--- title: "\"ОФС.1.2.4.0007.15. Общая фармакопейная статья. Испытание на гистамин\"" number: "ОФС.1.2.4.0007.15" issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации" status: утратил силу canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0007-15" --- ## "ОФС.1.2.4.0007.15. Общая фармакопейная статья. Испытание на гистамин" # "ОФС.1.2.4.0007.15. Общая фармакопейная статья. Испытание на гистамин" (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749) ("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том I") > [!WARNING] > Документ утратил силу с 30.04.2025 в связи с введением в действие [ОФС.1.1.1.0019](https://bukva.ai/docs/ofs-1-1-1-0019), утв. Приказом Минздрава России от 11.04.2025 N 188. > В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. > Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 10.02.2021 и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. > [!NOTE] > ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ ```mermaid flowchart LR n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье" n1["Государственная фармакопея Российской Федерации. XII..."]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/gf-xii" "Государственная фармакопея Российской Федерации. XII издание. Часть 1" n2["ОФС.1.2.4.0007.15"]:::rst n3["ОФС.1.2.4.0007.15 (от 31.10.2018 N 749)"]:::rst click n3 "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0007-15" "ОФС.1.2.4.0007.15. Общая фармакопейная статья. Испытание на гистамин (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)" n4["ОФС.1.1.1.0019"]:::doc click n4 "https://bukva.ai/docs/ofs-1-1-1-0019" "ОФС.1.1.1.0019. Общая фармакопейная статья. Испытание на гистамин (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 11.04.2025 N 188)" n3 --> n4 n2 --> n3 n1 --> n2 n0 --> n2 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000; ``` **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Испытание на гистамин | ОФС.1.2.4.0007.15 | | --- | --- | Настоящая статья распространяется на определение содержания гистамина in vitro в лекарственных средствах для парентерального применения. ## Подготовка изолированного органа В опыт берут морскую свинку-самца массой тела 200 - 350 г. За 24 ч до эксперимента животное лишают пищи, но оставляют свободный доступ к воде. После эвтаназии у свинки вскрывают брюшную полость от лонного сочленения до грудины и находят слепую кишку. Место ее перехода в ободочную кишку является ориентиром при поиске подвздошной кишки, которая отходит от слепой за 1 - 2 см до этого участка. Для того чтобы извлечь подвздошную кишку, тупым зажимом или пинцетом плотно захватывают ее основание и отрезают ножницами. Отсеченный конец кишки слегка приподнимают, а затем без натяжения и, не перехватывая ее, отсекают ткань брыжейки маленькими разрезами при помощи тупоконечных ножниц. Остатки брыжейки удалять не следует. Все манипуляции с подвздошной кишкой следует проводить осторожно, не растягивая ее. Для эксперимента пригоден дистальный участок подвздошной кишки, исключая 10 - 15 см, ближайшие к слепой кишке. Подвздошную кишку нарезают на равные части (около 6 см каждая) и помещают в чашку Петри с гипокальциевым раствором Тироде [(примечание 1)](#p100040). Этим раствором осторожно промывают полученные отрезки с помощью шприца или резиновой груши с пастеровской пипеткой с затупленным концом до полного удаления содержимого кишечника. Промытые отрезки подвздошной кишки помещают в чистый гипокальциевый раствор Тироде. Они могут быть использованы сразу или храниться в течение 24 ч при температуре от 2 °C до 4 °C [(примечание 2)](#p100069). Непосредственно перед экспериментом промытый отрезок кишки разрезают до длины, требуемой условиями эксперимента (10 мм при использовании электронного датчика или 20 мм при использовании механического рычага и кимографа). ## Приготовление растворов сравнения и разведений испытуемого образца ### 1. Растворы сравнения В качестве растворов сравнения используют растворы гистамина дигидрохлорида ч. или ч.д.а. в трех концентрациях: раствор 1 (1,30·10-6 г/мл); раствор 2 (2,5·10-6 г/мл) и раствор 3 (5,00·10-6 г/мл), вызывающие 50, 75 и 100% сокращение кишки соответственно. В качестве растворителя используют 0,9% раствор натрия хлорида. Объем введения растворов сравнения составляет 1/100 от объема ванночки. ### 2. Разведение испытуемого образца Испытанию подвергают неразведенный испытуемый образец, когда максимально допустимая нормативной документацией концентрация гистамина в неразведенном препарате находится в диапазоне от 1,30·10-6 г/мл до 2,50·10-6 г/мл в пересчете на гистамина дигидрохлорид. Объем введения испытуемого образца должен составлять 1/100 от объема ванночки. Если значение максимально допустимой концентрации гистамина в пересчете на гистамина дигидрохлорид в неразведенном испытуемом образце, меньше указанного диапазона или близко к его нижнему пределу, допустимо увеличение объема введения неразведенного испытуемого образца до 1/20 от объема ванночки. Если максимально допустимая концентрация гистамина в пересчете на гистамина дигидрохлорид в неразведенном испытуемом образце находится выше указанного диапазона, испытуемый образец разводят 0,9% раствором натрия хлорида до предполагаемой концентрации гистамина дигидрохлорида 2,50·10-6 г/мл (объем введения 1/100 от объема ванночки). ## Регистрирующая система Для регистрации сокращений изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки в изотонических условиях в ответ на введение растворов сравнения и испытуемого образца используют регистрирующую систему, состоящую из термостатируемой ванночки с гипокальциевым раствором Тироде при температуре 34 - 36 °C, а также электронного датчика с регистрирующим устройством или механического рычага с кимографом. Ванночку аэрируют карбогеном (95% O2 и 5% CO2) или воздухом. Нагрузка обычно составляет 500 - 800 мг. В случае использования механического рычага для вычисления нагрузки следует применять правило равновесия: сила x плечо силы = нагрузка x плечо нагрузки. ## Проведение опыта Изолированный отрезок подвздошной кишки помещают в ванночку и прикрепляют к регистрирующей системе с помощью лигатуры по диагонали за противоположные концы: один - к крючку на дне ванночки, а другой - к датчику или рычагу. Прикладывают к отрезку нагрузку и оставляют его в покое на 30 мин. За это время необходимо не менее 3 раз сменить в ванночке гипокальциевый раствор Тироде. ### 1. Адаптация изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки к субмаксимальной дозе гистамина В термостатируемую ванночку вводят раствор 3 в объеме, равном 1/100 от ее емкости. Через 30 с (время экспозиции) ванночку промывают тройным объемом гипокальциевого раствора Тироде. После первого отмывания проводят второе таким же объемом раствора. Не менее чем через 4 мин после первого введения снова повторяют цикл "введение-экспозиция-два отмывания". Эти циклы повторяют до тех пор, пока не получат не менее двух одинаковых пиков. Их высоту принимают за 100% [(примечание 3)](#p100070). Временные интервалы между введениями испытуемого вещества и между двумя отмываниями должны быть постоянными. ### 2. Испытание испытуемого образца на гистамин #### 2.0 Предварительное испытание После достижения постоянной величины ответа отрезка кишки на введение раствора 3 проводят испытание испытуемого образца на гистамин. Для этого с интервалом не менее 4 мин однократно в случайном порядке вводят растворы 1 и 3, и неразведенный испытуемый образец. Циклы "введение-экспозиция-два отмывания" такие же, как и при проведении адаптации органа к субмаксимальной дозе. В случае, если пик, полученный в ответ на введение испытуемого образца, по высоте не меньше, чем пик раствора 1, проводят количественное определение содержания гистамина в испытуемом образце (см. [п. 2.1](#p100029)). Если пик, полученный в ответ на введение испытуемого образца, меньше пика раствора 1 или вообще отсутствует, проводят контрольное испытание (см. [п. 2.2](#p100032)). #### 2.1 Количественное испытание испытуемого образца на гистамин В случайном порядке поочередно вводят растворы 1 и 3 (1/100 от объема ванночки), и разведенный или неразведенный испытуемый образец (тот же объем введения, что и при предварительном испытании) до получения не менее трех пиков в ответ на введение каждого раствора. Находят среднее значение ответа отрезка кишки на каждый раствор. С помощью регрессионного анализа вычисляют параметры линейной зависимости среднего ответа кишки на введение растворов сравнения от логарифма их концентрации. Затем, подставляя полученные значения этих параметров в уравнение регрессии, вычисляют концентрацию гистамина в том разведении испытуемого образца, которому соответствует средняя высота его пика, и исходя из этого, рассчитывают содержание гистамина в неразведенном испытуемом образце. Испытуемый образец считают прошедшим испытание, если найденное содержание гистамина не превышает максимально допустимое, указанное в нормативной документации (коэффициент пересчета гистамина дигидрохлорида на гистамин-основание равен 0,6038). #### 2.2 Контрольное испытание Схема проведения контрольного испытания такая же, как и при количественном определении содержания гистамина в испытуемом образце, только вместо испытуемого образца используют раствор 2 (1/100 от объема ванночки). Если средняя высота его пика соответствует вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном растворе (2,50·10-6 г/мл), то результаты опыта следует признать достоверными. Результаты опыта следует признать недостоверными в каждом из следующих случаев: 1. Если средняя высота пика раствора 2 не соответствует вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном растворе (2,50·10-6 г/мл). 2. Если при количественном определении содержания гистамина в испытуемом образце отсутствует воспроизводимость ответов отрезка кишки на введение испытуемого образца. 3. Если в процессе эксперимента наблюдается значительное снижение высоты пиков. В каждом из этих 3 случаев следует провести испытание испытуемого образца на вещества депрессорного действия в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0008-18) "Испытание на депрессорные вещества". Примечания | 1. Гипокальциевый раствор Тироде. | | | --- | --- | | Состав: | | | $\cdot$ Натрия хлорид | 80,00 г; | | $\cdot$ Натрия гидрокарбонат | 10,00 г; | | $\cdot$ D-глюкоза | 11,00 г; | | $\cdot$ Калия хлорид | 2,00 г; | | $\cdot$ Кальция хлорид дигидрат | 1,30 г; | | $\cdot$ Магния хлорид гексагидрат | 2,10 г; | | $\cdot$ Натрия дигидрофосфат моногидрат | 0,58 г; | | $\cdot$ Вода очищенная | до 10 л. | Приготовление В мерном цилиндре вместимостью 1 л растворяют в воде очищенной навески натрия хлорида, натрия гидрокарбоната и D-глюкозы в любом порядке. Доводят объем раствора тем же растворителем до метки, перемешивают и переливают содержимое цилиндра в 10-литровую стеклянную емкость с притертой пробкой или полиэтиленовый сосуд того же объема с завинчивающейся крышкой. Таким же образом, но по отдельности, каждую из оставшихся навесок растворяют в 1 л воды очищенной и по очереди переносят в тот же 10-литровый сосуд, строго придерживаясь следующего порядка: 1) калия хлорид, 2) кальция хлорид, 3) магния хлорид, 4) натрия дигидрофосфат. Затем доливают воду очищенную до отметки 10 л и вновь тщательно перемешивают. Полученный раствор может храниться при температуре от 3 °C до 5 °C не более 24 ч. Помутнение недопустимо. Помутневший раствор следует вылить, тщательно промыть сосуд в проточной воде и прополоскать водой очищенной. Поверхностно активные моющие средства применять нельзя. В качестве дополнительной меры по предупреждению спонтанной активности изолированного органа, в состав раствора можно добавить атропина сульфат в концентрации 0,5 мг/л или использовать растворы, указанные в Европейской фармакопее (2.6.10. HISTAMINE). 2. Сосуд, в котором находятся отрезки подвздошной кишки при хранении, плотно не закрывают, а затягивают двойным слоем марли, чтобы обеспечить доступ воздуха. Перед использованием в опыте отрезки следует подготовить. Для этого сосуд в течение 10 мин держат при комнатной температуре, а затем в течение 20 мин при температуре 34 - 36 °C в термостате. После нагревания из отрезка следует удалить слизь. Это достигается легкими поглаживающими движениями в продольном направлении. 3. Струя вводимого раствора должна быть направлена не прямо на изолированный отрезок кишки, а в сторону стенки ванночки, причем направление струи не должно меняться. Скорость введения должна быть максимально высокой и постоянной. Регистрацию сокращений проводят непрерывно (скорость ленты 2 мм/мин). В случае использования механического рычага и кимографа писчик во время отмывания можно отводить и прекращать запись. ---