интервал между дозами от двух до четырех раз является оптимальным для установления зависимости доза-эффект |
| Длительность тестирования | Самцам доза вводится на протяжении развития и, по меньшей мере, одного полного сперматогенного цикла (около 56 дней у мышей и 70 дней у крыс); самкам материнского поколения (P) доза вводится в период роста и в течение нескольких полных эстральных циклов; исследуемое вещество вводят животным обоего пола на протяжении периода спаривания, а затем только самкам в течение периода беременности и кормления; потомству (F1) во время его роста после отлучения от материнского питания и во взрослом возрасте, при спаривании, рождении (F2) поколения вплоть до отлучения от материнского питания |
| Процедура спаривания | Процедура спаривания должна проводиться в отдельных клетках. После доказательства совокупления индивидуальное содержание оплодотворенных животных является предпочтительным, но содержание небольшими группами также приемлемо. Животные должны быть отделены друг от друга за один или два дня до родов. Родительское спаривание (P) в соотношении 1:1 (один самец к одной самке) или 1:2 (один самец к двум самкам). Нулевым днем беременности считается день появления вагинальной пробки или спермы. Спаривания братьев и сестер следует избегать.
Для спаривания поколения F1 один самец и одна самка выбираются из каждого помета для спаривания с другими детенышами того же уровня дозы, но из другого помета, для получения поколения F2 |
| Наблюдения и контролируемые показатели |
| Общие клинические наблюдения | Один раз в день |
| Масса тела, потребление продуктов питания и воды | Родительские животные (P и F1) взвешиваются в первый день дозирования и минимум раз в неделю после этого. Родители - самки период беременности, на 0, 7, 14 и 20 или 21 дни, в период лактации в те же дни, при взвешивании помета и в день забоя животных.
Во время спаривания и в период беременности потребление продуктов питания измеряется еженедельно. Потребление воды измеряется, как минимум, еженедельно, если исследуемое вещество вводится в воду |
| Цикл течки | Оценивается у P и F1 самок с помощью влагалищных мазков до спаривания и, по возможности, во время спаривания, пока доказательства спаривания не обнаруживаются |
| Параметры сперматогенеза | Масса яичек и придатков яичек, подсчет гомогенизационно-устойчивых сперматид, объем спермы в хвосте придатков яичек, исследование подвижности и морфологии сперматозоидов |
| Осмотр потомства | Каждый помет осматривается после родов (количество, пол потомства, число мертворожденных и родившихся живыми с наличием выраженных аномалий).
Потомства, найденные мертвыми в день 0, если они не мацерированы, проверяются на предмет возможных дефектов и причин смерти и фиксируются для хранения.
Живое потомство взвешивается индивидуально при рождении (лактация, день 0) и регулярно после этого, например, в 4, 7, 14 и 21 дни лактации.
Физические или поведенческие аномалии, наблюдаемые у матерей или в потомстве, регистрируются (прирост массы тела, дополнительно другие физические параметры (открытие ушей и глаз, прорезывание зубов, рост шерсти), данные о половом созревании (возраст и масса тела при вагинальном раскрытии или отделение головки пениса от крайней плоти), функциональные исследования (например, двигательная активность, сенсорные функции, рефлекторный онтогенез, анально-генитальные расстояния) измеряют в 0 день после родов у F2 детенышей, если в генерации F наблюдаются изменения в соотношении полов или сроках полового созревания |
| Вскрытие животных | На момент прекращения испытания (или в случае смерти в течение исследования) все животные с внешними отклонениями или клиническими признаками, а также, по крайней мере, один случайно выбранный детеныш (пол, помет) от обоих F1 и F2 поколений, должны быть исследованы макроскопически для выявления структурных аномалий или патологических изменений |
| Гистопатологическое исследование родительских животных (P и F1) (органы и ткани, сохраняемые при проведении некропсии) | - влагалище, матка с шейкой матки и яичниками;
- одно яичко, один придаток яичка, семенные пузырьки, простата и других органов-мишеней;
- ранее определенные органы-мишени из всех P и Fi животных, выбранных для спаривания |
| Гистопатологическое исследование потомства (органы и ткани, сохраняемые при проведении некропсии) | Исследуются ткани и органы-мишени всех детенышей с внешними серьезными аномалиями или клиническими проявлениями, а также одного случайно выбранного детеныша (пола, помета) поколений F1 и F2, который не был выбран для спаривания |
| IN VIVO | Грызуны (крысы или мыши) |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | Группа должна состоять как минимум из 10 животных каждого пола, чтобы обеспечить минимум 8 беременных самок в каждой группе, что в норме является минимальным допустимым числом беременных самок в группе |
| Количество групп | 3 опытных и 1 контрольная |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Здоровые молодые половозрелые девственные животные, ранее не подвергавшиеся опытным испытаниям. Крысы вида Sprague Dawley в возрасте 10 недель, крысы вида Wistar - 12 недель |
| Масса тела | В начале эксперимента отклонения массы тела животных не более $\pm$ 20% от средней массы каждого пола |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | Оптимальное значение 50 - 60% (не ниже 30% и не выше 70%) |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Животные могут находиться отдельно или содержаться в клетках небольшими группами одного пола; при групповом расселении следует помещать не более 5 животных в каждую клетку |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Исследуемое вещество вводится перорально через зонд, при этом в качестве альтернативы исследуемый состав может вводиться с пищей или питьевой водой. |
| Частота и длительность введений | Ежедневно: 2 недели до спаривания (самцы, самки); 2 недели во время спаривания (самцы, самки); периоды беременности и лактации (самки) |
| Наблюдения |
| Общие клинические наблюдения | Ежедневно в течение всего периода исследования. В дополнение к наблюдению за родительскими особями любое аномальное поведение потомства должно быть зафиксировано |
| Прижизненные исследования |
| Показатели | - эстральный цикл;
- продолжительность беременности;
- токсическое действие на потомство (количество и пол, наличие мертворождений, живорождений, серьезных отклонений развития);
- наличие сосков у потомства мужского пола;
- уровень гормонов щитовидной железы у потомства на 13 день и взрослых самцов (а также у взрослых самок и у детенышей на 4 день, если проводится измерение);
- количество детенышей с явно выраженными аномалиями, общая оценка состояния наружных половых органов (аногенитальное расстояние);
- количество имплантаций, желтых тел, размер и масса помета на момент регистрации |
| Гистопатология | - яичники;
- яички и придатки яичек (с особым вниманием к фазе спермогенеза и гистопатологии межтканевого тестикулярного строения клетки);
- все остальные сохраненные органы (в том числе щитовидная железа родительских особей и потомства) могут изучаться по необходимости |
| IN VIVO | Крысы |
| Животные |
| Вид животных | Крысы, если используются другие виды животных, нужны соответствующие обоснования |
| Количество животных | Каждая экспериментальная и контрольная группа должна содержать достаточное количество животных, рекомендуется не менее 10 (исключая случаи, когда токсичность сильно влияет на беременность, ожидается, что из десяти, как минимум, 8 забеременеют, что является минимальным допустимым числом самок на группу) |
| Количество групп | Минимум 3 опытные группы и контрольная группа.
Целесообразна дополнительная сателлитная группа для наблюдения за обратимостью, устойчивостью или отсроченным проявлением токсических эффектов в течение минимум 14 дней после прекращения воздействия вещества. |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Молодые здоровые половозрелые животные обычно используемых лабораторных линий в возрасте от 8 до 12 недель |
| Масса тела | В начале эксперимента отклонения массы тела животных не более $\pm$ 20% от средней массы каждого пола |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | Не ниже 30% и не выше 70% (оптимальная влажность составляет 50 - 60%) |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Небольшими группами одного пола и уровня воздействия (не более 5 животных) или индивидуально |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Пероральный через желудочный зонд (в качестве альтернативы с диетой или питьевой водой) или ингаляционно, или через кожу |
| Частота и длительность введений | Ежедневно в течение семи дней в неделю - 4 недели и больше, включая день перед запланированным умерщвлением (включает минимум 2 недели до спаривания, время спаривания и примерно 2 недели после) (самцы), не менее 54 дней (как минимум, 2 недели до спаривания, до 14 дней спаривания, 22 дня беременности и 4 дня лактации) (самки) |
| Наблюдения |
| Общие клинические наблюдения | Клиническое наблюдение ежедневно, минимум 1 раз в день.
Как минимум, два раза в день нужно проверять животных на наличие смертей и предсмертных состояний.
Детальный осмотр проводится 1 раз до начала дозирования и, как минимум, раз в неделю во время исследования |
| Оценка сенсорной реакции на различного вида раздражители (в т.ч. слуховой, визуальной и проприоцептивной реакций, оценку силы захвата и оценку двигательной активности | Один раз за все исследование |
| Воздействия на репродуктивность (развитие) | - длительность беременности;
- количество живого потомства и постимплантационная гибель плодов;
- количество детенышей с явно наблюдаемыми аномалиями;
- количество малорослых;
- количество зародышей;
- мертворожденные;
- желтые тела (рекомендуется);
- размер и масса приплода |
| Масса тела, потребление пищи и воды |
| Масса тела | Самцы и самки должны взвешиваться в первый день введения дозы, как минимум, еженедельно в дальнейшем и по окончании исследования.
Во время беременности самок следует взвешивать в 0, 7, 14 и 20 дни, в течение 24 часов после родов (нулевой или первый день после родов) и на 4 день после родов |
| Потребление пищи и воды | Перед спариванием, во время беременности и лактации потребление пищи должно измеряться, как минимум, еженедельно.
Измерение потребления пищи в период спаривания является необязательным.
Потребление воды в этот период следует измерять, если исследуемое вещество вводится с питьевой водой |
| Клинические исследования |
| Гематологические тесты | Один раз во время эксперимента (гематокрит, концентрация гемоглобина, число эритроцитов, общее число лейкоцитов и лейкоцитарная формула, число тромбоцитов и время свертывания крови) |
| Биохимические тесты | Исследование плазмы или сыворотки должно включать определение калия, натрия, глюкозы, холестерина, мочевины, креатинина, белка и альбумина, как минимум, двух ферментов, отражающих гепатоцеллюлярные эффекты (такие как АЛТ, АСТ и сорбитолдегидрогеназа) и желчных кислот |
| Анализ мочи | Факультативно (в последнюю неделю исследования, собирая ее за фиксированный промежуток времени у самцов): исследовать вид, количество, осмоляльность или удельный вес, pH, белок, глюкозу, наличие крови (клеток крови) |
| Дополнительно | Исследования сывороточных маркеров общего повреждения тканей; исследование на содержание кальция, фосфатов, триглицеридов, глюкозы натощак, специфичных гормонов, метгемоглобина и холинэстеразы |
| Патоморфология |
| Измерение массы органов | - яички и придатки яичек;
- печень;
- почки;
- надпочечники;
- тимус;
- селезенка;
- мозг;
- сердце |
| Гистопатология | - яичники;
- яички и придатки яичек;
- органы с признаками макроскопического поражения;
- мозг (наиболее важные области, включая большие полушария, мозжечок и Варолиев мост);
- позвоночник;
- желудок;
- тонкий и толстый кишечник (включая Пееровы бляшки);
- печень;
- почки;
- надпочечники;
- селезенка;
- сердце;
- тимус;
- щитовидная железа;
- трахея;
- легкие;
- матка;
- мочевой пузырь;
- лимфатические узлы;
- периферические нервы (седалищные и большеберцовые);
- часть костного мозга (или часть аспирата костного мозга) |
| IN VIVO | Крыса | Мышь |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии грызунов |
| Количество животных | Минимум 6 животных в каждой опытной группе |
| Количество групп | Минимум 2 опытные группы и негативная контрольная группа |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | 50 - 60% - не ниже 30% и не выше 70% |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Индивидуально или в группах до 3 животных (социальные группы содержания рекомендованы для неполовозрелых животных) |
| Диета и подстилочный материал | Рекомендован низкий уровень содержания фитоэстрогенов в диете и подстилочном материале |
| Протокол |
| Метод | Метод с неполовозрелыми крысами без проведения процедуры овариэктомии (предпочтительный метод). Метод с половозрелыми самками после проведения процедуры овариоэктомии | Метод с половозрелыми самками после проведения процедуры овариоэктомии |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования для неполовозрелых животных | Самый ранний срок - 18 постнатальный день. Тестирование должно быть прекращено до 25 постнатального дня |
| Возраст, рекомендованный для проведения операции овариоэктомии | В возрасте между 6 и 8 неделями |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования для животных с удаленными яичниками | Минимум 14 дней должно пройти со дня проведения овариоэктомии до 1 дня введения тестируемого вещества | Минимум 7 дней должно пройти со дня проведения овариоэктомии до 1 дня введения тестируемого вещества |
| Масса тела | Различия значений массы тела должны быть минимальными и не отклоняться на $\pm$ 20% от показателя средней массы |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Пероральный через желудочный зонд или подкожное инъекционное введение |
| Частота введений | Однократная суточная доза |
| Объем вводимого раствора тестируемого вещества при желудочном и инъекционном введении | $\leq$ 5 мл/кг массы тела (или до 10 мл/кг массы тела в случае водных растворов) (подкожное инъекционное введение больших объемов тестируемого раствора производится с 2-х сторон тела) |
| Длительность тестирования | 3 последовательных дня для модели с неполовозрелыми крысами.
Минимум 3 последовательных дня для животных с удаленными яичниками | 7 последовательных дней для животных с удаленными яичниками |
| Время вскрытия животных | Приблизительно через 24 часа после введения последней дозы |
| Результаты |
| Положительная реакция | Статистически достоверное увеличение средней массы матки (сырой и (или) блоттированной) |
| Референтный (эталонный) эстроген | $17\alpha - \text{этинилэстрадиол}$ |
| IN VIVO | Крысы |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии грызунов (предпочтительно - крысы Sprague Dawley или Wistar) |
| Количество животных | Минимум 6 животных в каждой опытной группе (относится и к андрогенным, и к антиандрогенным вариантам проведения эксперимента) |
| Количество групп | Две экспериментальные группы с различными дозами тестируемого вещества, плюс группа положительного контроля и группа контроля используемого носителя (отрицательный контроль). Андрогенный контроль (тестостерона пропионат), антиандрогенный контроль (флутамид) |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | 50 - 60% - не ниже 30% и не выше 70% |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Содержание двух или трех животных в одной клетке (из-за молодого возраста и социальности животных) |
| Питание и подстилочный материал | Питание, обычно используемое в лаборатории при тестировании веществ |
| Протокол |
| Метод | Хирургически кастрированные препубертатные самцы |
| Масса тела | Различия значений массы тела должны быть минимальными и не отклоняться на $\pm$ 20% от показателя средней массы |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Пероральный через желудочный зонд или подкожное инъекционное введение (тестостерона пропионат вводят подкожно, а флутамид принудительно внутрижелудочно) |
| Частота введений | Однократная суточная доза |
| Объем вводимого раствора тестируемого вещества при желудочном и инъекционном введении | $\leq$ 5 мл/кг массы тела (или до 10 мл/кг массы тела в случае водных растворов) (подкожное инъекционное введение больших объемов тестируемого раствора производится с 2 сторон тела) |
| Длительность тестирования | Ежедневно, в течение 10 дней подряд |
| Для проверки андроген-агонистической активности выбранные дозы тестируемого вещества | Для проверки андроген-антагонистической активности и ингибиторов $5\alpha - \text{редуктазы}$ выбранные дозы тестируемого вещества и референтного тестостерона пропионат |
| Контрольные группы | Для тестирования агонистов андрогена в качестве отрицательного контроля используют носитель, в качестве положительного контроля - тестостерона пропионата | При тестировании антагонистов андрогена и ингибиторов $5\alpha - \text{редуктазы}$ в качестве отрицательного контроля вводят тестостерон пропионат, в качестве положительного контроля - флутамид совместно с референтным агонистом тестостерона пропионата |
| Время вскрытия животных | Приблизительно через 24 часа после введения последней дозы |
| Результаты |
| Положительная реакция | Статистически достоверное увеличение (уменьшение) абсолютной массы андроген-зависимых тканей-мишеней:
- вентральная простата;
- семенные пузырьки вместе со свертывающей железой и содержащимися жидкостями;
- мышца, поднимающая задний проход плюс луковично-пещеристая мышца;
- парная бульбоуретральная железа (куперова железа);
- головка пениса |
| Показатели | Статистически значимое увеличение массы пяти половых тканей в экспериментальных группах, по сравнению с группой контроля носителя - при воздействии сильного андрогена | Статистически значимое снижение массы пяти проверяемых добавочных половых тканей в экспериментальных группах (тестируемое вещество плюс референтный тестостерона пропионат) по сравнению с группой отрицательного контроля (только тестостерона пропионат) - при воздействии антиандрогена |
| Дополнительные показатели | Масса печени, почек и надпочечников, которые являются индикатором системной токсичности, поскольку находятся под влиянием андрогенов и производимое до умерщвления животных измерение уровня гормонов в сыворотке крови |
| Оценка (интерпретация) результатов | Положительным результатом для андроген-агонистической активности считается статистически значимое (p $\leq$ 0,05) увеличение массы любых двух или более из пяти измеряемых целевых андроген-зависимых тканей | Положительным результатом для андроген-антагонистической активности считается статистически значимое (p $\leq$ 0,05) уменьшение массы любых двух или более из пяти измеряемых целевых андроген-зависимых тканей по отношению к контрольному референтному андрогену тестостерону пропионату |
| Референтный (эталонный) андроген | Тестостерона пропионат |
| Референтный (эталонный) антиандроген | Флутамид |
| IN VIVO | Крысы |
| Животные |
| Линии | Основные лабораторные линии |
| Количество животных | Достаточное количество животных, чтобы получить не менее 20 беременных самок на каждую дозовую группу |
| Количество групп | Минимум 3 опытные группы и контрольная группа.
Целесообразна дополнительная сателлитная группа для наблюдения за обратимостью, устойчивостью или отсроченным проявлением токсических эффектов в течение минимум 14 дней после прекращения воздействия вещества |
| Возраст, рекомендованный для начала проведения тестирования | Молодые здоровые половозрелые животные; самки нерожавшие и небеременные; возраст животных около 90 дней |
| Масса тела | В начале эксперимента отклонения массы тела животных не более $\pm$ 20% от средней массы каждого пола |
| Условия содержания и питания |
| Температура в комнате содержания животных | Плюс (22 $\pm$ 3) °C |
| Относительная влажность воздуха | 50 - 60% - не ниже 30% и не выше 70% |
| Ежедневная последовательность освещения | Искусственное освещение (свет - 12 часов, темнота - 12 часов) |
| Питание и питьевая вода | Обычная лабораторная диета с неограниченным потреблением питьевой воды |
| Содержание | Небольшими группами одного пола и уровня воздействия или индивидуально |
| Введение и дозирование тестируемого вещества |
| Путь поступления | Пероральный через желудочный зонд или интубационную канюлю, с диетой или питьевой водой, ингаляционно или через кожу |
| Частота и длительность введений | 2 недели до спаривания (самцы, самки), 2 недели во время спаривания (самцы, самки), 6 недель после спаривания (самцы), периоды беременности и лактации (самки) |
| Наблюдения |
| Общие клинические наблюдения | Ежедневно, минимум 1 раз в день для родительских особей (P) и животных поколения F1.
Дополнительно проводится еженедельное более детальное обследование всех P и F1 животных (после прекращения материнского питания) |
| Критические точки для выявления эндокринных разрушителей |
| Измерение массы органов | - матка (с трубами и шейкой);
- яичника;
- тимус (вилочковая железа);
- щитовидная железа (после фиксации);
- гипофиз;
- надпочечники;
- трахея (с прикрепленными щитовидной и паращитовидной железами);
- семявыводящие протоки (самцы);
- молочные железы (самцы и самки);
- вагина |
| Гистопатология | Гонады:
- семенники;
- яичники.
Вспомогательные половые органы:
- эпидидимисы;
- простата + семенные пузырьки с коагулирующими железами;
- матка, включая шейку матки;
- вагина;
- надпочечники;
- щитовидная железа;
- тимус (вилочковая железа) |
| Измерение уровней гормонов | Уровни Т3, Т4, ТТГ в крови |
| Метод | Анализ трансактивации андрогеновых рецепторов для определения андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ с использованием стабильно трансфицированной линии клеток человека AR-EcoScreen | Анализ трансактивации андрогеновых рецепторов для определения андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ с использованием стабильно трансфицированной линии клеток человека AR-CALUX | Анализ трансактивации андрогеновых рецепторов для выявления андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ с использованием стабильно трансфицированной линии клеток человека 22Rv1/MMTV_GR-KO |
| Клетки | Клетка рака яичников китайского хомячка | Клетка остеосаркомы человека | Эпителиальная клетка карциномы предстательной железы человека |
| Эталонное вещество | $5\alpha - \text{дигидротестостерон}$ |
| Критерии | Диапазон logPC50 -11,03/-9,00 (log[M]) | Диапазон EC50 1,0 · 10-10/1,0 · 10-9 M | Диапазон logPC50 -10,6/-9,0 (log[M]) |
| Диапазон logPC10 -12,08/-9,87 (log[M]) | - | Диапазон logPC10 -12,2/-9,7 (log[M]) |
| Сигмоидальная кривая |
| IF PCAGO > 6.4 (PCAGO: дигидротестостерон 1,0 · 10-8 M) | IF дигидротестостерон 1,0 · 10-7 M > 20 | IF PCAGO $\geq$ 13 (PCAGO: дигидротестостерон 1,0 · 10-8 M) |
| IF PC10 > 1 + 2 стандартных отклонения (индукция контрольного растворителя) | - | IF PC10 > 1 + 2 стандартных отклонения (индукция контрольного растворителя) |
| Коэффициент вариации < 20% в трех повторных лунках | |Коэффициент вариации| logEC50 < 1,5% | - |
| - | Z-фактор > 0,5 | - |
| Положительный контроль | Местанолон | $17\alpha - \text{метилтестостерон}$ | Местанолон |
| Критерии | Диапазон logPC50 -10,15/-9,26 (log[M]) | Относительная индукция > 30% | Диапазон logPC50 -10,2/-8,6 (log[M]) |
| Диапазон logPC10 -10,92/-10,41 (log[M]) | - | Диапазон logPC10 -12,3/-9,8 (log[M]) |
| Сигмоидальная кривая | - | - |
| Коэффициент вариации < 20% в трех повторных лунках | - | - |
| Отрицательный контроль | Ди(2-этилгексил)фталат | Кортикостерон | Ди(2-этилгексил)фталат |
| Критерии | PC10 невозможно рассчитать | Относительная индукция < 10% | PC10 невозможно рассчитать |
| Контроль специфичности (агонист) | - | - | - |
| Критерии | Подтверждение путем добавления мощного антагониста андрогеновых рецепторов (1 мкМ гидроксифлутамида) для уточнения не андроген-опосредованной индукции люциферазы | - | - |
| Метод | Анализ трансактивации андрогеновых рецепторов для определения андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ с использованием стабильно трансфицированной линии клеток человека AR-EcoScreen | Анализ трансактивации андрогеновых рецепторов для определения андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ с использованием стабильно трансфицированной линии клеток человека AR-CALUX | Анализ трансактивации андрогеновых рецепторов для выявления андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ с использованием стабильно трансфицированной линии клеток человека 22Rv1/MMTV_GR-KO |
| Клетки | Клетка рака яичников китайского хомячка | Клетка остеосаркомы человека | Эпителиальная клетка карциномы предстательной железы человека |
| Эталонное вещество | Гидроксифлутамид | Флутамид | Бикалутамид |
| Критерии | Диапазон logIC50 -7,80/-6,17 (log[M]) | Диапазон IC50 1,0 · 10-7/1,0 · 10-6 M | Диапазон logIC50 -7,0/-5,8 (log[M]) |
| Диапазон logIC30 -8,37/-6,41 (log[M]) | | Диапазон logIC30 -7,5/-6,2 (log[M]) |
| Относительная транскрипционная активность PCATG < 46% (PCATG: 500 пМ дигидротестостерона + 1 мкМ гидроксифлутамида) | InhF флутамида 3 · 10-5 M > 10 | Относительная транскрипционная активность PCATG $\leq$ 53,6% (PCATG: 800 пМ дигидротестостерона + бикалутамид 1 мкМ) |
| Сигмоидальная кривая |
| Коэффициент вариации < 20% в трех повторных лунках | |Коэффициент вариации| logIC50 < 3% | - |
| - | Z-фактор > 0,5 | - |
| Положительный контроль | Бисфенол А | Линурон | Бисфенол А |
| Диапазон log IC50 -7,05/-4,29 (log[M]) | Относительная индукция < 60% | Диапазон log IC50 -6,2/-5,0 (log[M]) |
| Диапазон logIC30 -7,52/-4,48 (log[M]) | - | Диапазон logIC30 -6,6/-5,4 (log[M]) |
| Коэффициент вариации < 20% в трех повторных лунках | - | - |
| Отрицательный контроль | Ди(2-этилгексил)фталат | Левоноргестрел | Ди(2-этилгексил)фталат |
| Критерии | IC30 невозможно рассчитать | Относительная индукция > 85% | IC30 невозможно рассчитать |
| - | - | - |
| Другой контроль | IF контрольный агонист > 5 (контрольный агонист: 500 пМ дигидротестостерона) | - | IF контрольный агонист $\geq$ 10 (контрольный агонист: 800 пМ дигидротестостерона) |
| Специфический контроль (антагонист) | - | $5\alpha - \text{дигидротестостерон}$ | $5\alpha - \text{дигидротестостерон}$ |
| Критерии | - | R2 тестируемого вещества $\leq$ 0,9 | R2 тестируемого вещества < 0,9 |
| - | R2 флутамида $\leq$ 0,7 | - |
##