Изменение № 1 ГОСТ 34108-2017 «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение содержания микотоксинов прямым твердофазным конкурентным иммуноферментным методом»
(принято Протоколом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации от 30.06.2021 № 141-П)
Примечание
Документ введен в действие на территории Российской Федерации с 01.01.2022 Приказом Росстандарта от 01.09.2021 № 908-ст.
Принято Протоколом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации от 30 июня 2021 г. № 141-П
ИЗМЕНЕНИЕ N 1 ГОСТ 34108-2017 «КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МИКОТОКСИНОВ ПРЯМЫМ ТВЕРДОФАЗНЫМ КОНКУРЕНТНЫМ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ»
Принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 141-П от 30.06.2021)
Зарегистрировано Бюро по стандартам МГС № 15641
За принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих государств: AM, BY, KG, KZ, RU, TJ, UZ [коды альфа-2 по МК (ИСО 3166) 004]
Дату введения в действие настоящего изменения устанавливают указанные национальные органы по стандартизации <*>
<*> Дата введения в действие на территории Российской Федерации — 2022-01-01.
Содержание. Наименование приложения А дополнить словами: «для тест-системы № 1 и тест-системы № 2».
Раздел 2. ГОСТ 6709 дополнить знаком сноски — <*>;
дополнить сноской <*>:
«--------------------------------»
<*> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018«;»
ГОСТ 6995. Наименование перед словами «Метанол-яд» дополнить словом: «Реактивы.»;
ГОСТ 29169. Дополнить обозначением: «(ИСО 648-77)»;
заменить ссылки: «ГОСТ ИСО 5725-1 <>» на «ГОСТ ИСО 5725-1-2003 <>»; «ГОСТ ИСО 5725-6 <>» на «ГОСТ ИСО 5725-6-2003 <>».
Раздел 4 изложить в новой редакции:
«Сущность метода заключается в извлечении микотоксинов из проб экстрагентом, проведении в ячейках планшета реакции, в результате которой образуются окрашенные комплексы, добавлении останавливающего реактива, измерении значений оптической плотности и вычислении результатов.»
Для определения микотоксинов используют один из двух вариантов тест-систем.
Метод с использованием тест-системы № 1 с двумя планшетами предусматривает смешивание конъюгата и экстрактов проб или градуировочных растворов в первом планшете и проведение реакции во втором планшете с нанесенными (иммобилизованными) на поверхность ячеек планшета специфичными антителами (далее — АТ), после инкубации и отмывки носителя от несвязавшихся компонентов вносят субстрат, в результате реакции с которым образуются окрашенные комплексы.
Метод с использованием тест-системы № 2 с одним планшетом предусматривает дозирование экстрактов проб или градуировочных растворов, конъюгата и специфичных АТ в лунки планшета с иммобилизованными неспецифичными АТ. После инкубации и отмывки носителя от несвязавшихся компонентов вносят субстрат, в результате реакции с которым образуются окрашенные комплексы».
Раздел 10. Пункт 10.3. Первый абзац. Исключить слова: «, в состав которой входят:»;
дополнить словами (после первого абзаца): «Тест-система № 1 включает:»;
примечание. Заменить слова: «с приложением А» на «с А.2 — А.7 (см. приложение А)»;
дополнить абзацем и примечанием (после примечания):
- планшет разборный с микролунками с иммобилизованными неспецифичными АТ;
- флакон с раствором конъюгата;
- флакон с раствором специфичных АТ;
- флакон с останавливающим раствором;
- флакон с раствором субстрата;
- флакон с разбавителем проб;
- флакон с промывочным раствором;
- градуировочные растворы, содержащие микотоксины разной концентрации для градуировки тест-системы № 2.
Примечание - Допускается вместо градуировочных растворов, входящих в состав тест-системы, использовать градуировочные растворы микотоксинов, приготовленные в соответствии с А.9 — А.14 (см. приложение А) из стандартных образцов:
- раствор афлатоксина B1 массовой концентрации 3 мкг/см3;
- раствор дезоксиниваленола массовой концентрации 200 мкг/см3;
- раствор зеараленона массовой концентрации 100 мкг/см3;
- раствор охратоксина A массовой концентрации 50 мкг/см3;
- раствор T-2 токсина массовой концентрации 100 мкг/см3;
- раствор фумонизина массовой концентрации 500 мкг/см3»;
дополнить примечанием (после последнего абзаца):
«Примечание — Допускается использование тест-систем различных производителей, позволяющих обеспечить необходимую точность результатов определений согласно разделу 15. Применять рекомендованные ими способы подготовки проб и постановки иммуноферментного анализа следует в соответствии с инструкцией изготовителя».
Пункт 10.9 после слов «переменного объема 30 — 300 мм3» дополнить словами: «или шаговая пипетка (далее — степпер) с шагом дозирования 50, 100 мм3».
Пункт 10.23 изложить в новой редакции:
«10.23 Виалы вместимостью 5 — 10 см3 или пробирки типа Эппендорф для разбавления экстрактов».
Раздел 11. Подраздел 11.3. Восьмой абзац после слов «пипеточный дозатор» дополнить словами: «или степпер».
Пункт 11.4.2. Наименование. Исключить слова: «для определения содержания ДОН»;
дополнить абзацем (после наименования): «Приготовление промывочного раствора для определения содержания ДОН для тест-системы № 1»;
дополнить абзацами (после последнего):
«Приготовление промывочного раствора для определения содержания микотоксинов для тест-системы № 2»
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 100 см3 концентрированного промывочного раствора из комплекта реактивов к тест-системе. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
Раствор хранят при комнатной температуре не более одной недели или при температуре от 2 °C до 8 °C не более 1 мес».
Пункт 11.4.3. Первый абзац изложить в новой редакции:
«Для построения градуировочной характеристики каждого микотоксина используют входящие в соответствующий набор тест-системы градуировочные растворы различной концентрации: один раствор, не содержащий микотоксин (далее — нулевая точка), и четыре градуировочных раствора различной концентрации микотоксина для тест-системы № 1 или пять градуировочных растворов для тест-системы № 2. Содержание микотоксинов в градуировочных растворах тест-системы № 1 приведено в таблице А.1, тест-системы № 2 — в таблице А.2 (см. приложение А)»;
третий абзац изложить в новой редакции:
«Допускается готовить градуировочные растворы из стандартных образцов микотоксинов для тест-системы № 1 в соответствии с А.2 — А.7, для тест-системы № 2 — в соответствии с А.9 — А.14 (см. приложение А)».
Раздел 12. Подраздел 12.1 дополнить абзацем (после наименования):
первый абзац после слов «(см. таблицу 1)» дополнить словами: «При использовании тест-системы № 2 для определения охратоксина A к пробе добавляют 50 см3 экстрагента»;
после слова «Закрывают» дополнить словом: «колбу»;
примечания. Примечание 1. Исключить соотношение: «1 : 5»;
дополнить примечанием 4:
«4 Допускается вместо фильтрации через бумажный фильтр проводить центрифугирование при 3000 g в течение 5 мин»;
таблицу 1 изложить в новой редакции:
дополнить абзацем (после таблицы 1):
«Разбавление экстрактов для тест-системы № 1»;
дополнить абзацами (после последнего):
«Далее проводят градуировку и анализ экстрактов проб по 12.2.»
Разбавление экстрактов для тест-системы № 2
Фильтраты для определения содержания разбавляют в соответствии с таблицей 1 и далее используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2.
Разбавление экстракта для определения содержания афлатоксина B1, суммы афлатоксинов, охратоксина A, зеараленона разбавителем проб проводят следующим образом: в пробирку типа Эппендорф дозатором помещают 500 мм3 разбавителя проб, вносят 500 мм3 фильтрата, перемешивают.
Фильтрат для определения содержания ДОН, суммы фумонизинов разбавляют экстрагентом в соответствии с таблицей 1 и далее используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2.
Разбавление экстракта для определения содержания ДОН проводят следующим образом: в пробирку типа Эппендорф дозатором помещают 400 мм3 разбавителя проб, вносят 100 мм3 фильтрата, перемешивают.
Разбавление экстракта для определения содержания суммы фумонизинов проводят следующим образом: в пробирку типа Эппендорф дозатором помещают 700 мм3 разбавителя проб, вносят 50 мм3 фильтрата, перемешивают».
Подраздел 12.2 дополнить абзацем (после наименования):
«Проведение градуировки и анализа экстрактов проб для тест-системы № 1»;
первый абзац после слов «для смешивания реактивов» дополнить словами: «(схема расположения лунок приведена в приложении Б)»;
третий абзац. Заменить слова: «В остальные лунки первого планшета» на «Затем»;
таблицу 2 изложить в новой редакции:
восьмой, девятый абзацы. После слов «восьмиканальный дозатор» дополнить словами: «или степпер»;
дополнить абзацами (после последнего примечания):
«Далее проводят построение и оценку градуировочной характеристики по 12.3.»
Проведение градуировки и анализа экстрактов проб для тест-системы № 2
Анализ градуировочных растворов и экстрактов проб проводят одновременно. В рамку планшета помещают необходимое количество бесцветных стрипов с неспецифичными антителами.
Отмеряют необходимое количество раствора конъюгата и специфичных АТ (примерно 70 мм3 на лунку или 560 мм3 на стрип) и помещают в отдельные емкости (или в специальные кюветы при использовании восьмиканального пипеточного дозатора). В лунки планшета вносят по 100 мм3 каждого градуировочного раствора или экстракта пробы (по 50 мм3 для охратоксина и суммы афлатоксинов), используя для каждого раствора новый наконечник, добавляют с помощью степпера 50 мм3 конъюгата, 50 мм3 специфичных АТ.
Примечание - Следует строго соблюдать последовательность внесения реактивов.
Удаляют содержимое микролунок, промывают лунки промывочным раствором (см. таблицу 2). Процедуру промывки планшета рекомендуется проводить с помощью устройства для отмывки планшетов, задавая следующие параметры программы: количество циклов промывки — от трех до четырех, объем заливаемого промывочного раствора — 300 мм3. Допускается ручная промывка с использованием многоканального дозатора. При этом в лунки планшета вносят 4 раза по 300 мм3 промывочного раствора с последующим резким переворачиванием и встряхиванием планшета.
Планшет переворачивают лунками вниз на фильтровальную бумагу и окончательно удаляют из лунок остатки промывочного раствора легким постукиванием.
Отмеряют необходимое количество раствора субстрата из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 120 мм3 на лунку или 1 см3 на стрип) и помещают в отдельную емкость. Используя восьмиканальный дозатор или степпер, вносят по 100 мм3 раствора субстрата в каждую лунку. Инкубируют в течение времени, указанного в таблице 2.
Отмеряют необходимое количество останавливающего раствора из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 120 мм3 на лунку или 1 см3 на стрип) и помещают в отдельную емкость. Используя восьмиканальный дозатор или степпер, вносят по 100 мм3 останавливающего раствора в каждую лунку. Цвет раствора изменяется с голубого на желтый.
Измеряют оптическую плотность Di содержимого лунок при длине волны, указанной в таблице 2. Значения оптической плотности записывают с точностью до второго десятичного знака и заносят в форму для записи (см. приложение В).
Примечание - Перед фотометрией нужно избавиться от воздушных пузырьков в лунке, поскольку они могут повлиять на результат анализа».
Подраздел 12.3. Четвертый абзац. Заменить слово: «Вычисляют» на «Для тест-системы № 1 вычисляют»;
рисунок 1. Наименование дополнить словами: «для тест-системы № 1»;
формулы (3) и (4). Пояснения символов Di и Ci. Заменить слова: «для i-го раствора» на «для i-го градуировочного раствора»;
таблицу 3 изложить в новой редакции:
| Наименование микотоксина | Норматив контроля | ||
| g1 | g2 | ||
| тест-система № 1 | тест-система № 2 | ||
| Афлатоксин B1 | 10 | 2 | - |
| Сумма афлатоксинов | 10 | 2 | - |
| ДОН | 12 | 2 | - |
| Зеараленон | 10 | 2 | - |
| Охратоксин A | 18 | 2 | 97 |
| T-2 токсин | 11 | 2 | - |
| Сумма фумонизинов | 10 | 2 | 95 |
дополнить абзацами (после таблицы 3):
«Для тест-системы № 2 определяют процент связывания микотоксина для каждого градуировочного раствора относительно нулевой точки по формуле (1). Полученные значения являются координатами точек градуировочной характеристики по оси Y. Значения массовой концентрации (содержание) микотоксина Ci каждого градуировочного раствора являются координатами точек градуировочной характеристики по оси X.»
По значениям Xi и Yi методом наименьших квадратов строят градуировочную характеристику, которая описывается уравнением
Y = \frac{D_{\text{гр}}}{D_{0}} \cdot 100 = h + \frac{a - h}{1 + (\frac{C_{i}}{q})b} , (5а)
где Dгр — измеренное значение оптической плотности для i-го градуировочного раствора;
D0 — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки;
Ci — массовая концентрация (содержание) микотоксина i-го градуировочного раствора, мг/дм3 (мг/кг);
a, b, h, q — коэффициенты градуировочного уравнения.
Примечание - Коэффициенты градуировочного уравнения (5а) вычисляют с применением метода наименьших квадратов. Для поиска решения нелинейной задачи может использоваться, например, метод обобщенного приведенного градиента или симплекс-метод. Для автоматизации расчетов коэффициентов градуировочного уравнения допускается использовать надстройку «Поиск решения» в программе Microsoft Excel.
Пример градуировочной характеристики, описываемой уравнением (5а), представлен на рисунке 2.
Рисунок 2 — Пример градуировочной характеристики для тест-системы № 2
Для контроля стабильности градуировочной характеристики используют i-й градуировочный раствор. По градуировочной характеристике вычисляют массовую концентрацию (содержание) микотоксина Ci, изм, мг/дм3 (мг/кг), в i-м градуировочном растворе по формуле
C_{i,\text{изм}} = q \cdot (\frac{a - h}{\frac{D_{i}}{D_{0}} \cdot 100 - h} - 1)^{\frac{1}{b}} , (5б)
где Di — измеренное значение оптической плотности для раствора с массовой концентрацией (содержанием) микотоксина Ci.
Градуировочную характеристику признают стабильной, если выполняется условие (5)».
Раздел 13. Пункт 13.1. Заменить слова: «13.1 Если концентрация градуировочных растворов» на
«13.1 Обработка результатов для тест-системы № 1»
Если концентрация градуировочных растворов»;
формула (8). Пояснение символа Cпр. Заменить слова: «по формуле (6)» на «по формуле (7) или (8б)»;
дополнить подразделом 13.3 и пунктом 13.4:
«13.3 Обработка результатов для тест-системы № 2»
Если концентрация градуировочных растворов микотоксинов тест-системы пересчитана на массу навески с учетом всех разведений, то содержание микотоксина X1, мг/кг (млн-1), в пробе вычисляют по формуле
X_{1} = q \cdot (\frac{a - h}{\frac{D_{\text{пр}}}{D_{0}} \cdot 100 - h} - 1)^{\frac{1}{b}} , (8а)
где Dпр — измеренное значение оптической плотности для экстракта пробы;
D0 — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки;
a, b, h, q — коэффициенты градуировочного уравнения.
13.4 Вычисляют массовую концентрацию микотоксина в экстракте пробы Cпр, мг/дм3, по формуле
C_{\text{пр}} = q \cdot (\frac{a - h}{\frac{D_{\text{пр}}}{D_{0}} \cdot 100 - h} - 1)^{\frac{1}{b}} , (8б)
где Dпр — измеренное значение оптической плотности для экстракта пробы;
D0 — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки;
a, b, h, q — коэффициенты градуировочного уравнения.
Если массовая концентрация микотоксина в экстракте превышает верхнюю границу диапазона массовых концентраций градуировочных растворов, то допускается дополнительное разбавление экстракта (f2) таким образом, чтобы концентрация микотоксина соответствовала диапазону массовых концентраций градуировочных растворов.
Содержание микотоксина в пробе X2, мг/кг (млн-1), вычисляют по формуле (8).
Обработка результатов может проводиться автоматически с помощью программного обеспечения».
Раздел 14. Второй абзац. Заменить слова: «по формулам (7) или (8)» на «по формуле (6) или (8), или (8а)»;
формула (9). Пояснение символа \overline{X} . Заменить слова: «по формуле „(6) или (8)“ на „по формуле (6) или (8), или (8а)“;»
заменить единицу измерения: «%» на «мг/кг (млн-1)»;
таблица 4. Графа «Наименование микотоксина». Заменить наименование: «T-2» на «T-2 токсин».
Раздел 15. Подраздел 15.1. Второй абзац. Заменить ссылку: «ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.14)» на «ГОСТ ИСО 5725-1-2003 (подраздел 3.14)»;
формула (10). Пояснение символа \overline{X} . Заменить слова: «по формуле (6) или (8)» на «по формуле (6) или (8), или (8а)»;
последний абзац. Заменить ссылку: «ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5)» на «ГОСТ ИСО 5725-6-2003 (раздел 5)».
Приложение А. Наименование дополнить словами: «для тест-системы № 1 и тест-системы № 2»;
пункт А.1. Первый абзац после слов «градуировочной характеристики» дополнить словами: «для тест-системы № 1»;
заменить слова: «(см. таблицу 3)» на «(см. таблицу 2)»;
дополнить подразделами А.8 — А.14:
«А.8 Для построения градуировочной характеристики для тест-системы № 2 используют разбавляющий раствор (см. таблицу 2) в качестве нулевой точки и пять градуировочных растворов, значения массовой концентрации микотоксинов в которых приведены в таблице А.2. Порядок приготовления градуировочных растворов приведен в А.9 — А.14.»
Действительное значение массовой концентрации микотоксина Ciгр, мг/дм3, в i-м градуировочном растворе вычисляют по формуле
C_{i\text{гр}} = \frac{C_{0} \cdot V_{0}}{V_{i}} , (А.3)
где C0 — действительное значение массовой концентрации микотоксина в растворе, взятом для разбавления, мг/дм3;
V0 — объем раствора микотоксина, взятый для разбавления, см3;
Vi — объем приготовленного градуировочного раствора, см3.
А.9 Приготовление градуировочных растворов афлатоксина B1
А.9.1 Приготовление разбавителя стандартов
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 35 см3 метанола, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем проб.
А.9.2 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B1 № 5
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 40 см3 разбавителя стандартов (см. А.9.1), вносят 80 мм3 раствора афлатоксина B1 массовой концентрации 3 мкг/см3. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации афлатоксина B1 — 0,0024 мг/дм3.
А.9.3 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B1 № 4
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 12,5 см3 градуировочного раствора афлатоксина B1 № 5 (см. А.9.2), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.9.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации афлатоксина B1 — 0,0012 мг/дм3.
А.9.4 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B1 № 3
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 12,5 см3 градуировочного раствора афлатоксина B1 № 4 (см. А.9.3), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.9.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации афлатоксина B1 — 0,0006 мг/дм3.
А.9.5 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B1 № 2
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 12,5 см3 градуировочного раствора афлатоксина B1 № 3 (см. А.9.4), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.9.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации афлатоксина B1 — 0,0003 мг/дм3.
А.9.6 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B1 № 1
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 12,5 см3 градуировочного раствора афлатоксина B1 № 2 (см. А.9.5), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.9.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации афлатоксина B1 — 0,00015 мг/дм3.
А.10 Приготовление градуировочных растворов ДОН
А.10.1 Приготовление основного раствора ДОН массовой концентрации 2 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 40 см3 разбавителя стандартов из набора реактивов для тест-системы № 2, вносят 1 см3 раствора ДОН массовой концентрации 200 мкг/см3. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
А.10.2 Приготовление градуировочного раствора ДОН № 5
В мерную колбу вместимостью 25 см3 наливают около 10 см3 разбавителя стандартов, вносят 2,5 см3 основного раствора ДОН (см. А.10.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации ДОН — 0,2 мг/дм3.
А.10.3 Приготовление градуировочного раствора ДОН № 4
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора ДОН № 5 (см. А.10.2), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации ДОН — 0,08 мг/дм3.
А.10.4 Приготовление градуировочного раствора ДОН № 3
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 12,5 см3 градуировочного раствора ДОН № 4 (см. А.10.3), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации ДОН — 0,04 мг/дм3.
А.10.5 Приготовление градуировочного раствора ДОН № 2
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 12,5 см3 градуировочного раствора ДОН № 3 (см. А.10.4), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации ДОН — 0,02 мг/дм3.
А.10.6 Приготовление градуировочного раствора ДОН № 1
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора ДОН № 2 (см. А.10.5), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации ДОН — 0,008 мг/дм3.
А.11 Приготовление основного и градуировочных растворов зеараленона
А.11.1 Приготовление разбавителя стандартов
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 35 см3 метанола, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем проб.
А.11.2 Приготовление основного раствора зеараленона массовой концентрации 1 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 40 см3 разбавителя стандартов (см. А.11.1), вносят 1 см3 раствора зеараленона массовой концентрации 100 мг/см3. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
А.11.3 Приготовление градуировочного раствора зеараленона № 5
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 40 см3 разбавителя стандартов (см. А.11.1) вносят 5 см3 основного раствора зеараленона (см. А.11.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации зеараленона — 0,05 мг/дм3.
А.11.4 Приготовление градуировочного раствора зеараленона № 4
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора зеараленона № 5 (см. А.11.3), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.11.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации зеараленона — 0,02 мг/дм3.
А.11.5 Приготовление градуировочного раствора зеараленона № 3
В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 3,75 см3 градуировочного раствора зеараленона № 4 (см. А.11.4), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.11.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации зеараленона — 0,0075 мг/дм3.
А.11.6 Приготовление градуировочного раствора зеараленона № 2
В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 3,33 см3 градуировочного раствора зеараленона № 3 (см. А.11.5), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.11.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации зеараленона — 0,0025 мг/дм3.
А.11.7 Приготовление градуировочного раствора зеараленона № 1
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора зеараленона № 2 (см. А.11.6), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.11.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации зеараленона — 0,001 мг/дм3.
А.12 Приготовление основного и градуировочных растворов охратоксина A
А.12.1 Приготовление разбавителя стандартов
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 35 см3 метанола, объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой.
А.12.2 Приготовление основного раствора охратоксина A массовой концентрации 0,5 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 40 см3 разбавителя стандартов (см. А.12.1), вносят 1 см3 раствора охратоксина A массовой концентрации 50 мкг/см3. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
А.12.3 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A № 5
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают около 40 см3 разбавителя стандартов (см. А.12.1), вносят 2 см3 основного раствора охратоксина A (см. А.12.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации охратоксина A — 0,01 мг/дм3.
А.12.4 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A № 4
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора охратоксина A № 5 (см. А.12.3), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.12.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации охратоксина A — 0,004 мг/дм3.
А.12.5 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A № 3
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 12,5 см3 градуировочного раствора охратоксина A № 4 (см. А.12.4), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.12.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации охратоксина A — 0,002 мг/дм3.
А.12.6 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A № 2
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора охратоксина A № 3 (см. А.12.5), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.12.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации охратоксина A — 0,001 мг/дм3.
А.12.7 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A № 1
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора охратоксина A № 2 (см. А.12.6), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.12.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации охратоксина A — 0,0004 мг/дм3.
А.13 Приготовление основного и градуировочных растворов фумонизина B1
А.13.1 Приготовление разбавителя стандартов
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 5 см3 метанола, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем проб.
А.13.2 Приготовление основного раствора фумонизина B1 массовой концентрации 0,5 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 40 см3 разбавителя стандартов (см. А.13.1), вносят 1 см3 раствора фумонизина B1 массовой концентрации 50 мкг/см3. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
А.13.3 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B1 № 5
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 40 см3 разбавителя стандартов (см. А.13.1), вносят 13,34 см3 основного раствора фумонизина B1 (см. А.13.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации фумонизина B1 — 0,0667 мг/дм3.
А.13.4 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B1 № 4
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят около 30 см3 градуировочного раствора фумонизина B1 № 5 (см. А.13.3), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.13.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации фумонизина B1 — 0,02 мг/дм3.
А.13.5 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B1 № 3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 33,3 см3 градуировочного раствора фумонизина B1 № 4 (см. А.13.4), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.13.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации фумонизина B1 — 0,0067 мг/дм3.
А.13.6 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B1 № 2
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят около 30 см3 градуировочного раствора фумонизина B1 № 3 (см. А.13.5), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.13.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации фумонизина B1 — 0,002 мг/дм3.
А.13.7 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B1 № 1
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят около 30 см3 градуировочного раствора фумонизина B1 № 2 (см. А.13.6), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов (см. А.13.1) и перемешивают.
Значение массовой концентрации фумонизина B1 — 0,00067 мг/дм3.
А.14 Приготовление основного и градуировочных растворов T-2 токсина
А.14.1 Приготовление разбавителя стандартов
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 метанола, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем проб.
А.14.2 Приготовление основного раствора T-2 токсина массовой концентрации 1 мкг/см3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 40 см3 разбавителя стандартов (см. А.14.1), вносят 1 см3 раствора T-2 токсина массовой концентрации 100 мкг/см3. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
А.14.3 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина № 5
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают около 10 см3 разбавителя стандартов (см. А.14.1), вносят 5 см3 основного раствора T-2 токсина (см. А.14.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации T-2 токсина — 0,05 мг/дм3.
А.14.4 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина № 4
В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят 12,5 см3 градуировочного раствора T-2 токсина № 5 (см. А.14.3), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации T-2 токсина — 0,025 мг/дм3.
А.14.5 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина № 3
В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят 10 см3 градуировочного раствора T-2 токсина № 4 (см. А.14.4), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации T-2 токсина — 0,01 мг/дм3.
А.14.6 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина № 2
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 25 см3 градуировочного раствора T-2 токсина № 3 (см. А.14.5), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации T-2 токсина — 0,0025 мг/дм3.
А.14.7 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина № 1
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 20 см3 градуировочного раствора T-2 токсина № 2 (см. А.14.6), объем раствора в колбе доводят до метки разбавителем стандартов и перемешивают.
Значение массовой концентрации T-2 токсина — 0,0005 мг/дм3».