--- title: "\"Изменение N 1 ГОСТ Р 52174-2003 \"Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа\"" number: "ГОСТ Р 52174-2003" issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии" status: утратил силу canonical: "https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-52174-2003" --- ## "Изменение N 1 ГОСТ Р 52174-2003 "Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа" # "Изменение N 1 ГОСТ Р 52174-2003 "Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа" (утв. и введено в действие Приказом Ростехрегулирования от 25.12.2008 N 731-ст) > [!WARNING] > Документ утратил силу в связи с изданием Приказа Ростехрегулирования от 24.04.2009 N 142-ст. > Документ [введен](#p100005) в действие с 1 июля 2009 года с правом досрочного применения.
Утверждено и введено в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 25 декабря 2008 г. N 731-ст **ИЗМЕНЕНИЕ N 1 ГОСТ Р 52174-2003** **"БИОЛОГИЧЕСКАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ. СЫРЬЕ И ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ.** **МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ** **(ГМИ) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ** **БИОЛОГИЧЕСКОГО МИКРОЧИПА"**
**ОКС 65.140,**
65.160,
67.060,
67.080,
67.100,
67.120,
67.140,
67.140.30,
67.160,
67.180,
67.190,
67.200,
67.220 Группа Н11,
Н13,
Н17,
Н23,
Н31 - Н34,
Н36,
Н41 - Н43,
Н51 - Н56,
Н62,
Н65,
Н68,
Н72 - Н74,
Н81,
Н97,
С11,
С23 - С25,
С32 - С36,
С41 - С45,
С52 Дата введения
1 июля 2009 года Разделы 1 [(первый абзац)](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003#p100015), [5](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003#p100124). Заменить слова: "пищевое сырье" на "продовольственное сырье"; [дополнить](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003) абзацем: "Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением технологии FLASH изложен в обязательном приложении Д". [Пункт 4.1](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003#p100052). Исключить слова: "или "Био-1" [23]". [Пункт 4.2](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003#p100053). Исключить слова: "или "Евробио-ВТО" [24]". [Пункт 6.2.1](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003#p100146) дополнить абзацем: "6.2.1. Дополнительно готовят отрицательную контрольную пробу. Для этого в чистую стерильную микроцентрифужную пробирку вместимостью 1,5 см3 помещают 50 мм3 особо чистой воды по 4.30 и 400 мм3 буфера экстракции по 6.1.8. Дальнейшее приготовление и хранение отрицательной контрольной пробы - в соответствии с требованиями 6.2.2 - 6.2.6 настоящего стандарта <*>". --- <*> Отрицательную контрольную пробу по 6.2.1 подготавливают только при применении технологии FLASH (приложение Д). [Пункт 8.1](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003#p100186). Исключить слова: "или "Био-1" [23]". [Приложение Д](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003#p100211) изложить в новой редакции:
"Приложение Д
(обязательное)
**МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ**
**ИСТОЧНИКОВ (ГМИ) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ**
**ТЕХНОЛОГИИ FLASH** Д.1. Сущность метода Метод основан на технологии FLASH, то есть проведении полимеразной цепной реакции (ПЦР) со специфической гибридизацией флуоресцентномеченых зондов в процессе амплификации и последующей детекции продуктов амплификации при помощи ПЦР-детектора "Джин". Чувствительность метода - не менее 100 копий ДНК на реакционный объем. Д.2. Определения Д.2.1. ПЦР-детектор "Джин": специализированный флуориметр, предназначенный для регистрации результатов ПЦР при использовании комплектов реагентов, основанных на принципах флуоресцентной детекции. Д.3. Аппаратура, материалы и реактивы - в соответствии с разделом 4 настоящего стандарта со следующими дополнениями: Д.3.1. Компьютерная программа "Gene" для учета и интерпретации результатов, полученных при помощи ПЦР-детектора "Джин" [23]. Д.3.2. ПЦР-детектор "Джин" [24] или ПЦР-детектор "Джин-4" [25]. Д.3.3. Четыре комплекта реагентов для ПЦР-амплификации ДНК в микроцентрифужных пробирках для амплификации - "СКАН-35S", "СКАН-gus", "СКАН-nos" и "СКАН-npt" [26], каждый из которых включает: - 50 микроцентрифужных пробирок для амплификации, запечатанных парафином, содержащих по 20 мм3 смеси, включающей ПЦР-буфер, дезоксирибонуклеотидтрифосфаты, праймеры, флуоресцентномеченые зонды, внутренний контрольный образец ДНК; - 500 мм3 раствора Taq-полимеразы - одна микроцентрифужная пробирка; - 200 мм3 буферного раствора "ПЦР-буфер" - одна микроцентрифужная пробирка; - 1,0 см3 минерального масла - одна микроцентрифужная пробирка; - положительная контрольная проба ДНК, 150 мм3 - одна микроцентрифужная пробирка. Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, а также оборудования и реактивов с техническими характеристиками не хуже указанных в приложении Д и разделе 4 настоящего стандарта. Д.4. Отбор проб Отбор проб - в соответствии с требованиями раздела 5 настоящего стандарта. Д.5. Подготовка к проведению анализа Д.5.1. Приготовление растворов Приготовление растворов осуществляется в соответствии с 6.1 настоящего стандарта. Д.5.2. Приготовление пробы для анализа (выделение ДНК) Приготовление пробы для анализа (выделение ДНК) - в соответствии с требованиями 6.2 настоящего стандарта Д.6. Проведение анализа Д.6.1. Растворы ДНК, подготовленные в соответствии с Д.5 и 6.2, анализируют при помощи комплектов для амплификации ДНК: "СКАН-35S", "СКАН-gus", "СКАН-nos" и "СКАН-npt" по Д.3.3. Д.6.2. Маркируют микроцентрифужные пробирки с запечатанной парафином смесью для амплификации по Д.3.3 в количестве, соответствующем количеству анализируемых растворов ДНК. Дополнительно маркируют: - две микроцентрифужные пробирки для ПЦР-амплификации ДНК маркируют как "К+" (положительный контроль); - две микроцентрифужные пробирки для ПЦР-амплификации ДНК маркируют как "К-" (отрицательный контроль); - две микроцентрифужные пробирки для ПЦР-амплификации ДНК маркируют как "ФОН". Д.6.3. В промаркированные микроцентрифужные пробирки по Д.6.2, за исключением пробирок, промаркированных как "ФОН", не повреждая слой парафина, микродозатором по 4.12 настоящего стандарта вносят по 10 мм3 раствора Taq-полимеразы по Д.3.3, тщательно перемешанного на аппарате для встряхивания по 4.10 настоящего стандарта. В микроцентрифужные пробирки, промаркированные как "ФОН" по Д.6.2, микродозатором вносят по 10 мм3 ПЦР-буфера по Д.3.3. Д.6.4. Во все микроцентрифужные пробирки по Д.6.3 микродозатором вносят по 20 мм3 минерального масла по Д.3.3, плотно закрывают пробирки крышками. Д.6.5. В микроцентрифужные пробирки по Д.6.4, за исключением пробирок, промаркированных как "ФОН", "К-" и "К+", не повреждая слой парафина, микродозатором вносят по 5,0 мм3 анализируемого раствора ДНК по 6.2 настоящего стандарта. Д.6.6. В микроцентрифужные пробирки, промаркированные как "ФОН" и "К-" по Д.6.4, не повреждая слой парафина, микродозатором вносят по 5,0 мм3 отрицательной контрольной пробы по 6.2 настоящего стандарта. Д.6.7. В микроцентрифужные пробирки по Д.6.4, промаркированные как "К+", не повреждая слой парафина, микродозатором вносят по 5,0 мм3 положительной контрольной пробы из состава соответствующего комплекта реагентов для амплификации ДНК по Д.3.3. Д.6.8. Все микроцентрифужные пробирки, подготовленные по Д.6.5 - Д.6.7, плотно закрывают крышками и центрифугируют на настольной микроцентрифуге по 4.8 настоящего стандарта при частоте вращения $1000\text{мин}^{- 1}$ в течение 5 - 10 с и сразу же используют для проведения анализа. Д.6.9. Все микроцентрифужные пробирки по Д.6.8 помещают в амплификатор ДНК по 4.3 настоящего стандарта и проводят ПЦР по программе, указанной в таблице Д.1. При запуске программы указывают объем реакционной смеси, равный 35 мм3. Таблица Д.1 Программа проведения ПЦР
Шаг программыТемператураВремя инкубацииЧисло циклов
194 °C1 мин1
294 °C 67 °C5 с 15 с5
394 °C 67 °C1 с 15 с40
410 °CРежим хранения
Д.6.10. Все определения должен проводить квалифицированный, специально обученный персонал в соответствии с требованиями [22]. При проведении анализа каждую микроцентрифужную пробирку открывают только перед отбором или внесением анализируемой пробы, а по окончании манипуляции - сразу же закрывают. Запрещается открывать одновременно несколько микроцентрифужных пробирок с анализируемыми пробами и оставлять их открытыми длительное время. Каждую анализируемую пробу отбирают микродозатором с новым стерильным наконечником с фильтром по 4.14 настоящего стандарта. Д.7. Обработка результатов анализа Д.7.1. После прохождения реакции амплификации все микроцентрифужные пробирки по Д.6.9 помещают в ПЦР-детектор "Джин" по Д.3.2 для проведения регистрации результатов ПЦР. В соответствии с руководством по эксплуатации к ПЦР-детектору "Джин" проводят регистрацию результатов ПЦР (пороговые значения для продукта амплификации и для внутреннего контрольного образца указаны в инструкции к комплектам реагентов для амплификации ДНК). Д.7.2. Учет и интерпретация результатов Д.7.2.1. Учет и интерпретация результатов анализа осуществляется автоматически при помощи компьютерной программы "Gene" [23]. Результаты анализа отображаются на экране компьютера в виде таблицы (рисунок Д.1). ![рис. 1](https://i.bukva.ai/3rbxVZoy/img_0.png) Рисунок Д.1. Пример результатов анализа Д.7.2.2. За положительный результат принимают отображение символа "+" на красном фоне напротив обозначения анализируемой пробы в графе "Результат" таблицы. Положительный результат фиксируется в микроцентрифужных пробирках комплектов реагентов "СКАН-35S", "СКАН-nos", "СКАН-gus", "СКАН-npt" для анализируемых проб, содержащих нуклеотидные последовательности, характерные для промотора 35S, промотора nos, гена gus, гена nptII соответственно. Д.7.2.3. За отрицательный результат принимают отображение символа "-" на зеленом фоне напротив обозначения анализируемой пробы в графе "Результат" таблицы. Отрицательный результат фиксируется в микроцентрифужных пробирках комплектов реагентов "СКАН-35S", "СКАН-nos", "СКАН-gus", "СКАН-npt" для проб, не содержащих нуклеотидные последовательности, характерные для промотора 35S, промотора nos, гена gus, гена nptII соответственно. *Пример* оформления протокола испытания - в соответствии с приложением Г настоящего стандарта. Д.7.2.4. За недостоверный результат принимают отображение символа "нд" на оранжевом фоне или символа "?" на желтом фоне (на рисунке Д.1 желтый фон отсутствует) напротив обозначения анализируемой пробы в графе "Результат" таблицы. Это может быть вызвано несоблюдением условий анализа или несоблюдением условий выделения ДНК. В случае получения недостоверного результата определение повторяют. Д.7.2.5. В случае отображения символа "+" на красном фоне напротив обозначения отрицательной контрольной пробы в графе "Результат" таблицы результаты анализа считают ложноположительными. Причиной может быть загрязнение ГМИ реактивов и/или оборудования. В этом случае определение повторяют с заменой реактивов на свежеприготовленные. Д.8. Требования безопасности При проведении всех работ необходимо соблюдать требования техники безопасности в соответствии с разделом 9 настоящего стандарта". [Стандарт](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52174-2003) дополнить приложением - Е:
"Приложение Е
(справочное)
**БИБЛИОГРАФИЯ**
1. Центр биологических Компьютерная программа "Imageware" для микрочипов ИМБ РАН анализа изображений, полученных при помощи "Чипдетектора-03" 2. ТУ 9443-001-02699501-2003 Комплекс аппаратно-программный для анализа флуоресценции биологических микрочипов "Чипдетектор-03" 3. ТУ 9452-001-4648062-98 Амплификатор "Терцик МС-2" 4. ТУ 42-619-61 Термостат суховоздушный ТВР-25 5. Корпорация "Эппендорф", Микроцентрифуга настольная 5415С, кат. N 5425 000.014 -1 13000 мин 6. Корпорация "Хеликон", кат. Мешалка магнитная с подогревом N MSH-300 7. Корпорация "Хеликон", кат. Аппарат для встряхивания (центрифуга - N FV-2400 вортекс) 8. Корпорация "Хеликон", кат. Штативы под микроцентрифужные пробирки N RP-30 и RP-80 9. Корпорация "Хеликон", кат. Наконечники с фильтром для микропипеток N FA 104; FA 108; FA 111; FA 113N 10. ТУ 6-09-11-1721-83 Этилендиаминтетрауксусной кислоты натриевая соль дигидрат 11. ТУ 6-09-4292-76 Трис(оксиметил)аминометан [NH C(CH OH) ] 2 2 3 12. Корпорация "Сигма Алдрич" Додецилсульфат натрия (SDS) ("Sigma"), кат. N L-6026 13. Корпорация "Сигма Алдрич" Фермент Taq-полимераза 5 Ед.акт./мм3 ("Sigma"), кат. N Д 1806 14. Корпорация "Хеликон", Гуанидин тиоцианат [CH N -HSCN] кат. N Am-038-0.5 3 3 15. Корпорация "Хеликон", N-[2-оксиэтил]пиперазин-N'-[2- кат. N Am-0485-01 этансульфоновая кислота] (HEPES) [C H N J SNa] 8 17 2 4 16. Корпорация "Хеликон", Раствор смеси дАТФ, дГТФ, дТТФ, дЦТФ, по кат. N Н-4044-0.4 25 мМ каждого 17. ИФР РАН Раствор заведомо трансгенной ДНК около 100 6 нг/мм3 или 10 копий/мм3 18. ИФР РАН Раствор заведомо нетрансгенной ДНК около 6 100 нг/мм3 или 10 копий/мм3 19. ТУ 46-22-603-75 Баня водяная с электрическим или огневым подогревом 20. Центр биологических Раствор водный праймеров "ПР-1" микрочипов ИМБ РАН 21. Центр биологических Микрочипы гелевые с иммобилизованными микрочипов ИМБ РАН олигонуклеотидами 22. Методические рекомендации Государственный Комитет Санэпиднадзора по проведению работ в Российской Федерации; N 06-19/52-17 от диагностических лабораториях, 15.06.95 использующих метод полимеразной цепной реакции. Основные положения 23. ООО "НПО ДНК-Технология" Компьютерная программа "Gene" для учета и интерпретации результатов, полученных при помощи ПЦР-детектора "Джин" 24. ТУ 9443-005-46482062-2003 ПЦР-детектор "Джин" 25. ТУ 9443-001-96301278-2007 ПЦР-детектор "Джин-4" 26. ООО "БИОМАСТЕР-ПРОМ" Комплекты реагентов для ПЦР-амплификации ДНК "СКАН-35S", "СКАН-gus", "СКАН-nos" и "СКАН-npt" ------------------------------------------------------------------