--- title: "\"ОФС.1.2.3.0020.15. Общая фармакопейная статья. Спектрофотометрическое определение фосфора\"" number: "ОФС.1.2.3.0020.15" issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации" status: утратил силу canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-3-0020-15" --- ## "ОФС.1.2.3.0020.15. Общая фармакопейная статья. Спектрофотометрическое определение фосфора" # "ОФС.1.2.3.0020.15. Общая фармакопейная статья. Спектрофотометрическое определение фосфора" (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749) ("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том I") > [!WARNING] > Документ утратил силу с 01.09.2023 в связи с введением в действие [ОФС.1.2.3.0020](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-3-0020), утв. Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377. > В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. > Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 13.03.2019. > [!NOTE] > ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ ```mermaid flowchart LR n0["ОФС.1.2.3.0020.15"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-3-0020-15" "ОФС.1.2.3.0020.15. Общая фармакопейная статья. Спектрофотометрическое определение фосфора (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)" n1["ОФС.1.2.3.0020"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-3-0020" "ОФС.1.2.3.0020. Общая фармакопейная статья. Спектрофотометрическое определение фосфора (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000; ```
**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ | Спектрофотометрическое определение фосфора | ОФС.1.2.3.0020.15
Вводится впервые | | --- | --- | Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод спектрофотометрического определения фосфора после окислительного разложения, в результате которого фосфор переводится в фосфат-ионы, образующие с молибденовой кислотой окрашенные соединения. Выбор метода спектрофотометрического определения фосфора и способа минерализации связан с составом, свойствами лекарственного средства и количеством содержащегося в нем фосфора. Минерализацию осуществляют методами: 1) сжигания в атмосфере кислорода; 2) сжигания с окислительными смесями концентрированных кислот; 3) сухой минерализацией - сплавлением с твердыми окислителями. В ряде случаев (при определении фосфора фосфолипидов, нуклеиновых кислот и других соединений) до минерализации проводят выделение испытуемого вещества. Определение фосфора нуклеиновых кислот по Спирину проводят спектрофотометрическим методом с определением оптической плотности при двух значениях длин волн 270 и 290 нм в ультрафиолетовой области спектра. ## Способы минерализации ### Метод 1. Сжигание в колбе с кислородом Испытание проводят в соответствии с [ОФС](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-3-0010-15) "Метод сжигания в колбе с кислородом". ### Метод 2. Сжигание с окислительными смесями концентрированных кислот Методика 1 (для препаратов из животного и растительного сырья). Точную навеску (или точный объем) препарата, указанную в фармакопейной статье, содержащую 0,2 - 0,3 мг фосфора, помещают в колбу Кьельдаля; прибавляют 3 мл серной кислоты концентрированной и 3 мл азотной кислоты концентрированной (или 3 мл хлорной кислоты), перемешивают. Колбу закрывают стеклянной воронкой и осторожно нагревают при 50 °C, постепенно усиливая нагрев до температуры 200 - 300 °C. Через 10 мин после начала нагревания прибавляют по каплям 1 мл азотной кислоты концентрированной; добавление кислоты по 1 мл повторяют каждые 5 мин до получения раствора слабо-желтого цвета. К охлажденному раствору осторожно небольшими порциями прибавляют 20 мл воды и кипятят еще 30 мин. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольную пробу. Методика 2 (преимущественно для витаминных препаратов с минералами). Точную навеску препарата, эквивалентную содержанию фосфора 100 мг или указанному в фармакопейной статье, помещают в колбу Кьельдаля или высокую термостойкую пробирку, прибавляют 25 мл азотной кислоты концентрированной, осторожно нагревают в течение 30 мин на газовой горелке, электрическом колбонагревателе или плитке, прибавляют 15 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и продолжают нагревание до исчезновения бурых паров. ### Метод 3. Сухая минерализация Методика 3 (для витаминных препаратов с минералами). Точную навеску предварительно подготовленного как описано в фармакопейной статье препарата помещают в платиновый или кварцевый тигель (при необходимости в препаратах с маслом тигель переносят в сушильный шкаф при 110 °C на 10 мин или более для полной абсорбции масла магния оксидом), затем осторожно сжигают на открытом пламени газовой горелки или электроплитке в присутствии магния оксида (от 3,0 мг до 2,5 г; количество магния оксида должно быть указано в фармакопейной статье) до обугливания, затем продолжают сжигание в муфельной печи при температуре 800 - 1000 °C до тех пор, пока весь остаток не станет белого цвета (около 1 - 5 ч). ## Спектрофотометрические методики определения фосфора Образующиеся после минерализации фосфат-ионы взаимодействуют с молибденовой кислотой с образованием желтых гетерополикомплексов - фосфорномолибденовых кислот, переходящих под действием восстановителей (аскорбиновой кислоты, гидразина сульфата, эйконогена, метола или других) в фосфорномолибденовую синь, интенсивность окраски которой пропорциональна содержанию фосфора. Состав фосфорномолибденовой сини зависит от природы восстановителя, кислотности раствора, температуры и других условий. От природы восстановителя зависят скорость реакции, чувствительность метода, положение максимума поглощения. Определяют положение максимума в спектре поглощения фосфорномолибденовой сини для испытуемого препарата. При необходимости перед проведением цветной реакции испытуемый раствор нейтрализуют натрия гидроксида раствором 5 М (или другой концентрации, указанной в фармакопейной статье) в присутствии 1 - 2 капель фенолфталеина раствора 1%, избыток щелочи нейтрализуют серной кислоты раствором 0,05 М (или другой концентрации, указанной в фармакопейной статье). Методика А (преимущественно для витаминных препаратов с минералами, с аскорбиновой кислотой). Метод минерализации и приготовление раствора должны быть указаны в фармакопейной статье. В три мерные колбы вместимостью 25 мл отдельно помещают 2,0 мл раствора, приготовленного после минерализации, 2,0 мл стандартного раствора калия фосфата однозамещенного с концентрацией фосфора 20 мкг/мл [(примечание 1)](#p100075) и 2,0 мл воды (контрольный раствор). В каждую из трех колб прибавляют по 10 мл ацетатного буферного раствора, pH 3,9 - 4,1 [(примечание 14)](#p100117), 2,5 мл аммония молибдата раствора 1% в растворе серной кислоты [(примечание 15)](#p100119) и 2,5 мл свежеприготовленного аскорбиновой кислоты раствора 1% [(примечание 3)](#p100096), доводят объемы растворов ацетатным буферным раствором, pH 3,9 - 4,1, до метки и перемешивают. Точно через 10 мин после добавления аскорбиновой кислоты раствора 1% измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов относительно контрольного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 740 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.
Содержание фосфора в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле: $X = \frac{A \cdot V \cdot C \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 10^{6}} ,$ где A - оптическая плотность испытуемого раствора;
A0 - оптическая плотность стандартного раствора;
C - концентрация фосфора в стандартном растворе калия фосфата однозамещенного, мкг/мл (20 мкг/мл);
a - навеска препарата, г;
V - объем воды, используемый для приготовления раствора после минерализации, мл.
Методика Б (преимущественно для препаратов из животного и растительного сырья). Проводят минерализацию, как указано в [методике 1 метода 2](#p100017). Содержимое колбы количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через сухой бумажный фильтр (обеззоленный "синяя лента"), отбрасывая первые 15 мл фильтрата. 15,0 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 35 мл воды, 5,0 мл восстанавливающего раствора [(примечание 4)](#p100097), 10 мл раствора аммония молибдата [(примечание 6)](#p100101) и оставляют на 10 мин при комнатной температуре, периодически перемешивая. Соотношение фильтрата и воды (общий объем 50 мл) может быть изменено в зависимости от содержания фосфора в фильтрате.
Параллельно в аналогичных условиях готовят стандартный и контрольный растворы, помещая в мерную колбу вместимостью 100 мл 20,0 мл стандартного раствора калия фосфата однозамещенного с содержанием фосфора 20 мкг/мл [(примечание 1)](#p100075), 30 мл воды (стандартный раствор) или 50 мл воды (контрольный раствор) и те же количества реактивов, как для испытуемого раствора.
Точно через 10 мин в колбы с испытуемым, стандартным и контрольным растворами прибавляют по 20 мл насыщенного раствора натрия ацетата (см. [примечание 5](#p100099)), доводят объем раствора в каждой колбе водой до метки (100 мл), тщательно перемешивают и через 20 - 25 мин измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 725 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно контрольного раствора.
Содержание фосфора в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:
$X = \frac{A \cdot C \cdot 20 \cdot 100 \cdot 100 \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 100 \cdot V \cdot 10^{6}} = \frac{A \cdot C \cdot 20 \cdot 100 \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot V \cdot 10^{6}} ,$ где A - оптическая плотность испытуемого раствора; A0 - оптическая плотность стандартного раствора; C - концентрация фосфора в стандартном растворе калия фосфата однозамещенного, мкг/мл (20 мкг/мл); a - навеска препарата, г; V - объем фильтрата, взятый для реакции, мл; 20, 100, 100, 100 - объемы аликвотных частей растворов и вместимости мерных колб, мл. Методика В (преимущественно для витаминных препаратов с минералами, с гидрохиноном). Способ минерализации, навеска препарата или содержание фосфора в пробе должны быть указаны в фармакопейной статье. Полученный остаток после минерализации с помощью воды количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки. Отбирают 10,0 мл полученного раствора и переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Затем в три отдельные мерные колбы вместимостью 25 мл помещают по 5,0 мл испытуемого раствора, стандартного раствора калия фосфата однозамещенного с содержанием фосфора 20 мкг/мл [(примечание 1)](#p100075) и воды (контрольный раствор), в каждую из трех колб прибавляют по 1 мл раствора аммония молибдата [(примечание 9)](#p100106), 1 мл раствора гидрохинона [(примечание 10)](#p100108) и 1 мл раствора натрия гидросульфита [(примечание 11)](#p100110), перемешивают. Доводят объемы растворов в каждой колбе водой до метки, перемешивают и оставляют на 30 мин, затем измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов относительно контрольного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 650 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Содержание фосфора в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле: $X = \frac{A \cdot 25 \cdot C \cdot 500 \cdot 100 \cdot 100 \cdot 5}{A_{0} \cdot a \cdot 5 \cdot 10 \cdot 10^{6} \cdot 25} = \frac{A \cdot C \cdot 500 \cdot 100 \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 10 \cdot 10^{6}} ,$ где A - оптическая плотность испытуемого раствора; A0 - оптическая плотность стандартного раствора; C - концентрация фосфора в стандартном растворе калия фосфата однозамещенного, мкг/мл (20 мкг/мл); a - навеска препарата, г; 5, 10, 25, 100, 500 - объемы аликвотных частей растворов и мерных колб, мл. Методика Г (для определения примесей или количественного определения фосфора, с эйконогеном). Полученный остаток после минерализации (методику выбирают в зависимости от природы вещества) растворяют в 10 мл воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, перемешивают, туда же прибавляют 0,75 мл раствора аммония молибдата [(примечание 12)](#p100112), 1 мл раствора эйконогена [(примечание 13)](#p100114), доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Готовят стандартный раствор, помещая 1 - 3 мл стандартного раствора калия фосфата однозамещенного с содержанием фосфора 5 мкг/мл [(примечание 1)](#p100075) в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляя те же реактивы, что и в испытуемый раствор. Измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов относительно контрольного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 620 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно контрольного раствора. Содержание фосфора в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле: $X = \frac{A \cdot C \cdot 25 \cdot V_{0} \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 25 \cdot 10^{6}} = \frac{A \cdot C \cdot V_{0} \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 10^{6}} ,$ где A - оптическая плотность испытуемого раствора; A0 - оптическая плотность стандартного раствора; *C - концентрация фосфора в стандартном растворе калия фосфата однозамещенного, мкг/мл (5 мкг/мл);* *a - навеска препарата, г;* *V0 - объем стандартного раствора калия фосфата однозамещенного, мл;* *25 - объем мерной колбы, мл.* *Для нормирования предельного содержания примесей возможно сравнение оптических плотностей испытуемого и стандартного растворов. Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать оптическую плотность стандартного раствора.* *Методика Д (преимущественно для витаминных препаратов с минералами, с гидразина сульфатом). Остаток после минерализации (способ минерализации указывают в фармакопейной статье), содержащий от 0,25 до 1,50 мг фосфора, переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл с помощью 40 - 50 мл воды, прибавляют 20 мл серной кислоты раствора 1 М и перемешивают. Если остаток не растворился, прибавляют еще небольшое количество серной кислоты раствора 1 М, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.* *5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл молибденового реагента [(примечание 8)](#p100104), 50 мл воды и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Измеряют оптическую плотность полученного раствора относительно контрольного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 830 нм в кювете с толщиной слоя 1 см и определяют концентрацию фосфора в испытуемом растворе по калибровочному графику.* *Построение калибровочного графика. В мерные колбы вместимостью 100 мл помещают 2,0; 5,0; 7,5; 10,0 и 15,0 мл стандартного раствора калия фосфата однозамещенного с содержанием фосфора 10 мкг/мл [(примечание 1)](#p100075), прибавляют по 20 мл молибденового реагента и далее поступают, как указано выше для испытуемого раствора.* *Строят калибровочный график, откладывая по оси ординат оптическую плотность, а по оси абсцисс - концентрацию фосфора в мкг/мл.* *Содержание фосфора в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:* *$X = \frac{C \cdot 500 \cdot 100 \cdot 100}{a \cdot 5 \cdot 10^{6}} ,$* *где C - концентрация фосфора, определенная по калибровочному графику, мкг/мл;* *a - навеска препарата, г;* *5, 100, 500 - объемы аликвотных частей растворов и мерных колб, мл.* *Примечания.* *Приготовление реактивов для спектрофотометрического определения фосфора. Вода и все используемые реактивы не должны содержать примесей фосфора, мешающих определению.* *1. Приготовление стандартного раствора калия фосфата однозамещенного.* *1.1. Основной стандартный раствор калия фосфата однозамещенного. 0,4395 г калия фосфата однозамещенного, высушенного до постоянной массы при температуре 105 °C, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 700 - 800 мл воды, 20 мл 0,05 М раствора серной кислоты, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор содержит 100 мкг/мл фосфора).* *Срок годности полученного раствора 1 мес.* *1.2. Из основного стандартного раствора готовят стандартные растворы калия фосфата однозамещенного для каждого метода в соответствии с приведенной ниже таблицей.* | Методика | Содержание фосфора в стандартном растворе, мкг/мл | Количество основного стандартного раствора (с содержанием фосфора 100 мкг/мл), мл | Количество воды в мерной колбе, мл | | --- | --- | --- | --- | | [А](#p100025), [Б](#p100033), [В](#p100044) | 20 | 20,0 | до 100 | | [Г](#p100052) | 5 | 5,0 | до 100 | | [Д](#p100064) | 10 | 10,0 | до 100 | *2. Приготовление 3 М раствора серной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 мл приливают 700 мл воды, осторожно по каплям при перемешивании и охлаждении (в сосуде с холодной водой) прибавляют 168 мл серной кислоты концентрированной; после охлаждения раствора до комнатной температуры доводят объем раствора водой до метки.* *3. Приготовление аскорбиновой кислоты раствора 1% (для [методики А](#p100025)). Помещают 1,0 г аскорбиновой кислоты в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Полученный раствор используют в течение 1 дня.* *4. Приготовление восстанавливающего раствора для [методики Б](#p100033). 4,0 г метола и 10,0 г натрия сульфита растворяют в 150 мл воды в мерной колбе вместимостью 1000 мл, прибавляют 196 г натрия метабисульфита, растворенного в 600 мл воды, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через фильтр "Синяя лента".* *Срок годности раствора 30 сут.* *5. Приготовление насыщенного раствора натрия ацетата. 420 г натрия ацетата помещают в колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 500 мл воды, перемешивают и оставляют на 1 сут. Раствор над осадком фильтруют через фильтр "Синяя лента".* *Срок годности раствора 30 сут.* *6. Приготовление раствора аммония молибдата для [методики Б](#p100033). 50,0 г аммония молибдата растворяют в 500 мл воды в мерной колбе вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора 3 М раствором серной кислоты до метки, перемешивают и фильтруют.* *Срок годности раствора 30 сут.* *7. Проба на содержание фосфора в реактивах 4, 5 и 6. При смешивании 5 мл восстанавливающего раствора, 10 мл раствора аммония молибдата и 20 мл насыщенного раствора натрия ацетата не должно появляться синего окрашивания.* *8. Приготовление молибденового реагента для [методики Д](#p100064). Около 6,860 г (точная навеска) натрия молибдата растворяют в 200 мл воды (раствор А); 0,40 г гидразина сульфата растворяют в 100 мл воды (раствор Б). В мерную колбу вместимостью 1000 мл с 500 мл воды осторожно прибавляют при охлаждении и перемешивании 100 мл серной кислоты концентрированной, туда же полностью переносят растворы А и Б, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.* *Реагент используют свежеприготовленным.* *9. Приготовление раствора аммония молибдата для [методики В](#p100044). 12,50 г аммония молибдата растворяют в 150 мл воды, прибавляют 100 мл раствора серной кислоты (37,5 мл серной кислоты концентрированной и 100 мл воды).* *Срок годности раствора 14 сут.* *10. Приготовление раствора гидрохинона. 0,50 г гидрохинона помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, прибавляют 1 каплю серной кислоты концентрированной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.* *Раствор используют свежеприготовленным.* *11. Приготовление раствора натрия гидросульфита. 20,0 г натрия гидросульфита помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.* *Срок годности при хранении в темном месте 7 сут.* *12. Приготовление раствора аммония молибдата для [методики Г](#p100052). 8,30 г аммония молибдата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 40 мл воды, прибавляют 33 мл серной кислоты разведенной (2 мл серной кислоты концентрированной в 7 мл воды), доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.* *Срок годности раствора 14 сут.* *13. Приготовление раствора эйконогена. Готовят одним из двух способов.* *А) 0,750 г натрия сульфита, 14,150 г натрия гидросульфита и 0,1050 г эйконогена помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Полученный раствор используют свежеприготовленным.* *Б) Готовят сухую смесь из 5,0 г натрия сульфита, 94,3 г натрия гидросульфита и 0,70 г эйконогена при тщательном перемешивании. В день определения 1,5 г сухой смеси помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.* *14. Приготовление ацетатного буферного раствора pH 3,9 - 4,1. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 10 мл уксусной кислоты раствора 1 М, 25 мл натрия ацетата раствора 0,1 М, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают; pH полученного раствора 3,9 - 4,1 (потенциометрически).* *Срок годности полученного раствора 3 мес.* *15. Приготовление аммония молибдата раствора 1% в растворе серной кислоты для [методики А](#p100025). 1 г аммония молибдата растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, прибавляют калиброванной пипеткой 0,11 мл серной кислоты разведенной (1 часть серной кислоты концентрированной и 5 частей воды) и доводят объем раствора водой до метки.* *Срок годности полученного раствора 1 мес.* *16. Приготовление 0,05 М раствора серной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 50 мл серной кислоты раствора 1 М, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.* ## Определение фосфора нуклеиновых кислот по Спирину *Метод основан на измерении разности поглощений в ультрафиолетовой области при двух значениях длин волн после обработки испытуемого препарата раствором хлорной кислоты при нагревании. В фармакопейных статьях в зависимости от соотношения содержания нуклеиновых кислот (дезоксирибонуклеиновой и рибонуклеиновой, а также их фрагментов) допускаются модификации методик гидролиза.* *Методика. К 1 мл раствора препарата, содержащего 15 - 35 мкг нуклеиновых кислот, помещенного в термостойкую центрифужную пробирку (или колбу), прибавляют 5 мл хлорной кислоты раствора 0,5 М (другие условия указывают в фармакопейной статье) и закрывают стеклянным колпачком или присоединяют воздушный холодильник. Смесь нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин. После охлаждения пробы при необходимости (при наличии осадка) центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин. Измеряют оптическую плотность гидролизованного прозрачного раствора или надосадочной жидкости при длинах волн 270 и 290 нм в кювете с толщиной слоя 1 см; при высоких значениях оптической плотности растворы разводят хлорной кислоты раствором 0,5 М (разведение должно быть указано в фармакопейной статье). В качестве контрольного раствора используют хлорной кислоты раствор 0,5 М.* *Метод применим при выполнении условия: A270 и A290 не должны отличаться более чем на 15%.* *Содержание фосфора в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:* *$X = \frac{(A_{270} - A_{290}) \cdot N \cdot 100}{\Delta A_{1\text{см}} \cdot b \cdot a \cdot 10^{6}} ,$* *где A270 - оптическая плотность испытуемого раствора при 270 нм;* *A290 - оптическая плотность испытуемого раствора при 290 нм;* *N - разведение препарата (в данном описании равно 6);* *$\Delta A_{1\text{см}} = 0,19$ - разность удельных показателей поглощения нуклеиновых кислот при длинах волн 270 и 290 нм при содержании фосфора 1 мкг/мл;*
b - толщина поглощающего слоя, см;
a - навеска препарата, г. ---