ФС.2.5.0067.18. Фармакопейная статья. Горца перечного трава

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0067.18"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/prikaz-fs-2-5-0067-18" "ФС.2.5.0067.18. Фармакопейная статья. Горца перечного трава (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

Горца перечного трава

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или частично измельченные цветоносные олиственные побеги длиной до 45 см без грубых нижних частей, с плодами различной степени зрелости. Стебли цилиндрические, утолщенные в узлах. Листья очередные, короткочерешковые, продолговато-ланцетные, голые, с заостренной или притупленной верхушкой и цельным краем. Длина листьев 7 — 9 см, ширина до 1,8 см. У основания черешка находятся видоизмененные сросшиеся прилистники — раструбы. Раструбы пленчатые, часто с коричневато-красным оттенком, длиной до 1,5 см, плотно прилегают к стеблю. Поверхность раструбов голая, по верхнему краю заметны короткие щетинки до 2 мм длиной. Соцветия — тонкие прерывистые поникающие кисти длиной до 6 см. Цветки на коротких цветоножках; околоцветник простой, длиной 3 — 4 мм, с 4 — 6 туповатыми долями, заметны многочисленные буроватые точки (вместилища). Тычинок 6 (8), пестик с верхней одногнездной завязью и 2 — 3 столбиками. Плод — яйцевидно-эллиптический орешек, с одной стороны плоский, другой — выпуклый, при созревании остается заключенным в околоцветник.

Цвет стеблей — зеленоватый, часто с красновато-коричневым оттенком, листьев — зеленый, раструбов — красноватый, цветков — розоватый, плодов — черный. Запах отсутствует. Вкус водного извлечения слегка жгучий.

Измельченное сырье. Кусочки листьев, стеблей и соцветий различной формы, отдельные цветки и плоды, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет зеленый с красновато-коричневым оттенком. Запах отсутствует. Вкус водного извлечения слегка жгучий.

Микроскопические признаки. Цельное сырье. При рассмотрении листа с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса верхней стороны листа с прямыми стенками и складчатой кутикулой и нижней стороны — с извилистыми стенками; устьица аномоцитного типа, встречающиеся с обеих сторон листа; мелкие бесцветные или светло-бурые железки с 2-клеточным (реже 4-клеточным) основанием и 4-клеточной (реже 2- или 6-клеточной) головкой. По краю листовой пластинки и по жилке с нижней стороны должны быть видны конусовидные пучковые волоски, состоящие из нескольких сросшихся клеток. В мезофилле листа должны быть видны многочисленные крупные друзы кальция оксалата и округлые или овальные схизогенные вместилища с содержимым светло-бурого, бурого или желтовато-зеленого цвета.

Погруженные схизогенные вместилища, заметны во всех надземных органах — листьях, стеблях, раструбах и околоцветнике.

Рис. 1 — Горца перечного трава

с зеленоватым содержимым (200x).

Измельченное сырье, порошок. При исследовании микропрепаратов должны быть видны фрагменты листовой пластинки с эпидермисом, состоящим из клеток со слабоизвилистыми и сильноизвилистыми стенками и устьицами аномоцитного типа. На некоторых фрагментах (край листовой пластинки, раструбы) должны быть видны пучковые волоски. На поверхности фрагментов листа, стебля, раструба, околоцветника должны быть железки, в мезофилле — вместилища с зеленовато-бурым содержимым и друзы. Должны встречаться фрагменты кольчатых, спиральных и сетчатых сосудов.

Определение основных групп биологически активных веществ

Приготовление растворов.

Раствор стандартного образца (СО) кверцетина: около 0,05 г СО кверцетина, предварительно высушенного при температуре 130 — 135 °C в течение 3 ч, растворяют в 85 мл спирта 96% в колбе при нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до 100 мл и перемешивают. Срок годности раствора 1 мес.

Тонкослойная хроматография

Около 1,0 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл спирта 90%. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Охлажденное до комнатной температуры извлечение фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором наносят 10 мкл (0,01 мл) испытуемого раствора; рядом наносят 10 мкл (0,01 мл) раствора СО рутина (см. раздел «Количественное определение») и 10 мкл (0,01 мл) раствора СО кверцетина.

Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 2 — 3 мин, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин смесью растворителей бутанол — уксусная кислота — вода (4:1:2) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции сине-фиолетового цвета выше зон адсорбции растворов СО кверцетина и рутина.

Затем пластинку обрабатывают алюминия хлорида спиртовым раствором 1%, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 — 105 °C в течение 2 — 3 мин и просматривают УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограммах растворов СО рутина и кверцетина должны обнаруживаться две зоны адсорбции с флюоресценцией желто-зеленого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться 2 зоны адсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета на уровне стандартных образцов рутина и кверцетина; допускается обнаружение других зон адсорбции.

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 14%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 8%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 2,0%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм — не более 5%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм — не более 5%.

Посторонние примеси

Сырье, изменившее окраску (побуревшее, пожелтевшее и почерневшее). Цельное сырье — не более 5%;

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 3%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: суммы флавоноидов в пересчете на рутин — не менее 1,5%;

Приготовление раствора СО рутина: около 0,05 г (точная навеска) СО рутина, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 130 — 135 °C, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 85 мл спирта 96% при нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят объем спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор А СО рутина). Срок годности раствора 30 сут.

2,0 мл раствора А СО рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты раствора 30%, 1 мл алюминия хлорида раствора 1% и доводят до метки спиртом 96% и перемешивают (раствор Б СО рутина).

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл спирта 90%. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Экстракцию последовательно повторяют таким образом еще 2 раза. Извлечения фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу. Объем фильтрата доводят спиртом 90% до метки и перемешивают (раствор А испытуемого раствора).

2,0 мл раствора А испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 0,5 мл уксусной кислоты раствора 30%, 1 мл алюминия хлорида раствора 1% и доводят объем раствора спиртом 96% до метки, перемешивают (раствор Б испытуемого раствора).

Оптическую плотность раствора Б испытуемого раствора измеряют через 30 мин на спектрофотометре при длине волны 408 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют состоящий из 2,0 мл раствор А испытуемого раствора, 0,5 мл уксусной кислоты разбавленной 30% и доводят спиртом 96% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО рутина. Для приготовления раствора сравнения в мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2,0 мл раствора А СО рутина, добавляют 0,5 мл уксусной кислоты раствора 30% и доводят до метки спиртом 96%, перемешивают.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{A \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 25 \cdot 2 \cdot P \cdot 100 \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 2 \cdot 100 \cdot 25 \cdot 100 \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

Ao — оптическая плотность раствора Б СО рутина;

a — навеска сырья, г;

ao — навеска СО рутина, г;

P — содержание основного вещества в СО рутина, %;

W — влажность сырья, %.

Допускается вычислять содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье с использованием удельного показателя поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом по формуле:

X = \frac{A \cdot 100 \cdot 25 \cdot 100}{A_{1\text{см}}^{1\%} \cdot a \cdot 2 \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

A_{1\text{см}}^{1\%} — удельный показатель поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом при длине волны 408 нм, равный 248;

a — навеска сырья, г;

W — влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».