---
title: "\"ОФС.1.7.2.0032.15. Общая фармакопейная статья. Определение содержания анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания\""
number: "ОФС.1.7.2.0032.15"
issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0032-15"
---

## "ОФС.1.7.2.0032.15. Общая фармакопейная статья. Определение содержания анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания"

# "ОФС.1.7.2.0032.15. Общая фармакопейная статья. Определение содержания анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания"

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)

("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II")

> [!IMPORTANT]
> В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018.
> Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.ph по состоянию на 01.06.2021.


<div align="center">

<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

</div>


<a id="p100002"></a>ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ


| <a id="p100003"></a>Определение содержания анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания | <a id="p100004"></a>ОФС.1.7.2.0032.15 |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на определение содержания анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания, которая основана на способности анатоксинов образовывать комплекс антиген-антитело со специфическими антитоксинами. При внесении в раствор анатоксина определенного количества соответствующего антитоксина часть последнего связывается с анатоксином в эквивалентном соотношении. Содержание не связавшегося антитоксина определяют по его токсиннейтрализующей способности. На основании полученных результатов определяют содержание анатоксина в испытуемом растворе.
<a id="p100006"></a>Для проведения испытания используют стандартные образцы антитоксинов, калиброванные в Международных единицах (МЕ). Количество анатоксина, которое связывает 1 МЕ соответствующего антитоксина, принимают за 1 единицу связывания (ЕС). Специфическую активность анатоксинов, определяемую в реакции антитоксинсвязывания, выражают в ЕС/мл.

<a id="p100007"></a>ИСПЫТАНИЯ

<a id="p100008"></a>Перед проведением испытания устанавливают опытную дозу токсинов, используемых при определении содержания антитоксинов в испытуемой среде.
<a id="p100009"></a>Столбнячный анатоксин
<a id="p100010"></a>За опытную дозу принимают минимальное количество столбнячного токсина, которое при введении мышам в смеси с 0,01 МЕ столбнячного антитоксина вызывает гибель 50% животных в течение 4 сут.

<div align="center">

<a id="p100011"></a>При определении опытной дозы готовят не менее 7 последовательных разведений токсина в 0,9% растворе натрия хлорида, отличающихся одно от другого на 10 - 20%. В ряд пробирок вносят по 1 мл столбнячного антитоксина, содержащего 0,1 МЕ, 1 мл одного из разведений токсина и 2 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Смеси инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (45 +/- 2) мин и вводят 4 белым мышам массой тела 16 - 18 г подкожно в объеме 0,4 мл. За животными наблюдают в течение 4 сут, регистрируя количество павших от каждого разведения токсина. В результате испытания отмечают наибольшее разведение токсина, вызвавшее гибель 50% животных в группе. Готовят разведение токсина, содержащее 10 опытных доз в 1 мл.<br>
<a id="p100012"></a>Для использования в опыте антитоксинсвязывания готовят разведение токсина.<br>
<a id="p100013"></a>Проведение реакции антитоксинсвязывания<br>
<a id="p100014"></a>Исходя из предполагаемого содержания анатоксина в растворе, готовят несколько его последовательных разведений до 0,1 ЕС/мл, отличающихся друг от друга на 10 - 25% [(табл.)](#p100016). Подготовленные разведения вносят по 1 мл во флаконы и добавляют по 0,2 МЕ столбнячного антитоксина в объеме 2 мл. Смеси тщательно перемешивают и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (45 +/- 2) мин для связывания анатоксина с антитоксином. После окончания инкубации определяют содержание оставшегося свободным антитоксина. С этой целью в каждый флакон вносят 1 мл токсина, содержащего 10 опытных доз. Смеси инкубируют при тех же условиях и вводят группам мышей (не менее 4 животных в каждой) подкожно по 0,4 мл.

<a id="p100015"></a>Таблица

<a id="p100016"></a>Схема приготовления разведений испытуемого анатоксина

</div>



<table>
<colgroup><col width="29%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100017"></a>Показатель</td><td colspan="9"><a id="p100018"></a>N флакона (разведения)</td></tr>
<tr><td><a id="p100019"></a>1</td><td><a id="p100020"></a>2</td><td><a id="p100021"></a>3</td><td><a id="p100022"></a>4</td><td><a id="p100023"></a>5</td><td><a id="p100024"></a>6</td><td><a id="p100025"></a>7</td><td><a id="p100026"></a>8</td><td><a id="p100027"></a>9</td></tr>
<tr><td><a id="p100028"></a>Предполагаемая активность анатоксина ЕС/мл</td><td><a id="p100029"></a>200</td><td><a id="p100030"></a>250</td><td><a id="p100031"></a>300</td><td><a id="p100032"></a>350</td><td><a id="p100033"></a>400</td><td><a id="p100034"></a>450</td><td><a id="p100035"></a>500</td><td><a id="p100036"></a>550</td><td><a id="p100037"></a>600</td></tr>
<tr><td><a id="p100038"></a>Количество анатоксина в разведении 1:100 мл</td><td><a id="p100039"></a>1</td><td><a id="p100040"></a>1</td><td><a id="p100041"></a>1</td><td><a id="p100042"></a>1</td><td><a id="p100043"></a>1</td><td><a id="p100044"></a>1</td><td><a id="p100045"></a>1</td><td><a id="p100046"></a>1</td><td><a id="p100047"></a>1</td></tr>
<tr><td><a id="p100048"></a>Количество 0,9% раствора натрия хлорида, мл</td><td><a id="p100049"></a>19</td><td><a id="p100050"></a>24</td><td><a id="p100051"></a>29</td><td><a id="p100052"></a>34</td><td><a id="p100053"></a>39</td><td><a id="p100054"></a>44</td><td><a id="p100055"></a>49</td><td><a id="p100056"></a>54</td><td><a id="p100057"></a>59</td></tr>
</table>


<a id="p100058"></a>Испытания проводят совместно с контролем опытной дозы токсина. Смесь, состоящую из 2 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида, 1 мл раствора столбнячного антитоксина (0,1 МЕ/мл) и 1 мл раствора токсина, содержащего 10 опытных доз, инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (45 +/- 2) мин и вводят мышам подкожно по 0,4 мл.
<a id="p100059"></a>За животными опытной и контрольной групп наблюдают в течение 4 сут, регистрируя появление симптомов заболевания у животных в каждой группе. Мышей с признаками столбняка усыпляют. Результат выражают как отношение количества выживших животных к общему количеству животных в каждой группе. Отмечают разведение анатоксина с наименьшей предполагаемой активностью, которое при введении мышам опытной группы вызвало такой же эффект, как у мышей контрольной группы. Это означает, что из 0,2 МЕ столбнячного антитоксина, находившихся в смеси, 0,1 МЕ антитоксина не связалась с анатоксином и вступила в реакцию нейтрализации токсина. Следовательно, 0,1 МЕ антитоксина связала анатоксин и его активность равна 0,1 ЕС/мл. Для определения содержания анатоксина в исходном растворе учитывают его разведение [(табл.)](#p100016).
<a id="p100060"></a>Ботулинические анатоксины типов A, B и E
<a id="p100061"></a>Перед проведением испытания устанавливают опытную дозу ботулинических токсинов типов A, B и E, используемых в реакции антитоксинсвязывания.
<a id="p100062"></a>За опытную дозу (L+/50) ботулинических токсинов типов A, B и E принимают минимальное количество токсина, которое при внутривенном введении мышам в смеси с 1/50 МЕ соответствующего антитоксина вызывает гибель 50% животных в течение 4 сут.
<a id="p100063"></a>Для определения опытной дозы готовят 5 - 7 последовательных разведений токсина в 0,9% растворе натрия хлорида, отличающихся одно от другого на 10 - 20%. Для этого в ряд пробирок вносят по 1,5 мл одного из разведений токсина, 1 мл соответствующего антитоксина, содержащего 0,1 МЕ, и 1 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Смеси инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение (45 +/- 1) мин и вводят группам белых мышей с массой тела 16 - 18 г (не менее 4 животных в каждой группе) внутривенно в объеме 0,7 мл. За животными наблюдают в течение 4 сут, учитывая количество павших животных от каждого разведения токсина. Наибольшее разведение токсина, вызвавшее гибель 50% животных в группе, считают рабочим разведением (1,5 мл этого разведения содержат 5 опытных доз).
<a id="p100064"></a>Проведение реакции антитоксинсвязывания
<a id="p100065"></a>Исходя из предполагаемого содержания анатоксина в испытуемом препарате, готовят несколько его последовательных разведений в 0,9% растворе натрия хлорида, отличающихся друг от друга на 10 - 25% до 0,1 ЕС/мл [(табл.)](#p100016). По 1 мл одного из разведений анатоксина помещают во флаконы и добавляют по 1 мл соответствующего антитоксина, содержащего 0,2 МЕ. Смеси тщательно перемешивают и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (45 +/- 1) мин. Во время инкубации происходит связывание испытуемого анатоксина с антитоксином в эквивалентном соотношении. Содержание антитоксина, не связавшегося с анатоксином, определяют по его токсиннейтрализующей способности. С этой целью в каждый флакон вносят 1,5 мл соответствующего токсина, содержащего 5 опытных доз. Смеси инкубируют при тех же условиях и вводят внутривенно по 0,7 мл группам мышей (не менее 4 животных в каждой).
<a id="p100066"></a>Испытания проводят совместно с контролем опытной дозы токсина. С этой целью готовят смесь, состоящую из 1 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида, 1 мл раствора антитоксина (0,1 МЕ/мл) и 1,5 мл раствора токсина, содержащего 5 опытных доз. Смеси тщательно перемешивают, инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (45 +/- 1) мин и вводят внутривенно по 0,7 мл мышам опытных и контрольной групп.
<a id="p100067"></a>За животными наблюдают в течение 4 сут, учитывая количество больных и павших в каждой группе. Отмечают разведение анатоксина с наименьшей предполагаемой активностью, вызвавшее у мышей опытной группы такой же эффект, как в контрольной группе. Это означает, что из 0,2 МЕ антитоксина, находившихся в смеси, 0,1 МЕ антитоксина не связалась с анатоксином и вступила в реакцию нейтрализации токсина. Следовательно, 0,1 МЕ антитоксина связала анатоксин, активность которого равна 0,1 ЕС/мл. При определении содержания анатоксина в исходном растворе учитывают его разведение.



<a id="p100068"></a>

---