Экспертное исследование производных амфетамина. Методические рекомендации
Актуально на 07.11.2026.
Как цитировать: "Экспертное исследование производных амфетамина. Методические рекомендации". 7/61-97. https://bukva.ai/docs/protokol-761-97
(утв. Постоянным комитетом по контролю наркотиков, протокол от 20.10.1997 № 7/61-97)
Утверждены Постоянным комитетом по контролю наркотиков (протокол № 7/61-97 от 20.10.97)
ЭКСПЕРТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ АМФЕТАМИНА
<*> Разработчики: И.Г. Алексеев, А.В. Беляев, М.А. Дроздов, Т.В. Кимстач, Е.П. Семкин, Е.А. Симонов, В.И. Сорокин.
Утверждены Постоянным комитетом по контролю наркотиков (протокол № 7/61-97 от 20.10.97).
Одобрены и рекомендованы к опубликованию Методическим советом ЭКЦ МВД России.
Синтетические наркотические средства в последние годы занимают все большее место в незаконном обороте наркотиков на территории России. Значительная часть из них являются производными фенилалкиламина или амфетамина. В литературе эти вещества часто упоминаются под общим названием «амфетамины». Поэтому этот термин будет в дальнейшем использоваться для обозначения всей группы указанных веществ.
Амфетамины ставят перед международным сообществом целый ряд серьезных проблем, связанных с их незаконным употреблением и охраной здоровья населения. Во-первых, эти наркотические средства составляют значительную часть синтетических наркотиков в незаконном обороте на территории Западной Европы. В России количество изымаемых амфетаминов в последние годы растет стремительными темпами. В силу особенностей своего фармакологического действия средства, содержащие амфетамины, получают наиболее широкое распространение среди молодежи на дискотеках и вечеринках, вызывая сильную психическую зависимость и привыкание. Во-вторых, производимые нелегально аналоги амфетамина редко подвергаются тестированию фармакологической активности. Поэтому при их приеме постоянно существует угроза передозировки или серьезных побочных эффектов. В-третьих, незаконные производители наркотических средств практически не проверяют свою продукцию на присутствие посторонних загрязняющих веществ и полупродуктов синтеза. В связи с этим при приеме таких препаратов существует реальная вероятность интоксикации побочными продуктами. В-четвертых, как было установлено в последнее время, целый ряд аналогов амфетамина и метамфетамина, в том числе замещенных по бензольному кольцу, оказывает токсическое воздействие на организм человека.
В настоящее время в незаконном обороте наркотиков получили распространение около двух десятков производных амфетамина и метамфетамина. Наиболее часто встречаются следующие: МДА (другое название — «Love Drugs»); МДМА (другие названия — «Ecstasy», «XTC», «Adam», «ESSENCE», «Cardillac»); МДЕА («Eve», «МДЕ»); ДОМ («STP»); ПМА; ДМА; ТМА; ДОБ; ДОХ; МБДБ; БДБ; ДОЭТ; мескалин.
В России до настоящего момента в незаконном обороте зафиксированы случаи употребления только некоторых из них (МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ, ДОБ и мескалина), все упомянутые амфетамины внесены в Списки наркотических средств Постоянного комитета по контролю наркотиков.
Амфетамины являются психомоторными стимуляторами, вызывают психическое состояние, характеризующееся обострением чувств и повышенной эмоциональной свободой. Некоторые амфетамины в определенных дозах могут оказывать галлюциногенное и психотропное действие. Принятие препаратов, содержащих амфетамины, вызывает учащенное сердцебиение, приводит к стимуляции дыхания, активизации моторной деятельности, снижению аппетита и потребности в сне, снятию усталости, поднятию настроения.
Длительное употребление препаратов, содержащих амфетамины, приводит к нарушениям сердечной деятельности, кровообращения, повышению агрессивности, вплоть до психозов, а также поражению печени, почек и нервной системы. Кроме того, у потребителей амфетаминов высока склонность к суициду. На сегодняшний день амфетамины в России в медицинской практике не применяются.
Производные амфетамина в незаконном обороте
Наибольшее распространение в незаконном обороте, как уже упоминалось, получили МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ, ДОБ и мескалин. Краткие сведения о них и некоторых других амфетаминах даны в списке литературы к данной методике.
Первым известным наркотическим средством класса амфетаминов был мескалин — основной активный компонент кактуса Lophophora Williamsii Lemaire. Аборигены северной Мексики использовали цветки кактуса для снятия усталости, чувства голода, обезболивания. Высушенные верхушки растения носили как амулеты для защиты от опасностей. При помощи мескалина индейцы достигали состояния транса во время религиозных обрядов. Препараты, содержащие мескалин, получили распространение в США и Канаде в начале XX в.
Мескалин получают экстракцией из различных частей названного выше кактуса или синтезируют в лаборатории. Наряду с мескалином другие алкалоиды Lophophora Williamsii, такие как ангалонидин, ангалонин и пеллотин, также вызывают галлюциногенные эффекты. Наибольшее содержание мескалина в цветках, которые имеют окраску коричневого цвета и размер 2,5 — 5 см в диаметре. Они редко встречаются в незаконном обороте, так как имеют очень горький вкус. Поэтому цветки обычно растирают в темно-коричневый порошок и продают в желатиновых капсулах.
МДА впервые был синтезирован в 1910 г. и является одним из первых синтетических амфетаминов. Широкое распространение в незаконном обороте наркотиков МДА получил в Америке в конце 60-х — начале 70-х гг. и был известен как Mellow Drug (таблетки Меллоу) или Love Drug (таблетки любви). Популярность МДА снизилась после 1973 г. из-за многочисленных смертельных случаев в США и Канаде, которые связывали с употреблением этого вещества. Однако этот наркотик все еще имеет широкое распространение в ряде европейских стран.
Действие МДА сильно зависит от дозы. Большие дозы (более 150 мг) приводят к галлюциногенным эффектам с искажением визуальных, акустических и тактильных ощущений. Доза выше 500 мг является смертельной. Практически все препараты, в состав которых входит МДА, встречаются в виде таблеток, содержащих 200 — 230 мг вещества, и употребляются перорально. Действие препарата начинается через 30 — 60 мин. после приема и длится 8 — 12 ч. МДА вызывает психическое привыкание средней силы, при отсутствии физического привыкания.
МДМА впервые был синтезирован в 1914 г. Средняя разовая доза при приеме перорально составляет около 100 мг. Действие начинается через 30 — 60 мин. и продолжается 4 — 6 ч. МДМА вызывает высокую психическую зависимость. В незаконном обороте этот наркотик появился в конце 70-х гг. в виде таблеток, капсул и порошков, содержащих 50 — 100 мг действующего вещества.
МДЕА впервые синтезировали в 1980 г. Его действие начинается через полчаса после приема, длится 3 — 5 ч, а затем медленно ослабевает. Принимаемая доза составляет около 120 мг. Смертельная доза — более 500 мг. МДЕА вызывает состояние эйфории, повышение коммуникабельности, в определенных условиях происходит резкая смена настроения от эйфории к депрессии. Вызывает психическую зависимость средней силы.
ДОБ получен в 1967 г. Оказывает галлюциногенное действие, подобное МДА, но по интенсивности действия превосходит МДА примерно в 100 раз. Принимаемая доза составляет около 2 мг. Действие наступает через 1 — 2 ч, длится, однако, по разным источникам в течение 18 — 30 ч. При принятии этого наркотика наблюдается изменение цветового восприятия окружающего мира, происходит потеря ощущения окружающей действительности, иногда — потеря сознания. Смертельная доза — 30 — 35 мг. ДОБ является одним из самых сильных наркотических средств и по силе приближается к ЛСД.
МБДБ (иногда называют МДМБА) и БДБ впервые появились в незаконном обороте в начале 90-х годов. По действию напоминают МДМА и МДА соответственно. МБДБ обладает расслабляющим действием; повышает чувствительность различных органов чувств (слух, зрение, вкус). В настоящее время свойства МБДБ и БДБ мало изучены. МБДБ, БДБ, МДА, МДМА и МДЕА отнесены к классу энтактогенов. Согласно определению энтактогены — это «вещества, производящие чувства внутри нас». Они пробуждают возможность и способность погружаться в самих себя и выявлять собственные проблемы и «позитивно» их разрешать.
ДОМ/STP был первым из производных амфетамина, появившихся в незаконном обороте наркотиков в 1967 г. Этот наркотик впервые появился в США в виде таблеток массой 10 мг под названиями, характеризующими его действие: STP, Serenity (безмятежность), Tranquility (спокойствие), Peace (мир). ДОМ/STP действует как галлюциноген и обладает активностью в 80 — 100 раз более высокой, чем мескалин, но в 50 — 60 раз более низкой, чем ЛСД.
ДОХ обладает высокой активностью. Этот наркотик появился впервые в незаконном обороте в США в 1972 г., а в Канаде, Австралии и Европе — в конце 70-х — начале 80-х гг. Препараты, содержащие ДОХ, встречаются в виде таблеток, порошков и пропитки на бумажных носителях. Обладает активностью, близкой к ДОБ. Описываемые ощущения сравнивают с состоянием комфорта в теле, мыслях, появляются галлюцинации, связанные с цветными картинами, и т.д.
Для наиболее активных амфетаминов (ДОБ, ДОХ и ДОМ) распространены средства в виде пропитанных веществом бумажек, аналогичных бумажкам с ЛСД. Остальные наркотики этой группы встречаются в виде порошков, капсул, но прежде всего в виде таблеток. На таблетках, содержащих МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ, как правило, выдавлены различные изображения: корона, птичка, автомобили, голова индейца, гнома, символическое изображение доллара ($), могут встречаться различные надписи (ADAM, EVE, LOVE) и т.д. Принимают препараты обычно перорально, реже — введением внутривенно.
Кроме самих амфетаминов в состав таблеток могут входить такие вещества, как героин, фентермин и флунитразепам.
Часто в таблетках встречаются кофеин, аспирин, парацетамол, альфа-метилбензиламин, эфедрин, хинин, изосафрол (прекурсор для получения некоторых амфетаминов), лидокаин, тестостерон (гормон), хлорамфеникол (антибиотик).
В качестве наполнителей для таблеток и порошков, как правило, используют крахмал, лактозу, глюкозу, фруктозу, карбонат кальция, маннит, сорбит и др., а в качестве связующего при таблетировании — поливиниловый спирт.
Химические названия амфетаминов, получивших распространение в незаконном обороте, эффективная доза и время действия приведены в табл. 1. Структурные формулы амфетаминов и их физические свойства приведены в табл. 2. Для сравнения в этой таблице даны доза и время действия наркотического средства ЛСД.
ЭФФЕКТИВНАЯ ДОЗА И ВРЕМЯ ДЕЙСТВИЯ АМФЕТАМИНОВ
Основания амфетаминов (кроме ДОМ, ДОБ и ДОЭТ) представляют собой маслянистые вещества. Основания ДОМ, ДОБ и ДОЭТ представляют собой кристаллические вещества с температурами плавления от 60 до 65 °C. Основания амфетаминов растворимы в этаноле, хлороформе и диэтиловом эфире. Гидрохлориды амфетаминов растворимы в хлороформе и не растворимы в диэтиловом эфире.
ФИЗИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА, МОЛЕКУЛЯРНАЯ МАССА И СТРУКТУРНЫЕ ФОРМУЛЫ АМФЕТАМИНОВ
| Вещество | Основание (при н.у.) | Гидрохлорид (при н.у.) | Молекулярная масса основания | Структурная формула |
|---|---|---|---|---|
| 1. МДА | Бесцветная маслянистая жидкость | Кристаллическое вещество, Tпл = 183 — 185 °C | 179,2 |  |
| 2. МДМА | Бесцветная маслянистая жидкость | Кристаллическое вещество, Tпл = 147 — 148 °C | 193,2 |  |
| 3. МДЕА | Бесцветная маслянистая жидкость | Кристаллическое вещество, Tпл = 201 — 202 °C | 207,2 |  |
| 4. ДОМ/STP | Кристаллическое вещество, Tпл = 60,5 — 61 °C | Кристаллическое вещество, Tпл = 190 — 191 °C | 209,3 |  |
| 5. ПМА | Бесцветная маслянистая жидкость | Кристаллическое вещество, Tпл = 208 — 209 °C | 165,2 |  |
| 6. ДМА | Бесцветная маслянистая жидкость | Кристаллическое вещество, Tпл = 110 — 113 °C | 195,3 |  |
| 7. ТМА | Бесцветная маслянистая жидкость | Кристаллическое вещество, Tпл = 219 — 220 °C | 225,3 |  |
| 8. ДОБ | Кристаллическое вещество, Tпл = 63 — 65 °C | Кристаллическое вещество, Tпл = 198 — 199 °C | 274,2 |  |
| 9. ДОХ | Нет данных | Кристаллическое вещество, Tпл = 191 — 193 °C <*> | 229,8 |  |
| 10. МБДБ | Бесцветная маслянистая жидкость | Кристаллическое вещество, Tпл = 155 — 156 °C <*> | 207,2 |  |
| 11. БДБ | Бесцветная маслянистая жидкость | Кристаллическое вещество, Tпл = 159 — 161 °C | 193,2 |  |
| 12. ДОЭТ | Кристаллическое вещество, Tпл = 61 — 61,5 °C | Кристаллическое вещество, Tпл = 195 °C | 223,3 |  |
| 13. Мескалин | Кристаллическое вещество, Tпл = 35 — 36 °C | Кристаллическое вещество, Tпл = 181 °C | 211,3 |  |
Методики экспертного исследования
1. Исследование методом капельных цветных реакций
Наиболее доступным реагентом, позволяющим выявлять амфетамины, является реактив Марки.
При исследовании таблеток часть таблетки массой 5 — 10 мг растирают в ступке, растертый порошок помещают в фарфоровую чашку и добавляют 2 — 3 капли реактива Марки, наблюдая при этом появившуюся окраску. Через 10 — 15 мин. фиксируют изменение окраски, если оно наблюдается. При исследовании вещества на бумажных носителях к 1 — 2 измельченным ножницами бумажкам, размером 1 см x 1 см, содержащим ДОБ, ДОХ или ДОМ, добавляют 1 мл хлороформа, каплю 0,1 № водного раствора КОН (NaOH), доводят растворитель до кипения, после охлаждения отбирают растворитель, стараясь не захватить водный слой, и упаривают его досуха. К упаренному экстракту добавляют 2 — 3 капли реактива Марки.
Характерное окрашивание исследуемых амфетаминов, получающееся при взаимодействии с реактивом Марки, представлено в табл. 3.
ОКРАСКА РАЗЛИЧНЫХ АМФЕТАМИНОВ С РЕАКТИВОМ МАРКИ
2. Исследование методом тонкослойной хроматографии
Часть таблетки массой 3 — 10 мг растирают в ступке, добавляют 0,5 мл хлороформа, каплю 0,1 № водного раствора КОН (NaOH) и нагревают до начала кипения.
Если соответствующий амфетамин нанесен на бумажки (что встречается в случае активных амфетаминов, таких как ДОБ, ДОМ, ДОХ), к 1 — 2 измельченным ножницами бумажкам, размером 1 см x 1 см, добавляют 1 мл хлороформа, каплю 0,1 № водного раствора КОН (NaOH) и доводят растворитель до кипения; после охлаждения отбирают растворитель, стараясь не захватить водный слой, и упаривают его до объема 4 — 5 капель. После охлаждения 4 — 5 мкл полученных экстрактов наносят на хроматографическую пластину.
Для хроматографирования рекомендуются следующие системы растворителей:
ЗНАЧЕНИЯ Rf АМФЕТАМИНОВ В СИСТЕМЕ ХЛОРОФОРМ-АЦЕТОН-ЭТАНОЛ-25%-Й ВОДНЫЙ РАСТВОР АММИАКА (20:20:3:1)
По окончании хроматографирования пластину сушат при 50 °C в течение 10 мин., а затем выявляют хроматографические зоны по гашению флуоресценции при 254 нм, обработкой реактивом Марки или раствором нингидрина в ацетоне.
При обработке раствором нингидрина в ацетоне (0,5 г нингидрина в 40 мл ацетона) хроматографическую пластину после опрыскивания нагревают до 70 °C и выдерживают при этой температуре 5 — 8 мин. При отсутствии ацетона для растворения нингидрина можно использовать этилацетат, хуже получаются результаты при использовании этанола. Значения Rf на пластинах SORBFIL ПТСХ П-А-УФ и Merc Kieselgel 60 F 254 указаны в табл. 4 и 5. Для сравнения в таблицах приведены значения Rf и Rs для метамфетамина.
Для исследования пригодны любые пластины с немодифицированным слоем силикагеля, например Silufol, SORBFIL, Merck и аналогичные им.
Предел обнаружения амфетаминов при обработке реактивом Марки для ДОМ, ДМА, ТМА, ДОБ, ДОХ 2 мкг, для МДА, МДМА, МДЕА, БДБ — 0,4 мкг, нингидрином для всех производных амфетамина — 0,6 мг.
ЗНАЧЕНИЯ Rf АМФЕТАМИНОВ В СИСТЕМЕ ТОЛУОЛ-ЭТАНОЛ-ТРИЭТИЛАМИН (ДИЭТИЛАМИН) (9:1:1)
Как видно, для наиболее распространенных в настоящее время в незаконном обороте амфетаминов (МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ и БДБ) наилучшего разделения позволяет добиться система хлороформ-ацетон-этанол-аммиак (20:20:3:1). Обработка реактивом Марки и нингидрином позволяет получать дополнительный признак при исследовании амфетаминов, имеющих в указанных системах близкие значения Rf (например, для МДЕА и МБДБ, которые окрашивают реактив Марки в одинаковый цвет, обработка нингидрином является единственным диагностическим признаком, позволяющим различать эти вещества). Использование нингидрина в качестве окрашивающего агента во второй системе затруднительно, так как диэтиламин, который всегда содержится и в триэтиламине, окрашивается при взаимодействии с нингидрином и маскирует зоны амфетаминов при обнаружении.
Окраска хроматографических зон зависит от количества вещества, нанесенного на хроматографическую пластину. Поэтому оттенок окраски зоны может меняться.
3. Исследование методом газовой хроматографии и хроматомасс-спектрометрии
Исследование методом газовой хроматографии применяют для качественного выявления амфетаминов и их количественного определения.
Газохроматографический анализ проводят при следующих условиях: колонка кварцевая капиллярная длиной 12 — 20 м и диаметром 0,2 — 0,3 мм с метилсиликоновой стационарной фазой (OV-101, SE-30, SE-54, OV-1). Температура испарителя — 220 °C, детектора — 290 °C. Температура колонки меняется от 100 °C до 280 °C со скоростью 10 °C/мин. Газ-носитель — гелий (азот), детектор пламенно-ионизационный. Ввод пробы с делением потока.
В ходе исследования таблетку растирают в ступке и гомогенизируют полученный порошок встряхиванием. Навеску измельченной таблетки массой около 3 — 4 мг заливают 1 мл хлороформа, добавляют каплю 0,1 № водного раствора КОН (NaOH), доводят смесь до кипения, охлаждают и дают отстояться.
Если соответствующий амфетамин нанесен на бумажки, к 1 — 2 взвешенным и измельченным ножницами бумажкам размером 1 см x 1 см добавляют 1 мл хлороформа, 1 каплю 0,1 № водного раствора КОН (NaOH), доводят растворитель до кипения; после охлаждения отбирают растворитель, добавляют новую порцию хлороформа, доводят его до кипения, растворитель также отбирают и объединенные хлороформные экстракты упаривают досуха. К упаренному экстракту добавляют 1 мл хлороформа, доводят до кипения и охлаждают.
1 мкл полученных экстрактов из таблетки и бумажек хроматографируют в указанных условиях.
Однако часто амфетамины хроматографируются в виде несимметричных пиков, поэтому необходимо проводить исследование, получая их ацетильные производные. Для этого к 3 — 4 мг растертой в порошок таблетки или упаренному досуха экстракту с бумажек добавляют 0,2 мл уксусного ангидрида (ангидрида трифторуксусной кислоты) и выдерживают смесь в течение 30 — 40 мин. в закрытой склянке при 70 °C (при использовании ангидрида трифторуксусной кислоты смесь выдерживают 10 мин. при комнатной температуре. Указание: при работе с ангидридом трифторуксусной кислоты необходимо работать под тягой). Пробу полученного раствора после охлаждения хроматографируют в указанных выше условиях. Температура испарителя в этом случае равна 260 °C. Индексы удерживания амфетаминов и их ацетильных производных приведены в табл. 6.
ЗНАЧЕНИЯ ИНДЕКСОВ УДЕРЖИВАНИЯ АМФЕТАМИНОВ И ИХ АЦЕТИЛЬНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ
Количественное определение проводят следующим образом: таблетку растирают в ступке и гомогенизируют полученный порошок встряхиванием.
Если соответствующий амфетамин нанесен на бумажки, к 1 — 2 взвешенным и измельченным ножницами бумажкам размером 1 см x 1 см добавляют 1 мл хлороформа, каплю 0,1 № водного раствора КОН (NaOH), доводят растворитель до кипения; после охлаждения отбирают как можно больше растворителя, стараясь не захватить водную часть, добавляют новую порцию хлороформа, доводят его до кипения; растворитель также отбирают и объединенные хлороформные экстракты упаривают досуха.
К навеске растертой в порошок таблетки массой 3 — 4 мг (берут точную навеску) добавляют 1 мг метилстеарата (метилстеарат либо взвешивают на весах, либо при отсутствии весов соответствующей точности 1 мл раствора метилстеарата в хлороформе, гексане или пентане помещают в склянку и осторожно упаривают растворитель досуха, после чего в этой же склянке взвешивают навеску растертой таблетки), 0,4 мл уксусного ангидрида и нагревают на плитке при температуре 70 °C в течение 30 мин. в плотно закрытой склянке (нагрев осуществляют до исчезновения в смеси нативного амфетамина — контроль проводят методом тонкослойной или газовой хроматографии). После окончания нагрева, охлаждения и отстаивания 1 мкл полученной смеси хроматографируют на кварцевой капиллярной колонке длиной 12 — 20 м и диаметром 0,2 мм с метилсиликоновой стационарной фазой (OV-101, SE-30, SE-54, OV-1). Температура испарителя — 260 °C, детектора — 290 °C. Температура колонки меняется от 150 °C до 280 °C со скоростью 10 °C/мин. Газ-носитель — гелий (азот), детектор пламенно-ионизационный. На коротких колонках (до 20 м) ацетильное производное ДОБ может не разделиться с метилстеаратом. В этом случае скорость нагрева колонки необходимо уменьшить до 5 °C/мин.
Перед определением проводят калибровку хроматографа с использованием чистых метилстеарата и соответствующего амфетамина. При отсутствии образцов чистых амфетаминов используют относительные массовые коэффициенты (табл. 6).
В этом случае расчет содержания производного амфетамина проводят по формуле:
X = (S_{x} \cdot m_{\text{ст}}/S_{\text{ст}} \cdot m_{\text{п}}) \cdot \text{К } \cdot 100,
Sx — площадь пика производного амфетамина;
Sст — площадь пика внутреннего стандарта;
mст — количество стандартного образа, мг;
mп — количество исходной пробы, мг;
K — относительный массовый коэффициент.
При количественном определении можно также использовать ангидрид трифторуксусной кислоты. Подготовку пробы в этом случае проводят так же, как и в случае уксусного ангидрида, однако после добавления ангидрида уксусной кислоты смесь не нагревают, а выдерживают при комнатной температуре 10 мин., после этого ангидрид уксусной кислоты осторожно отгоняют на плитке досуха, добавляют 1 мл хлороформа и хроматографируют 1 мкл полученной смеси в тех же условиях, что и при использовании ангидрида уксусной кислоты.
Исследование методом хроматомасс-спектрометрии проводят для качественного выявления амфетаминов. Для исследования были подобраны следующие условия. Предварительное разделение компонентов пробы на кварцевой капиллярной колонке длиной 12 — 25 м и диаметром 0,2 мм с диметилсиликоновой стационарной фазой. Температура испарителя — 220 °C, интерфейса детектора — 280 °C. Температура колонки меняется от 100 °C до 280 °C со скоростью 10 °C/мин. Газ-носитель — гелий. Ионизация электронным ударом (энергия 70 ЭВт). Подготовка пробы аналогична пробоподготовке для газовой хроматографии без дериватизации.
Следует отметить, что работа с уксусным ангидридом сопряжена с определенными сложностями, поэтому исследование амфетаминов нужно проводить с чистой газохроматографической системой (т.е. необходимо проводить регулярную чистку детектора, инжектора и кондиционирование хроматографической колонки). После окончания работы с уксусным ангидридом нужно ввести в инжектор хроматографа 3 раза по 1 мкл метанола или этанола.
4. Исследование методом жидкостной хроматографии
Исследование методом жидкостной хроматографии применяют как для качественного выявления производных амфетамина, так и для их количественного определения в экспертных образцах.
Анализ проводят на жидкостном хроматографе «Милихром-4» (или аналогичных жидкостных хроматографах), используя для разделения компонентов один из вариантов высокоэффективной жидкостной хроматографии — обращенно-фазную распределительную хроматографию.
Условия анализа: колонка типа КАХ-4 размером 80 x 2 мм с обращенно-фазным сорбентом «Separon С 18» (НПО «Научприбор», г. Орел); подвижная фаза — фосфатный буфер: ацетонитрил (80:20); изократическое элюирование со скоростью 120 мкл/мин.; спектрофотометрический детектор, работающий в режиме одновременного пятиволнового детектирования на длинах волн 210, 220, 230, 250, 280 нм; объем вводимой пробы — 10 мкл; максимальная длительность проведения анализа — 20 мин.
Для приготовления фосфатного буфера в 1 л дистиллированной воды растворяют 3,0 г КОН, 12,0 г 82% ортофосфорной кислоты и 3,0 г диэтиламина. Буфер указанного состава должен иметь значение pH3. В случае отклонения pH буфера от указанной величины следует провести корректировку, добавляя водный раствор щелочи или кислоту. Значение pH буфера предварительно определяют по универсальной индикаторной бумаге. Для более точного определения следует использовать pH-метр любого типа.
Для приготовления подвижной фазы фосфатный буфер смешивают с ацетонитрилом в указанном соотношении и тщательно перемешивают с помощью магнитной мешалки. Подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр и дегазируют, помещая в ультразвуковую баню на 20 мин., или продувают гелием в течение 20 мин. (дегазация гелием более эффективна).
Для определения хроматографических параметров разделения производных амфетамина готовят тестовую модельную смесь индивидуальных веществ. Для приготовления модельной смеси навески индивидуальных веществ помещают в мерную колбу и растворяют в подвижной фазе с таким расчетом, чтобы концентрация каждого компонента в растворе не превышала 0,1 мг/мл. Раствор тщательно перемешивают в ультразвуковой бане, фильтруют, дегазируют, продувают гелием в течение 20 мин. и хроматографируют в указанных условиях.
На рис. 1 представлена хроматограмма модельной смеси четырех индивидуальных веществ — МДА, МДМА, МДЕА и МБДБ. Полученное при этом разрешение хроматографических пиков позволяет проводить количественное определение компонентов смеси. По имеющимся данным, образцы аналогичного качественного состава наиболее часто представлены среди реальных объектов экспертного исследования.
Рис. 1. Хроматограмма модельной смеси четырех производных амфетамина, полученная в режиме пятиволнового детектирования спектрофотометра «Милихром-4»
Хроматографические параметры разделения некоторых производных амфетамина для указанных условий приведены в табл. 7.
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ РАЗДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ АМФЕТАМИНА
Все представленные хроматограммы и УФ-спектры получены с помощью программно-аппаратурного комплекса МультиХромСпектр, разработанного АО «Амперсенд» (г. Москва). При отсутствии данного комплекса снятие УФ-спектров компонентов хроматограмм проводят в процессе анализа в автоматическом режиме работы хроматографа «Милихром-4» при внесении соответствующих изменений в программу работы спектрофотометрического детектора.
Для проведения количественного определения производных амфетамина калибруют УФ-детектор, применяя для этого растворы индивидуальных веществ с точно известной концентрацией (метод абсолютной калибровки).
Для приготовления калибровочных растворов готовят растворы индивидуальных веществ в подвижной фазе с точной концентрацией — 1,0 мг/мл. Далее растворы последовательно разбавляют подвижной фазой для получения растворов с концентрациями 0,5; 0,25; 0,125; 0,0625; 0,0312 и 0,0156 мг/мл. Приготовленные растворы хроматографируют при неизменных условиях. По результатам анализа строят калибровочные графики, определяющие зависимость площади хроматографического пика вещества (при детектировании сигнала на строго заданной длине волны) от его концентрации в растворе. Для всех исследованных веществ получена линейная зависимость, описываемая уравнением первого порядка Y = k x X, которая соблюдается при детектировании сигнала на длине волны 210 нм в диапазоне концентраций от 0,0156 мг/мл до 1,0 мг/мл.
Если для приготовления калибровочных растворов используют производные амфетамина в форме хлористоводородных или других солей, в расчеты необходимо внести поправочный коэффициент, позволяющий определить концентрацию вещества в пересчете на основание. Количественное содержание производных амфетамина в экспертных образцах также всегда следует указывать в пересчете на вещество в форме основания.
На рис. 2 представлен типичный калибровочный график для производных амфетамина. Калибровки следует периодически проверять, хроматографируя растворы с известной концентрацией вещества.
Рис. 2. График зависимости площади хроматографического пика МДА от его концентрации в растворе (спектрофотометрическое детектирование «Милихром-4» на длине волны 210 нм)
Анализ образцов, изъятых из незаконного оборота и содержащих производные амфетамина, проводят следующим образом: точную навеску анализируемого вещества (тщательно измельченного) экстрагируют в точном объеме подвижной фазы. При этом концентрация экстрагируемого вещества в экстрагенте не должна превышать 1,0 мг/мл. Экстракцию проводят при нормальной температуре в ультразвуковой бане в течение 20 мин. Полученный раствор фильтруют, дегазируют путем продувки гелием и хроматографируют в указанных условиях.
Выявление хроматографических пиков, соответствующих производным амфетамина, проводят, сравнивая время удерживания пиков компонентов хроматограммы анализируемого вещества с временем удерживания компонентов хроматограммы модельной смеси. Для компонентов с близкими значениями времени удерживания проводят сравнение УФ-спектров и применяют метод добавок.
Концентрацию производных амфетамина в экстракте анализируемого вещества определяют по калибровочным графикам. Содержание производного амфетамина в анализируемом веществе — X (%) рассчитывают по формуле:
C — концентрация производного амфетамина в экстракте, мг/мл, найденная по калибровочному графику;
m — навеска анализируемого вещества, подвергнутого экстракции, мг.
Предел обнаружения производных амфетамина в анализируемых экстрактах для указанных условий хроматографирования составляет величину не менее (1,0 — 1,5) x 10-8 г. Предел обнаружения определяется по величине достоверно регистрируемого детектором минимального аналитического сигнала (высота пика) индивидуального вещества при длине волны 210 нм. За минимальную высоту пика принимают сигнал, в 5 раз превышающий уровень флуктуационных шумов, регистрируемых детектором.
На рис. 3 представлена хроматограмма экстракта вещества таблетки с изображением знака «$», действующим началом которой является МВДБ (содержание 26% масс.). В процессе экстракции вещества таблетки подвижной фазой наряду с действующим началом (МВДБ) в растворе выявлены и другие компоненты, наблюдаемые на хроматограмме как неидентифицированные хроматографические пики.
Рис. 3. Хроматограмма экстракта таблетки, содержащей МБДБ
Необходимо обратить внимание на то, что при работе на одной и той же колонке в одних и тех же условиях анализа коэффициенты емкости и селективности разделения не должны варьировать от анализа к анализу. Основным фактором, влияющим на изменение этих параметров, является нарушение состава подвижной фазы. В случае непостоянства значений хроматографических параметров необходимо проверить правильность приготовления подвижной фазы и, если не наступит улучшение результатов, сменить колонку.
5. Исследование методом ИК-спектроскопии
Как показывает анализ экспертной практики, таблетки, изымаемые из незаконного оборота, наряду с амфетаминами содержат другие вещества — сахара, крахмал, соду и др. Поэтому ИК-спектры исходных объектов не дают правильного представления о содержании наркотического средства, но могут иметь важное значение для получения информации о наполнителях, которые, как правило, достаточно четко различимы в ИК-спектре исходного объекта.
Методика выделения амфетаминов с целью их последующей идентификации методом ИК-спектроскопии заключается в следующем. При исследовании порошков и таблеток небольшую часть вещества после измельчения и гомогенизирования встряхиванием (примерно 20 — 30 мг) растворяют в 1 мл дистиллированной воды. Затем к раствору, после тщательного перемешивания, добавляют несколько капель 0,1 № раствора гидроксида калия или натрия и 1 мл хлороформа. После перемешивания и отстаивания смеси осторожно отбирают 0,6 — 0,8 мл жидкости от нижнего хлороформного слоя и переносят в агатовую ступку. После упаривания растворителя в сушильном шкафу при температуре 50 °C в течение 5 мин. к полученному в виде белых кристаллов или маслянистой пленки веществу добавляют бромид калия, перетирают полученную смесь и прессуют в виде таблетки.
Как уже упоминалось ранее, некоторые активные амфетамины (ДОБ, ДОХ и др.) наносятся на бумажки. В этом случае образец бумаги с нанесенным на нее веществом разрезают на мелкие части и заливают 1 мл 0,1 № раствора соляной кислоты. Экстракцию проводят в течение 10 мин. при постоянном перемешивании. Раствор центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 5 мин. Водную фазу отделяют, а образец снова заливают кислотой и всю операцию повторяют еще раз.
Объединенные кислотные вытяжки по каплям подщелачивают 0,1 № раствором едкого натрия (едкого калия) до получения pH9-10 по универсальной индикаторной бумаге и экстрагируют 5 мл эфира 3 раза. Объединенный эфирный экстракт переносят в агатовую ступку и сушат в сушильном шкафу при 50 °C в течение 5 — 10 мин. Сухой остаток перетирают с бромидом калия и прессуют в таблетку.
Далее регистрируют спектр на любом дисперсионном или ИК-Фурье спектрометре с разрешением 4 см-1 и сопоставляют его с базой данных ИК-спектров наркотических средств, сравнивая спектры по наличию, форме и относительной интенсивности полос поглощения. Для амфетаминов, основания которых представляют собой маслянистые жидкости (см. табл. 2), регистрацию ИК-спектра можно проводить в виде тонкой пленки на кристалле из подходящего оптического материала (KBr, KRS и др.). Однако в этом случае наблюдается худшая сходимость спектра с библиотечным.
Следует отметить, что при наличии в исходном объекте двух или более амфетаминов в хлороформный слой будут экстрагироваться все амфетамины и их идентификация методом ИК-спектроскопии будет затруднена. Поэтому в таких случаях необходимо использовать более сложные способы пробоподготовки — твердофазную экстракцию или препаративную ТСХ для выделения индивидуальных компонентов и проведения их последующего определения методом ИК-спектроскопии.
6. Исследование методом УФ-спектроскопии
Наиболее важное значение метод УФ-спектроскопии приобретает при проведении количественных определений амфетаминов. Метод имеет ряд достоинств: простота и экспрессность определения, возможность проведения определений в водных растворах. Кроме того, метод не требует наличия редких реактивов и растворителей, отсутствует стадия сложной предварительной пробоподготовки объекта, определению не мешают такие часто встречающиеся наполнители, как сахара, крахмал, стеараты, сода.
Оборудование для УФ-спектроскопии имеется практически во всех экспертно-криминалистических подразделениях. При использовании метода УФ-спектроскопии для количественных определений необходимо иметь построенную калибровочную кривую по стандартным растворам на данном приборе.
В основе количественных определений спектральными методами лежит закон Бугера — Ламберта — Бера, устанавливающий зависимость между оптической плотностью и концентрацией анализируемого раствора. Поэтому перед началом проведения исследований необходимо определить диапазон концентраций для данного вещества, в котором соблюдается линейная зависимость оптической плотности (A) от концентрации (C), т.е. A = k x C, где k — коэффициент молярного поглощения, если концентрация выражена в моль/л. Для амфетаминов было проведено исследование, позволяющее определить интервал концентраций, в котором соблюдается линейная зависимость оптической плотности от концентрации раствора, т.е. диапазон концентраций, в котором следует проводить количественные определения (см. табл. 8). В большинстве случаев линейная зависимость оптической плотности от концентрации соблюдается для значений оптической плотности до 1,3 — 1,5, а реально измерения ведутся при оптических плотностях не менее 0,05 — 0,10.
Таким образом, при количественном определении амфетаминов оптическая плотность раствора должна быть от 0,1 (A0,1) до 1,5 (A1,5). Исходя из данных табл. 8 можно рассчитать рабочий диапазон концентраций для каждого из амфетаминов следующим образом:
концентрация при \text{А}_{0,1} = \frac{0,1 \cdot \text{С}_{\text{табл}}}{\text{А}_{\text{табл}}} ;
концентрация при \text{А}_{1,5} = \frac{1,5 \cdot \text{С}_{\text{табл}}}{\text{А}_{\text{табл}}} .
Проведенные таким образом вычисления показывают, что рабочий диапазон концентраций для амфетаминов составляет примерно 0,01 — 0,08 мг/мл, для мескалина — 0,05 — 0,60 мг/мл. Поэтому при приготовлении стандартных растворов концентрация раствора должна находиться в указанных выше рабочих диапазонах.
ОПТИЧЕСКИЕ ПЛОТНОСТИ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ АМФЕТАМИНОВ ГИДРОХЛОРИДОВ (ИЗМЕРЕНИЯ ПРОВЕДЕНЫ НА СПЕКТРОФОТОМЕТРЕ UV-VIS LAMBDA 14P ФИРМЫ PERKIN-ELMER (США) В КВАРЦЕВЫХ КЮВЕТАХ С ТОЛЩИНОЙ ПОГЛОЩАЮЩЕГО СЛОЯ 10 ММ)
Следует выделить два способа количественного определения веществ методом УФ-спектроскопии.
Первый способ — самый простой, но он требует наиболее полного знания о составе объекта и применим к смесям, не содержащим каких-либо веществ, поглощающих в той же области, что и определяемый компонент. При этом необходимо убедиться с помощью любого физико-химического метода в наличии только одного из амфетаминов в пробе и отсутствии мешающих веществ (веществ, поглощающих в той области спектра, которая используется для спектрального исследования). Затем следует взять точную навеску анализируемого вещества (10 — 20 мг), растворить в точно измеренном объеме дистиллированной воды (50 мл), подкисленной несколькими каплями концентрированной соляной кислоты, разбавить раствор в 10 раз и сравнить оптические плотности пробы и стандартного раствора исследуемого амфетамина в максимуме поглощения (максимумы поглощения приведены в табл. 8).
Вычисление содержания наркотического средства в анализируемой пробе проводят по формулам:
\text{С}_{\text{ан}} = \frac{\text{А}_{\text{ан}} \cdot \text{С}_{\text{ст}}}{\text{А}_{\text{ст}}} , (1)
\text{содержаниевещества }(\%) = \frac{\text{С}_{\text{ан}} \cdot V_{\text{ан}} \cdot 10}{g} \cdot 100\%, (2)
Cан, Cст — концентрации анализируемого и стандартного растворов, измеренные в максимуме поглощения;
Aан, Aст — оптические плотности анализируемого и стандартного растворов, измеренные в максимуме поглощения;
Vан — объем раствора, в котором растворяли навеску анализируемого вещества, мл;
g — навеска анализируемого вещества, мг.
При наличии в пробе нескольких амфетаминов данным способом определять содержание наркотических компонентов нельзя, поскольку амфетамины имеют близкие значения максимумов поглощения в диапазоне 275 — 295 нм, что не позволяет проводить их индивидуальное определение. Поэтому в данном случае следует использовать другой способ определения.
Второй способ количественного определения представляет собой сочетание методов ТСХ и УФ-спектроскопии, требует более длительной пробоподготовки объекта, но является универсальным методом при исследовании различных смесей, содержащих один или несколько амфетаминов, а также различные наполнители.
Принципиальная схема количественного определения наркотических веществ методом УФ-спектроскопии с предварительным разделением методом ТСХ включает несколько этапов. Следует отметить, что количественное определение проводится после идентификации наркотических веществ в исследуемом объекте любым физико-химическим методом.
Этап 1. Приготовление раствора, содержащего определяемое вещество, путем растворения части таблетки или порошка, поступивших на исследование, в органическом растворителе (метаноле, хлороформе, воде и др.). При поступлении на исследование небольшого количества водного раствора можно использовать данный раствор без предварительной подготовки. При поступлении на исследование нескольких миллилитров водного раствора желательно проводить 2 — 3-кратную экстракцию водного раствора органическим растворителем для наиболее полного извлечения и концентрирования определяемого вещества. Экстракцию органическими растворителями анализируемого и стандартного (с известной концентрацией) водных растворов проводят в одинаковых условиях.
Этап 2. Нанесение анализируемого раствора и раствора, содержащего точно известную концентрацию определяемого вещества (стандартного раствора), на хроматографическую пластину. Нанесение осуществляется на подогреваемом столике, входящем в комплект для ТСХ, так как необходимо наносить, как правило, 10 — 50 мкл раствора в зависимости от концентрации вещества. Анализируемый и стандартный раствор наносятся в виде пятна микрошприцем на пластину типа Sorbfil ПСТХ-П-А-УФ. Количественное содержание вещества в пятнах можно регулировать при осмотре пластины в УФ-лучах, при этом пятна должны быть четко различимы и иметь хорошую интенсивность гашения флуоресценции.
Этап 3. Хроматографирование пластины в камере с одной из систем растворителей, которые рекомендованы в разделе данного пособия, посвященном исследованию методом тонкослойной хроматографии.
Этап 4. Выделение (смыв) с пластины зон, содержащих определяемое вещество, полученных из анализируемого и стандартного растворов. После хроматографирования и высушивания пластины необходимо отметить расположение зон на пластине карандашом. Затем (для пластин на гибкой, полимерной основе) следует вырезать три фрагмента в виде квадратов площадью 1 кв. см, которые содержат зоны определяемого вещества из анализируемого и стандартного растворов и зону без определяемого вещества (для «холостого» раствора). Для пластин на стеклянной основе следует соскабливать отмеченные зоны скальпелем в соответствующие емкости (например, бюксы). Далее с полученных фрагментов или соскобов с пластин экстрагируют определяемое вещество путем добавления одинаковых объемов (1 — 4 мл в зависимости от объема используемых кварцевых кювет) растворителя или смеси растворителей (например, смесь: метанол — 5% водный раствор соляной кислоты, 1:1). Таким образом готовят анализируемый, стандартный и «холостой» растворы для последующего фотометрирования.
Этап 5. Сравнение оптических плотностей анализируемого и стандартного растворов в УФ-области, вычисление концентрации определяемого вещества в анализируемом растворе. Фотометрирование можно проводить на любом спектрофотометре в УФ-области спектра в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм, отмечая оптическую плотность анализируемого и стандартного растворов относительно «холостого» раствора в максимуме поглощения. Вычисление концентрации определяемого вещества в анализируемом растворе проводят по формуле:
\text{С}_{\text{ан}} = \frac{\text{А}_{\text{ан}} \cdot \text{С}_{\text{ст}} \cdot V_{\text{ст}}}{\text{А}_{\text{ст}} \cdot V_{\text{ан}}} ,
Cан, Cст — концентрации анализируемого и стандартного растворов, мг/мл;
Aан, Aст — оптические плотности анализируемого и стандартного растворов;
Vан, Vст — объемы анализируемого и стандартного растворов, нанесенные на хроматографическую пластину, мкл.
Относительная погрешность измерения количества вещества методом УФ-спектроскопии составляет 3 — 5 отн. %.
Литература
1. Материалы конференции по стимуляторам амфетаминового типа. ООН. Вена, 12 — 16 февраля, 1996.
2. Kovar K-A. // Pharmazeutishe Zeitung. 1995. 140. № 21.
3. Recommended Methods for Testing Illicid Ring-Substituted Amphetamine Derivatives. United Nations. Dovision of Narcotic Drugs, Vienna, 1987.
4. Bundes-kriminalblatt. BKA. 1995. 45. № 178.
5. The Merck Index. Twelfth Edition. Merck & CO., Inc. 1996.
6. Recommended Methods for Testing Peyote Cactus (Mescal Buttons) / Mescaline and Psylocybe Mushrooms / Psilocybm. United Nations. Division of Narcotic Drugs, Vienna, 1989.
7. Kovar K-A., Roesch C, Rupp A. // Pharmazie in unserer Zeit. 1990. 19. № 3: 99 — 107.
8. Kovar K-A., Roesch C, Rupp A. // Pharmazie in unserer Zeit. 1990. 19. № 5: 211 — 221.
9. Neuninger H. // Scientia Pharmaceutica. 1987. 55: 1 — 11.
10. Information Manual on Desinger Drugs. World Health Organization. Geneva, 1991.
11. Clarke's Isolation and Identification of Drugs. The Farmaceutical Press, London, 1986.
12. Oesterreichische chemishe Zeitschrift. 1989. № 11: 332 — 336.
13. Terry A. Dal Cason// Journal of Forensic Science. 1989. 34. № 4: 928 — 961.
14. Drug Enforcement Handbook. U.S. Department of Justice. DEA.
15. Shulgin A. Psychotomimetic Drugs: Strukture-Activity Relationsships // The Handbook of Psychopharmacology. V. 11, Stimulants. Plenum Publishing Company New York, 1978. P. 243 — 333.
16. Clandestinaly Produced Drugs, Analogues and Precursors U.S. Department of Justice, DEA, Washington, 1989.
17. Pharmakology and Toxicology of Amphetamine and Related Desinger Drugs. // NIDA Research Monograph 1989. 94. U.S. Department of Health and Human Services.
18. Shulgin A.T. // Nature. 1969. V. 221. P. 537 — 541.
19. Haffmans G. // Toxichem + Krimtech. 1994. 61. № 2: 30.
20. Christine Brown F. Hallucinogenic drugs, Charles Thomas Publisher, Springfield, Illinois, 1972.
21. Multilingual dictionary of narcotic drugs and psychotropic substances under international control. United Nations, 1993.
22. Shulgin A. Pihkal. A chemical Love Story. Transform Press, 1995.