---
title: "\"ОФС.1.2.1.1.0013.18. Общая фармакопейная статья. Спектроскопия кругового дихроизма\""
number: "ОФС.1.2.1.1.0013.18"
issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации"
status: утратил силу
canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-1-0013-18"
---
## "ОФС.1.2.1.1.0013.18. Общая фармакопейная статья. Спектроскопия кругового дихроизма"
# "ОФС.1.2.1.1.0013.18. Общая фармакопейная статья. Спектроскопия кругового дихроизма"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том I")
> [!WARNING]
> Документ утратил силу с 01.09.2023 в связи с введением в действие [ОФС.1.2.1.1.0013](https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-1-1-0013), утв. Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377.
> В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018.
> Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 13.03.2019 и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи.
> [!NOTE]
> ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
```mermaid
flowchart LR
n0["ОФС.1.2.1.1.0013.18"]:::rst
click n0 "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-1-1-0013-18" "ОФС.1.2.1.1.0013.18. Общая фармакопейная статья. Спектроскопия кругового дихроизма (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
n1["ОФС.1.2.1.1.0013"]:::doc
click n1 "https://bukva.ai/docs/ofs-1-2-1-1-0013" "ОФС.1.2.1.1.0013. Общая фармакопейная статья. Спектроскопия кругового дихроизма (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)"
n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
```
**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**
**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**
| Спектроскопия кругового дихроизма | ОФС.1.2.1.1.0013.18
Вводится впервые |
| --- | --- |
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод спектроскопии кругового дихроизма (КД-спектроскопия), основанного на анизотропии оптически активных молекул, при пропускании света, поляризованного по правому или левому кругу.
## Область применения
КД-спектроскопия используется в основном для изучения структуры органических молекул, обладающих оптической изомерией. С помощью данного метода можно дифференцировать вклады полос поглощения различных изомеров в суммарную оптическую активность исследуемого образца. Этот метод может использоваться для анализа смесей оптических изомеров биологически активных веществ, для контроля качества лекарственных средств. Кроме того, КД-спектроскопия является популярным методом определения количества белка и контроля за его вторичной структурой в растворах (то есть за денатурационными изменениями).
## Суть метода
При прохождении через любую оптически активную среду плоскополяризованного света, он становится эллиптически поляризованным. Данное явление связано с различными величинами поглощения средой двух волн, составляющих этого света, с противоположной круговой поляризацией. Разность этих величин поглощения называют круговым дихроизмом. Полученные в ходе эксперимента спектры кругового дихроизма сравнивают со стандартными спектрами КД. Благодаря этому получают качественный и количественный состав исследуемого образца. Метод КД обладает высокой чувствительностью (вплоть до анализа десятков микрограммов субстанции).
## Методика
Из образцов готовят растворы одинаковой концентрации. Концентрацию подбирают таким образом, чтобы при максимуме поглощения исследуемого вещества оптическая плотность составляла примерно 1.
Растворы помещают в кварцевую кювету и проводят измерение КД на соответствующем приборе в указанном диапазон длин волн. Далее проводят анализ полученных спектров, сравнивая их с реперными спектрами и проверяя наличие эффекта Коттона в области поглощения хромофора. Наличие или отсутствие данного эффекта может определить обладает ли образец оптической активностью.
Непосредственное измерение оптической плотности дает следующее выражение:
$\Delta A = A_{1} - A_{2}$ ,
где $\Delta A$ - оптическая плотность кругового дихроизма;
A1 - оптическая плотность для света с левой круговой поляризацией;
A2 - оптическая плотность для света с правой круговой поляризацией.
Величину кругового дихроизма рассчитывают по следующей формуле:
$\Delta\epsilon = \epsilon_{1} - \epsilon_{2} = \frac{\Delta A}{c \times l}$ ,
где $\Delta\epsilon$ - молярный круговой дихроизм или молярный дифференциальный дихроичный коэффициент поглощения, л·моль·см-1;
$\epsilon_{1}$ - молярный коэффициент поглощения для света с левой круговой поляризацией;
$\epsilon_{2}$ - молярный коэффициент поглощения для света с правой круговой поляризацией;
c - концентрация вещества в исследуемом растворе, моль·л-1;
l - длина оптического пути, см.
Кроме того, для характеристики кругового дихроизма также используют следующие единицы
Коэффициент асимметрии:
$g = \frac{\Delta\epsilon}{\epsilon}$ ,
Где $\epsilon$ - молярный коэффициент поглощения.
Молярная эллиптичность:
Некоторые типы приборов непосредственно показывают величину молярной эллиптичности $\Theta$ , выраженную в градусах. При использовании таких приборов молярная эллиптичность может быть рассчитана по следующему уравнению:
$[\Theta] = \frac{\Theta \times M}{c \times l \times 10}$ ,
$[\Theta]$ - молярная величина эллиптичности, выраженная в градус x см2 x децимоль-1;
$\Theta$ - величина эллиптичности, показываемая прибором;
M - относительная молекулярная масса исследуемого вещества;
c - концентрация исследуемого вещества в растворе, г/мл;
l - длина оптического пути, см.
Молярная эллиптичность также связана с молярным круговым дихроизмом уравнением:
$[\Theta] = 2.303 \times \Delta\epsilon \times \frac{4500}{\pi} \approx 3300 \times \Delta\epsilon$
Молярная эллиптичность часто используется в анализе белков и нуклеиновых кислот. В этом случае молярная концентрация, выраженная в единицах мономерных остатков, рассчитывается исходя из отношения молекулярной массы к числу аминокислот.
Для белков среднее значение относительной молекулярной массы мономерного остатка составляет от 100 до 120, для нуклеиновых кислот (в виде натриевой соли) - около 330.
Рис. 1 Спектр кругового дихроизма
на примере раствора альбумина.
## Прибор
Основные составляющие КД-спектрометра или, по-другому, дихрографа:
- источник излучения (обычно ксеноновая лампа);
- система круговой поляризации света (двойной монохроматор, кварцевые призмы, двоякопреломляющий модулятор);
- детектор (фотоумножитель);
- усилитель сигнала.
Дихрограф способен производить измерения в диапазоне длин волн от 170 до 800 нм.
## Калибровка
Для проверки правильности шкалы оптической плотности обычно используют раствор изоандростерона в диоксане (10 мг изоандростерона растворяют в 10,0 мл диоксана). Снимают КД-спектр в диапазоне от 280 нм до 360 нм. Величина $\Delta\epsilon$ , измеренная при 304 нм, должна быть равна +3,3. Линейность модуляции проверяют обычно с помощью раствора (1S)-(+)-10-камфорсульфоновой кислоты в воде (10,0 мг кислоты в 10,0 мл воды). Сначала спектрофотометрически определяют точную концентрацию камфорсульфоновой кислоты, используя удельный показатель поглощения при 285 нм, равный 1,49. Далее снимают КД-спектр в диапазоне от 185 нм до 340 нм. Величина $\Delta\epsilon$ , измеренная при 290,5 нм, должна быть равна от +2,2 до +2,5, а измеренная при 192,5 нм - от -4,3 до -5. Также возможно использование (1R)-(+)-аммония 10-камфорсульфоната.
---