ФС.3.4.0015.22. Фармакопейная статья. Алоэ древовидного листьев сок + Календулы лекарственной цветков экстракт жидкий + Левоментол + Ромашки аптечной цветков экстракт жидкий + Эвкалипта листьев масло эфирное, линимент
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 11.04.2022 № 246)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 11.04.2022 № 246 данный документ введен в действие с 01.04.2022.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Настоящая фармакопейная статья распространяется на лекарственный препарат Алоэ древовидного листьев сок + Календулы лекарственной цветков экстракт жидкий + Левоментол + Ромашки аптечной цветков экстракт жидкий + Эвкалипта листьев масло эфирное, линимент. Препарат должен соответствовать требованиям ОФС «Мази» и ниже приведенным требованиям.
Содержит не менее 0,07% суммы флавоноидов в пересчете на рутин; не менее 0,10% суммы дубильных веществ в пересчете на танин.
Описание. Однородная густая масса светло-коричневого цвета с характерным запахом.
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
Подвижная фаза (ПФ). Муравьиная кислота безводная — вода — этилацетат (10:10:80).
Испытуемый раствор. 25 мл раствора А, полученного для количественного определения, выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл спирта 50%.
Раствор сравнения. Около 1 мг стандартного образца (СО) кофейной кислоты, 1 мг СО хлорогеновой кислоты и 2,5 мг СО рутина растворяют в 10,0 мл спирта 96% и перемешивают.
Срок годности раствора 1 мес при хранении в прохладном, защищенном от света месте.
Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1% в спирте 96%.
Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5%.
На линию старта хроматографической пластинки в виде полос длиной 10 мм и шириной не более 2 мм наносят 80 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора сравнения. Пластинку с нанесенными пробами сушат до удаления следов растворителей, затем помещают в хроматографическую камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч ПФ, и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры и сушат до удаления следов растворителей. Хроматограмму обрабатывают реактивом для детектирования 1, затем реактивом для детектирования 2, выдерживают при температуре 100 — 105 °C в течение 10 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.
На хроматограмме раствора сравнения должны обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желтого или коричневато-желтого цвета (СО рутин), две зоны адсорбции с флуоресценцией голубого цвета выше зоны СО рутина (по возрастанию: хлорогеновая кислота, кофейная кислота).
На хроматограмме испытуемого препарата должны обнаруживаться: зона адсорбции с флуоресценцией желтого или коричневато-желтого цвета на уровне зоны адсорбции СО рутина, две зоны адсорбции с флуоресценцией голубого цвета на уровне зон адсорбции СО хлорогеновой кислоты и СО кофейной кислоты; допускается обнаружение других зон адсорбции.
1. Качественная реакция. 5 г препарата помещают в колбу, прибавляют 30 мл воды, 10 мл хлористоводородной кислоты разведенной 10%, перемешивают и нагревают на водяной бане в течение 2 ч. После охлаждения смесь переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл и экстрагируют хлороформом трижды порциями по 20 мл, каждый раз перемешивая в течение 1 — 2 мин. После разделения фаз хлороформные извлечения сливают в одну колбу. Объединенные хлороформные извлечения фильтруют через бумажный фильтр.
10 мл хлороформного извлечения помещают в пробирку и осторожно по стенке приливают 5 мл 0,5 М раствора натрия гидроксида; на границе слоев должно появиться оранжево-красное окрашивание (антраценпроизводные соединения).
2. Качественная реакция. 30 г препарата помещают в делительную воронку вместимостью 100 мл и экстрагируют трижды порциями по 20, 10 и 10 мл. Объединенные эфирные извлечения фильтруют через бумажный фильтр в колбу вместимостью 100 мл и упаривают на водяной бане под вакуумом при температуре не выше 30 °C до полного удаления растворителя. К остатку прибавляют 5 мл спирта 95%, встряхивая в течение 5 мин, спиртовое извлечение декантируют и фильтруют через бумажный фильтр.
2 мл спиртового извлечения помещают в колбу вместимостью 25 мл, приливают 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и 1 мл уксусной кислоты ледяной, встряхивают и нагревают до кипения; должно появиться окрашивание: верхнего слоя в зеленый цвет, нижнего — в коричневый с зеленоватым оттенком (сесквитерпеновые лактоны азуленового ряда).
3. Качественная реакция. К 5 г препарата прибавляют 20 мл спирта 90%, встряхивают в течение 2 мин, дают отстояться в течение 10 мин, затем фильтруют через бумажный фильтр.
5 мл спиртового извлечения помещают в пробирку и осторожно по стенке приливают 2 мл ванилина раствора 1% в серной кислоте; на границе слоев должно появиться красновато-коричневое кольцо (тритерпеноиды).
4. Качественная реакция. К 5 мл спиртового извлечения, полученного в качественной реакции 3, прибавляют 0,5 мл железа(III) хлорида раствора 3%; должно появиться зеленовато-коричневое окрашивание (дубильные вещества).
Масса содержимого упаковки. В соответствии с требованиями ОФС «Масса (объем) содержимого упаковки».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Сумма флавоноидов. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Спектрофотометрия в УФ и видимой областях».
Испытуемый раствор. Около 5,0 г (точная навеска) препарата помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 10 мл воды, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл. Колбу ополаскивают 5 мл воды, которую переносят в ту же делительную воронку. Смесь экстрагируют хлороформом 4 раза порциями по 20 мл, каждый раз перемешивая по 1 — 2 мин. Хлороформные извлечения отбрасывают. Обезжиренную водную фазу переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл. Делительную воронку ополаскивают 10 мл спирта 70%, который присоединяют к основной фазе в мерной колбе, и перемешивают. Полученный раствор нагревают на водяной бане при температуре 80 °C в течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора спиртом 95% до метки, перемешивают и фильтруют через вату (раствор А).
5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл алюминия хлорида раствора 2% в спирте 70%, 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б).
Раствор стандартного образца (СО) рутина. Около 0,05 г (точная навеска) СО рутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл спирта 70%, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.
Стандартный раствор. 1 мл раствора СО рутина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл алюминия хлорида раствора 2% в 70% спирте, 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают.
Раствор сравнения 1. 5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают.
Раствор сравнения 2. 1 мл раствора СО рутина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают.
Оптическую плотность раствора Б измеряют через 30 мин на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения 1.
Параллельно при аналогичных условиях измеряют оптическую плотность стандартного раствора относительно раствора сравнения 2.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{A \cdot a_{o} \cdot 50 \cdot 25 \cdot 1 \cdot 100}{A_{o} \cdot a \cdot 5 \cdot 100 \cdot 25} = \frac{A \cdot a_{o} \cdot 10}{A_{o} \cdot a} ,
где: A — оптическая плотность раствора Б;
Ao — оптическая плотность стандартного раствора;
Определение суммы дубильных веществ в пересчете на танин. Около 5 г (точная навеска) препарата помещают в колбу вместимостью 100 мл с притертой пробкой, экстрагируют ацетоном трижды порциями по 50, 30 и 20 мл каждый раз интенсивно встряхивая в течение 2 мин с последующим растиранием осадка стеклянной палочкой. После отстаивания в течение 2 мин ацетоновые извлечения декантируют в колбу вместимостью 250 мл. К полученным извлечениям прибавляют 5 мл индигокармина раствора 0,25% и сразу же титруют 0,1 М раствором калия перманганата со скоростью 0,5 — 0,6 мл/мин при энергичном встряхивании до желтого окрашивания, неисчезающего в течение 30 с.
Содержание дубильных веществ в пересчете на танин в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{(V - V_{0}) \cdot K \cdot T \cdot 100}{a} ,
где: V — объем титранта, израсходованный на титрование испытуемого раствора, мл;
V0 — объем титранта, израсходованный на титрование раствора в контрольном опыте, мл;
T — титр 1 мл 0,1 М раствора калия перманганата, соответствует 0,004157 г танина;
K — поправка к титру 0,1 М раствора калия перманганата, г.
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственных средств».