---
title: "\"ОФС.1.2.3.0019.15. Общая фармакопейная статья. Определение сахаров спектрофотометрическим методом\""
number: "ОФС.1.2.3.0019.15"
issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации"
status: утратил силу
canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-3-0019-15"
---

## "ОФС.1.2.3.0019.15. Общая фармакопейная статья. Определение сахаров спектрофотометрическим методом"

# "ОФС.1.2.3.0019.15. Общая фармакопейная статья. Определение сахаров спектрофотометрическим методом"

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)

("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том I")

> [!WARNING]
> Документ утратил силу с 01.09.2023 в связи с введением в действие [ОФС.1.2.3.0019](https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-3-0019), утв. Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377.
> В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018.
> Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 13.03.2019.

> [!NOTE]
> ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

```mermaid
flowchart LR
  n0["ОФС.1.2.3.0019.15"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-3-0019-15" "ОФС.1.2.3.0019.15. Общая фармакопейная статья. Определение сахаров спектрофотометрическим методом (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n1["ОФС.1.2.3.0019"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-3-0019" "ОФС.1.2.3.0019. Общая фармакопейная статья. Определение сахаров спектрофотометрическим методом (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
```


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Определение сахаров спектрофотометрическим методом | <a id="p100004"></a>ОФС.1.2.3.0019.15<br>Вводится впервые |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Для определения сахаров используют спектрофотометрический метод. Его проводят, осуществляя измерение оптической плотности окрашенных растворов, образуемых при взаимодействии сахаров с антроновым или орциновым реактивами и пикриновой кислотой.

<a id="p100006"></a>Метод определения с антроновым реактивом

<a id="p100007"></a>Метод основан на расщеплении сложных углеводов до моносахаров в сильнокислой среде с последующей их дегидратацией и образованием гидроксиметилфурфурола, образующего при реакции с антроном комплексное соединение синевато-зеленого цвета. Интенсивность образовавшейся окраски прямо пропорциональна содержанию сахаров в реакционной среде.
<a id="p100008"></a>Пропорциональная зависимость интенсивности окраски от содержания сахаров в испытуемом растворе соблюдается в области концентраций моносахаров 0,02 - 0,10 мг/мл.
<a id="p100009"></a>Методика. В пробирку помещают 3,0 мл раствора испытуемого препарата (пробоподготовка и, если необходимо, методика гидролиза полисахаров до моносахаров должны быть описаны в фармакопейной статье), охлаждают в бане со льдом до 0 °C, осторожно при охлаждении приливают 6,0 мл 0,2% антронового реактива, перемешивают и немедленно нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 - 15 мин (точное время должно быть указано в фармакопейной статье), охлаждают и измеряют оптические плотности испытуемого и стандартного растворов на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 625 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.
<a id="p100010"></a>Приготовление раствора сравнения. В охлажденную на бане со льдом пробирку с 3,0 мл воды приливают 6,0 мл 0,2% антронового реактива. Далее проводят анализ аналогично раствору испытуемого препарата.
<a id="p100011"></a>Приготовление стандартного раствора. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,10 г стандартного образца глюкозы, растворяют в воде или насыщенном растворе бензойной кислоты в воде, доводят этим же раствором до метки и перемешивают. Отбирают 2,0 мл полученного раствора в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят водой до метки и перемешивают. Полученный раствор содержит 0,02 мг/мл глюкозы. Далее проводят анализ аналогично раствору испытуемого препарата.
<a id="p100012"></a>Вместо использования одного стандартного раствора, если указано в фармакопейной статье, строят калибровочный график, используя разведенные растворы стандартного образца глюкозы с концентрацией от 0,01 до 0,05 мг/мл.
<a id="p100013"></a>Калибровочный график строят при каждом анализе.
<a id="p100014"></a>Содержание сахаров в 1 мл раствора испытуемого препарата находят по калибровочной кривой зависимости оптической плотности калибровочных растворов от содержания стандартного образца глюкозы в 1 мл растворителя.
<a id="p100015"></a>При анализе декстранов учитывают, что 1 г глюкозы соответствует 0,94 г декстранов.
<a id="p100016"></a>*Примечание.* Приготовление 0,2% антронового реактива. 0,20 г антрона помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют серную кислоту, свободную от азота, или смесь серная кислота, свободная от азота, - вода (19:1), тщательно перемешивают и помещают в темное место до полного растворения. До использования раствор выдерживают после приготовления не менее 4 ч.
<a id="p100017"></a>Срок годности при хранении в темном месте при температуре 6 - 8 °C не более 7 сут.
<a id="p100018"></a>При использовании антронового реактива для анализа глюкозы или декстранов проводят определение чувствительности реактива к глюкозе.
<a id="p100019"></a>Осторожно прибавляют 6 мл антронового реактива (в смеси серная кислота, свободная от азота, - вода, 19:1) к 3 мл раствора D-глюкозы (5 мкг/мл), нагревают на водяной бане в течение 5 мин. Раствор, содержащий глюкозу, должен быть темнее раствора сравнения без глюкозы. Раствор сравнения темно-зеленого цвета.

<a id="p100020"></a>Метод определения с пикриновой кислотой

<a id="p100021"></a>Метод основан на цветной реакции моносахаров с пикриновой кислотой, протекающей с образованием пикраминовой кислоты в результате восстановления сахаром группы NO2 до NH2. Интенсивность образовавшейся окраски пропорциональна количеству определяемого сахара (0,1 - 0,8 мг/мл) в испытуемом растворе препарата. Пробоподготовка должна быть описана в фармакопейной статье.
<a id="p100022"></a>В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл пикриновой кислоты раствора 1%, 3,0 мл натрия карбоната раствора 20% и 1 - 5 мл раствора испытуемого образца (точное количество должно быть указано в фармакопейной статье). Колбу погружают на 10 мин на кипящую водяную баню, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора стандартного образца глюкозы на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны, указанной в фармакопейной статье (в области от 440 до 460 нм), в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.
<a id="p100023"></a>Приготовление раствора сравнения. Вместо раствора испытуемого образца используют воду, добавляя те же реактивы и проводя те же операции, что и с раствором испытуемого образца препарата.
<a id="p100024"></a>Примечания.
1. <a id="p100025"></a>Приготовление раствора стандартного образца глюкозы. Около 0,05 г (точная навеска) глюкозы, предварительно высушенной при температуре 100 - 105 °C до постоянной массы, помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
<a id="p100026"></a>1 мл раствора стандартного образца содержит около 0,2 мг глюкозы.
<a id="p100027"></a>Раствор должен быть свежеприготовленным.
2. <a id="p100028"></a>Приготовление пикриновой кислоты раствора 1%. 1 г кислоты пикриновой помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 90 мл воды на кипящей водяной бане, охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
<a id="p100029"></a>Срок годности раствора при хранении в склянках с притертой пробкой в защищенном от света месте 1 мес.

<a id="p100030"></a>Метод определения с орциновым реактивом

<a id="p100031"></a>При нагревании пентоз (или их фосфорных производных) в присутствии кислот от них отщепляется вода и образуется фурфурол; в присутствии орцина и железа (III) хлорида при этом развивается зеленое окрашивание.
<a id="p100032"></a>Чувствительность метода определения значительно выше с рибозой, чем с дезоксирибозой и гексозами.
<a id="p100033"></a>В пробирку помещают 2,0 мл разведенного в воде препарата с содержанием рибозы около 2,5 - 25,0 мкг/мл, прибавляют 2,0 мл железа (III) хлорида раствора 0,05% в хлористоводородной кислоте концентрированной, смесь встряхивают, прибавляют 0,2 мл орцина раствора 10% в этаноле. Пробирку со смесью помещают в кипящую водяную баню на 20 мин, затем охлаждают в ледяной воде. По достижении комнатной температуры измеряют оптическую плотность раствора испытуемого образца препарата на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 670 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.
<a id="p100034"></a>Приготовление раствора сравнения. Вместо раствора испытуемого образца используют воду, добавляя те же реактивы и проводя те же операции, что и с раствором испытуемого образца препарата.
<a id="p100035"></a>Содержание сахаров (пентоз) в 1 мл испытуемого раствора препарата находят по калибровочной кривой зависимости оптической плотности калибровочных растворов от содержания рибозы в мкг/мл воды.
<a id="p100036"></a>Построение калибровочного графика. Перед определением разводят стандартный раствор рибозы в 10 раз водой (рабочий раствор). В 6 пробирок вносят 0,10, 0,20, 0,40, 0,60, 0,80 и 1,0 мл рабочего раствора, в каждую пробирку прибавляют воду до 2,0 мл и далее проводят те же операции, что и с испытуемым раствором.
<a id="p100037"></a>Примечания.
1. <a id="p100038"></a>Приготовление раствора стандартного образца рибозы. 25,0 мг стандартного образца рибозы (с содержанием не менее 99,0%) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
<a id="p100039"></a>Раствор используют свежеприготовленным.
2. <a id="p100040"></a>Приготовление железа (III) хлорида раствора 0,05%. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,050 г FeCl3·6H2O, растворяют в хлористоводородной кислоте концентрированной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
<a id="p100041"></a>Срок годности раствора 1 мес.
3. <a id="p100042"></a>Приготовление орцина раствора 10% в этаноле. 10,0 г орцина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в этаноле, доводят объем раствора до метки этим же растворителем и перемешивают.
<a id="p100043"></a>Раствор используют свежеприготовленным и защищают от света.



<a id="p100044"></a>

---