--- title: "\"ОФС.1.7.2.0014.15. Метод спектроскопии ЯМР для определения подлинности полисахаридных вакцин\"" number: "ОФС.1.7.2.0014.15" issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0014-15" --- ## "ОФС.1.7.2.0014.15. Метод спектроскопии ЯМР для определения подлинности полисахаридных вакцин" # "ОФС.1.7.2.0014.15. Метод спектроскопии ЯМР для определения подлинности полисахаридных вакцин" (утв. Приказом Министерства здравоохранения РФ от 31.10.2018 N 749) ("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание, Том II") > [!IMPORTANT] > В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. > Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.ph по состоянию на 01.06.2021. **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Метод спектроскопии ЯМР для определения подлинности полисахаридных вакцин | ОФС.1.7.2.0014.15 | | --- | --- | Метод спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР) предназначен для идентификации и контроля подлинности полисахаридных вакцин. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса - физический метод анализа, основанный на регистрации переходов между ядерными магнитными энергетическими уровнями молекул вещества, находящегося в постоянном магнитном поле. Переходы между ядерными магнитными уровнями возможны для ядер, обладающих ненулевым магнитным моментом, то есть для ядер со спиновым квантовым числом 1, не равным нулю. Практическое значение с точки зрения распространенности и чувствительности имеет наблюдение ЯМР на ядрах 1H, 13C, 15N, 19F и 31P. Все перечисленные магнитно активные ядра имеют спин, равный 1/2. Набор переходов между всевозможными магнитными энергетическими состояниями магнитно активных ядер в молекуле составляет спектр ЯМР. Спектр ЯМР является характеристическим для каждого вещества и поэтому может применяться для его идентификации. На результирующий спектр ЯМР оказывают влияние условия регистрации: агрегатное состояние вещества, температура, наличие других веществ в анализируемом образце. Основными характеристиками спектров ЯМР являются химический сдвиг, измеряемый в миллионных долях (м.д.), мультиплетность, интегральная интенсивность сигналов, а также константы спин-спинового взаимодействия, определяющие расщепление сигналов ЯМР и измеряемые в герцах (Гц). Эти характеристики зависят от химического окружения данного ядра или группы ядер, от типа и числа соседних ядер, обладающих магнитным моментом, от их пространственного расположения, а также от условий, в которых регистрируется спектр ЯМР. С целью идентификации и контроля подлинности полисахаридных вакцин регистрируются спектры ЯМР на ядрах углерода 13 (ЯМР 13C) в контролируемых условиях. Спектроскопия ЯМР на ядрах 1H для образцов полисахаридов не является характеристической из-за сильного перекрывания сигналов. Регистрация спектра ЯМР 13C Предварительно в датчике спектрометра ЯМР устанавливают температуру 35 °C. В случае исследования вязких растворов температура может быть увеличена до 70 °C. Перед началом регистрации спектра исследуемый образец выдерживают в датчике спектрометра для установления необходимой температуры не менее 5 мин. Для калибровки шкалы химических сдвигов спектрометра регистрируют спектр ЯМР 13C 20% раствора 1,4-диоксана в дейтерия оксиде (D2O). Химический сдвиг сигнала 1,4-диоксана устанавливают как 67,4 м.д. Спектры ЯМР 13C образцов полисахаридных вакцин регистрируют в тех же условиях. Параметры регистрации спектров ЯМР 13C образцов полисахаридных вакцин: Величина импульса: 45°; Спектральное разрешение: < 1 Гц/точка; Время между импульсами: не менее 1 с; Температура регистрации: 35 °C. Параметры обработки спектров ЯМР 13C: Взвешивающая функция: экспонента; Параметр уширения взвешивающей функции: 2 Гц; Коррекция базовой линии: полиноминальная. Критерии пригодности спектров ЯМР 13C для анализа: Отношение сигнал/шум: >= 10:1; Результирующая ширина спектральных линий: < 20 Гц. Анализ спектров 13C образцов полисахаридных вакцин: - выделяется спектральный диапазон аномерных атомов углерода 95 - 105 м.д.; - в выделенном спектральном диапазоне идентифицируются характеристические сигналы для полисахаридов вакцины. Эти сигналы должны быть охарактеризованы определенными химическими сдвигами, уникальными для данного полисахарида, с соответствующими доверительными интервалами; - в выделенном спектральном диапазоне определяется отсутствие других сигналов, не относящихся к полисахаридам вакцины; - записывается 13C спектр, соответствующий спектральному диапазону аномерных атомов углерода, с указанием цифровых значений химических сдвигов всех характеристических сигналов. Также приводится запись полного спектра (0 - 210 м.д.) с указанием цифровых значений химических сдвигов характеристических сигналов. Для идентификации и определения подлинности полисахаридной вакцины требуется одновременное выполнение условий как наличия всех характеристических сигналов с определенными химическими сдвигами, находящихся в границах доверительных интервалов, так и отсутствия любых других сигналов, не относящихся к целевому полисахариду. Конкретный набор характеристических сигналов с соответствующими доверительными интервалами приводится в фармакопейной статье и нормативной документации. Примечания 1. Испытуемый образец. Образец массой от 10 до 20 мг (количество должно быть достаточным для регистрации спектра 13C, пригодного для анализа в соответствии с критерием пригодности по соотношению сигнал/шум) растворяют в 0,6 мл дейтерия оксида (D2O) 99,9 ат. % D, раствор центрифугируют 20 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в помеченную ампулу для регистрации спектров. 2. Раствор для калибровки. В ампулу для спектроскопии ЯМР помещают 480 мкл D2O, добавляют 120 мкл 1,4-диоксана и перемешивают. ---