Приказ Минсельхоза РФ от 03.04.2006 № 105
«Об утверждении Ветеринарных правил лабораторной диагностики гриппа a птиц»
(Зарегистрировано в Минюсте РФ 27.04.2006 № 7761)
Зарегистрировано в Минюсте РФ 27 апреля 2006 г. 7761
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРИКАЗ
от 3 апреля 2006 г. № 105
В целях повышения эффективности борьбы с гриппом птиц и в соответствии с пунктом 5.2.11 Положения о Министерстве сельского хозяйства Российской Федерации, утвержденного Постановлением Правительства Российской Федерации от 24 марта 2006 г. № 164 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2006, № 14, ст. 1543), приказываю:
утвердить Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа A птиц согласно приложению.
Приложение к Приказу Минсельхоза России от 3 апреля 2006 г. № 105
ВЕТЕРИНАРНЫЕ ПРАВИЛА ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА A ПТИЦ
1. Область применения
1.1. Настоящие Правила устанавливают обязательные требования к организации лабораторной диагностики гриппа A птиц (далее — грипп птиц).
1.2. Положения настоящих правил обязательны для выполнения на территории Российской Федерации органами государственной власти, предприятиями или иными хозяйствующими субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.
2. Общие положения
2.1. Диагностические лабораторные исследования и серологические тесты по определению напряженности поствакцинального иммунитета (далее — лабораторные тесты) проводят в специализированных ветеринарных учреждениях.
2.2 Лабораторная диагностика гриппа птиц направлена на выявление в исследуемых объектах ветеринарного надзора:
2.3 При проведении лабораторных тестов могут быть использованы методы лабораторных исследований, применяющие:
тесты, утвержденные в установленном порядке;
тесты, которые реализуются с использованием тест-систем, зарегистрированных в установленном порядке в Российской Федерации.
3. Обязательные требования по отбору проб для проведения диагностики гриппа птиц
3.1. Отбор проб крови и патологического материала проводит ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку.
3.2. Пробы маркируются и опечатываются. К пробам прилагается сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора проб, юридическом или физическом лице — владельце птицы и месте его нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.
3.3. Для проведения исследований осуществляют отбор проб патологического материала (органы, ткани головного мозга, легких, трахеи, селезенки, участков кишечника, почек, сердца) от павшей или убитой с диагностической целью птицы.
3.4. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5 — 10 трупов или патологический материал от 5 — 10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10 — 15 голов, 1 — 10 сборных проб помета от стада.
У мелких видов птиц для отбора проб используют свежий помет.
Пробу помета рекомендуется отбирать из расчета 1 грамм помета на 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.
3.5. Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц рекомендуется отбирать у 25 — 30 птиц из стада (партии), из одного птичника (зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).
Пробы крови отбирают из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре или в термостате при 37 град. C в течение 1 — 2 часов, затем обводят иглой или пастеровской пипеткой, отслаивая сгусток крови от стенок пробирки, и оставляют на 16 — 18 часов при температуре 2 — 4 град. C. Образовавшуюся прозрачную без признаков гемолиза сыворотку отбирают с помощью пипетки в отдельные, чистые пробирки.
Отбор крови допускается проводить с помощью иглы и шприца (или вакуумной пробирки).
Рекомендуется проводить центрифугирование проб крови для получения сыворотки в течение 10 — 15 минут при 1000 об./мин. для осаждения свободных эритроцитов.
Для серодиагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных или инфицированных птиц, в начале заболевания и через 4 — 10 дней.
3.6. Пробы транспортируются во влагонепроницаемой таре, в контейнере с хладоэлементами или в термосе со льдом. Допускается однократное замораживание сывороток.
При транспортировке проб соблюдают установленные ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные агенты 3-й группы патогенности.
3.7. Если немедленное исследование проб невозможно, допускается сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4 град. C.
При необходимости для увеличения срока хранения диагностические образцы и/или изолят помещают в морозильную камеру с температурой -80 град. C.
4. Методы и сроки проведения лабораторных исследований
4.1 Для установления диагноза на грипп птиц допускается применение следующих методов:
а) для выявления вируса гриппа птиц — биопроба на СПФ (свободных от патогенной микрофлоры) — цыплятах с обязательным последующим подтверждением специфичности биологической реакции;
б) для выделения вируса гриппа птиц — метод выделения вируса на СПФ — куриных эмбрионах или в культуре клеток;
в) для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц;
иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения одного или нескольких белков вируса;
иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее — РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее — ИЭОФ);
иммунохроматографические методы (далее — ИХА);
радиоиммунный анализ (далее — РИА);
непрямая гем- и латексагглютинация;
реакция связывания комплемента (далее — РСК);
г) для обнаружения гемагглютинина (гемагглютинирующей активности) вируса гриппа птиц:
реакция гемагглютинации (далее — РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
д) для обнаружения РНК вируса:
полимеразная цепная реакция (далее — ПЦР);
ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
е) для обнаружения антител к вирусу гриппа птиц:
ж) для субтипирования вируса по гемагглютинину и нейраминидазе:
сиквенс к ДНК или ПЦР-продукта;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
з) для субтипирования противовирусных антител по гемагглютинину:
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину.
4.2. Применение иных тестов допускается для получения предварительных результатов.
4.3. Методы проведения лабораторных исследований реализуются на основе утверждаемых в установленном порядке методик проведения обязательных диагностических исследований.
4.4. Сроки проведения лабораторных исследований устанавливаются в зависимости от метода исследования и не могут превышать 1 месяца.