---
title: "\"ОФС.1.2.4.0011.15. Общая фармакопейная статья. Определение эффективности антимикробных консервантов\""
number: "ОФС.1.2.4.0011.15"
issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0011-15"
---

## "ОФС.1.2.4.0011.15. Общая фармакопейная статья. Определение эффективности антимикробных консервантов"

# "ОФС.1.2.4.0011.15. Общая фармакопейная статья. Определение эффективности антимикробных консервантов"

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)

("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том I")

> [!IMPORTANT]
> В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018.
> Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 10.02.2021 и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи.


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Определение эффективности антимикробных консервантов | <a id="p100004"></a>ОФС.1.2.4.0011.15 |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод определения эффективности антимикробных консервантов, входящих в состав лекарственных препаратов (ЛП).
<a id="p100006"></a>Антимикробные консерванты - это вещества органической или неорганической природы, обладающие антимикробным действием, которые добавляют в ЛП для предотвращения роста и развития микроорганизмов, которые могут попасть в них в процессе производства или при многократном применении. Эффективная концентрация консерванта в готовом ЛП должна быть ниже дозы, токсичной для человека.
<a id="p100007"></a>Эффективность антимикробных консервантов - это способность вещества ингибировать рост микроорганизмов в ЛП на протяжении срока годности. Испытание эффективности консервантов - это процедура, состоящая из искусственной контаминации образца ЛП суспензиями определенных тест-микроорганизмов, инкубации контаминированных образцов при определенной температуре, отбора проб через указанные интервалы времени и подсчете жизнеспособных клеток микроорганизмов в 1 г (мл) ЛП на протяжении периода испытания, расчетов и оценке полученных результатов.
<a id="p100008"></a>ЛП, в состав которых входят консерванты, разделены на три категории, представленные в табл. 1.

<a id="p100009"></a>Таблица 1

<a id="p100010"></a>Категории ЛП, содержащие консерванты


| <a id="p100011"></a>Категория | <a id="p100012"></a>Лекарственные препараты |
| --- | --- |
| <a id="p100013"></a>1 | <a id="p100014"></a>Стерильные ЛП (парентеральные; препараты для местного применения, офтальмологические ЛП) |
| <a id="p100015"></a>2 | <a id="p100016"></a>Нестерильные ЛП, применяемые местно, для введения в полость носа, в том числе и на слизистые оболочки |
| <a id="p100017"></a>3 | <a id="p100018"></a>ЛП для приема внутрь, включая антацидные, водорастворимые или приготовленные на водной основе |


<a id="p100019"></a>Недопустимо вносить консерванты в ЛП для внутриполостных, внутрисердечных, внутриглазных инъекций, имеющих доступ к спинномозговой жидкости, а также при разовой дозе, превышающей 15 мл.

## 1. <a id="p100020"></a>Используемые тест-штаммы микроорганизмов и работа с ними

<a id="p100021"></a>Эффективность консервантов определяют в отношении определенных видов бактерий и дрожжевых и плесневых грибов:
<a id="p100022"></a>Escherichia coli ГКМП 240533, ATCC 25922, ATCC 8739, NCTC 12923, NCTC 12241, DSM 1103, CIP 53.126, NCIMB 8545,
<a id="p100023"></a>Pseudomonas aeruginosa ГКМП 190155, ATCC 9027, NCTC 12924, CIP 82.118, NCIMB 8626,
<a id="p100024"></a>Staphylococcus aureus ГКМП 201108, ATCC 6538, NCTC 10788, NCIMB 9518, CIP 4.83,
<a id="p100025"></a>Candida albicans ГКМП 303903, ГКМП 303901, ATCC 10231, РКПГY 401/NCTC 885-653, NCPF 3179, IP 48.72,
<a id="p100026"></a>Aspergillus brasiliensis BKM F-3882, ATCC 16404, BKM F-1119, ATCC 9642, РКПГF 106, NCPF 2275, IMI 149007, IP1431.83.
<a id="p100027"></a>Примечания.
1. <a id="p100028"></a>Кроме перечисленных тест-штаммов можно использовать и другие микроорганизмы, которые должны быть типичными по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохимическим свойствам.
2. <a id="p100029"></a>Набор тест-штаммов микроорганизмов может быть уменьшен или увеличен в зависимости от способа применения или состава испытуемого ЛП. Например, для испытания лекарственных препаратов для приема внутрь, содержащих высокие концентрации сахара, можно использовать Zygosaccharomyces rouxii (NCYC 381; IP 2021.92), для препаратов, в состав которых входит бензалкония хлорид, целесообразно включать Burkholderia cepacia (ATCC 25416, ATCC 177759) и др.

<a id="p100030"></a>Все тест-штаммы микроорганизмов, полученные из Государственных коллекций с сертификатом производителя в ампулах, на дисках или в другом виде следует восстанавливать способами, описанными в прилагаемых к тест-штаммам инструкциях или в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/gf-xiv-minzdrav-rossii-ministerstvo-29) "Микробиологическая чистота". Культуры бактерий и грибов пересевают, делая не более 5 пассажей. Условия культивирования тест-штаммов для приготовления инокулята представлены в табл. 2. Используемые питательные среды представлены в [ОФС](https://bukva.ai/docs/gf-xiv-minzdrav-rossii-ministerstvo-29) "Микробиологическая чистота".

<a id="p100031"></a>Таблица 2

<a id="p100032"></a>Условия культивирования тест-микроорганизмов
для приготовления инокулята


<table>
<colgroup><col width="30%"><col width="34%"><col width="20%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100033"></a>Тест-штамм</td><td rowspan="2"><a id="p100034"></a>Питательная среда</td><td colspan="2"><a id="p100035"></a>Условия инкубации посевов</td></tr>
<tr><td><a id="p100036"></a>температура</td><td><a id="p100037"></a>время</td></tr>
<tr><td><a id="p100038"></a><a id="p100039"></a><a id="p100040"></a>- Escherichia coli<br>- Pseudomonas aeruginosa<br>- Staphylococcus aureus</td><td><a id="p100041"></a><a id="p100042"></a>Соево-казеиновый агар или среда N 1<br>Соево-казеиновый бульон или среда N 8</td><td><a id="p100043"></a>32,5 +/- 2,5 °C</td><td><a id="p100044"></a>18 - 24 ч</td></tr>
<tr><td><a id="p100045"></a>- Candida albicans</td><td><a id="p100046"></a><a id="p100047"></a>Агар Сабуро с глюкозой или среда N 2,<br>жидкая среда Сабуро или соево-казеиновый бульон</td><td><a id="p100048"></a>22,5 +/- 2,5 °C</td><td><a id="p100049"></a>48 ч</td></tr>
<tr><td><a id="p100050"></a>- Aspergillus brasiliensis</td><td><a id="p100051"></a>Агар Сабуро с глюкозой или среда N 2</td><td><a id="p100052"></a>22,5 +/- 2,5 °C</td><td><a id="p100053"></a>6 - 10 сут</td></tr>
<tr><td colspan="4"><a id="p100054"></a>Примечание. Допускается использование альтернативных жидких и агаризованных питательных сред отечественного и зарубежного производства.</td></tr>
</table>


<a id="p100055"></a>Контроль ростовых свойств используемых питательных сред проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/gf-xiv-minzdrav-rossii-ministerstvo-29) "Микробиологическая чистота".
<a id="p100056"></a>При приготовлении инокулята суточные культуры тест-штаммов бактерий и C.albicans смывают с поверхности скошенного агара стерильным 0,9% раствором натрия хлорида. Концентрацию клеток бактерий доводят до 109 КОЕ/мл, а C.albicans - до 107 КОЕ/мл, используя стандартный образец мутности или инструментальные методы, в том числе турбидиметрический. В случае использования жидких питательных сред для культивирования тест-штаммов, клетки бактерий и C.albicans выделяют центрифугированием, промывают и ресуспендируют стерильным 0,9% раствором натрия хлорида до концентрации 1·107 - 1·108 КОЕ/мл.
<a id="p100057"></a>Для смыва конидий A.brasiliensis используют стерильный 0,9% раствор натрия хлорида, содержащий 0,05% раствор твина-80. Количество конидий A.brasiliensis в 1 мл смыва определяют с помощью камеры Горяева или чашечным агаровым методом. Полученную взвесь разводят до концентрации 107 конидий в 1 мл.
<a id="p100058"></a>Стандартизованные суспензии всех тест-штаммов микроорганизмов разводят до концентрации 107 - 108 КОЕ/мл.


## 2. <a id="p100059"></a>Методика испытания


<a id="p100060"></a>Для определения эффективности консервантов используют готовые ЛП в неповрежденной упаковке.
<a id="p100061"></a>В каждый стерильный флакон с исследуемым препаратом вносят суспензию, содержащую один из тест-штаммов микроорганизмов, обеспечивая концентрацию клеток 105 - 106 КОЕ в 1 мл или 1 г ЛП, и перемешивают. Объем инокулята должен составлять 0,5 - 1% от объема образца.
<a id="p100062"></a>Образцы ЛП на твердой мазевой основе нагревают до температуры (42,5 +/- 2,5) °C. Смешивают инокулят каждой стандартизованной микробной суспензии с образцом ЛП в течение не менее 1 мин до достижения гомогенной эмульсии. Для улучшения смешивания можно добавить определенное (валидированное) количество стерильного поверхностно-активного вещества, например, твина-80, если оно не влияет на жизнеспособность микроорганизмов или на эффективность консерванта.
<a id="p100063"></a>Фактическую исходную концентрацию бактерий и грибов в контаминированных образцах определяют сразу после контаминации. Для этого чашечным агаровым методом делают посев на соответствующие питательные среды [(табл. 2)](#p100032), используя подходящие разведения для получения на чашке от 30 до 300 колоний бактерий и от 10 до 100 колоний грибов. Для этой цели также можно применять метод мембранной фильтрации (при условии растворимости ЛП в водных растворителях или изопропилмиристате). Контаминированные образцы ЛП выдерживают при температуре (22,5 +/- 2,5) °C в защищенном от света месте в течение определенного времени. Через 7, 14, 28 сут после инокуляции образцов препаратов 1 категории и через 14, 28 сут препаратов 2 и 3 категорий определяют количество жизнеспособных микроорганизмов в 1 мл образца, делая высев на чашки Петри глубинным или модифицированным глубинным методами в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/gf-xiv-minzdrav-rossii-ministerstvo-29) "Микробиологическая чистота".
<a id="p100064"></a>Антимикробное действие ЛП устраняют одним из способов: разведением, мембранной фильтрацией или с помощью инактиватора, который вносят в чашки с питательной средой или в соответствующее разведение лекарственного средства перед посевом. Используемые инактиваторы, некоторые из которых указаны в [ОФС](https://bukva.ai/docs/gf-xiv-minzdrav-rossii-ministerstvo-29) "Микробиологическая чистота", не должны влиять на жизнеспособность микроорганизмов.


## 3. <a id="p100065"></a>Результаты испытания и их интерпретация


<a id="p100066"></a>Чашечным агаровым методом определяют количество КОЕ/мл для каждого тест-штамма через указанные выше сроки инкубации контаминированного образца ЛП. Изменение количества микробных клеток по сравнению с исходной концентрацией в 1 мл выражают в десятичных логарифмах (lg). При оценке эффективности антимикробного действия консервантов увеличение КОЕ/мл не фиксируется, если последующее измерение превышает предыдущее менее, чем 0,5lg КОЕ.


## 4. <a id="p100067"></a>Требования к качеству


<a id="p100068"></a>Консерванты считают эффективными, если наблюдают уменьшение количества клеток бактерий в соответствии с критериями, описанными в табл. 3. Количество клеток дрожжевых и плесневых грибов не должно увеличиваться на протяжении всего срока исследования.

<a id="p100069"></a>Таблица 3

<a id="p100070"></a>Критерии оценки эффективности антимикробных консервантов ЛП


<table>
<colgroup><col width="13%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="17%"><col width="13%"><col width="14%"><col width="14%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100071"></a>Категория ЛП</td><td colspan="3"><a id="p100072"></a>Уменьшение количества клеток бактерий, lg</td><td colspan="3"><a id="p100073"></a>Уменьшение количества клеток дрожжевых и плесневых грибов, lg</td></tr>
<tr><td><a id="p100074"></a>7 сут</td><td><a id="p100075"></a>14 сут</td><td><a id="p100076"></a>28 сут</td><td><a id="p100077"></a>7 сут</td><td><a id="p100078"></a>14 сут</td><td><a id="p100079"></a>28 сут</td></tr>
<tr><td><a id="p100080"></a>1</td><td><a id="p100081"></a>Не менее 1</td><td><a id="p100082"></a>Не менее 3</td><td rowspan="3"><a id="p100083"></a>Не должно быть увеличения <a href="#p100095">&lt;*&gt;</a></td><td colspan="3"><a id="p100084"></a>Не должно быть увеличения <a href="#p100095">&lt;*&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100085"></a>2</td><td><a id="p100086"></a>-</td><td><a id="p100087"></a>Не менее 2</td><td><a id="p100088"></a>-</td><td colspan="2"><a id="p100089"></a>Не должно быть увеличения <a href="#p100095">&lt;*&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100090"></a>3</td><td><a id="p100091"></a>-</td><td><a id="p100092"></a>Не менее 1</td><td><a id="p100093"></a>-</td><td colspan="2"><a id="p100094"></a>Не должно быть увеличения <a href="#p100095">&lt;*&gt;</a></td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100095"></a>Примечание. &lt;*&gt; Не должно быть увеличения количества клеток бактерий, дрожжевых и плесневых грибов по сравнению с предыдущим результатом.</td></tr>
</table>




<a id="p100096"></a>

---