ОФС.1.7.2.0019.15. Общая фармакопейная статья. Определение O-ацетильных групп в полисахаридных вакцинах

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II»)

Определение O-ацетильных групп в полисахаридных вакцинах	ОФС.1.7.2.0019.15

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения O-ацетильных групп в полисахаридных вакцинах. Принцип метода заключается в способности O-ацетильных групп образовывать с гидроксиламином в щелочной среде гидроксамовую кислоту, которая в кислой среде дает цветную реакцию с ионами железа (III). Определение O-ацетильных групп проводится колориметрическим методом.

Колориметрический метод

К 1 мл испытуемого раствора прибавляют 2 мл свежеприготовленного реактива № 1, перемешивают и оставляют на 4 мин при температуре от 18 до 20 °C. К полученному раствору приливают 1 мл разведенной хлористоводородной кислоты, перемешивают, прибавляют 1 мл 0,37 М раствора железа (III) хлорида, вновь перемешивают и оставляют на 15 мин при температуре, указанной выше.

По окончании инкубирования измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при 540 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 1 мл воды очищенной и реактивы, указанные выше и добавленные в той же последовательности.

X = A/B,

где: A — содержание O-ацетильных групп, найденное по калибровочному графику, мкмоль;

B — объем испытуемого раствора, мл.

Содержание O-ацетильных групп в 1 мл испытуемого раствора должно быть от 1,5 до 2,5 мкмоль/мл с учетом содержания влаги в лекарственном препарате.

Построение калибровочного графика. К 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 мл стандартного раствора ацетилхолина йодистого (5 мкмоль O-ацетильных групп) прибавляют воду очищенную до 1 мл (конечная концентрация O-ацетильных групп 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 мкмоль/мл соответственно). Далее анализ проводят, как указано выше.

Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс концентрацию стандартного раствора ацетилхолина йодистого в мкмолях O-ацетильных групп, а по оси ординат — показания оптической плотности стандартных растворов при 540 нм.

Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.

Примечания

Испытуемый раствор. 1 мл испытуемого раствора (0,1% раствор испытуемого образца в воде очищенной), содержащий 1,5 — 2,5 мкмоль O-ацетильных групп. Приготовление испытуемого раствора указывается в фармакопейной статье или нормативной документации.

Стандартный раствор ацетилхолина йодистого 5 мкмоль O-ацетильных групп в 1 мл. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1360 г (точная навеска) ацетилхолина йодистого, прибавляют около 80 мл 0,001 М раствора натрия ацетата, перемешивают, доводят общий объем раствора тем же растворителем до метки и вновь перемешивают. Раствор хранят при температуре 4 — 8 °C в течение 3 мес.

2 М раствор гидроксиламина. В мерной колбе вместимостью 500 мл растворяют 69,5 г гидроксиламина гидрохлорида в воде очищенной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4 — 8 °C в течение 1 мес.

3,5 М раствор натрия гидроксида. В мерной колбе вместимостью 500 мл растворяют 70,0 г натрия гидроксида в воде очищенной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 3 мес.

Реактив 1. Смешивают равные объемы 1 М раствора гидроксиламина и 3,5 М раствора натрия гидроксида. Реактив готовят в день проведения анализа.

Хлористоводородная кислота разведенная. Смешивают 1 объем хлористоводородной кислоты концентрированной с 2 объемами воды очищенной. Раствор хранят в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 6 мес.

0,37 М раствор железа (III) хлорида. Растворяют 50,0 г железа (III) хлорида 6-водного в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты в мерной колбе вместимостью 500 мл, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4 — 8 °C в течение 3 мес.

0,001 М раствор натрия ацетата. Растворяют 0,0680 г натрия ацетата тригидрата в воде очищенной в мерной колбе вместимостью 500 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Устанавливают в растворе pH 4,5 с помощью 1 М раствора уксусной кислоты. Раствор хранят при температуре 4 — 8 °C в течение 3 мес.

1 М раствор хлористоводородной кислоты. В мерную колбу вместимостью 500 мл, содержащую 200 — 300 мл воды очищенной, помещают 4,13 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, доводят объем тем же растворителем до метки и перемешивают. Раствор хранят в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 6 мес.

---