--- title: "\"ОФС.1.7.1.0016.18. Общая фармакопейная статья. Эритропоэтины\"" number: "ОФС.1.7.1.0016.18" issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-1-0016-18" --- ## "ОФС.1.7.1.0016.18. Общая фармакопейная статья. Эритропоэтины" # "ОФС.1.7.1.0016.18. Общая фармакопейная статья. Эритропоэтины" (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749) ("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание") > [!IMPORTANT] > В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. > Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 14.03.2019. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**
| Эритропоэтины | ОФС.1.7.1.0016.18
Вводится впервые | | --- | --- | Аминокислотная последовательность APPRLICDSR VLERYLLEAK EAENITTGCA EHCSLNENIT VPDTKVNFYA WKRMEVGQQA │ VEVWQGLALL SEAVLRGQAL LVNSSQPWEP LQLHVDKAVS GLRSLTTLLR ALGAQKEAIS │ PPDAASAAPL RTITADTFRK LFRVYSNFLR GKLKLYTGEA CRTGD Молекулярная масса около 30600 Да Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на эритропоэтины (эпоэтины), представляющие собой гликопротеин с аминокислотной последовательностью, включающей 165 аминокислот и углеводные цепи, присоединенные в участках гликозилирования с образованием трех N-связей и одной O-связи, с прикреплением сиаловых кислот в терминальных отделах углеводородных цепочек. Сайты N-гликозилирования: asn (24), asn (38), asn (83); сайт O-гликозилирования: thr (134). Трехмерная структура сформирована за счет двух дисульфидных связей между цистеинами в положении 7 - 161 и 29 - 33, которые необходимы для проявления биологической активности. Углеводная часть составляет 40 - 50% массы молекулы гликопротеина, из которых около 17% приходится на сиаловые кислоты. Аминокислотная последовательность эпоэтина идентична эндогенному человеческому эритропоэтину, продуцируемому клетками почек человека и различается профилем гликозилирования ( $\alpha$ , $\beta$ и др.). Настоящая общая фармакопейная статья включает требования к эритропоэтинам, полученным с использованием технологии рекомбинантной ДНК с применением в качестве экспрессионной системы клеток млекопитающих. Эритропоэтины специфически стимулируют пролиферацию и дифференцировку клеток эритроцитарного ростка. Препараты эритропоэтинов применяют для профилактики и лечения анемий различного генеза. Требования, приведенные в настоящей общей фармакопейной статье, могут быть дополнены с учетом специфических свойств лекарственного средства и технологии его производства. Данная ОФС не распространяется на эритропоэтины с измененной аминокислотной последовательностью (дарбэпоэтин) и модифицированные эритропоэтины (пегилированные эритропоэтины).
**ПРОИЗВОДСТВО**
Производство эритропоэтинов проводится с использованием технологии рекомбинантной ДНК и должно осуществляться в условиях соблюдения правил надлежащей производственной практики. При изменениях производственного процесса представляются доказательства сопоставимости продуктов до и после внесения изменений. Изменения не должны оказывать влияния на качество эпоэтина и/или стабильность процесса производства. Безопасность эритропоэтинов основывается строгим контролем исходных материалов. При оценке рисков контаминации исходного сырья и материалов животного происхождения, особое внимание уделяют губчатой энцефалопатии животных ([ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-1-0024-18) "Уменьшение риска передачи возбудителей губчатой энцефалопатии животных при применении лекарственных средств") и вирусам, вызывающим латентные инфекции ([ОФС](https://bukva.ai/docs/gf-xiv-minzdrav-rossii-ministerstvo-17) "Вирусная безопасность"). Также должно быть уделено внимание исходным материалам, непосредственно контактирующим с технологическим оборудованием или продукцией. Производство эритропоэтинов основано на системе банков клеток-продуцентов - Главного банка клеток (ГБК) и Рабочего банка клеток (РБК). Для создания штамма-продуцента эритропоэтина используются клетки линий млекопитающих животных (клетки яичника китайского хомячка (СНО)), из почки хомячка (ВНК) и др. Рекомбинантный штамм-продуцент получают путем трансформации клеточной линии плазмидой, содержащей ген человеческого эритропоэтина. Полученный штамм-продуцент секретирует эритропоэтин при культивировании на синтетических питательных средах in vitro. Экспрессирующая конструкция, штамм-продуцент, производство лекарственного средства, включая банки клеток-продуцентов, должны быть охарактеризованы в объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0011-15) "Требования к клеточным культурам - субстратам производства биологических лекарственных препаратов" и [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-7-1-0007-15) "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК". При изменениях производственного процесса представляют доказательства сопоставимости продуктов до и после внесения изменений. Изменения не должны оказывать влияния на качество эпоэтина и/или стабильность процесса производства. ИСПЫТАНИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ Требования к испытаниям фармацевтических субстанций эритропоэтинов регламентируются нижеприведенными показателями, а также требованиями [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-7-1-0007-15) "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК". Описание. До замораживания и после размораживания (оттаивания) бесцветный прозрачный или слегка опалесцирующий раствор. В замороженном состоянии - плотная бесцветная затвердевшая масса. Определение проводят визуально. Подлинность. Подлинность должна быть подтверждена с помощью комплекса взаимодополняющих методов (не менее 3, позволяющих специфически идентифицировать эритропоэтин с использованием стандартных образцов), один из которых биологический - определение специфической активности в соответствии с [ОЛФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0017-18) "Определение специфической активности препаратов эритропоэтина", второй метод пептидного картирования, в соответствии с ОФС "Пептидное картирование", подтверждающий первичную аминокислотную последовательность. Подлинность эритропоэтина, помимо указанных методов, может быть подтверждена методами: капиллярным электрофорезом; электрофорезом в полиакриламидном геле (в том числе, с последующим иммуноблоттингом); иммуноферментным анализом; изоэлектрическим фокусированием и другими методами с доказанной специфичностью. Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Испытания проводятся в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0022-15) "Капиллярный электрофорез", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0023-15) "Электрофорез в полиакриламидном геле", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0021-15) "Изоэлектрическое фокусирование", ОФС "Определение подлинности и чистоты методом вестерн-блот". Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Прозрачность. Раствор должен быть прозрачным или степень опалесценции не должна превышать эталон 1. Испытания проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-1-0007-15) "Прозрачность и степень мутности жидкостей". Цветность. Раствор должен быть бесцветный. Испытания проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0006-15) "Степень окраски жидкостей". pH. От 6,5 до 7,5. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-1-0004-15) "Ионометрия". Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси. Испытания проводят комплексом специфических (не менее 3) взаимодополняющих методов, определяющих содержание основного компонента и родственных соединений - агрегатов, димеров, модифицированных форм белка, посторонних примесей. Содержание родственных соединений и посторонних примесей может определяться методами электрофореза в полиакриламидном геле в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях; капиллярного электрофореза; изоэлектрофокусирования; высокоэффективной жидкостной хроматографии и другими валидированными методами, выбор которых должен быть обоснован. Испытания проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-2-0001-15) "Хроматография", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-2-0005-15) "Высокоэффективная жидкостная хроматография", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0022-15) "Капиллярный электрофорез", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0023-15) "Электрофорез в полиакриламидном геле", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0021-15) "Изоэлектрическое фокусирование", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0022-15) "Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот", [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-7-2-0033-15) "Метод иммуноферментного анализа". Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Гликановый профиль. Проводится оценка общего профиля гликанов (олигосахаридов), отщепленных от гликопротеина. Определяют содержание различных групп олигосахаридов, связанных с белковой частью молекулы эритропоэтина. Нормируют содержание отдельных, наиболее значимых гликановых структур. Также может быть оценена степень сиалирования гликопротеина. Гликановый профиль эритропоэтина может быть определен методами обращенно-фазовой и ионообменной высокоэффективной жидкостной хроматографии, нормально-фазовой хроматографией, обращенно-фазовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием, электрофорезом с масс-спектрометрическим детектированием и другими методами. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Сиаловые кислоты. Не менее 10 молей сиаловых кислот (в пересчете на N-ацетилнейраминовую кислоту) на 1 М эритропоэтина. Испытание проводят в соответствии с методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации. Остаточные белки клетки-хозяина. Приводят нормы по содержанию остаточных белков клетки-хозяина. Содержание не должно превышать значений, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят иммунохимическими методами (например, радиоиммунологическим или иммуноферментным (ИФА)). Испытание проводят в соответствии с методикой, изложенной в фармакопейной статье или нормативной документации. Для определения остаточных белков клеток-хозяина возможно использования готовых наборов реагентов, использование которых должно быть подтверждено материалами валидации методики. Остаточная ДНК штамма-продуцента. Приводят нормы по содержанию остаточной ДНК штамма-продуцента. Содержание не должно превышать значений, установленных в фармакопейной статье или в нормативной документации. Испытания проводят методом гибридизации с зондами, меченными биотином, дигоксигенином, другой меткой или другим валидированным методом, например, методом ПЦР или иммуноферментным методом (Treshold system). Для определения остаточной ДНК штамма-продуцента возможно использования готовых наборов реагентов, использование которых должно быть подтверждено материалами валидации методики. Микробиологическая чистота. Субстанция до стерилизующей фильтрации должна соответствовать требованиям, предъявляемым к фармацевтическим субстанциям, предназначенным для приготовления лекарственных форм для парентерального применения. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота". Стерильность. Субстанция должна быть стерильной, если хранится после стерилизующей фильтрации. Испытания проводят методом прямого посева или методом мембранной фильтрации в соответствии с ОФС "Стерильность". Белок. Содержание должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-1-1-0003-15) "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области" и ОФС "Определение белка" или в соответствии с другой валидированной методикой. Вещества, вносимые в субстанцию. Проводят количественное определение содержания веществ, используемых в качестве стабилизатора (например, полисорбат). Содержание полисорбата должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Определение полисорбата проводится в случае, если в состав входят соединения указанного класса. Содержание полисорбата определяется методами: обращенно-фазовой хроматографии, газовой хроматографии, спектрометрии или иным валидированным методом. Методика должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Бактериальные эндотоксины. Содержание не должно превышать значений, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Бактериальные эндотоксины". Аномальная токсичность. Должна быть нетоксична. Испытание проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-4-0004-15) "Аномальная токсичность". Период наблюдения за животными составляет 7 сут. Специфическая активность. Содержание активного вещества должно составлять не менее 80% и не более 125% от заявленного содержания. При доверительном интервале (P = 0,95) рассчитанной активности должны быть не ниже 64% и не более 156% от заявленной величины. Определение специфической активности проводят биологическим методом in vivo, оценивая стимуляцию продукции ретикулоцитов у нормоцитемических мышей. Активность субстанции сравнивают с активностью фармакопейного стандартного образца эритропоэтина BRP и выражают в международных единицах (МЕ). Испытание проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0017-18) "Определение специфической активности эритропоэтинов". Удельная активность. Расчетная величина вычисляется по формуле, указанной в фармакопейной статье или нормативной документации. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Должна быть не менее 100000 МЕ/мг. Удельная активность является расчетной величиной, равной отношению специфической активности в МЕ/мл к содержанию белка эритропоэтина в мг/мл. Транспортирование и хранение. В герметичном контейнере при температуре ниже минус 20 °C (или в соответствии с указаниями в нормативной документации). Недопустимо повторное замораживание и оттаивание образца.
**ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПРЕПАРАТ**
Лекарственные препараты на основе рекомбинантного эритропоэтина выпускают в формах для парентерального применения: раствор для инъекций и лиофилизат. Лиофилизат может выпускаться в комплекте с растворителем, разрешенным к медицинскому применению. Требования к испытаниям лекарственных препаратов эритропоэтина регламентируются нижеприведенными показателями, а также требованиями [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-7-1-0007-15) "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК" и [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-4-1-0007-15) "Лекарственные формы для парентерального применения". Описание. Приводится описание свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного препарата. Для лиофилизата отдельно приводится описание восстановленного раствора. Подлинность. Подтверждается комплексом взаимодополняющих методов, позволяющих специфически идентифицировать эритропоэтин (с использованием стандартных образцов) один из которых биологический - определение специфической активности, второй - пептидное картирование, в соответствии с ОФС "Пептидное картирование", подтверждающий первичную аминокислотную последовательность. Подлинность эритропоэтина, помимо указанных методов, может быть подтверждена капиллярным электрофорезом, электрофорезом в полиакриламидном геле (в том числе, с последующим иммуноблоттингом), изоэлектрическим фокусированием, и другими методами с доказанной специфичностью. Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Испытания проводятся в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0022-15) "Капиллярный электрофорез", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0023-15) "Электрофорез в полиакриламидном геле". [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0021-15) "Изоэлектрическое фокусирование", ОФС "Определение подлинности и чистоты методом вестерн-блот" и другими подходящими валидированными методами. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации. Прозрачность. Раствор должен быть прозрачным или степень опалесценции не должна превышать эталон 1. Испытания проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-1-0007-15) "Прозрачность и степень мутности жидкостей". Цветность. Раствор должен быть бесцветным. Испытания проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0006-15) "Степень окраски жидкостей". Время восстановления препарата (для лиофилизатов). Время восстановления лекарственного препарата указывается в фармакопейной статье или нормативной документации. Условия проведения испытания (применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, температуру растворителя, необходимость встряхивания) должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат. pH. От 6,5 до 7,5. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-1-0004-15) "Ионометрия". Механические включения. Видимые механические включения должны соответствовать требованиям ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах". Невидимые механические включения должны соответствовать требованиям [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-4-2-0006-15) "Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения". Испытания проводят в соответствии с указанными ОФС. Извлекаемый объем (для растворов). Должен быть не менее номинального. Определение проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-4-2-0003-15) "Извлекаемый объем для лекарственных форм для парентерального применения". Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси. Должно быть указано содержание основного компонента, родственных соединений - агрегатов, димеров, модифицированных форм белка и посторонних примесей. Чистота, содержание родственных соединений и посторонних примесей может определяться комплексом взаимодополняющих методов (не менее 3), включающих: электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE электрофорез) в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях; капиллярный электрофорез; изоэлектрофокусирование; высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) и другие методы с доказанной специфичностью, правильностью и прецизионностью. Испытания проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-2-0001-15) "Хроматография", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-2-0005-15) "Высокоэффективная жидкостная хроматография", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0021-15) "Электрофорез", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0022-15) "Капиллярный электрофорез", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-0023-15) "Электрофорез в полиакриламидном геле", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0021-15) "Изоэлектрическое фокусирование", [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-7-2-0022-15) "Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот", [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-7-2-0033-15) "Метод иммуноферментного анализа". Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат. Содержание димеров и высокомолекулярных родственных веществ эритропоэтина в испытуемом образце должно быть не более 2%. Сиаловые кислоты. Не менее 10 молей сиаловых кислот (в пересчете на N-ацетилнейраминовую кислоту) на 1 М эритропоэтина. Испытание проводят в соответствии с методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации. Стерильность. Должен быть стерильным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Стерильность" методом прямого посева или мембранной фильтрации. Аномальная токсичность. Должен быть нетоксичным. Испытание проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-4-0004-15) "Аномальная токсичность". Период наблюдения за животными составляет 7 сут. Пирогенность. Лекарственный препарат должен быть апирогенным. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность". Бактериальные эндотоксины. Содержание должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Бактериальные эндотоксины". Белок. Содержание должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-1-1-0003-15) "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области" и ОФС "Определение белка" или в соответствии с методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации. Вещества, вносимые в препарат. Проводят определение количественного содержания веществ, используемых в качестве стабилизатора например, полисорбаты, испытание которых проводится для лекарственных препаратов, содержащих эритропоэтины, в состав которых входят соединения указанного класса. Используется метод обращенно-фазовой хроматографии, газовой хроматографии, спектрометрический метод или другой валидированный метод с доказанной специфичностью, правильностью и прецизионностью. Методика определения, параметры пригодности системы и нормы определяются типом полисорбата, входящего в состав эритропоэтина и используемым методом испытания. Выбор метода оценки полисорбата должен быть обоснован. Методика должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат. Вода (для лиофилизатов). Предельно допустимое содержание воды и навеску препарата, в которой проводят определение, а также методику определения, указывают в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-3-0002-15) "Определение воды". Однородность дозирования (для лиофилизатов). Должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытание проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-4-2-0008-18) "Однородность дозирования". Специфическая активность. Содержание активного вещества должно составлять не менее 80% и не более 125% от заявленного содержания. Доверительные интервалы (P = 0,95) рассчитанной активности должны быть не ниже 64% и не более 156% от заявленной величины. Определение активности проводят биологическим методом in vivo, оценивая стимуляцию продукции ретикулоцитов у нормоцитемических мышей. Активность препарата сравнивают с активностью фармакопейного стандартного образца эритропоэтина BRP и выражают в международных единицах (МЕ). Испытание проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0017-18) "Определение специфической активности эритропоэтинов". Упаковка и маркировка. В соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-4-1-0007-15) "Лекарственные формы для парентерального применения" и ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств". Транспортирование, хранение. В соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-4-1-0007-15) "Лекарственные формы для парентерального применения" и ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств". В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C, не допускается замораживание. ---