---
title: "\"ОФС.1.2.4.0017.18. Общая фармакопейная статья. Определение специфической активности препаратов эритропоэтина\""
number: "ОФС.1.2.4.0017.18"
issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0017-18"
---

## "ОФС.1.2.4.0017.18. Общая фармакопейная статья. Определение специфической активности препаратов эритропоэтина"

# "ОФС.1.2.4.0017.18. Общая фармакопейная статья. Определение специфической активности препаратов эритропоэтина"

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)

("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том I")

> [!IMPORTANT]
> В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018.
> Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 13.03.2019 и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи.


<a id="p100001"></a>МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

<div align="center">

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**

</div>



| <a id="p100003"></a>Определение специфической активности препаратов эритропоэтина | <a id="p100004"></a>ОФС.1.2.4.0017.18<br>Вводится впервые |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья определяет основные требования к методике определения специфической активности препаратов рекомбинантного эритропоэтина с использованием нормоцитемических мышей и распространяется на субстанции и лекарственные формы эритропоэтина.

<div align="center">

<a id="p100006"></a>ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

</div>


<a id="p100007"></a>Биологический метод определения специфической активности в условиях in vivo основан на способности эритропоэтина стимулировать эритропоэз у нормоцитемических мышей. Активность препарата сравнивают с активностью стандартного образца (СО) эритропоэтина и выражают в международных единицах (МЕ). Рассчитанная специфическая активность должна быть от 80 до 125% от заявленной активности, доверительный интервал (P = 0,95) в диапазоне от 64 до 156%. Специфическую активность и доверительный интервал рассчитывают методом параллельных линий с помощью программного обеспечения.
<a id="p100008"></a>В качестве СО эритропоэтина может быть использован международный стандартный образец для количественного определения специфической активности, стандартный образец Европейской Фармакопеи, а также СО, откалиброванный в Международных единицах (МЕ).

<div align="center">

<a id="p100009"></a>Подготовка к испытаниям

<a id="p100010"></a>Животные

</div>


<a id="p100011"></a>Испытания проводят с использованием мышей линий B6D2F1, F1(CBA*C57BL) или линии Balb/c весом от 18 - 24 г. Использование беспородных мышей не позволяет получить необходимую точность результатов испытания.
<a id="p100012"></a>Мышей предварительно взвешивают, если совокупность экспериментальных объектов однородна (разница не более, чем +/- 0,5 г), их распределение в группы проводят случайным образом, животных распределяют в 6 клеток, по 8 особей в каждую. Если разница более, чем +/- 0,5 г, но не более +/- 2 г, животных вначале распределяют на группы, с колебаниями массы тела не более +/- 0,5 г, помещая каждую группу в отдельную клетку. Затем из каждой весовой группы по одному животному помещают в одну из 6 клеток (по количеству вводимых растворов), пока в клетке не будет 8 особей. Животным в каждой из 6 клеток наносят определенную метку (пикриновой кислотой или выстриганием шерсти) в зависимости от дозы (табл. 1).

<div align="right">

<a id="p100013"></a>Таблица 1

</div>


<div align="center">

<a id="p100014"></a>*Пример* нанесения метки (идентификации) животных

</div>



<table>
<colgroup><col width="24%"><col width="19%"><col width="25%"><col width="31%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100015"></a>Наименование образца</td><td><a id="p100016"></a>МЕ/мл</td><td><a id="p100017"></a>Количество мышей</td><td><a id="p100018"></a>Место нанесения метки</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100019"></a>Стандартный образец</td><td><a id="p100020"></a>80</td><td><a id="p100021"></a>8</td><td><a id="p100022"></a>Хвост</td></tr>
<tr><td><a id="p100023"></a>40</td><td><a id="p100024"></a>8</td><td><a id="p100025"></a>Спина</td></tr>
<tr><td><a id="p100026"></a>20</td><td><a id="p100027"></a>8</td><td><a id="p100028"></a>Голова</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100029"></a>Испытуемый образец</td><td><a id="p100030"></a>80</td><td><a id="p100031"></a>8</td><td><a id="p100032"></a>Задняя нога</td></tr>
<tr><td><a id="p100033"></a>40</td><td><a id="p100034"></a>8</td><td><a id="p100035"></a>Бок</td></tr>
<tr><td><a id="p100036"></a>20</td><td><a id="p100037"></a>8</td><td><a id="p100038"></a>Передняя нога</td></tr>
</table>


<a id="p100039"></a>Примечания:
<a id="p100040"></a>Приготовление разведений стандартных и испытуемых образцов проводят в соответствии со следующей процедурой или в соответствии с указаниями, приведенными в нормативной документации. Готовят разведения стандартных и испытуемых образцов 80, 40 и 20 МЕ/мл.
<a id="p100041"></a>Испытуемый раствор (a). Испытуемый препарат разводят фосфатно-альбуминовым забуференным физиологическим раствором pH 7,2 (1) до концентрации 80 МЕ/мл (ориентируясь на данные, указанные в сертификате анализа).
<a id="p100042"></a>Испытуемый раствор (b). Смешивают равные объемы испытуемого раствора (a) и фосфатно-альбуминового забуференного физиологического раствора pH 7,2 (1) до получения концентрации 40 МЕ/мл.
<a id="p100043"></a>Испытуемый раствор (c). Смешивают равные объемы испытуемого раствора (b) и фосфатно-альбуминового забуференного физиологического раствора pH 7,2 (1) до получения концентрации 20 МЕ/мл.
<a id="p100044"></a>Стандартный раствор (a). Стандартный образец эритропоэтина восстанавливают в соответствии с инструкцией по применению, разводят в фосфатно-альбуминовом забуференном физиологическом растворе pH 7,2 (1) до получения концентрации 80 МЕ/мл.
<a id="p100045"></a>Стандартный раствор (b). Смешивают равные объемы стандартного раствора (a) и фосфатно-альбуминового забуференного физиологического раствора pH 7,2 (1) до получения концентрации 40 МЕ/мл.
<a id="p100046"></a>Стандартный раствор (c). Смешивают равные объемы стандартного раствора (b) и фосфатно-альбуминового забуференного физиологического раствора pH 7,2 (1) до получения концентрации 20 МЕ/мл.

<div align="center">

<a id="p100047"></a>Проведение испытания

</div>


<a id="p100048"></a>Каждому животному в одной из 6 клеток подкожно вводят по 0,5 мл одной дозы (одно из разведений испытуемого препарата или стандартного образца). Затем животных распределяют в 8 новых клеток по одному животному с определенной дозой. Таким образом, в каждой клетке должны содержаться мыши, получившие все шесть растворов (3 испытуемых и 3 стандартных).
<a id="p100049"></a>Отбор крови у лабораторных животных
<a id="p100050"></a>Через 96 ч после введения препаратов у животных из ретроорбитального синуса отбирают образцы крови (200 - 300 мкл) в пробирки с этилендиаминтетрауксусной кислотой дикалиевой или трикалиевой соли и определяют количество ретикулоцитов методом проточной цитофлуориметрии.
<a id="p100051"></a>Учет результатов испытания с помощью проточного цитофлуориметра
<a id="p100052"></a>Образцы крови окрашивают флуоресцентным красителем, например, 5 мкМ раствором акридинового оранжевого, в соотношении 1:500 (1000 мкл 5 мкМ раствора акридинового оранжевого и 2 мкл отобранной крови). Пробирки помещают в проточный цитофлуориметр и проводят подсчет ретикулоцитов.
<a id="p100053"></a>Примечания:
<a id="p100054"></a>Приготовление 0,001 М раствора акридинового оранжевого (флуоресцентный краситель). 3,7 мг акридинового оранжевого вносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в 0,9% растворе натрия хлорида, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Раствор хранят в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C в течение 6 мес.
<a id="p100055"></a>Приготовление 5 мкМ раствора акридинового оранжевого (флуоресцентный краситель). 0,5 мл 0,001 М раствора акридинового оранжевого вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят до метки 0,9% раствором натрия хлорида и перемешивают. Используют только свежеприготовленный раствор. Раствор используют свежеприготовленным, непосредственно перед использованием.

<a id="p100056"></a>Процедура разведения образцов, используемые дозы и флуоресцентный краситель могут быть изменены, о чем должно быть указано в нормативной документации.



<a id="p100057"></a>

---