ОФС.1.5.3.0017. Общая фармакопейная статья. Определение состава жирных кислот в маслах жирных растительных и жирах
Актуально на 02.11.2026.
Как цитировать: "ОФС.1.5.3.0017. Общая фармакопейная статья. Определение состава жирных кислот в маслах жирных растительных и жирах". ОФС.1.5.3.0017. https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-5-3-0017
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 15.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Определение состава жирных кислот в маслах жирных растительных и жирах | ОФС.1.5.3.0017 |
| Вводится впервые |
Метод определения состава жирных кислот в маслах жирных растительных и жирах проводят методом газовой хроматографии (ОФС «Газовая хроматография»).
Методика неприменима для масел, содержащих глицериды жирных кислот с эпокси-, гидроэпокси-, гидроперокси-, циклопропиловыми или циклопропениловыми группами, а также для масел, в составе которых большая часть жирных кислот имеет длину цепи менее восьми атомов углерода, или для масел с кислотным числом более 2,0.
Метиловые эфиры жирных кислот могут быть получены следующими способами, если в фармакопейной статье не приведены иные условия:
1. В колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 — 0,15 мл тщательно перемешанного испытуемого образца, добавляют 1 мл метанола и 0,05 — 0,1 мл ацетилхлорида. Смесь аккуратно перемешивают и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч. Избыток метанола отгоняют. К остатку прибавляют 0,2 мл гексана (гептана или другого растворителя с соответствующей полярностью) и перемешивают.
2. В колбу вместимостью 50 мл, снабженную пришлифованным обратным холодильником, помещают 0,1 г тщательно перемешанного испытуемого образца, приливают 10 мл метанола. К полученной смеси прибавляют 0,28 г калия гидроксида и нагревают с обратным холодильником на песчаной бане при температуре 105 — 110 °C в течение 1 часа. Смесь охлаждают до комнатной температуры, приливают по каплям 0,5 мл диметилсульфата, нагревают с обратным холодильником на песчаной бане при температуре 105 — 110 °C в течение 30 мин и приливают еще 0,2 мл диметилсульфата. Из полученного раствора отгоняют метанол до объема 2,5 мл. Смесь охлаждают до комнатной температуры, приливают 20 мл воды, переносят в делительную воронку, добавляют 20 мл гексана (гептана или другого растворителя с соответствующей полярностью) и интенсивно встряхивают. Верхний слой отделяют и фильтруют через беззольный фильтр, содержащий 1 г натрия сульфата безводного.
Раствор сравнения А. Готовят 0,5 г смеси веществ, применяемых для калибровки (калибровочной смеси), состава приведенного в таблицах 1, 2 или 3, в соответствии с указаниями в фармакопейной статье. Если в фармакопейной статье не указан определенный раствор, готовят смесь состава, приведенного в таблице 1. Смесь растворяют в гексане (гептане или другом растворителе с соответствующей полярностью) и доводят объем раствора тем же растворителем до 50 мл.
Раствор сравнения Б. Доводят 1,0 мл раствора сравнения А гептаном до 10 мл.
Раствор сравнения В. Готовят 0,5 г смеси метиловых эфиров жирных кислот, которые по составу соответствуют смеси жирных кислот, указанных в фармакопейной статье на испытуемое вещество. Смесь растворяют в гексане (гептане или другом растворителе с соответствующей полярностью) и доводят объем раствора тем же растворителем до 50 мл. Допускается также использование готовых смесей метиловых эфиров жирных кислот.
Если требуется линейный градиент температуры, температуру колонки увеличивают, например, со скоростью 3 °C/мин от 170 до 230 °C.
Пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если при использовании смеси веществ, используемых для калибровки, приведенных в таблице 1 или таблице 2, выполняются следующие условия:
- разрешение (RS) между пиками метилолеата и метилстеарата на хроматограмме раствора сравнения А должно быть не менее 1,8;
- отношение сигнал/шум (S/N) для пика метилмиристата на хроматограмме раствора сравнения Б должно быть не менее 5;
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику метилстеарата на хроматограмме раствора сравнения А должна быть не менее 30000 теоретических тарелок.
Смесь веществ, применяемых для калибровки (для газовой хроматографии с капиллярной колонкой и системой с делением потока)
| Смесь веществ | Состав (в процентах м/м) |
|---|---|
| Метиллаурат | 5 |
| Метилмиристат | 5 |
| Метилпальмитат | 10 |
| Метилстеарат | 20 |
| Метиларахидат | 40 |
| Метилолеат | 20 |
Смесь веществ, применяемых для калибровки (для газовой хроматографии с капиллярной колонкой и системой с делением потока)
| Смесь веществ | Состав (в процентах м/м) |
|---|---|
| Метилмиристат | 5 |
| Метилпальмитат | 10 |
| Метилстеарат | 15 |
| Метиларахидат | 20 |
| Метилолеат | 20 |
| Метилэйкозеноат | 10 |
| Метилбехенат | 10 |
| Метиллигноцерат | 10 |
Примечание - при выполнении качественного анализа с использованием калибровочных кривых в калибровочную смесь рекомендуется добавлять компонент испытуемого раствора с максимальным числом атомов углерода в цепи.
Хроматографическая система считается пригодной, если при использовании смеси веществ, применяемых для калибровки, приведенных в таблице 3 выполняются следующие условия:
- разрешение (RS) между пиками метилкаприлата и метилдеканоата на хроматограмме раствора сравнения А должно быть не менее 4,0;
- отношение сигнал/шум (S/N) для пика метилкапроата на хроматограмме раствора сравнения Б должно быть не менее 5;
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику метилдеканоата на хроматограмме раствора сравнения А должна быть не менее 15000 теоретических тарелок.
Смесь веществ, применяемых для калибровки (для газовой хроматографии с капиллярной колонкой и системой с делением потока)
| Смесь веществ | Состав (в процентах м/м) |
|---|---|
| Метилкапроат | 10 |
| Метилкаприлат | 10 |
| Метилдеканоат | 20 |
| Метиллаурат | 20 |
| Метилмиристат | 40 |
Примечание - при выполнении качественного анализа с использованием калибровочных кривых в калибровочную смесь рекомендуется добавлять компонент испытуемого раствора с максимальным числом атомов углерода в цепи.
Следует избегать условий хроматографирования, которые могут дать неразделенные пики (наличие компонентов с небольшим различием между временами удерживания, например, линоленовая и арахидоновая кислоты).
Качественный анализ. Идентифицируют пики на хроматограмме раствора сравнения В (изотермические условия хроматографирования или линейный градиент температуры).
При использовании изотермических условий хроматографирования пики могут быть также идентифицированы построением калибровочных кривых с использованием хроматограммы раствора сравнения А и данных таблиц 1, 2 или 3.
На хроматограмме раствора сравнения А измеряют приведенное время удерживания (t'R) каждого пика.
t'R — разница между временем удерживания пика растворителя и временем удерживания несорбирующегося (в условиях определения) вещества.
Строят график линейной зависимости:
Lg (t'R) = f (эквивалент числа атомов углерода в цепи).
Логарифмы t'R ненасыщенных жирных кислот расположены на этой линии в точках, соответствующих не целым значениям «эквивалента числа атомов углерода в цепи». Эквивалент числа атомов углерода в цепи представляет собой длину теоретической цепи насыщенной жирной кислоты, которая должна была иметь такое же t'R, как идентифицируемая жирная кислота. Например, у линолевой кислоты такое же t'R, как у теоретической насыщенной жирной кислоты, имеющей 18,8 атомов углерода.
Идентификацию пиков на хроматограмме испытуемого раствора проводят по прямой линии и уменьшающимся временам удерживания.
Эквиваленты числа атомов углерода в цепи представлены в таблице 4.
Эквиваленты числа атомов углерода в цепи (значения рассчитаны с использованием калибровочных кривых и приведены в качестве примера для колонки с макроголом 20 000)
Количественный анализ. Используют метод внутренней нормализации. Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,05% от суммы площадей всех пиков.
В определенных случаях, например, при наличии жирных кислот с 12 или менее атомами углерода, в фармакопейной статье должен быть указан поправочный коэффициент для преобразования площадей пиков в проценты (м/м).
Содержание олеиновой кислоты представляет собой сумму олеиновой кислоты (18:1 n-9) и цис-вакциновой кислоты (18:1 n-7).
Методика неприменима для масел, содержащих глицериды жирных кислот с эпокси-, гидроэпокси-, гидроперокси-, циклопропиловыми и циклопропениловыми группами или для масел с кислотным числом более 2,0.
Испытуемый раствор. В центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой помещают 0,1 г (точная навеска) испытуемого образца, растворяют в смеси 1 мл гептана (гексана или другом растворителе с соответствующей полярностью) с 1 мл диметилкарбоната, энергично перемешивают и нагревают до температуры 50 +/- 5 °C. Прибавляют к еще теплому раствору 1 мл натрия раствора 1,2% в метаноле и энергично перемешивают в течение 5 мин, прибавляют 3 мл воды и энергично перемешивают в течение 30 с. Смесь центрифугируют 15 мин со скоростью 1500 об/мин. Надосадочную жидкость используют в качестве испытуемого раствора.
Растворы сравнения и анализ данных. Если в фармакопейной статье нет других указаний, поступают, как указано в методике 1.
Методика неприменима для масел, содержащих глицериды жирных кислот с эпокси-, гидроэпокси-, гидроперокси-, альдегидными, кетоновыми, циклопропиловыми и циклопропениловыми группами и сопряженными полиненасыщенными и ацетиленовыми соединениями из-за частичного или полного разрушения этих групп.
Испытуемый раствор. В коническую колбу вместимостью 25 мл помещают 0,1 г испытуемого образца, растворяют в 2 мл натрия гидроксида раствора в метаноле 2% и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Прибавляют через холодильник 2,0 мл бора фторида в метаноле 14% и кипятят в течение 30 мин, прибавляют через холодильник 4,0 мл гептана и кипятят в течение 5 мин. Смесь охлаждают, прибавляют 10,0 мл натрия хлорида насыщенного раствора, встряхивают в течение 15 с и прибавляют такое количество натрия хлорида насыщенного раствора, чтобы верхний слой поднялся к горлу колбы. Отбирают 2,0 мл верхнего слоя, помещают в делительную воронку, промывают тремя порциями воды, по 2 мл каждая, и сушат полученный экстракт над натрия сульфатом безводным.
Растворы сравнения, хроматографическая методика и анализ данных. Если в фармакопейной статье нет других указаний, поступают, как указано в методике 1.