Приказ Минздрава СССР от 23.12.1967 № 980

<Об экспресс-методе определения резус-фактора>

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ПРИКАЗ

В соответствии с представлением Управления по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники и Главного управления лечебно-профилактической помощи детям и матерям приказываю:

1. Внедрить в практику лечебно-профилактических учреждений экспресс-метод определения резус-фактора, одобренный Комитетом по новой медицинской технике.

2. Министрам здравоохранения союзных и автономных республик, заведующим краевыми и областными отделами здравоохранения:

а) организовать силами и средствами службы крови заготовку универсальной (AB(IV) группы крови) сыворотки антирезус для приготовления тестового реактива по определению резус-фактора на плоскости;

б) обязать директоров республиканских институтов гематологии и переливания крови, главных врачей республиканских, краевых, областных и городских станций переливания крови, а также заведующих крупными (категорированными) отделениями переливания крови:

• обеспечить бесперебойное снабжение лечебно-профилактических учреждений на обслуживаемой территории универсальной сывороткой для определения резус-фактора на плоскости, руководствуясь Инструкцией по приготовлению сывороток для определения резус-фактора на плоскости без подогрева (Приложение № 1);
• организовать инструктаж врачей лечебно-профилактических учреждений по применению экспресс-метода определения резус-фактора на плоскости и установить контроль за использованием противорезусных сывороток;

в) обязать главных врачей лечебно-профилактических учреждений в течение 1968 года внедрить экспресс-метод определения резус-фактора на плоскости согласно Инструкции по применению экспресс-метода (Приложение № 2).

ИНСТРУКЦИЯ <*> ПО ПРИГОТОВЛЕНИЮ СЫВОРОТОК АНТИРЕЗУС ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ НА ПЛОСКОСТИ БЕЗ ПОДОГРЕВА

---

<*> Разработана в иммуногематологической лаборатории ЦОЛИПК.

Специальное оснащение и реактивы:

1. Сыворотки антирезус группы AB(IV) с титром неполных антител не ниже 1:32.

2. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки AB(IV).

3. Образцы свежей резус-положительной и резус-отрицательной крови, взятой на гепарине.

4. Альбумин, полученный из плазмы человека, или полиглюкин.

5. Гепарин «Гедеон Рихтер».

6. Физиологический раствор.

7. Центрифужные пробирки.

8. Тарелки.

9. Стеклянные палочки.

Определение резус-фактора на плоскости без подогрева достигается путем добавления к сыворотке антирезус альбумина или полиглюкина, в присутствии которых сыворотки с неполными антителами приобретают способность агглютинировать резус-положительные эритроциты.

I. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ТЕСТОВЫХ СЫВОРОТОК АНТИРЕЗУС С ПРИМЕНЕНИЕМ АЛЬБУМИНА

Определение оптимальных соотношений сыворотки антирезус и раствора альбумина.

1. В штатив устанавливают 9 пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят пипеткой одну каплю 20% раствора альбумина в физиологическом растворе, во вторую — 2 капли, в третью — 3 капли и т.д.

2. В каждую пробирку добавляют по одной капле сыворотки антирезус и содержимое пробирок тщательно перемешивают.

3. Из каждой пробирки по одной капле смеси сыворотки с альбумином переносят на тарелку, располагая в два ряда.

4. В капли верхнего ряда той же пипеткой вносят по одной капле свежей цельной резус-положительной крови, взятой на гепарине (1 капля гепарина на 5 мл крови). В нижний ряд соответственно вносят по 1 капле резус-отрицательной крови. Смесь перемешивают стеклянной палочкой, затем тарелку периодически покачивают в течение 3 минут.

5. В каждую каплю верхнего и нижнего ряда по истечении 3 минут добавляют по 1 капле физиологического раствора. Тарелку снова покачивают, пока кровь не перемешается с физиологическим раствором. Результат учитывают через 5 минут с момента перемешивания сыворотки с кровью.

Трактовка результатов

Четкая агглютинация в капле верхнего ряда и отсутствие агглютинации в соответствующей капле нижнего ряда указывают на оптимальное соотношение альбумина и используемой сыворотки антирезус.

Выбранные соотношения применяют для приготовления тестовой сыворотки антирезус в необходимых объемах. К приготовленной сыворотке добавляют гепарин из расчета 1 — 2 капли на 10 мл сыворотки.

Примечание. 1. На 100 мл альбумина добавляют 2 гр. борной кислоты.

2. Концентрация исходного раствора альбумина может варьировать:

а) если агглютинация резус-положительных эритроцитов не достаточно сильно выражена или медленно появляется (к 5 мин.), то концентрацию альбумина в растворе следует увеличить до 25 — 30%;

б) если в капле, где должна быть отрицательная реакция, имеется неспецифическая агглютинация, то концентрацию альбумина в растворе следует понизить до 15%.

Приготовленную тестовую сыворотку антирезус необходимо тщательно проверить по нескольким образцам стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.

II. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ТЕСТОВЫХ СЫВОРОТОК АНТИРЕЗУС С ПРИМЕНЕНИЕМ ПОЛИГЛЮКИНА

Ввиду того, что сыворотки антирезус в комбинации с полиглюкином обладают способностью неспецифически агглютинировать эритроциты, их необходимо перед добавлением полиглюкина разводить специально подобранными изогемагглютинирующими сыворотками AB(IV).

1. Выбор изогемагглютинирующей сыворотки для разведения сыворотки антирезус:

а) в штатив помещают 5 — 10 пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят 2 капли изогемагглютинирующей сыворотки группы AB(IV) одной серии, во вторую — 2 капли другой серии и т.д.;

б) в каждую пробирку добавляют по 1 капле 18% раствора полиглюкина. Содержимое пробирок тщательно перемешивают;

в) из каждой пробирки переносят на тарелку по 1 капле смеси сыворотки с полигклюкином и рядом помещают по одной капле свежей крови, взятой на гепарине;

г) капли перемешивают стеклянной палочкой; тарелку периодически покачивают в течение 5 минут, после чего выбирают сыворотку, которая в смеси с полиглюкином не вызывает неспецифической агглютинации эритроцитов в течение 3 — 4 минут.

2. Определение оптимального разведения сыворотки антирезус, отобранной изогемагглютинирующей сывороткой AB(IV):

а) в штатив устанавливают 9 пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят пипеткой одну каплю отобранной изогемагглютинирующей сыворотки, во вторую — 2, в третью — 3 и т.д.;

б) в каждую пробирку добавляют по одной капле сыворотки антирезус и содержимое пробирок тщательно перемешивают;

в) начиная со второй пробирки, отсасывают содержимое с таким расчетом, чтобы в каждой из них осталось по 2 капли приготовленной смеси сывороток;

г) в каждую пробирку добавляют по 1 капле 18% раствора полиглюкина и перемешивают его с сывороткой;

д) из каждой пробирки по одной капле приготовленной смеси сыворотки и полиглюкина переносят на тарелку, располагая в два ряда;

е) в капли верхнего ряда вносят по 1 капле свежей цельной резус-положительной крови, взятой на гепарине. В нижний ряд соответственно вносят по 1 капле резус-отрицательной крови. Смесь перемешивают стеклянной палочкой; тарелку периодически покачивают в течение 3 минут;

ж) в каждую каплю верхнего и нижнего ряда по истечении 3 — 4 минут добавляют по 1 капле физиологического раствора. Тарелку снова покачивают, пока кровь не перемешается с физиологическим раствором. Результат учитывают через 5 минут с момента перемешивания сыворотки с кровью.

Четкая агглютинация в капле верхнего ряда и отсутствие агглютинации в соответствующей капле нижнего ряда указывают на оптимальное разведение сыворотки антирезус изогемагглютинирующей сывороткой.

Выбранное соотношение используют для приготовления тестовой сыворотки антирезус в необходимых объемах. К приготовленной сыворотке добавляют гепарин из расчета 1 — 2 капли на 10 мл сыворотки.

3. Освобождение тестовой сыворотки антирезус от хлопьев, выпадающих при добавлении полиглюкина:

а) тестовую сыворотку оставляют в холодильнике на 2 суток при температуре 4 — 8 °C;

б) выпавшие в тестовой сыворотке хлопья отделяют центрифугированием при 3000 — 5000 об./мин. в течение 15 — 20 мин.;

в) прозрачную часть сыворотки отсасывают и пропускают через бумажный фильтр;

г) приготовленную тестовую сыворотку проверяют по нескольким образцам стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.

Примечание. 1. Необходимая концентрация полиглюкина достигается выпариванием 6% раствора до 1/3 его первоначального объема. На 100 мл приготовленного 18% полиглюкина добавляют 4 г борной кислоты.

2. Соотношение полиглюкина и сыворотки может варьировать. Если агглютинация резус-положительных эритроцитов недостаточно сильная или медленно появляется (к 5 мин.), следует на 5 объемов сыворотки антирезус добавить 3 объема 18% полиглюкина.

III. ПРИГОТОВЛЕНИЕ КОНТРОЛЬНОЙ СЫВОРОТКИ

При каждом определении резус-принадлежности крови необходимо параллельно проводить контрольное исследование на специфичность.

Контрольную сыворотку готовят из изогемагглютинирующей сыворотки группы AB(IV) с добавлением к ней альбумина или полиглюкина в тех же соотношениях, которые были использованы для приготовления тестовой сыворотки антирезус.

При применении полиглюкина контрольную сыворотку готовят из изогемагглютинирующей сыворотки, которую использовали для разведения сыворотки антирезус.

Агглютинация эритроцитов в капле контрольной сыворотки должна отсутствовать во всех случаях.

IV. ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ

1. При определении резус-фактора тестовыми сыворотками антирезус, приготовленными в сочетании с альбумином или полиглюкином, необходимо одновременно проводить контрольное исследование на специфичность реакции.

2. В капле контрольной сыворотки агглютинация эритроцитов должна отсутствовать. Если же в контрольной капле имеется агглютинация эритроцитов, то это следует отнести за счет неспецифичности исследуемого образца крови, что наблюдается у некоторых больных и может привести к неправильной трактовке результатов. В таких случаях заключение о резус-принадлежности крови не может быть выдано и больным переливают резус-отрицательную кровь.

3. Определять резус-фактор можно при температуре 15 — 35 °C.

4. Срок годности тестовых и контрольных сывороток от 3 до 6 месяцев при хранении в холодильнике (4 — 6 °C).

5. Тестовые сыворотки контролируются не реже 2 раз в месяц лабораторией, где они изготовлены.

ИНСТРУКЦИЯ <*> ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕЗУС-ФАКТОРА ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ НА ПЛОСКОСТИ ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ С ПОМОЩЬЮ СЫВОРОТОК, ПРИГОТОВЛЕННЫХ НА АЛЬБУМИНЕ ИЛИ ПОЛИГЛЮКИНЕ

---

<*> Разработана в иммуногематологической лаборатории ЦОЛИПК.

Оснащение: сыворотка антирезус универсальная — AB(IV), контрольная сыворотка, физиологический раствор, тарелки, стеклянные палочки.

Кровь для реакции берут из пальца непосредственно перед определением. Можно использовать также свежие (не более 2-дневного хранения при +4 °C) эритроциты, взятые со дна пробирки после центрифугирования или отстаивания от плазмы с консервантом.

Техника определения: на тарелку слева наносят одну каплю сыворотки антирезус и справа — одну каплю контрольной сыворотки. Рядом с этими каплями помещают по одной капле крови в количестве 1/2 от объема взятой сыворотки. Стеклянной палочкой перемешивают кровь с сыворотками и размазывают на тарелке до получения тонкого слоя. После этого тарелку периодически покачивают. Через 3 — 4 мин. в обе капли необходимо добавить по одной капле физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агглютинации и продолжать наблюдение при покачивании тарелки до истечения 5 мин., после чего учитывают результат.

Оценка результатов: при положительном результате агглютинация наблюдается только в одной капле — слева, с сывороткой антирезус. При отрицательном результате агглютинация отсутствует в обеих каплях и они остаются равномерно окрашенными (см. рис. — не приводится).

Агрегацию эритроцитов в зоне подсыхания по периферии капли не учитывают!

---