ФС.3.3.0009.22. Фармакопейная статья. Дезоксирибонуклеат натрия с железом комплекс, раствор для внутримышечного введения

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 11.04.2022 № 246)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Дезоксирибонуклеат натрия с железом комплекс, раствор для внутримышечного введения Natrium desoxyribonucleate cum, ferrum complex solutio intramuscular et telae iniectio	ФС.3.3.0009.22
	Вводится впервые

Настоящая фармакопейная статья распространяется на дезоксирибонуклеат натрия с железом комплекс, раствор для внутримышечного введения, являющийся иммуномодулирующим и противовирусным средством в отношении различных РНК и ДНК-содержащих вирусов. Препарат представляет собой биологически активное вещество — вытяжку из молок осетровых или лососевых рыб — очищенную и стандартизованную комплексную соль дезоксирибонуклеата натрия с железом.

Препарат содержит от заявленного количества не менее 93% и не более 107% дезоксирибонуклеата натрия и не менее 40% и не более 120% железа (III).

Препарат должен соответствовать ниже приведенным требованиям.

Описание. Прозрачная желтая или коричневато-желтая жидкость.

Подлинность

Спектрофотометрический метод

5,0 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора до метки 0,1% раствором натрия хлорида и перемешивают (раствор A).

1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1% раствором натрия хлорида и перемешивают (раствор B).

Снимают спектр раствора B ультрафиолетовой области в диапазоне длин волн от 220 до 300 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют натрия хлорида раствор 0,1%. Полученный спектр должен иметь максимум поглощения при (260 +/- 2) нм и минимум поглощения при (230 +/- 2) нм, отношение оптических плотностей Dmax/Dmin должно быть не менее 2.0 (гетероциклические азотистые основания).

Качественная реакция (дезоксирибоза)

Реактив Дише. 1 г дифениламина растворяют в 100 мл ледяной уксусной кислоты, добавляют 2,75 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

0,1 мл препарата помещают в пробирку со шлифом вместимостью 10 мл, прибавляют 2 мл воды и 2 мл реактива Дише, соединяют пробирку с воздушным холодильником, снабженным шлифом и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Появляется синее окрашивание раствора (дезоксирибоза).

Качественная реакция (железо)

10 мл препарата помещают в коническую колбу, прибавляют 2 мл раствора натрия гидроксида 10%, нагревают до кипения и кипятят 2 — 3 мин. Охлаждают при температуре от 15 до 25 °C в течение 3 — 5 мин. Выпадает осадок коричнево-желтого цвета (железо).

Прозрачность. Должен быть прозрачным. Определение проводят в соответствии с ОФС. «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность. Окраска препарата должна быть не интенсивнее эталонного раствора BY2 и не слабее эталонного раствора BY7. Определение проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

pH. От 5,7 до 7.0. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Извлекаемый объем. Должен быть не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

Видимые механические включения. Препарат должен соответствовать требованиям ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».

Невидимые механические включения. Среднее число частиц размером 10 мкм и более не должно превышать 6000, размером 25 мкм и более не должно превышать 600. Определение проводят в соответствии с ОФС «Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения», счетно-фотометрический метод.

Аномальная токсичность. Препарат должен выдерживать испытание ОФС «Аномальная токсичность». Тест-доза: 7.5 мг в 0,5 мл препарата на мышь, внутримышечно. Срок наблюдения 48 час.

Пирогенность. Препарат должен быть апирогенным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность». Тест-доза: 3,75 мг в 0,25 мл препарата на 1 кг массы животного, внутримышечно.

Бактериальные эндотоксины. Предельное содержание не более 4,67 ЕЭ на 1 мг натрия дезоксирибонуклеата. Определение проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины». Для проведения анализа препарат разводят водой для ЛАЛ-теста не менее чем в 1000 раз.

Стерильность. Должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность».

Количественное определение

Натрия дезоксирибонуклеат.

Спектрофотометрический метод

Измеряют оптическую плотность раствора C (приготовление раствора C приведено в разделе «Гиперхромизм») на спектрофотометре при длинах волн 270 и 290 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют воду.

Содержание натрия дезоксирибонуклеата (X) в г/мл вычисляют по формуле:

X = \frac{(D270 - D290) \cdot 100 \cdot 25}{0198 \cdot 10^{6} \cdot 5 \cdot 1} \cdot 10,7

где: D270, D290 — оптические плотности раствора C при 270 нм и 290 нм;

106 — перевод микрограммов в граммы;

0,198 — разность удельных показателей поглощения натрия дезоксирибонуклеата при длинах волн 270 и 290 нм (концентрации фосфора 1 мкг/мл);

5 — объем раствора препарата, взятый для определения, мл;

1 — объем раствора A, взятый для приготовления раствора C (см. «Гиперхромизм»)

100, 25 — разведение раствора препарата при приготовлении раствора C (см. «Гиперхромизм»);

10,7 — коэффициент пересчета фосфора на натрия дезоксирибонуклеат.

Содержание дезоксирибонуклеата натрия от заявленного в препарате должно быть не менее 40% и не более 120% железа (III) (от 0,02 до 0,06 мг/мл).

Количественное определение

Железо (III)

Спектрофотометрический метод

2 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл сульфосалициловой кислоты раствора 10%. перемешивают (выпадает осадок), добавляют 5 мл аммиака раствора 10% и нагревают на водяной бане при температуре 60 °C до полного растворения осадка. Раствор охлаждают, доводят до метки водой и перемешивают. Измеряют оптическую плотность на спектрофотометре раствора в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 440 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, содержащий в том же количестве все реактивы, кроме препарата.

Содержание железа (X) (III) в мг/мл вычисляют по формуле:

X = \frac{a}{2}

где: a — содержание железа (III), найденное по калибровочному графику, мг;

2 — объем раствора препарата, взятый для определения, мл.

Содержание железа (III) от заявленного количества в препарате должно быть не менее 40% и не более 120% железа (III) (от 0.02 мг/мл до 0,06 мг/мл).

Калибровочный график

Стандартный раствор иона железа (III) 0,7 мг/мл. Около 6,0397 г (точная навеска) железоаммониевых квасцов, NH4Fe(SO4)2·12H2O растворяют в 1000 мл воды, подкисленной 10 мл хлористоводородной кислотой концентрированной.

Стандартный раствор иона железа (III) 0,07 мг/мл. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл доводят объем раствора до метки водой и перемешивают.

Для построения калибровочного графика в 10 мерных колб вместимостью 25 мл отбирают 0,2; 0,4; 0,5; 0,7; 0,8; 1,0; 1,2; 1,4; 1.6; 1,8 мл раствора с содержанием иона железа (III) 0,07 мг/мл, добавляют 10 мл сульфосалициловой кислоты 10%, 5 мл аммиака раствора 10%, перемешивают, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Содержание железа (III) в калибровочных растворах составляет соответственно: 0,014, 0.028, 0,035, 0,049, 0,056, 0,070, 0,084, 0,098, 0,112, 0,126 мг. Растворы используют свежеприготовленными.

Построение калибровочного графика.

На спектрофотометре измеряют оптическую плотность полученных растворов в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 440 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, содержащий в том же количестве все реактивы, кроме железа. Строят график зависимости оптической плотности от содержания иона железа (III) в растворе.

Характеристическая вязкость. Значение характеристической вязкости должно быть от 1,55·102 мл/г до 3,50·102 мл/г (ОФС «Вязкость»).

20.0 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл. доводят объем раствора до метки 0,1% раствором натрия хлорида, предварительно профильтрованного через стеклянный фильтр с диаметром пор 10 — 40 мкм, и перемешивают (раствор D). Из раствора D готовят растворы с различными концентрациями дезоксирибонуклеата натрия (конечные растворы). Для этого в пять мерных колб вместимостью 25 мл последовательно отбирают 5,0 мл, 7,5 мл. 10.0 мл. 12,5 мл, 15.0 мл раствора D. доводят объем растворов до метки 0,1% раствором натрия хлорида, предварительно профильтрованного через стеклянный фильтр с диаметром пор 10 — 40 мкм. перемешивают.

В капиллярном вискозиметре ВПЖ 2 с номинальным диаметром капилляра 0.56 мм при температуре (25 +/- 0.1) °C определяют время истечения 0,1% раствора натрия хлорида, предварительно профильтрованного через стеклянный фильтр с диаметром пор 10 — 40 мкм, и каждого конечного раствора как среднее трех измерений.

Вычисляют концентрацию конечных растворов (Cn) в г/мл на основании результатов количественного определения дезоксирибонуклеата натрия в препарате по формуле:

Cn = \frac{X \cdot 20 \cdot V_{n}}{100 \cdot 25}

где: X — концентрация натрия дезоксирибонуклеата в препарате, г/мл (определена в разделе «Количественное определение. Натрия дезоксирибонуклеат»);

Vn — объем раствора D, взятый для приготовления конечного раствора, мл;

20 — объем раствора препарата, взятого для приготовления раствора D, мл;

100 — разведение раствора препарата;

25 — разведение раствора D.

Для каждого конечного раствора рассчитывают приведенную вязкость (\eta_{\text{прив}}) по формуле:

(\eta_{\text{прив}}) = [\frac{t_{n}}{t_{0}} - 1] \cdot \frac{1}{Cn} ,

где: t0 — время истечения натрия хлорида раствора 0,1%, сек;

tn — время истечения конечного раствора, сек;

Cn — концентрация конечного раствора, г/мл.

Строят зависимость (\eta_{\text{прив}}) от концентрации Cn, графически или линейным методом наименьших квадратов экстраполируют приведенную вязкость к нулевой концентрации, т.е. находят характеристическую вязкость (\eta_{\text{прив}}) .

Гиперхромизм

Кислоты хлорной раствор 10%. 115 мл хлорной кислоты (60%) помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре от 15 до 25 °C в течение 6 мес.

Измеряют оптическую плотность раствора B (раздел «Подлинность») на спектрофотометре при длине волны 260 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве сравнения используют натрия хлорида раствор 0,1%.

1 мл раствора A (раздел. «Подлинность») помещают в пробирку вместимостью 20 мл, прибавляют 10 мл хлорной кислоты раствора 10%, прикрывают пробкой и нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин. Раствор охлаждают до температуры от 15 до 25 °C, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора до метки водой (раствор C).

Измеряют оптическую плотность раствора C на спектрофотометре при длине волны 260 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют воду.

Гиперхромизм (X) в процентах вычисляют по формуле:

X = \frac{Di - D0}{D0} \cdot 100 ,

где: Do — оптическая плотность раствора B при длине волны 260 нм;

Di — оптическая плотность раствора C при длине волны 260 нм;

Гиперхромизм должен быть не менее 10%.

Хранение. В защищенном от света месте при температуре от 4 °C до 20 °C в соответствии с ОФС «Хранение лекарственных средств».

---