---
title: "\"ОФС.1.7.2.0004.15. Общая фармакопейная статья. Иммуногенность адсорбированного столбнячного анатоксина\""
number: "ОФС.1.7.2.0004.15"
issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0004-15"
---

## "ОФС.1.7.2.0004.15. Общая фармакопейная статья. Иммуногенность адсорбированного столбнячного анатоксина"

# "ОФС.1.7.2.0004.15. Общая фармакопейная статья. Иммуногенность адсорбированного столбнячного анатоксина"

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)

("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II")

> [!IMPORTANT]
> В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018.
> Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 13.05.2021 и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи.


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Иммуногенность адсорбированного столбнячного анатоксина | <a id="p100004"></a>ОФС.1.7.2.0004.15 |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения специфической (иммуногенной) активности адсорбированного столбнячного анатоксина, входящего в состав моно- и комбинированных вакцин. Специфическую активность столбнячного анатоксина определяют по его способности защищать иммунизированных животных от заражения столбнячным токсином и выражают в количестве Международных единиц (МЕ) активности, содержащихся в 1 мл или 1 прививочной дозе (0,5 мл). Активность столбнячного анатоксина в МЕ/мл рассчитывают путем сопоставления его количества и количества соответствующего референс-препарата, калиброванного в МЕ, необходимых для защиты 50% животных от летального заражения столбнячным токсином (LD50). Для определения специфической активности используют метод множественных разведений. При стабильно воспроизводимых показателях активности адсорбированного столбнячного анатоксина и стандартной технологии производства возможно использование метода с одним разведением.

## <a id="p100006"></a>Метод множественных разведений

<a id="p100007"></a>Разными дозами испытуемого препарата иммунизируют не менее 3 групп мышей по 12 - 16 животных в группе. Не менее 3 аналогичных групп животных иммунизируют разными дозами референс-препарата, калиброванного в МЕ. Разведения вакцины и референс-препаратов выбирают таким образом, чтобы наименьшая доза защищала от заражения не более 20%, а наибольшая доза - не менее 80% иммунизированных животных. Следует избегать разведений испытуемых образцов, при которых наблюдается гибель или выживаемость 100% иммунизированных животных.
<a id="p100008"></a>Через 28 сут животным вводят по 50 LD50 столбнячного токсина. Наблюдение проводят в течение 4 сут, регистрируя число выживших животных, и рассчитывают величины ED50 (статистически определяемая доза вакцины или референс-препарата, защищающая от гибели 50% иммунизированных животных в течение 4 сут) для вакцины (в мл) и референс-препарата (в МЕ). На основании полученных результатов определяют количество МЕ в 1 мл вакцины.
<a id="p100009"></a>Материалы и животные:
- <a id="p100010"></a>референс-препарат (стандартный образец активности адсорбированного столбнячного анатоксина, калиброванный в МЕ по соответствующему международному стандартному образцу);
- <a id="p100011"></a>испытуемый образец;
- <a id="p100012"></a>столбнячный токсин с предварительно установленной дозой LD50 (статистически определяемая доза токсина, вызывающая гибель 50% животных в течение 4 сут);
- <a id="p100013"></a>белые мыши с массой тела 16 - 18 г.
<a id="p100014"></a>Примечания
1. <a id="p100015"></a>Приготовление разведений референс-препарата. Референс-препарат разводят стерильным 0,9% раствором натрия хлорида, pH (7,0 +/- 0,2), и готовят не менее 3 последовательных разведений с двойным шагом (например: 0,5, 1,0 и 2 МЕ/0,5 мл).
2. <a id="p100016"></a>Приготовление разведений испытуемого образца вакцины. Разведения испытуемого образца готовят, соблюдая те же условия, что и при приготовлении разведений референс-препарата.

#### <a id="p100017"></a>Иммунизация животных

<a id="p100018"></a>Разведения референс-препарата и испытуемого образца анатоксина вводят по 0,5 мл мышам в соответствующих группах однократно под кожу в область внутренней поверхности верхней трети бедра.

#### <a id="p100019"></a>Введение столбнячного токсина

<a id="p100020"></a>По истечении 28 сут всем иммунизированным животным вводят под кожу внутренней поверхности верхней трети бедра по (50 +/- 10) LD50 столбнячного токсина в объеме 0,5 мл. Опыт сопровождают контролем величины LD50 столбнячного токсина. Для этого неиммунизированным мышам из той же партии, разделенным на 3 группы (не менее 4 мышей в каждой группе), вводят столбнячный токсин в дозах 0,5, 1 и 2 LD50. За иммунизированными животными и животными контрольной группы наблюдают 4 сут, регистрируя число выживших мышей без явлений столбняка.
<a id="p100021"></a>На основании полученных результатов производят расчет иммуногенной активности столбнячного анатоксина с помощью статистических программ, включающих Probit analysis, или по [формуле](#p100022) Кербера, определяя величины ED50 для референс-препарата и испытуемой вакцины. Также рассчитывают количество LD50 токсина, введенного иммунизированным животным.
<a id="p100022"></a>Формула Кербера:
- <a id="p100023"></a>для испытуемого образца и референс-препарата:

<a id="p100024"></a> $lgED_{50} = lgD_{N} - \sigma(\Sigma Li - 0,5)$ ,

- <a id="p100025"></a>для токсина:

<a id="p100026"></a> $LgLD_{50} = lgD_{N} - \sigma(\Sigma Li - 0,5)$ ,

<a id="p100027"></a>где: DN - величина максимальной из испытуемых доз;
<a id="p100028"></a> $\sigma$ - логарифм кратности разведения (отношение большей дозы к следующей за ней меньшей дозе);
<a id="p100029"></a>Li - отношение количества выживших мышей без явлений столбняка (для LD50 - павших) к общему числу животных, получивших данную дозу;
<a id="p100030"></a> $\Sigma Li$ - сумма значений Li, найденных для всех испытуемых доз.
<a id="p100031"></a>Испытание считается проведенным правильно, если:
- <a id="p100032"></a>вычисленное значение ED50 для испытуемого образца анатоксина и референс-препарата лежит между значениями наибольшей и наименьшей дозы препаратов, введенных животным;
- <a id="p100033"></a>пределы доверительного интервала (P = 0,95) не менее 50% и не более 200% от величины вычисленной активности;
- <a id="p100034"></a>разрешающая доза столбнячного токсина приблизительно равна 50 LD50.

## <a id="p100035"></a>Метод с одним разведением

<a id="p100036"></a>Если при испытании не менее 10 серий вакцины подтверждена стабильность и соответствие требованиям нормативной документации показателя иммуногенности столбнячного анатоксина, возможно использование метода с одним разведением. Принцип метода заключается в сравнении активности единичных разведений вакцины и референс-препарата, калиброванного в МЕ.
<a id="p100037"></a>По данным тестов с 3 разведениями выбирают дозу референс-препарата, обеспечивающую выживаемость 10 - 20% иммунизированных животных при заражении разрешающей дозой токсина. Разведение вакцины готовят с таким расчетом, чтобы получить подтверждение того, что ее активность значительно выше минимально требуемой.
<a id="p100038"></a>Животных делят на 2 группы (не менее 12 животных в каждой), одну из которых иммунизируют вакциной, а другую - референс-препаратом. Препараты вводят подкожно в объеме 0,5 мл. Через 28 сут всем иммунизированным животным вводят разрешающую дозу столбнячного токсина (50 +/- 10) LD50 в объеме 0,5 мл. Опыт сопровождают контролем величины LD50 столбнячного токсина. За животными наблюдают 4 сут, регистрируя число выживших животных без явлений столбняка в каждой группе. Результаты выражают как отношение числа выживших без явлений столбняка мышей в каждой группе к общему числу животных, получивших данную дозу вакцины или референс-препарата. В опытной группе количество выживших животных должно быть достоверно выше, чем в контроле. Достоверность различия определяют с помощью точного критерия Фишера (одностороннего, P < 0,05). При значении P >= 0,05 различия считаются недостоверными [(табл)](#p100040).

<a id="p100039"></a>Таблица

<a id="p100040"></a>Расчет значения доверительного интервала (P)


<table>
<colgroup><col width="25%"><col width="25%"><col width="25%"><col width="25%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100041"></a>Группа</td><td colspan="3"><a id="p100042"></a>Количество испытуемых животных</td></tr>
<tr><td><a id="p100043"></a>Выжило</td><td><a id="p100044"></a>Пало</td><td><a id="p100045"></a>Всего</td></tr>
<tr><td><a id="p100046"></a>Опыт</td><td><a id="p100047"></a>a</td><td><a id="p100048"></a>b</td><td><a id="p100049"></a>T</td></tr>
<tr><td><a id="p100050"></a>Контроль</td><td><a id="p100051"></a>c</td><td><a id="p100052"></a>d</td><td><a id="p100053"></a>R</td></tr>
<tr><td><a id="p100054"></a>Всего</td><td><a id="p100055"></a>n+</td><td><a id="p100056"></a>n-</td><td><a id="p100057"></a>N</td></tr>
</table>


<a id="p100058"></a>Вычисление P проводят по формуле:

<a id="p100059"></a> $P = \frac{(n +)!(n -)!T!R!}{a!b!c!d!N!}$ ,

<a id="p100060"></a>где: ! - знак факториала (означает произведение всех натуральных чисел от 1 до числа, стоящего перед знаком "!" включительно).
<a id="p100061"></a>Если показатель иммуногенности столбнячного анатоксина при испытании методом с одним разведением не соответствует требованиям нормативной документации, испытание повторяют методом множественных разведений.



<a id="p100062"></a>

---