ОФС.1.7.2.0027.15. Общая фармакопейная статья. Определение общего азота с реактивом Несслера в биологических лекарственных препаратах

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II»)

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение общего азота с реактивом Несслера в биологических лекарственных препаратах	ОФС.1.7.2.0027.15

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения общего азота в биологических лекарственных препаратах (БЛП). Метод основан на свойстве реактива Несслера давать цветную реакцию с ионами аммония, образующимися после минерализации белковых продуктов. Для количественного определения содержания общего азота с реактивом Несслера используется колориметрический метод.

Колориметрический метод

В центрифужную пробирку вносят 0,5 мл испытуемого образца (A), с содержанием общего азота от 0,05 до 0,4 мг (табл.), прибавляют 0,1 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают. Пробирку закрывают стеклянным колпачком и минерализуют на песочной бане при температуре 190 — 210 °C. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл серной кислоты концентрированной. Минерализацию продолжают не менее 10 ч до обесцвечивания содержимого пробирки. Затем к минерализату прибавляют 9,9 мл воды очищенной и перемешивают.

Содержание общего азота в испытуемом образце (A), мг/0,5 мл	Объем разведенного минерализата для колориметрирования (B), мл
0,050 — 0,200	1,0
0,200 — 0,400	0,5

В химическую пробирку вносят 0,5 или 1,0 мл разведенного минерализата (B) (табл.), доводят объем раствора водой до 9,5 мл, перемешивают, прибавляют 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, приготовленным аналогичным образом из контрольной пробы.

Построение калибровочного графика. В химические пробирки вносят 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 мл стандартного раствора № 2 (содержание азота 5; 10; 15; 20; 25 мкг), доводят объем растворов водой до 9,5 мл, перемешивают и далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество мкг общего азота, а по оси ординат — среднее значение оптической плотности.

Калибровочный график воспроизводится при каждом анализе.

Содержание общего азота (X) в мг/мл вычисляют по формуле:

X = \frac{a \cdot 10}{A \cdot B \cdot 1000} = \frac{a}{A \cdot B \cdot 100} ,

где: a — количество азота, рассчитанное по калибровочному графику, мкг;

A — объем анализируемого образца, мл;

B — объем минерализата, мл;

1000 — перевод мкг в мг;

10 — разведение минерализата.

Содержание общего азота должно составлять от 0,1 до 0,8 мг/мл, если в фармакопейной статье или нормативной документации нет иных указаний.

---