ОФС.1.2.2.2.0018. Общая фармакопейная статья. 4-Аминофенол
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 15.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| 4-Аминофенол | ОФС.1.2.2.2.0018 |
| Вводится впервые |
Метод определения 4-аминофенола в лекарственных средствах, содержащих парацетамол, основан на использовании ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы, содержащие парацетамол или 4-аминофенол, защищают от света и используют свежеприготовленными.
Буферный раствор. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 4,0 г натрия цитрата и 1,5 г лимонной кислоты безводной, растворяют в воде и доводят объем тем же растворителем до метки.
Подвижная фаза А (ПФА). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,60 г калия дигидрофосфата и 0,82 г динатрия гидрофосфата безводного.
Подвижная фаза В (ПФВ). Ацетонитрил.
Растворитель. Ацетонитрил — буферный раствор 10:90.
Испытуемый раствор А. Готовят раствор субстанции или препарата в растворителе с концентрацией парацетамола 10 мг/мл и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мл испытуемого раствора А, доводят объем раствора растворителем до метки и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Раствор стандартного образца 4-аминофенола. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают около 5 мг (точная навеска) стандартного образца 4-аминофенола, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки пригодности системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл раствора стандартного образца 4-аминофенола и доводят объем раствора растворителем до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мл испытуемого раствора А и 15 мл раствора стандартного образца 4-аминофенола, доводят объем раствора растворителем до метки.
| Колонка | 150 x 4,6 мм, сорбент комбинированный для ВЭЖХ, 5 мкм; |
|---|---|
| Температура колонки | 30 °C; |
| Скорость потока | 1,0 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 300 нм; |
| Объем пробы | 10 мкл. |
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % | ПФВ, % |
|---|---|---|---|
| 0 — 7 | 90 | 5 | 5 |
| 7 — 7,1 | 90 \rightarrow 10 | 5 \rightarrow 10 | 5 \rightarrow 80 |
| 7,1 — 10 | 10 \rightarrow 90 | 10 \rightarrow 5 | 80 \rightarrow 5 |
| 10 — 15 | 90 | 5 | 5 |
Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор Б.
Время удерживания 4-аминофенола — около 5 мин.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-аминофенола должно быть не менее 20.
На хроматограмме стандартного раствора:
- разрешение (RS) между пиками 4-аминофенола и ближайшим к нему должно быть не менее 1;
- фактор асимметрии пика (AS) 4-аминофенола должен быть не более 1,5;
- относительное стандартное отклонение площади пика 4-аминофенола должно быть не более 5,0% (6 введений).
Содержание 4-аминофенола C6H7NO в субстанции или препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 15}{S_{0} \cdot 10 \cdot 25 \cdot 200 \cdot 50} ,
где S1 — площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска стандартного образца 4-аминофенола, мг;
P — содержание 4-аминофенола в стандартном образце 4-аминофенола, %.
Допустимое содержание 4-аминофенола: Не более 0,15% по отношению к парацетамолу, если в фармакопейной статье не указано иначе.
Настройка хроматографической системы. При необходимости, время удерживания 4-аминофенола может быть уменьшено или увеличено в соответствии с таблицей:
Подвижная фаза. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,6 г натрия бутансульфоната, растворяют в смеси муравьиная кислота — метанол — вода 4:150:850 и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Растворитель. Метанол — вода 15:85.
Испытуемый раствор. Готовят раствор субстанции или препарата в растворителе с концентрацией парацетамола 10 мг/мл и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Раствор стандартного образца 4-аминофенола. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около 10 мг (точная навеска) стандартного образца 4-аминофенола, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 г стандартного образца парацетамола и доводят объем раствором стандартного образца 4-аминофенола до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора для проверки пригодности хроматографической системы и доводят объем растворителем до метки.
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца 4-аминофенола.
Время удерживания соединений. Парацетамол — около 6 мин; 4-аминофенол — около 3 мин.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-аминофенола должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:
- разрешение (RS) между пиками 4-аминофенола и парацетамола должно быть не менее 5;
- фактор асимметрии пика (AS) 4-аминофенола должен быть не более 2,0;
- относительное стандартное отклонение площади пика 4-аминофенола должно быть не более 5,0% (6 введений);
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику 4-аминофенола, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.
Содержание 4-аминофенола C6H7NO в субстанции или препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 1}{S_{0} \cdot 10 \cdot 100 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме раствора стандартного образца 4-аминофенола;
a0 — навеска стандартного образца 4-аминофенола, мг;
P — содержание 4-аминофенола в стандартном образце 4-аминофенола, %.
Допустимое содержание 4-аминофенола: Не более 0,01% по отношению к парацетамолу, если в фармакопейной статье не указано иначе.